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金雀异黄素诱导结肠癌HCT-116细胞凋亡及其机制研究
目的 探讨金雀异黄素对结肠癌细胞HCT-116的细胞增殖和凋亡的影响及其可能的机制.方法 不同浓度金雀异黄素处理HCT-116细胞,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡、细胞内活性氧(ROS)水平和线粒体膜电位的变化,并用透射电镜观察细胞的超微结构.结果 金雀异黄素呈剂量和时间依赖性地抑制细胞增殖.0～100μmol/L的金雀异黄素处理细胞24 h后引起G2/M期阻滞,凋亡峰Sub-G1所占细胞比例从(1.63±0.44)％增至(8.33±1.51)％(P＜0.01),早期凋亡细胞从(1.93±0.32)％增至(7.25±0.86)％(P＜0.01).透射电镜下细胞出现凋亡特征性改变.100 μmol/L金雀异黄素处理后细胞内ROS水平在2h时增至处理前的1.81倍,(15.53±1.55)％ vs(8.57±0.35)％,P＜0.01,细胞线粒体膜电位在1h时迅速下降了87.8％,(0.82±0.02)％vs(6.70±0.21)％,P＜0.01.结论 金雀异黄素抑制结肠癌细胞株HCT-116的细胞增殖,引起G2/M期细胞阻滞并促进细胞凋亡,可能与升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位有关.
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丹参对血管紧张素Ⅱ诱导的肾小球系膜细胞表达TGF-β1,ROS和PAI-1的影响
目的:探讨丹参对血管紧张素Ⅱ致肾小球硬化的干预作用.方法:采用血管紧张素Ⅱ刺激系膜细胞增殖,同时加入不同剂量的丹参注射液分别对系膜细胞作用24 h.观察系膜细胞纤溶酶原激活剂抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)mRNA、培养上清液中的PAi-1蛋白和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的含量,以及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平的变化.结果:丹参明显抑制住了由血管紧张素Ⅱ刺激大鼠肾脏系膜细胞而产生的PAI-1 mRNA以及蛋白表达的升高,且其抑制作用的强弱与丹参注射液的剂量密切相关.丹参还明显下调了因血管紧张素Ⅱ刺激后TGF-β1的表达增加以及细胞内ROS水平的升高.结论:丹参下调血管紧张素Ⅱ诱导的系膜细胞PAI-1表达的增加,以及抑制TGF-β1的分泌增加与细胞内ROS水平的增高,从而发挥抗肾小球硬化的作用.
关键词： 丹参 纤溶酶原激活剂抑制物 转化生长因子β1 细胞内活性氧 -
人参三七川芎提取物延缓血管紧张素Ⅱ诱导内皮细胞衰老机制的研究
目的 探讨人参三七川芎提取物对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)诱导的内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)衰老的影响.方法 体外培养的HUVECs加入终浓度为10-6mol/L Ang Ⅱ诱导细胞衰老,造成内皮细胞衰老模型.细胞分为Ang Ⅱ衰老模型组、空白对照组、人参三七川芎高剂量组、人参三七川芎低剂量组和缬沙坦组,采用SA-β-半乳糖染色法观察细胞衰老改变,流式细胞仪分析细胞周期,激光共聚焦显微镜观察细胞内活性氧(ROS)含量,硝酸还原酶法检测培养液一氧化氮(NO)和抗超氧阴离子水平,Western-blot检测各组细胞Ang Ⅱ 1型和2型受体(AT1R和AT2R)、NAD(P)H氧化酶p47phox的蛋白表达.结果 Ang Ⅱ衰老模型组与空白对照组比较,β-gal染色阳性细胞数明显增多,细胞停滞在G0-G1期,激光共聚焦显微镜下ROS荧光强度明显增强,培养液中抗超氧阴离子、NO含量减少,p47phox蛋白表达明显上调,AT1R表达较空白对照组上调.给予高、低剂量中药处理后改善了细胞的衰老状态,β-gal染色阳性细胞数减少,G0-G2期细胞减少,G2-M期细胞增加,ROS荧光强度减弱,抗超氧阴离子、NO含量较AngⅡ衰老模型组增加,p47phox蛋白表达下调,AT1R表达较AngⅡ衰老模型组下调.结论 人参三七川芎提取物能够延缓AngⅡ诱导的HUVECs衰老,可通过AT1R下调NAD(P)H氧化酶p47phox表达,进而使ROS产生减少,可能是益气活血中药延缓内皮细胞衰老的主要原因之一.
