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沉默Sam68基因对Jurkat细胞增殖影响的研究
本研究探讨Sam68基因对人急性T淋巴细胞白血病细胞Jurkat增殖的影响.针对Sam68 mRNA 531-552靶位点设计并合成shRNA,构建pLKO-Tet-On条件性真核干扰载体,制备慢病毒并感染Jurkat细胞;应用强力霉素(Doxycycline)诱导干扰载体表达,用Real-time PCR和Western blot验证干扰效率,用改良MTT法检测沉默Sam68基因对Jurkat细胞活力的影响,用体外细胞集落形成实验观察沉默Sam68基因对细胞集落形成能力的影响,用流式细胞术分析沉默Sam68前后细胞周期的变化.结果表明:与对照组相比,实验组Sam68基因的表达被有效抑制(P＜0.05);沉默Sam68基因降低了Jurkat细胞活力,抑制了细胞的集落形成能力并且导致S期细胞比例显著增加,G2期细胞比例显著降低(P＜0.05).结论:利用shRNA靶向干扰Sam68基因的表达可以有效抑制人急性T淋巴细胞白血病Jurkat细胞的增殖.
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shRNA干扰CIAPIN1基因表达促进K562细胞粒系分化
目的：探讨靶向干扰CIAPIN1基因表达对慢性粒细胞白血病（CML）细胞系K562粒系分化的影响。方法针对CIAPIN1基因设计并构建短发卡RNA（shRNA）真核表达载体，转染K562细胞并作为干扰组，以无关序列shRNA处理的K562细胞作为对照组。采用Real-time PCR及Western blot技术鉴定干扰效率；采用瑞氏染色和电镜分别观测K562细胞形态学和超微结构的改变；采用Real-time PCR方法检测粒系分化标志基因中性粒细胞胞浆因子1（NCF1）、血清黏蛋白1（ORM1）以及粒系分化转录因子CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）、低氧诱导因子1α（HIF1α）mRNA水平的改变；流式细胞术检测K562细胞表面分化抗原CD11b表达的改变；Western blot技术检测ERK1/2、JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平的改变。结果与对照组相比，干扰组的CIAPIN1基因表达被有效抑制（P＜0.05）；K562细胞的形态和超微结构趋向成熟粒细胞阶段；NCF1、ORM1、C/EBPα及HIF1αmRNA表达水平升高（P＜0.05）；CD11b表达升高（P＜0.01）；ERK1/2磷酸化水平升高（P＜0.05），而JNK、p38MAPK及Akt磷酸化水平未见明显改变。结论抑制CIAPIN1基因表达能促进K562细胞向成熟的粒细胞阶段分化，ERK1/2磷酸化水平的升高可能参与了该分化过程。
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shRNA-Piezo1对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制
目的:探讨短发夹RNA沉默压电离子蛋白1编码基因(shRNA-Piezo1)对异常机械牵张应力作用下髓核细胞凋亡的影响及相关机制.方法:取8例腰椎间突出症患者术中摘取的椎间盘组织(改良Pfirrmann分级为Ⅱ级或Ⅲ级),分别分离培养髓核细胞,取第2代髓核细胞构建体外机械牵张应力模型;利用293T细胞作为慢病毒感染靶细胞,检测适慢病毒滴度,用适滴度慢病毒感染髓核细胞;应用RT-PCR和Western-Blot法筛选出有效干扰序列,利用shRNA干扰技术构建shRNA-Piezo1干扰质粒;根据预实验处理结果,将细胞分成4组:空白对照组(取第2代髓核细胞不做机械牵张应力处理),牵张应力组(取第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA阴性对照组(空白载体质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),shRNA干扰组(shRNA-Piezo1干扰质粒+第2代髓核细胞机械牵张应力处理24h),应用Fluo3-AM试剂盒检测4组细胞的细胞质Ca2+水平;Cell Meter检测试剂盒检测4组细胞中线粒体膜电位的变化;AnnexinV-FITC试剂盒检测4组细胞的凋亡率.结果:(1)分离培养的细胞Ⅱ型胶原蛋白和Aggrecan蛋白表达阳性,符合髓核细胞特征.(2)当髓核细胞转染复数(MOI)=50时,慢病毒滴度为1×108TU/ml转染效率高.(3)homo-3201序列为shRNA-Piezo1的有效序列.(4)4组髓核细胞细胞质Ca2+含量、线粒体膜电位翻转比例和细胞凋亡率有显著性差异(P＜0.05),空白组与shRNA阴性对照组比较无显著性差异(P＞0.05);shRNA干扰组与牵张应力组和shRNA阴性对照组比较均显著性减少(P＜0.05),与空白对照组比较无显著性差异(P＞0.05).结论:shRNA-Piezo1可以抑制异常机械牵张应力作用下髓核细胞的过度凋亡,而且是通过抑制细胞质Ca2+水平和线粒体膜电位翻转来实现的.
