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溴阻燃剂对Jurkat淋巴细胞毒性作用
目的 研究十溴联苯醚(BDE-209)和四溴双酚A(TBBPA)对人淋巴Jurkat细胞增殖作用的影响.方法 采用CCK-8法检测不同剂量(10、20和40μmol/L)的BDE-209和TBBPA对Jurkat细胞存活率和细胞活性抑制率的影响.结果 BDE-209和TBBPA在0～ 40 μmol/L的剂量范围内均抑制Jurkat细胞的增殖作用；且BDE-209在剂量为10、20和40 μmol/L时差异均有统计学意义(P＜0.05),TBBPA在剂量为20和40μmol/L时差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 BDE-209和TBBPA均对人体的免疫细胞增殖产生不利的影响.
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重组人肿瘤坏死因子相关凋亡配体的凋亡效应
目的 研究重组可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡配体(TRAIL)诱导细胞凋亡的生物学活性.方法 应用RT-PCR方法检测TRAIL受体(DR4和DR5)表达;细胞数目分析采用CCK试剂盒;细胞凋亡应用PI染色并经流式细胞仪检测;线粒体膜电位观察采用JC-1荧光染料.结果 重组可溶性TRAIL抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡;凋亡过程中出现线粒体膜电位的降低.结论 此重组可溶性TRAIL具有诱导细胞凋亡的生物学活性.
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去氢骆驼蓬碱诱导急性白血病Jurkat细胞凋亡及其机制
目的 本研究旨在研究去氢骆驼蓬碱体外诱导Jurkat细胞凋亡及其可能机制.方法 采用MTT法测定去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞的生长抑制作用；用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡；应用蛋白印迹法检测去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡过程中bcl-2与ICAD的表达变化情况.结果 去氢骆驼蓬碱对Jurkat细胞有明显的生长抑制作用,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;bcl-2与ICAD在Jurkat细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低.结论 去氢骆驼蓬碱可诱导Jurkat细胞凋亡,bcl-2与ICAD在去氢骆驼蓬碱诱导Jurkat细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子.
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转导反向6A8α-甘露糖苷酶cDNA对抗Fas抗体诱导Jurkat细胞凋亡的影响
用梯形DNA电泳与Gimsa染色研究人T细胞瘤细胞株Jurkat在转导编码人6A8 α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA后，对抗Fas 抗体诱导凋亡敏感性的变化，并用间接免疫荧光染色（流式细胞仪）检测细胞表面Fas分子的表达。结果表明，抗Fas抗体诱导细胞24h后，野生型及转导空载载体的Jurkat细胞出现明显的梯形DNA，两者之间无明显差异，但转导反向6A8 cDNA的细胞未见明显的梯形DNA。Gimsa染色结果显示转导反向6A8 cDNA的Jurkat细胞中凋亡细胞数明显减少，而转导空载载体则无影响。Jurkat细胞为Fas（CD95, Apo-1）全阳性细胞，转导反向6A8 cDNA或空载载体对Fas表达阳性率与Fas表达强度无明显影响。以上结果提示，转导编码6A8α-甘露糖苷酶基因的反向cDNA使人T细胞株Jurkat对抗人Fas抗体诱导的凋亡作用产生耐受。
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丙戊酸钠对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖及凋亡的影响
本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)对Jurkat细胞增殖的抑制作用及对凋亡的影响.选择不同浓度的VPA处理Jurkat细胞,采用CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测抑凋亡基因BCL-2及促凋亡基因Bak1的变化.结果表明,VPA对Jurkat细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性,与对照组相比,随药物浓度增高,细胞凋亡率增加；VPA能够使抑凋亡基因BCL-2表达减低,但对促凋亡基因Bak1的表达无明显影响.结论:VPA可促进Jurkat细胞凋亡,可能与其抑制BCL-2表达有关.
