首页 > 文献资料
-
TRAIL基因对人白血病Jurkat细胞生物力学特性的影响
本实验研究将人类肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TNF-related apoptosis inducing ligand)的cDNA序列作为目的基因导入RevTet-On后,利用在Jurkat中所建立起的四环素调控TRAIL基因表达系统,作为研究肿瘤细胞凋亡前后生物流变学特性变化的细胞模型.我们通过测量用强力霉素诱导TRAIL基因表达前后细胞生物力学特性的变化,研究TRAIL基因对Jurkat细胞生物力学特性的影响.结果显示TRAIL基因的表达对Jurkat细胞有明显的促凋亡作用.TRAIL基因表达后,细胞表面电荷密度减少,流动性下降.而且,本实验表明,TRAIL基因诱导的细胞凋亡引起了Jurkat细胞膜的二级结构改变.
-
六种肿瘤细胞株BLM基因转录水平的研究
BLM基因的不同突变是导致Bloom综合征(Bloom's syndrome)的病因.BLM基因突变使姐妹染色单体互换率(sister chromatic exchange,SCE)增高,细胞DNA修复功能降低,这样受损的DNA很容易随细胞分裂而传入子细胞,细胞稳定性下降.临床表现为免疫缺陷,恶性肿瘤易患体质等等.本研究对BLM基因在肿瘤细胞株和正常人中表达的差异进行研究,以期发现肿瘤新的发生机制,为寻找新的特异分子治疗靶点提供线索.应用PT-PCR方法检测正常人造血细胞和六种肿瘤细胞株中BLM基因的mRNA水平,并作序列检测.结果表明,六种肿瘤细胞株均高表达BLM mRNA,但未见BLM基因结构异常,而正常人表达量很低(P＜0.01).结论:在本研究中的6种肿瘤细胞株高表达BLM mRNA,肿瘤细胞株和正常人BLM mRNA表达水平有显著差异性.BLM异常可能参与肿瘤的发生或是导致耐药的原因之一.
-
β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究
β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一.由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究.本研究探讨4种常见的白血病细胞株(Daudi, Jurkat, K562和Thp-1)中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平,了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常,以期发现白血病新的发生机制,为寻找新的特异治疗靶点提供线索.用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位,用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平.结果表明:4种白血病细胞株有两种(Jurkat、Thp-1)存在β-连环素的异常定位,且β-连环素mRNA表达增高,但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA 低于Daudi和K562细胞.这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性.结论:β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生,引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平.
-
Zebularine对Jurkat、K562细胞p53基因表达的影响
目的 了解药物zebularine对白血病细胞株Jurkat、K562细胞p53基因表达的影响,探讨其作用机制及在白血病基因治疗中的价值.方法 根据zebularine作用终浓度将白血病细胞株Jurkat、K562各分为3组:对照组、250 sμmoL/L组、500μmol/L组,分别用RT-PCR、Westem-blot方法 检测Jurkat、K562细胞在药物干预48 h后p53 mRNA和蛋白的表达情况.根据检测结果,探讨其作用机制及应用价值.结果在zebularine干预48 h后,在对照组和250μmol/L组均检测不到p53mRNA表达,而在500 μmol/L组中检测到有p53mRNA表达,差异有显著性(P＜0.05);6组细胞样品中均检测到p53蛋白表达,在500 μmol/L组中表达上升,差异有显著性(P＜0.05).结论 Zebularine可促进Jurkat、K562白血病细胞株p53的表达,并有一定的浓度依赖性,提示zebula-rine的干预激活了p53的表达,为zebularine治疗白血病提供了实验室依据.
关键词： zebularine Jurkat K562 P53 -
硼替佐米对淋巴瘤细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响研究
目的 观察硼替佐米对淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖凋亡和SHP-2基因表达的影响.方法 利用淋巴瘤细胞株Jurkat细胞和Raji细胞进行传代培养,用1.0、5.0、25.0和100.0 nmol/L不同浓度的硼替佐米进行处理,观察不同时间段细胞增殖抑制率和凋亡率,比较实验组和对照组SHP-2基因表达水平.结果 随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞抑制率增加;随着干预时间延长,相同硼替佐米浓度时,Jurkat细胞、Raji细胞抑制率也增加.随着硼替佐米浓度增加,相同干预时间下的Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率增加;随着干预时间延长,干预浓度相同时,Jurkat细胞、Raji细胞凋亡率也增加.对照组的SHP-2表达量小于硼替佐米干预组,且干预时间相同时,随着浓度增加,SHP-2表达量升高;药物浓度相同,随着干预时间延长,SHP-2表达量升高.结论 硼替佐米可抑制淋巴瘤细胞株Jurkat细胞、Raji细胞增殖,促进凋亡并提高SHP-2基因表达量,相关作用与浓度有关.
