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AnnexinⅡsiRNA对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响
目的 观察沉耿膜联蛋白Ⅱ(annexinⅡ,A2)基因对淋巴瘤Jurkat细胞凋亡的影响.方法 采用A2 siRNA转染人淋巴瘤Jurkat细胞后应用RT-PCR和Western blot鉴定干扰效果.Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响.结果 Real-time PCR和Western blot检测结果表明,A2基因被成功抑制.流式细胞术检测得A2siRNA组细胞凋亡率为57.47%±2.10%.较阴性对照组(28.68%±1.21%)明显增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 A2基因可增强Jurkat细胞抗凋亡作用,A2 siRNA可诱导Jurkat细胞凋亡.
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阿司匹林对Jurkat细胞体外作用的实验研究
目的:探讨非甾体类抗炎药阿司匹林对存在有β-连环素异常表达的T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的作用及机制.方法:MTT法观察阿司匹林对Jurkat细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测阿司匹林对Jurkat细胞细胞周期分布的影响.实时荧光定量RT-PCR法分析经不同浓度的阿司匹林处理后的Jurkat细胞β-连环素及CyclinD1基因的表达水平的改变.结果:阿司匹林呈剂量依赖性抑制Jurkat细胞的增殖,72 h半数抑制浓度为1.78 mmol/L;随浓度增加,CyclinD1基因及蛋白的表达水平均下调.结论:非甾体类抗炎药阿司匹林可能通过影响Wnt信号通路调节某些细胞周期相关基因的表达,将Jurkat细胞阻滞于G0/G1期,从而抑制白血病细胞株Jurkat的增殖.
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Tal1促进急性T淋巴白血病Jurkat细胞的增殖
目的 探讨Tal1对T-ALL细胞增殖及其机制的影响.方法 用Tal1慢病毒感染T-ALL细胞株Jurkat,建立稳定的Tal1敲降细胞株(Jurkat-siTal1)和Tal1过表达细胞株(Jurkat-T1),及siRNA阴性对照细胞(Jurkat-mock1)和过表达阴性对照细胞(Jurkat-mock2).CCK-8检测细胞生长能力;流式细胞术检测细胞周期;Real-time RT-PCR和Western blot检测周期蛋白依赖性激酶抑制因子2(CDKN2A)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子1(CDKN2B)mRNA和蛋白表达.结果 成功建立Jurkat稳定转染细胞株.CCK8结果表明细胞Jurkat-T1与Jurkat-mock2相比,细胞生长更快,而Jurkat-siTal1与Jurkat-mock1相比,细胞生长明显减缓.流式细胞术检测细胞周期发现,Jurkat-siTal1与Jurkat-mock1相比G0/G1期增加,S期减少;而Jurkat-T1与Jurkat-mock2相比,G0/G1期减少,S期增加.Real-time RT-PCR和Western blot结果显示Tal1抑制Jurkat细胞内CDKN2A、CDKN2B的mRNA和蛋白表达.结论Tal1可以促进T淋巴白血病细胞Jurkat增殖;促进Jurkat细胞由G0/G1期向S期转换,其可能通过Tal1抑制G0/G1和S期负调控蛋白CDKN2A、CDKN2B的表达.
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在不同应激状态下MDM2基因对Jurkat细胞的作用
[目的]探讨MDM2基因在不同应激状态下对T细胞性白血病细胞株Jurkat增殖、凋亡和基因表达的影响.[方法]采用RNA干扰下调白血病细胞株Jurkat MDM2基因表达后,用Western blot、流式细胞术等方法检测Jurkat细胞在不同应激状态下的变化.[结果]无应激状态下,MDM2基因表达下降后,Jurkat细胞增殖减慢,细胞周期表现一定程度的G1-S阻滞;E2F1表达明显降低超过78%,p65表达下调超过58%;细胞损伤后,MDM2表达下调可导致细胞损伤修复减慢,增强紫外线和甲氨喋呤诱导凋亡作用,导致甲氨喋呤作用下Rb和Bax基因的表达相对增加.[结论]在不同应激状态下,MDM2基因表达下降广泛影响Jurkat细胞的增殖、凋亡和基因表达等生物学特性,提示MDM2基因有可能作为T细胞性白血病治疗的潜在新靶点.
关键词： MDM2基因:T细胞性白血病 Jurkat RNA干扰 -
红桂木凝集素对Jurkat T淋巴细胞生长的影响
目的 研究红桂木凝集素(ALL)对Jurkat T淋巴细胞生长的影响.方法 将ALL单独作用于CD4+T淋巴细胞系Jurkat E6-1细胞株,WST-8比色法检测细胞增殖;倒置显微镜观察细胞生长变化;酶联免疫夹心法(ELISA)检测IL-2、IL-10和IFN-γ的分泌水平.结果 ALL(0.36～360 μg/ml)单独作用后,能够抑制T细胞的增殖,抑制率为1.82%～59.17%(P＜0.01),且呈剂量-效应关系,其半数细胞抑制剂浓度(IC50值)为59.72 μg/ml,且镜下可见细胞集落形成受到抑制;ALL对细胞因子IL-2和IFN-γ的分泌均有明显促进作用,ALL(1.8 μg/ml)处理组IL-2和IFN-γ的分泌与空白对照组比较分别增加了11.69倍和21.29倍(P＜0.01).结论 ALL能有效抑制Jurkat T淋巴细胞的生长,且具有剂量-效应关系.