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ADAM10抑制剂GI254023X对Jurkat细胞的增殖和凋亡作用及机制研究
目的:探讨ADAM10抑制剂GI254023X对急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法:选择不同浓度的GI254023X处理Jurkat细胞,采用CCK-8法检测并绘制增殖抑制曲线,Annexin V/7-AAD双染检测细胞存活与凋亡,Western blot检测Notch1蛋白的切割,定量PCR检测抑凋亡基因BCL-2、MCL-1、BCL-xl及Notch1靶基因Hes-1的转录变化.结果:GI254023X能明显抑制Jurkat细胞增殖,且呈量-效关系,但无明确的时-效关系.GI254023X能够诱导Jurkat细胞凋亡.Western blot检测结果显示,Cleaved Notch1在GI254023X作用后水平下降,而Notch1水平升高;GI254023X能够使抑凋亡基因MCL-1和Hes-1表达下调,对BCL-2和BCL-xl转录无明显影响.结论:GI254023X能抑制Jurkat细胞增殖并诱导其凋亡,其机制主要与抑制Notch1活化和下调MCL-1转录有关.
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熊果酸诱导Jurkat细胞凋亡及其作用机制的研究
本研究观察熊果酸(ursolic acid,UA)对人T细胞白血病/淋巴瘤细胞(Jurkat)凋亡的影响及其初步作用机制.用不同浓度UA在不同时间处理Jurkat细胞,采用细胞毒性试验(CCK8法)检测细胞增殖情况;应用荧光显微镜及流式细胞术检测细胞凋亡;实时定量PCR检测PTEN mRNA的表达水平.结果表明:UA在10-80 μmol/L的浓度范围内能抑制Jurkat细胞的生长,并呈现剂量-时间依赖性;UA 40、80μmol/L处理Jurkat细胞24、48 h后,出现凋亡细胞,并可见其细胞核呈波纹状或折缝样,荧光染色增强.UA诱导Jurkat细胞凋亡的作用呈浓度依赖性,与同时间对照组比较差异有统计学差异(P＜0.05);与同时间对照组相比,UA能够增加PTEN mRNA的表达.结论:UA可以上调PTEN mRNA的表达,并可能通过此机制诱导Jurkat细胞凋亡.
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has-miR-150对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制
目的:本研究旨在探讨has-miR-150对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法:通过构建慢病毒载体过表达miR-150并感染Jurkat细胞,另设空白组和阴性对照组,应用实时定量PCR法检测miR-150的表达;应用CCK-8法和流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡情况,Westem blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的蛋白表达.结果:构建的慢病毒载体过表达miR-150后感染Jurkat细胞,has-miR-150表达升高约2.06倍(P＜0.05);与阴性对照相比,过表达miR-150后Jurkat细胞增殖能力明显下降(P＜0.01),凋亡数明显增多(P＜0.01),p-Akt及p-p65蛋白的表达明显下调,Akt蛋白的表达无明显变化.结论:过表达has-miR-150可以有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导其凋亡,对T-ALL可能具有潜在的抑癌作用,其机制可能与负调控PBK/Akt/NF-κB信号通路有关.
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藤黄酸通过MAPK通路诱导Jurkat细胞凋亡的机理
本研究探讨藤黄酸对Jurkat细胞的抑制作用及可能机理.以不同浓度藤黄酸与抑制剂处理Jurkat细胞,Annexin V/PI双染法检测细胞的凋亡；流式细胞仪检测荧光素激活的caspase3、caspase 8、caspase 9阳性细胞水平；免疫印迹检测pro-caspase 3、pro-caspase 9、磷酸化JNK及P38蛋白水平.结果表明,藤黄酸呈浓度依赖性诱导Jurkat细胞凋亡；藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase3、caspase8、caspase9阳性细胞水平升高,caspase3、caspase9活化蛋白及磷酸化JNK及P38蛋白水平升高；ROS、CaMKⅡ、caspase 3、caspase 9、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂减弱藤黄酸诱导Jurkat细胞凋亡的作用；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2及P38抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后caspase 3、cmaspase9活化蛋白水平；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、JNK1/2抑制剂降低藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化JNK蛋白水平；ROS、CaMKⅡ、MAPKK、P38抑制剂减弱藤黄酸作用Jurkat细胞后磷酸化P38蛋白水平.结论:藤黄酸通过激活caspase途径诱导Jurkat细胞凋亡,该过程可能与ROS- CaMKⅡ-MAPKK-JNK/P38通路有关.