-
p27kip1及其出核相关分子激活蛋白1辅因子在淋巴瘤细胞中的表达及相互关系
目的 探讨p27kip1及其出核相关分子激活蛋白1(AP-1)的辅助因子Jab1在淋巴瘤细胞中的表达变化及相互关系.方法 采用血清饥饿合并释放方法同步化处理淋巴瘤细胞系Jurkat和Raji细胞,分别采用Western blot及RT-PCR技术检测p27kip1、Jab1在淋巴瘤细胞中的蛋白表达水平和mRNA表达水平变化;采用来普霉素B(LMB)刺激增殖过程中的淋巴瘤细胞,检测p27kip1、Jab1的表达变化;构建人Jab1基因的pcDNA3.1-myc-Jab1的真核表达质粒,脂质体转染Jurkat细胞,配合免疫荧光技术检测p27kip1的亚细胞定位情况;免疫沉淀检测Jurkat和Raji细胞中p27kip1与Jab1的结合情况.结果 血清饥饿导致Jurkat和Raji细胞生长周期停滞,p27kip1蛋白总量增加,Jab1蛋白总量减少.血清释放后两者的蛋白水平呈现相反的表达变化,而p27kip1 mRNA水平无明显改变.LMB可以抑制由血清释放引起的细胞增殖,在此过程中p27kip1表达上调,Jab1表达下调.转染Jab1真核表达质粒的Jurkat细胞p27kip1定位有明显的改变.免疫沉淀结果显示在Jurkat和Raji细胞中p27kip1与Jab1相互结合.结论 Jab1可能通过与p27kip1结合来介导p27kip1的核内外分布并影响其表达,进而影响p27kip1的功能状态,从而参与调控淋巴瘤细胞的生长.
-
MTS1基因β启动子转录活性研究
目的研究MTS1基因β启动子在急性T淋巴细胞白血病细胞株中的转录激活情况,鉴定β启动子转录活性的功能片段区.方法用DNA重组方法,构建MTS1基因β启动子3′端转录起始点相同,而5′端序列不同的7种pGL3重组质粒.用脂质体介导的基因瞬时转染法,将构建的重组质粒分别转染MTS1基因双等位缺失的Jurkat细胞株,检测pGL3重组质粒中荧光素酶报告基因的表达,观察β启动子在Jurkat细胞中的激活情况及其基础转录活性片段区.结果成功构建了MTS1基因β启动子7种不同片段的重组质粒,它们在Jurkat细胞中均有转录活性,其中0.38 kb SacⅡ-SacⅠ酶切片段是MTS1基因β启动子转录活性的基础片段.结论 MTS1β启动子可在Jurkat细胞中被激活.
-
反义Bmi-1对Jurkat细胞的抑制作用
目的观察反义Bmi-1表达质粒在体外对T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的生长抑制作用.方法选择Bmi-1基因起始密码子及与锌指结构对应的171 bp核苷酸片段,反向连接于pLNCX2质粒上,得到反义Bmi-1表达质粒;通过脂质体转染将质粒导入Jurkat细胞中,以G418进行筛选得到阳性克隆;以MTT法和体外集落形成实验检测反义Bmi-1表达质粒对Jurkat细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术分析细胞周期;采用免疫荧光组化法检测反义Bmi-1对Jurkat细胞P16蛋白的上调作用.结果转染反义Bmi-1表达质粒组与对照组(空白对照及空质粒组)相比较,生长速度明显变慢,克隆形成能力明显下降,空白对照组Jurkat细胞集落数为(90.70±9.07)/103细胞,空质粒组Jurkat细胞集落数为(83.30±6.11)/103细胞,转染反义质粒组Jurkat细胞集落数为(56.00±5.56)/103-细胞(P＜0.01);P16蛋白表达也明显增强.结论反义Bmi-1对Jurkat细胞的体外生长具有明显的抑制作用,并上调了P16蛋白的表达.