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淫羊藿素对K562细胞增殖及细胞内活性氧的影响
目的:探讨淫羊藿素(icaritin,ICT)对慢性髓系白血病K562细胞增殖及细胞内活性氧(ROS)的影响.方法:MTT法检测ICT对K562细胞增殖的影响;流式细胞术检测K562细胞的凋亡情况;Western blot法检测PARP蛋白表达变化;流式细胞术检测细胞中ROS水平.结果:ICT对K562细胞增殖有明显的抑制作用,且呈一定的浓度依赖性(r=0.837);凋亡细胞比例增多;PARP蛋白表达量增加;细胞内活性氧水平明显增高.结论:淫羊藿素具有抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,其机制可能与升高细胞内活性氧有关.
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汉防己甲素抑制肝癌细胞增生的作用
目的:研究汉防己甲素(tetrandrine,TTD)对肝癌细胞的作用及其机制.方法:采用MTT比色法观察了TTD对肝癌细胞增生的影响;采用流式细胞仪法观察了TTD对肝癌细胞内活性氧的影响;采用琼脂凝胶电泳法观察了DNA片断化的梯形条带.结果:10 and 20 μmol/L TTD作用于肝癌细胞系24,48,72 h后其增生率分别为90.1±1.0%and 77.5±2.0%,70.2±2.9%and 56.6±1.6%,61.6±2.0%and 47.2±1.9%(F=40.025,P＜0.001);0、10和20μmol/L TTD作用于肝癌细胞系2 h后O2-为35%、36.6%、63.2%;H2O2.为24.5%、40.5%、84.6%.48 h后20 umol/LTTD组肝癌细胞出现典型的凋亡表现.结论:TTD能够通过诱导肝癌细胞内活性氧的产生,而引起细胞凋亡,呈明显的剂量依赖性.
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Romo1与肿瘤相关性的研究进展
活性氧调节因子1 (reactive oxygen species modulator1,Romo1)是一种新型的线粒体跨膜蛋白,可诱导细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生.研究表明,Homo1在肺癌、胃癌、肝癌等组织中高表达,其在肿瘤的诊断、治疗、病情评估及预后判断中的价值越来越受到关注,现就Romo1的生物特征、在肿瘤中的作用机制、表达及临床意义作一综述.
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多次强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响
目的 探讨多次强脉冲光(intense pulsed light,IPL)照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响,并用长波紫外线(ultraviolet A,UVA)作对比,观察多次强脉冲光照射能否造成细胞老化.方法 实验分3组,一组朱接受照射作为对照组,其他两组分别接受UVA 9 J/cm2和IPL 15 J/cm2照射,每天1次,连续照射5d.在第6天,收集细胞,分别进行β半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色及细胞周期、细胞内活性氧和端粒长度的测定.结果 连续5 d IPL照射后,SA-β-Gal染色和端粒长度与正常对照组相比,未见明显变化(P＞0.05).细胞周期中G1期所占百分比下降,细胞内活性氧下降(P＜0.05)；连续5 d UVA照射后,与正常对照组相比,SA-β-Gal染色阳性细胞的百分数增加,细胞周期中G1期所占百分比未见明显变化,细胞内活性氧上升,端粒长度缩短(P＜0.05).结论 多次UVA照射可诱导细胞老化,但多次IPL照射不会出现细胞老化.
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姜黄素对放射性血管内皮损伤的保护作用
目的 探讨姜黄素对放射性血管内皮损伤的保护作用及其机制.方法 对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分离培养后分组,以2、4、6和8Gy4种不同剂量进行β线照射,并设未照射组为对照.分别通过光学显微镜及电子显微镜观察细胞形态和超微结构改变；流式细胞仪法观察各组的凋亡率和坏死率以及细胞内活性氧(ROS)生成；检测细胞照射前后乳酸脱氢酶(LDH)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 细胞经照射后,形态及超微结构改变均显示为典型的凋亡改变,而姜黄素预处理组的细胞凋亡率和坏死率均明显轻于其他实验组,差别有统计学意义(P＜0.05).LDH活力和MDA含量在各照射组均高于姜黄素预处理组(P＜0.05),照射后各组ROS含量明显升高,呈剂量依赖性改变,明显高于姜黄素预处理组,差别均有统计学意义(P＜0.05).结论 放射线照射可导致HUVEC凋亡和坏死,细胞内LDH活力和MDA含量增高,且呈剂量依赖性.姜黄素对受照射后的HUVEC凋亡和坏死有保护作用.