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Jurkat(E6-1)细胞TCR alpha和beta链重排基因家族取用分析
目的 探讨人T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat(E6-1)TCR alpha和beta链的重排基因家族的取用及基因、氨基酸序列与结构,为Jurkat细胞做为单克隆T细胞研究的模型提供基础.方法 采用T细胞TCR的免疫扫描谱型分析技术(im-munoscope spectratyping),监测Jurkat细胞的alpha和beta链各基因家族的取用,ABI测序仪测序出各取用家族基因的序列,并分析其氨基酸组成(DNA tools软件),模拟H{TCR的结构(CPH modle 2.0 Server和Informax 9.0).结果 Jurkat细胞TCR alpha链的基因家族取用为:可变区为TRAV1,连接区为TRAJ3;beta链的基因家族取用为:可变区为TRBV8S1,连接区为TRBJIS2.结论 Jurkat(F6-1)细胞的TCR alpha和beta链基因、氨基酸序列和结构的确定,将为Jurkat做为效应T细胞、TCR重排模型等方面的研究提供基础.
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酪氨酸磷酸化抑制剂AG490抑制Jurkat T细胞增殖
目的:通过AG490对Jurkat T细胞活化、增殖、周期、凋亡及ICBP90蛋白表达的影响.探讨阻断JAK/STAT信号通路以抑制Jurkat T细胞生长的可能性及其初步机制.方法:以Jurkat T细胞为模型,应用双荧光抗体标记结合流式细胞仪检测AG490对Jurkat T细胞表面分子CD69和CD25表达的影响;利用噻唑蓝(MTT)比色法观察AG490对Jurkat T细胞增殖的影响;采用碘化丙锭(PI)染色检测AG490对Jurkat T细胞周期的影响;应用Annexin V-FITC和PI双染色检测AG490对Jurkat T细胞凋亡的影响;Western blot检测AG490对Jurkat T细胞中ICBP90蛋白表达的影响以确定其与AG490抑制Jurkat T细胞增殖的关系.结果:随着AG490浓度从1 mmol/L增至30 mmol/L,细胞停滞于G0/G1期,阻止其进入S期和G2/M期,导致Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达显著降低;AG490对细胞的抑制作用于24 h为明显,抑制率可达27.37%,呈剂量依赖关系;AG490不能明显抑制Jurkat T细胞的活化或促进其凋亡.结论:AG490能明显抑制Jurkat T细胞的生长,其抑制作用可能通过下调Jurkat T细胞ICBP90蛋白的表达与细胞周期阻滞有关,而不是通过促进细胞凋亡而实现.
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cblN/Zap嵌合分子的构建及其对Jurkat细胞TCRζ的下调
目的:构建cblN/Zap嵌合分子, 稳定转染Jurkat细胞后观察对细胞TCRζ的影响.方法: 提取Jurkat细胞的总RNA并反转录为cDNA, 以其作为模板用PCR方法扩增Zap基因的SH2片段.以含有人全长cbl cDNA的质粒pEFHAcbl作为模板扩增cbl基因的N-端(cblN), 并在其N末端带上含24 bp的flag标签.用重叠延伸PCR法, 在cblN基因内部的SH2两端引入BamH I和EcoR V酶切位点并克隆入pcDNA3.1(+)中.再以Zap基因的SH2置换cblN基因的SH2, 即成为pcDNA3.1(+)-cblN/Zap.酶切鉴定及测序正确后, 采用脂质体法稳定转染Jurkat细胞, 用RT-PCR和Western blot鉴定flag-cblN/Zap的表达, 用Western blot检测其对细胞TCRζ表达的影响.结果: 重组质粒pcDNA3.1(+)-flag-cblN/Zap经酶切后可产生与理论预期长度相符的片段.且测序证实其序列正确.脂质体法稳定转染Jurkat细胞后, 检测到目的基因在RNA和蛋白水平的表达.表达的cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.结论: 重构嵌合分子cblN/Zap可下调Jurkat细胞的TCRζ.
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PMA对Jurkat细胞株中可溶型分泌和膜型TRAIL表达的调节
目的:探讨乙酰肉豆蔻佛波酯(PMA)对Jurkat细胞可溶型TNF相关的凋亡诱导配体(solubletumor necrosis factor-related apoptosis-inducing igand,sTRAIL)分泌和膜型TRAIL(membrane bound TRAIL,mTRAIL)表达的调节,以及二者的细胞毒作用.方法:分别采用ELISA及间接免疫荧光染色和流式细胞术分析,检测sTRAIL的分泌和mTRAIL的表达水平;用4h51Cr释放试验检测sTRAIL和mTRAIL对靶细胞Raji的细胞毒作用.结果:PMA刺激24h后jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达均增加,sTRAIL分泌在刺激后48h达峰值,mTRAIL表达峰值在60h.两型TRAIL都具有对Raji细胞的细胞毒作用.结论:PKC活化剂PMA可上调Jurkat细胞sTRAIL分泌和mTRAIL的表达,两型TRAIL分子都具有杀伤靶细胞的细胞毒作用.