-
利用亲和层析法检测乙酰化蛋白的研究
目的 建立一种快速、相对定量检测乙酰化蛋白方法,并初步应用其检测药物作用后Jurkat细胞乙酰化总蛋白水平.方法 用不同浓度的曲古菌素A(TSA)诱导Jurkat细胞蛋白高乙酰化后,利用抗乙酰化赖氨酸抗体亲和层析柱富集纯化乙酰化总蛋白,经酸洗脱后固定于酶标板,ELISA法检测乙酰化蛋白相对总量,并用基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF)分析验证其成分；同法检测不同浓度的没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A三种药物作用Jurkat细胞后乙酰化总蛋白水平的变化,筛查诱导Jurkat细胞蛋白乙酰化药物.结果 1μmol/L TSA作用于4×105Jurkat细胞24 h,乙酰化总蛋白相对水平高.MALDI-TOF/TOF分析显示,TSA诱导Jurkat细胞产生的乙酰化蛋白共有22种,其中15种为乙酰化组蛋白.没食子酸、大黄素、单乙酰化大黄素A作用Jurkat细胞后所导致的乙酰化程度不同,以1μmol/L浓度TSA为阳性对照组,无药物为空白对照组,35.09 μmol/L和17.54 μmol/L大黄素处理的Jurkat细胞乙酰化蛋白相对水平分别为4.3％和14.2％；1.47 μmol/L和2.94 μmol/L没食子酸处理组乙酰化蛋白相对水平分别为28.7％和11.5％；152.91 μmol/L和30.58 μmoL/L单乙酰化大黄素组分别为22.0％和3.6％；其中1.47 μmol/L没食子酸所诱导的乙酰化蛋白水平高.结论 初步建立了活细胞基础上纯化富集并检测乙酰化总蛋白水平的方法,该法可快速、简便的筛选以组蛋白去乙酰化酶为靶点的抗癌药物.
-
短发夹RNA诱导survivin基因缄默对Jurkat细胞凋亡和增殖的影响
目的研究应用载体表达短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术抑制人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞survivin基因的表达,探讨survivin基因表达缄默对Jurkat细胞凋亡和增殖的影响.方法构建针对survivin基因的shRNA重组质粒并转染至Jurkat细胞,分别用多重PCR和Western blot法检测瞬时转染和稳定转染细胞survivin基因mRNA和蛋白表达水平的变化;流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞凋亡指数的变化,绘制细胞生长曲线,探讨survivin shRNA转染对细胞生长和增殖的影响.结果多重PCR结果示与无功能(对照组)shRNA处理组和磷酸盐缓冲液处理组比较,survivin shRNA瞬时转染和稳定转染细胞survivin基因mRNA表达均显著下降,抑制率分别为66.67%和60.69%(P＜0.05);Western blot结果显示survivin shRNA瞬时转染和稳定转染细胞survivin蛋白表达水平亦显著降低,抑制率分别为63.41%和60.18%(P＜0.05).流式细胞术检测瞬时转染和稳定转染细胞的凋亡率显著增加,分别为(22.41±2.83)%和(20.73±2.56)%(与对照组比较,P均＜0.05),细胞倍增时间显著延长.生长曲线显示稳定转染细胞的生长显著减慢.结论shRNA重组质粒介导的RNA干扰能明显抑制Jurkat细胞survivin基因mRNA和蛋白产物的表达,诱导细胞凋亡和生长抑制.
-
抗人DR5单克隆抗体诱导Jurkat和U937细胞凋亡作用的研究
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是肿瘤坏死因子超家族中的一员,它可诱导多种转化细胞和恶性肿瘤细胞凋亡,而对正常组织和细胞无明显毒性作用,这种特性使TRAIL可能成为一种低毒而有前途的抗肿瘤药[1].TRAIL的生物学效应是通过与细胞膜上的相应受体结合启动内源或外源性信号传导途径而产生的.