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糠醛对大鼠某些血液指标和氧化损伤作用研究
糠醛是石油化工工业常用的溶剂和中间体,用于提炼石油、润滑油以及橡胶、塑料制造等,也广泛存在于人们的生活环境中.研究表明[1],石油化工生产过程充满了自由基反应,许多化工毒物可通过影响细胞内活性氧系统而导致细胞的氧化性损伤,被认为是化学中毒的重要机理之一.糠醛可引起中枢神经系统损害、并具有肝、肾和血液毒性[2].为了进一步探讨糠醛的毒作用与氧化损伤的关系,并为健康监护提供线索,我们进行了本实验.
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齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对ROS和细胞内Ca2+含量的影响
目的 探讨齐墩果酸对白血病Jurkat细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用,分析凋亡发生与细胞内活性氧(ROS)及钙离子浓度([Ca2+]i)变化的关系.方法 应用MTT法检测细胞增殖抑制；流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期；DCFH-DA荧光定量法检测ROS含量；Fluo-3AM荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化.结果 齐墩果酸对Jurkat细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,0,40,80,160 μmol/L齐墩果酸作用24 h细胞凋亡率分别为(7.36±0.40)％、(19.80±1.59)％、(29.39±0.64)％、(34.72±0.94)％,G0/G1期细胞比例分别为(54.26±1.43)％、(85.83±0.91)％、(91.18±1.32)％、(92.90±1.19)％.80 μmol/L和160μmol/L齐墩果酸处理24 h,细胞中ROS和[Ca2+]i水平均明显高于对照组(P＜0.05),ROS和[Ca2+]i水平均与细胞凋亡率呈正相关(r分别为0.95、0.97).结论 细胞中ROS和Ca2+可能参与了齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用.
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SOD与ROS在As2O3作用于S180肉瘤细胞中的作用研究
目的:初步探讨超氧化物歧化酶(SOD)、细胞内活性氧(ROS)在三氧化二砷(As2O3)抗肿瘤中的作用.方法:对小鼠S180肉瘤细胞采用细胞培养,并建立S180移植瘤动物模型,体内体外观察As2O3对S180肉瘤的抑制作用,同时检测S180肉瘤细胞及S180移植瘤肿瘤组织内的总超氧化物歧化酶(TSOD),含锰超氧化物歧化酶(MnSOD),含铜锌超氧化物歧化酶(CuZnSOD)以及ROS的改变.结果:As2O3可以抑制小鼠S180肉瘤细胞生长并具有浓度依赖性,在一定浓度下其作用强于化疗药物阿霉素(ADM);肿瘤细胞内及肿瘤组织内的TSOD以及MnSOD均表现出下降的趋势,ROS则表现出上升趋势.TSOD和ROS呈负相关.结论:As2O3是通过降低细胞内SOD值,使细胞内超氧阴离子(O2·-)更多的积累以杀伤肿瘤细胞,这可能是As2O3抗肿瘤作用机制之一.
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木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H2O2诱导乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的:观察木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对过氧化氢(H2O2)诱导乳鼠心肌细胞氧化损伤的作用及其机制.方法:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷预作用12 h后,采用H2O2诱导培养乳鼠心肌细胞氧化损伤模型,测定细胞存活率、细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量、细胞内活性氧(ROS)水平及细胞内钙(Ca2+)超载的变化.结果:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷能明显提高H2O2损伤细胞存活率,提高细胞内SOD活性,降低胞内MDA和ROS生成量,同时使细胞内钙含量降低.结论:木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷对H2O2氧化损伤心肌细胞具有明显的保护作用,机制可能与其抑制脂质过氧化、抑制细胞内钙超载有关.