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4'-羟基汉黄芩素对急性淋巴细胞白血病细胞增殖和凋亡的作用研究
目的:研究4'-羟基汉黄芩素(4'-hydroxywogonin)对急性淋巴细胞白血病细胞株SUP-B15和Jurkat细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养SUP-B15和Jurkat细胞,经不同浓度的4'-羟基汉黄芩素处理细胞后,用CCK8法测定4'-羟基汉黄芩素对细胞增殖的抑制作用;Annexin V-APC/7-AAD双染流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot检测BCL-2,cleaved caspase-3,C-MYC等蛋白表达情况.结果:4'-羟基汉黄芩素呈剂量依赖性抑制SUP-B15和Jurkat细胞的增殖(r=0.78,r=0.89),24 h IC50分别为(6.32±0.53) μg/ml,(12.04±0.42) μg/ml.在梯度药物浓度下,细胞凋亡率增高.Westwm blot检测结果显示,4'-羟基汉黄芩素使凋亡相关蛋白BCL-2表达下调(P＜0.01);cleaved caspase-3表达上调(P＜0.01);细胞增殖相关蛋白C-MYC表达下调(P＜0.01).结论:4'-羟基汉黄芩素可通过抑制SUP-B15和Jurkat细胞的增殖及诱导其凋亡而发挥抗肿瘤作用,其机制可能与下调BCL-2,C-MYC表达,上调cleaved caspase-3蛋白表达有关.
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HSP90抑制剂17-DMAG对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株增殖和凋亡的影响
目的:探讨热休克蛋白90 (HSP90)抑制剂17-二甲胺乙胺基-17去甲氧基格尔德霉素(17-DMAG)对急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖及凋亡的影响.方法:收集Jurkat细胞,应用HSP90抑制剂17-DMAG作用于细胞株,通过半定量PCR检测HSP90的基因表达,WST技术检测17-DMAG对细胞增殖的影响,Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡.结果:不同浓度17-DMAG作用于Jurkat细胞48 h后,HSP90 mRNA表达明显减少,且呈剂量依赖性(r=0.9530,P≤0.01);17-DMAG处理Jurkat细胞48 h的IC5o为3.17 μmol/L,作用于Jurkat细胞后抑制Jurkat细胞增殖(r=0.9903,P≤ 0.01),促进Jurkat细胞凋亡,且呈剂量依赖性(r=0.9876,P≤0.01).结论:HSP90抑制剂17-DMAG能够抑制急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞株的增殖并诱导其凋亡.
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eEF1A1基因敲除对Jurkat细胞增殖和凋亡的影响及其机制探讨
本研究旨在探讨真核翻译延长因子1A1(eEF1A1)表达沉默对人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞株Jurkat增殖、凋亡的影响及其作用机制.应用实时PCR法和Western blot法分别别检测Jurkat细胞和3例健康成人外周血单个核细胞(PBMNC)中eEF1A1 mRNA和蛋白的表达.构建eEF1A1-shRNA慢病毒并感染Jurkat细胞,另设空白和阴性对照组,应用实时PCR法和Western blot法分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达；应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期,Western blot法检测细胞PI3K/Akt信号通路相关信号分子的表达.结果表明,Jurkat细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达水平明显高于健康成人PBMNC中的表达(P＜0.01,P＜0.05)；构建的eEF1A1-shRNA慢病毒高效沉默Jurkat细胞eEF1A1的表达.与阴性对照组相比,eEF1A1-shRNA组Jurkat细胞增殖能力明显下降,凋亡明显增多,细胞周期被阻滞于G0/G1期,p-Akt、NF-κB、p-NF-κB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显下调.结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,其表达沉默可有效抑制Jurkat细胞的增殖并诱导凋亡,其机制可能与下调PI3K/Akt/NF-κB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
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BRD4抑制剂JQ1对Jurkat细胞增殖抑制及凋亡诱导作用的研究
目的:探讨布罗莫结构域抑制剂(JQ1)对急性T淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)的增殖抑制、诱导凋亡作用以及可能的作用机制.方法:应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测JQ1作用于Jurkat细胞后的细胞增殖抑制率,AnnexinV-FITC/PI荧光染色流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,实时荧光定量PCR检测Notch1及c-Myc基因表达水平.结果:随药物浓度的增加,Jurkat细胞生长受到明显抑制,表现为时间-剂量依赖性.JQ1 0.8、1.6、4μmol/L处理Jurkat细胞48和72 h后,Jurkat细胞株的凋亡率呈时间-剂量变化,与对照组比较有统计学差异(P＜0.05).PCR检测显示,药物作用48 h后Notch1及c-Myc mRNA表达均下调,与对照组相比,有显著差异.结论:JQ1可以有效抑制Jurkat细胞株的增殖,这可能是通过Notch1基因和c-Myc基因促进凋亡.JQ1可以作为治疗T-ALL新途径之一.