-
螺内酯诱导人急性白血病细胞Jurkat凋亡的作用研究
目的：研究螺内酯对人急性白血病细胞Jurkat体外增殖的抑制及诱导凋亡的作用。方法将终浓度分别是10、50及100μmol/L的螺内酯加入Jurkat细胞的培养体系中,24 h内每隔4 h通过 MTT法分析Jur-kat细胞的增殖抑制率,Annexin V/PI流式细胞术法分析Jurkat细胞的早期凋亡率。结果螺内酯与Jurkat细胞共同培养12 h后,螺内酯能显著增加对细胞的增殖抑制作用,并且与药物浓度成正相关,各浓度组的抑制率随着培养时间的延长而升高,与药物干预时间成正相关；螺内酯处理Jurkat细胞24 h,各浓度组诱导细胞凋亡率分别为：10μmol/L组(11．2±0．35)%、50μmol/L组(29．8±1．27)%及100μmol/L(56．5±1．41)%,各个浓度组诱导细胞凋亡率与药物浓度成正相关。结论螺内酯对人T淋巴细胞白血病Jurkat细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用,提示该药可能具有潜在抑瘤作用。
-
齐墩果酸诱导Jurkat细胞凋亡及对ROS和细胞内Ca2+含量的影响
目的 探讨齐墩果酸对白血病Jurkat细胞株增殖抑制和诱导凋亡作用,分析凋亡发生与细胞内活性氧(ROS)及钙离子浓度([Ca2+]i)变化的关系.方法 应用MTT法检测细胞增殖抑制；流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期；DCFH-DA荧光定量法检测ROS含量；Fluo-3AM荧光负载方法测定[Ca2+]i的变化.结果 齐墩果酸对Jurkat细胞的增殖具有浓度依赖性和时间依赖性抑制作用,0,40,80,160 μmol/L齐墩果酸作用24 h细胞凋亡率分别为(7.36±0.40)％、(19.80±1.59)％、(29.39±0.64)％、(34.72±0.94)％,G0/G1期细胞比例分别为(54.26±1.43)％、(85.83±0.91)％、(91.18±1.32)％、(92.90±1.19)％.80 μmol/L和160μmol/L齐墩果酸处理24 h,细胞中ROS和[Ca2+]i水平均明显高于对照组(P＜0.05),ROS和[Ca2+]i水平均与细胞凋亡率呈正相关(r分别为0.95、0.97).结论 细胞中ROS和Ca2+可能参与了齐墩果酸对Jurkat细胞的抑制增殖和诱导凋亡作用.
-
CD59促进LAT介导的T细胞活化
目的：研究CD59分子在LAT（ Linker for activated T cells ）介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法：构建LAT-GFP融合蛋白，以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞，建立稳定转染细胞株（ Jurkat-GFP）。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒（ GFP标记）沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位；MTT比色法检测细胞增殖率的变化；Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果：荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜，转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜，且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。 CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。 MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞，抗体活化后细胞增殖速率明显升高（P＞0.05），而电转干扰质粒后细胞生长减慢。 Western blot 结果表明，CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异（ P＞0.05），而磷酸化蛋白表达显著增高（ P＜0.05）。结论：抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜，且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高，进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。
-
下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat 凋亡相关分子的影响
目的:探讨下调CD59对急性T系白血病细胞株Jurkat凋亡相关分子的影响.方法:运用RNAi慢病毒为载体下调急性T系白血病Jurkat 细胞株CD59的表达;激光共聚焦观察转染效率及CD59分子的定位;Real-time-PCR、Western blot筛选下调效果好的一组细胞,用其做后续的分子生物学水平的实验;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、Survivin蛋白表达量的变化;ELISA检测各组的细胞培养上清中IL-3、TNF-β的表达. 结果:激光共聚焦观察到转染各组的转染效率在90%以上,CD59分子主要位于细胞膜;Real-time-PCR筛选得出下调A组的转染效果好;Western blot结果显示下调A组的CD59蛋白的表达量减少明显,将RNAi-CD59-A定义为RNAi-CD59作为实验组进行后续实验;实验组能增强Bax、Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制Bcl-2、Survivin蛋白的表达(P<0.05);ELISA结果显示下调组IL-3 表达水平降低(P<0.05), TNF-β的表达水平升高(P<0.05).结论:下调D59基因表达可使急性T系白血病细胞株Jurkat的促凋亡分子表达增高,促增殖分子表达降低.
-
vFLIP激活Jurkat细胞表达HIV抑制因子的研究
目的:检测KSHV编码的vFLIP蛋白对Jurkat细胞HIV抑制因子表达的影响.方法:本研究首先构建真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,再将其电穿孔至Jurkat细胞,然后使用实时荧光定量PCR技术检测Jurkat细胞中A3G、A3F、CCL5等HIV抑制因子的表达水平,从而探讨vFLIP抗HIV/AIDS的作用及机制.结果:成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-vFLIP,电转染效率达到40％左右.与对照载体转染组相比,vFLIP转染组内Jurkat细胞中CCL5、A3G、A3F及Mx2基因的表达分别上调了6.71、2.20、1.52及14.47倍.结论:vFLIP蛋白可以激活Jurkat细胞内某些HIV抑制因子的表达,提示其具有一定的抗HW/AIDS作用.