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蛋氨酸亚砜还原酶A在结肠癌组织中表达及其意义
目的 探讨结肠癌细胞中蛋氨酸亚砜还原酶A(methionine sulfoxide reductase A,MsrA)mRNA表达量及细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,探讨不同组织学分级的结肠癌细胞MsrA mRNA表达量.方法 通过RT-PCR法检测结肠癌细胞以及不同组织学分级的结肠癌细胞MsrA mRNA表达量;通过2 ',7’-二氯荧光素双醋酸盐法(DCFH-DA)检测其细胞内反应氧水平.结果 结肠癌细胞内ROS荧光度为350.2 ±6.3;明显高于正常结肠细胞(134.3±15.6),二者差异有统计学意义(P＜0.05).结肠癌细胞MsrA mRNA表达量为1.27±0.32,明显低于正常结肠细胞(0.62±0.27),差异有统计学意义(P＜0.05).组织学Ⅰ级结肠癌细胞MsrA mRNA表达量为0.93±0.26,明显高于组织学Ⅱ级结肠癌细胞MsrA(0.35 ±0.29)及组织学Ⅲ级结肠癌细胞MsrA mRNA表达量(0.32±0.20),差异均有统计学意义(P＜0.05).组织学Ⅱ级结肠癌细胞与组织学Ⅲ级结肠癌细胞MsrA mRNA表达量无显著性差异(P＞0.05).结论 MsrA可能通过调控细胞内反应氧水平参与结肠癌细胞分化.
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花青素抗氧化损伤及细胞凋亡的作用研究
目的:探索花青素对H2O2引起的Huh7细胞氧化应激、细胞凋亡的作用及其机制.方法:对H2O2和花青素干预培养的Huh7细胞,应用MTT法检测细胞活力,荧光探针DCFH-DA测定细胞内活性氧(ROS)生成量,免疫印迹测定Akt、磷酸化激活的c-Jun蛋白水平.结果:H2O2 0.8mmol/L孵育1小时可显著诱导Huh7细胞损伤,细胞活力下降到(49.27±3.2)%,ROS生成量是未处理细胞的3.56倍.细胞经花青素50μmol/L与H2O2共孵育后,细胞存活率提高到(81.2±2.34)%;花青素能显著抑制H2O2引起的Huh7细胞ROS生成,ROS生成下降74%(P＜0.01).花青素抑制H2O2引起Huh7细胞死亡和ROS生成的效应随剂量增加而加强.花青素抑制H2O2激发Huh7细胞磷酸化c-Jun表达,提高细胞Akt水平.结论:花青素抑制H2O2引起的Huh7细胞氧化应激损伤所导致的细胞死亡,其作用机制在于减少细胞内活性氧生成,抑制H2O2激活磷酸化c-Jun,提高细胞Akt水平.
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亲环素A与动脉粥样硬化
目前随着中国社会的高速发展，人民生活水平随之提高，生活规律改变诱发高血压、高血糖、高血脂等慢性疾病在人群中的患病率越来越高。在病理状态下机体受各种内外环境有害刺激时氧自由基的产生与清除失衡，细胞内活性氧大量蓄积导致机体处于氧化应激状态。近几年氧化应激与血管损伤的机制成为学术界研究热点，越来越多的证据表明，氧化应激为动脉粥样硬化形成的重要危险因素之一，而亲环素 A 作为一种氧化应激诱导的生长因子参与单核/巨噬细胞、内皮细胞的炎性反应，炎性细胞的趋化，诱导血管平滑肌细胞增殖，导致血管壁不可逆性损伤[1]。
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蓬子菜含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型细胞增殖与凋亡的影响
目的:观察蓬子菜含药血清对H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤模型细胞增殖与凋亡的影响,从分子生物学水平阐明蓬子菜保护血管内皮细胞的部分机制.方法:用不同浓度(0％,2％,5％,10％)的蓬子菜含药血清及通塞脉片含药血清与体外培养的经H2O2诱导的人脐静脉内皮细胞损伤模型共同孵育,以CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞内活性氧(ROS)含量.结果:与对照组比较,蓬子菜含药血清能够明显减轻H2O2对人脐静脉内皮细胞的增殖抑制作用,促进HUVECs的增殖,并与浓度呈正相关;能显著降低细胞内活性氧的含量,减少H2O2诱导的HUVECs凋亡;且优于正常血清组及通塞脉片血清组(P＜0.05).结论:蓬子菜能促进内皮细胞增殖,降低细胞内活性氧的含量,减少细胞凋亡,从而阻止ASO的发生,达到预防和治疗ASO的作用.