关键词： JQ1 Notch1/c-Myc Jurkat细胞 细胞凋亡 -
下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞TAL1相关调控基因表达谱影响的初步分析
目的:前期研究显示,下调PPP2R5C表达能抑制T细胞白血病细胞株Jurkat细胞增殖.本研究利用基因芯片技术分析RNA干扰下调PPP2R5C表达对Jurkat细胞中TAL1通路相关基因的影响.方法:利用核转染技术将PPP2R5 C-siRNA799转导Jurkat细胞,培养48 h后,提取细胞总RNA,纯化mRNA后逆转录制备目标序列,与Affymetrix基因表达谱芯片3'IVT杂交,以Affymetrix GeneChip Scanner 3000扫描仪扫描得到原始图像数据,并应用Gene spring GX 11.0软件进行差异表达谱分析.结果:基因芯片分析的TAL1信号通路相关的26个基因全部发生了差异表达,其中上调表达的基因有15个,下调表达的基因有11个;明显上调表达的基因有GATA1、TCF4、XRCC6和TCF3,而明显下调表达的基因有SIN3A和RUNX1.结论:下调Jurkat细胞PPP2R5C基因表达,在一定程度上能抑制TAL1信号通路基因,从而抑制Jurkat细胞增殖.
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eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究
本文探讨真核翻译延伸因子1A1(eEF1A1)回复表达对eEF1A1基因敲除人急性T淋巴细胞白血病(TALL) Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.构建表达的eEF1A1慢病毒并感染eEF1A1基因敲除的Jurkat细胞,应用RT-PCR和Western blot分别检测细胞eEF1A1 mRNA和蛋白的表达；应用MTT法、Annexin V-APC标记法、DNA倍体法分别检测细胞增殖、细胞凋亡和细胞周期,Western blot法检测细胞PI3 K/Akt信号通路相关信号分子的表达.结果表明,构建的eEF1A1表达慢病毒使基因敲除Jurkat细胞的eEF1A1表达明显回复.与阴性对照组相比,eEF1A1表达组Jurkat细胞增殖能力明显增强,凋亡明显减少,G0/G1期细胞比例明显减少；随着S期、G2/M期细胞比例增多,pAk、NF-kB、p-NF-kB、mTOR、p-mTOR蛋白的表达明显升高.结论:eEF1A1在T-ALL细胞中可能具有潜在的致癌作用,它的表达可有效促进Jurkat细胞的增殖并抑制凋亡,其机制可能与上调PI3K/Akt/NF-kB和PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.
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沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究
本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响.针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化.结果表明:与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制(P＜0.05);沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低(P＜0.05).结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖.