-
活化/抑制CD59对T淋巴细胞增殖的影响
目的:研究活化/抑制CD59分子对T细胞增殖的影响.方法:Jurkat细胞分别电转入pSUPER-siCD59质粒及用CD59活化抗体刺激.激光共聚焦显微镜下观察细胞的电转情况及CD59分子在细胞膜上的分布及表达;MTT比色法检测细胞的增殖.Western blot检测CD59分子表达及T细胞活化相关蛋白ZAP70磷酸化水平.结果:激光共聚焦显微镜下可见电转染细胞表达绿色荧光,转染效率约为40％.转染pSUPER-siCD59质粒后CD59荧光强度强度降低,CD59分子均匀分布于细胞膜与正常Jurkat细胞分布一致.抗体活化后CD59在细胞膜成簇状分布.抗体活后细胞增殖速率和磷酸化ZAP70的蛋白表达水平均高于正常组(P＜0.05),而细胞电转质粒后则恰恰相反.结论:CD59通过与信号转导分子的相互作用促进T细胞活化增殖.
-
蝎素组分Ⅲ对Jurkat细胞NF-κB通路的调节作用
目的:研究蝎素组分Ⅲ(SVC-Ⅲ)对Jurkat细胞NF-kB通路的免疫调节作用.方法:不同浓度(0、0.1、1.0、10、100ns/mL)SVCⅢ刺激Jurkat细胞,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IKK1和IkBa mRNA表达变化;荧光素酶报告基因测定NF-kB活化情况.结果:低剂量的SVC-Ⅲ(0.1、1.0 ng/mL)对IKK1、IkBa及NF-kB有促进作用,浓度为1.0ng/mL促进作用强,中、高剂量SVC-Ⅲ(10ng/mL、100 ng/mL)对IKK1、IkBa及NF-kB则有抑制作用.结论:不同剂量的SVC-Ⅲ对NF-kB呈现活化或抑制作用,因此对T淋巴细胞中NF-kB通路的调节具有剂量依赖性.
-
油茶皂苷体外诱导人白血病Jurkat细胞凋亡及其可能机制
目的:探讨油茶皂苷在体外诱导人白血病Jurkat细胞的凋亡及其可能机制.方法:将不同浓度的油茶皂苷作用于人白血病Jurkat细胞,应用细胞计数法检测其对细胞增殖的影响,FCM检测细胞周期分布和细胞凋亡率,蛋白质印迹法检测细胞caspase-3、多聚ADP-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose) polymerase,PARP]、p-Bcl-2、Bcl-2、Bax和caspase-9蛋白的表达.结果:1～16 μg/mL油茶皂苷可抑制Jurkat细胞的增殖,呈剂量依赖性.1～4μg/mL油茶皂苷作用Jurkat细胞24 h后,G0/G1期和G2/M期细胞比率下降,S期细胞比率上升,细胞凋亡率随着油茶皂苷浓度的增加而上升；Jurkat细胞中,p-Bcl-2和Bcl-2蛋白的表达水平下调,caspase-3、PARP和caspase-9蛋白的表达水平上调,Bax蛋白的表达水平无明显变化.结论:油茶皂苷能抑制人白血病Jurkat细胞增殖和诱导其凋亡,其作用机制可能与细胞凋亡的线粒体途径有关.
-
导入野生型p53基因对T细胞淋巴瘤化疗敏感性的影响
目的:探讨野生型p53基因对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞化疗敏感性的影响.方法:用脂质体介导法,将p53基因导入Jurkat细胞,经G418筛选获得p53稳定表达的细胞, 将细胞分别与0.1～100 μg/ mL 阿霉素(doxorubicin,ADM)或0.1～100 μg/mL足叶乙甙(etoposide, VP16) 培养24 h,采用MTT法检测细胞的生长抑制率.结果:转染p53基因的Jurkat细胞在0.47 μg/mL ADM和2.5 μg/mL VP16作用后,细胞生长抑制率为50%,与空载体转染组和未转染组比较,半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)明显降低(P<0.05).结论:p53基因能提高T细胞淋巴瘤Jurkat细胞对化疗药物ADM和VP16的敏感性, p53基因联合化疗药物可能成为耐药T细胞淋巴瘤治疗的新途径.