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硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响
目的 探讨硫化氢对氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响及有关机制.方法 人脐静脉内皮细胞分别经不同浓度(25、50、100、200μmol/L)和不同时间(6、12、24h)硫氢化钠预孵育24h后加入100 mg/L氧化型低密度脂蛋白处理24h,Hoechst 33258荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡,罗丹明123染色检测细胞线粒体膜电位变化,双氢罗丹明123染色检测细胞内活性氧的含量变化.结果 硫氢化钠预处理能以时间和浓度依赖性的方式抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡(均P＜0.01),硫氢化钠或N-乙酰半胱氨酸预先处理能显著阻断氧化型低密度脂蛋白引起的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位降低、活性氧生成增多(均P＜0.05).结论 硫化氢能显著抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,其机制与减少细胞线粒体膜电位及降低活性氧生成有关.
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6-姜酚诱导白血病细胞凋亡中细胞内活性氧及线粒体跨膜电位的改变
目的:研究细胞内活性氧(ROS)及线粒体跨膜电位(△ψm)在6-姜酚诱导慢性粒细胞白血病K562细胞、人急性T淋巴细胞白血病MOLT4细胞凋亡中的变化,探讨线粒体途径在白血病信号转导中的作用.方法:用不同浓度6-姜酚作用K562细胞和MOLT4细胞,以2,7-二氯荧光素(2,7-dichloro fluoresceinciactate,DCFH-DA)为细胞内活性氧探针,罗丹明-123为反映线粒体膜电位荧光探针,流式细胞仪检测ROS水平和线粒体膜电位的变化.结果:不同浓度6-姜酚作用K562细胞后,ROS水平显著高于对照组(P<0.01),△ψm显著低于对照组(P<0.01).姜酚作用MOLT4细胞后,ROS显著高于对照组(P<0.05).结论:6-姜酚能诱导白血病细胞株K562及MOLT4细胞ROS水平升高,降低细胞△ψm,通过线粒体途径介导白血病细胞凋亡.
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上转化纳米颗粒介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制研究
目的：探讨上转化纳米颗粒包覆的二氢卟吩（ UCNPs－Ce6）介导的光动力治疗对THP－1巨噬细胞凋亡机制。方法：通过DCFH－DA检测光动力治疗后细胞内活性氧（ ROS）的变化，通过钙黄绿素探针检测光动力治疗之后线粒体通透性转换孔（ MPTP）开放。通过免疫荧光与Western blotting检测光动力治疗后Bax蛋白与细胞色素C蛋白在胞浆和线粒体的表达。结果：光动力治疗后巨噬细胞内活性氧明显升高，线粒体膜电位下降，MPTP开放。免疫荧光与Western blotting结果显示光动力治疗后Bax蛋白发生了胞浆到线粒体的转位变化，细胞色素C从线粒体释放入胞浆，引起caspase级联反应诱导细胞凋亡。NAC阻断光动力治疗后ROS的产生，有效减少了巨噬细胞凋亡发生。结论：UCNPs－Ce6介导的光动力治疗能通过活性氧爆发激活线粒体－caspase通路引起THP－1巨噬细胞凋亡。
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非选择性腺苷受体激动剂5’－N－乙基酰胺基腺苷的体外心肌保护作用及其机制研究
目的：研究腺苷A2A和A2B受体是否参与NECA的抗心肌缺血再灌注损伤作用及其相关机制。方法：利用H9c2心肌细胞建立模拟缺血／再灌注损伤模型，给予非选择性腺苷受体激动剂5’－N－乙基酰胺基腺苷及选择性腺苷A2A、A2B受体拮抗剂，采用CCK－8法测定细胞活性，JC－1染色检测细胞线粒体膜电位（ΔΨm ），Amplex Red过氧化氢／过氧化物酶试剂盒测定细胞内H2O2水平，活性氧试剂盒检测细胞内活性氧（ROS）水平，MitoSox Red超氧化物指示剂检测线粒体内活性氧水平。结果：5’－N－乙基酰胺基腺苷明显改善缺血／再灌注损伤引起的细胞活性和线粒体膜电位的降低，显著抑制缺血／再灌注损伤导致的细胞和线粒体内活性氧含量的升高，腺苷A2A及A2B受体拮抗剂均可阻断5’－N－乙基酰胺基腺苷的上述作用。结论：5’－N－乙基酰胺基腺苷可减轻H9c2心肌细胞的缺血／再灌注损伤，腺苷A2A和A2B受体共同参与5’－N－乙基酰胺基腺苷的心肌保护作用，其机制可能与调节线粒体通透性转换孔（ mPTP）的开放及线粒体活性氧的产生有关。