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miR-20a海绵载体构建及在白血病细胞株Jurkat中的表达
本研究构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立Jurkat-S稳定细胞株,为进一步研究的miR-20a功能及应用干扰技术治疗奠定基础.设计、合成1对含有2个重复针对miR-20a成熟序列第9-12碱基错配的序列,并带有酶切位点,退火后连接到pCDNA3.0-L表达载体上；载体双酶切后再与退火产物连接,重复4次后进行酶切及荧光素酶活性鉴定；亚克隆到慢病毒表达载体,与psPAX2、PMD2G共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒颗粒并测定病毒滴度,感染Jurkat细胞,建立稳定细胞株；应用实时PCR和Western blot技术分别检测Jurkat-S稳定细胞中P21及E2F1 mRNA和蛋白的表达,并与对照组进行比较.结果表明,成功构建了针对miR-20a基因的海绵载体,病毒滴度为5×107TU/ml;建立了稳定转染的Jurkat-S细胞株.有效干扰验证显示,miR-20a海绵能明显上调P21及E2F1的mRNA及蛋白表达水平,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:成功构建miR-20a基因的miRNA海绵载体,建立稳定干扰miR-20a表达的Jurkat-S细胞株.
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MIP-1α诱导Jurkat细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层能力分析
本研究为探究人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞脑转移发生中枢神经系统白血病的机制及MIP-1α在T-ALL模式细胞Jurkat穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)过程中的作用.应用real-time PCR、siRNA试验、跨内皮迁移试验和细胞黏附试验,分别检测MIP-1 α的表达、Jurkat细胞穿透能力、迁移能力和黏附力.结果表明,Jur-kat细胞作为研究T-ALL细胞穿过血脑屏障(BBB)机制的模式细胞MIP-1α表达均高于正常人T淋巴细胞以及其他3种T-ALL细胞系(HSB2、CEM、SUP-T1),Jurkat细胞分泌的MIP-1α使其穿过HBMEC单层能力增强.MIP-1 αsiRNA干扰后的Jurkat细胞对HBMEC黏附和跨内皮迁移力下降.结论:Jurkat细胞分泌的MIP-1α参与了Jurkat细胞穿过HBMEC单层的过程.
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低氧及其模拟物CoCl2下调Foxp3的表达不依赖于HIF-1α
本研究探讨低氧条件下人T-淋巴细胞白血病Jurkat细胞株Foxp3表达水平及在该过程中HIF-1α的作用,并研究低氧影响调节性T细胞功能的作用机制.应用低氧(1%CO2)及其模拟化合物CoCl2处理Jurkat细胞并在不同时相后用Western blot检测HIF-1表达情况,同时应用real-time PCR检测Foxp3表达水平;应用RNA干扰技术抑制Jurkat细胞HIF-1α基因表达,然后分别检测HIF-1α及Foxp3的表达水平.结果表明:Jurkat细胞经过低氧(1%CO2)及其模拟化合物CoCl2处理后,HIF-1α有明显累积,而Foxp3表达明显下降;Jurkat细胞的HIF-1基因经siRNA干扰抑制后,低氧模拟化合物CoCl2依然可以下调Foxp3表达.结论:低氧及其模拟物CoCl2可以明显下调Foxp3表达,但该过程不依赖于HIF-1.
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抗原冲击致敏树突状细胞诱导特异性CTL杀伤Jurkat细胞实验研究
本研究以健康人外周血单核细胞为前体细胞,体外诱导其为树突状细胞(DC),分别负载Jurkat细胞冻融抗原及WT1多肽抗原,产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),以探讨其对白血病Jurkat细胞的杀伤作用.联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α及rhsCD40L等细胞因子,密度梯度离心法、贴壁法从外周血获取单核细胞并进行诱导扩增,培养出DC,分别用冻融抗原及WT1多肽抗原冲击致敏DC.实验分4组:冻融抗原致敏DC组为实验组A, WT1多肽致敏DC组为实验组B,未致敏DC组为对照组A,单核细胞组为对照组B,观察CTL对Jurkat细胞的杀伤作用.结果表明:培养出了具有典型特征的DC,它高表达CD40、CD80、CD1a 及CD86等表面标志,能体外诱导强烈的同种异基因混合淋巴细胞增殖反应.实验组显示高水平杀伤率,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.01),实验组A、B间比较无统计学意义.结论:Jurkat细胞冻融抗原及WT1多肽抗原冲击致敏DC能有效诱导T细胞抗白血病作用,为临床研制DC疫苗提供了实验依据.