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沉默SIRT2基因对急性粒细胞白血病细胞增殖的影响
目的 SIRT2是组蛋白去乙酰化酶家族成员之一,其参与多种肿瘤的发生和发展.本研究旨在探讨SIRT2基因在人急性粒细胞白血病细胞NB4和耐药细胞HL60/A增殖中的作用,分析SIRT2对于细胞周期的影响,寻找治疗急性粒细胞白血病的新靶点.方法 蛋白质印迹法检测SIRT2在急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4中的表达,针对SIRT2 mRNA不同的靶序列设计并合成shRNA,构建真核表达干扰载体,制备慢病毒并感染HL60/A和NB4细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定表达shRNA的细胞,应用蛋白质印迹法验证干扰效率;采用改良MTT法检测沉默SIRT2基因前后HL60/A和NB4细胞增殖的改变;用流式细胞术检测沉默SIRT2基因前后细胞周期的变化.结果 在HL60/A和NB4细胞中SIRT2蛋白表达水平均增高,F=43.22,P=0.002.用慢病毒感染HL60/A(F=184.9,P＜0.001)和NB4(F=354.7,P＜0.001)后,SIRT2基因的蛋白表达水平显著降低.MTT结果显示,与对照组细胞比较,48 h沉默SIRT2基因的HL60/A(F=208.4,P＜0.001)和NB4(F=27.58,P＜0.001)细胞的生长速度变慢;于72 h这种抑制作用更加明显,其中HL60/A的增殖速度明显变慢,F=555.9,P＜0.001.流式细胞术检测细胞周期结果显示,G0～G1期百分比,与对照组HL60/A/con(27.62±1.01)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (37.14±0.03)％(F=7.61,P＜0.001)和HL60/sh2(37.51±3.63)％(F=3.89,P=0.009)比例显著增加;与对照组NB4/con(27.49±0.50)％相比,干扰组NB4/sh1(38.26±1.93)％(F=8.02,P=0.007)和NB4/sh2(35.23±1.11)％(F=3.50,P＜0.001)比例显著增加;S期细胞百分比,与对照组HL60/A/con(51.94±1.15)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (40.24±0.66)％(F=3.34,P＜0.001)和HL60/sh2(42.73±2.76)％(F=10.33,P=0.004)比例显著降低;与对照组NB4/con(50.65±0.23)％相比,干扰组NB4/sh1(39.58±1.11)％(F=3.02,P＜0.001)和NB4/sh2(43.82±1.33)％(F=10.42,P=0.011)比例显著降低;G2～M期细胞比例无明显变化.结论 干扰SIRT2基因的表达可使细胞周期阻滞在G0～G1期,从而抑制急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4的增殖.
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PKM2基因沉默对人肺癌细胞生物学特性的影响
目的 探讨M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)下调对人肺癌A549细胞生物学特性的影响.方法 采用免疫荧光技术检测A549细胞中PKM2蛋白的表达;将构建有PKM2-shRNA的重组质粒转入A549细胞;分别采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测PKM2 mRNA和蛋白表达水平;CCK-8法检测PKM2基因沉默对A549细胞增殖能力的影响;采用葡萄糖测定试剂盒测定细胞对葡萄糖的消耗量;Transwell实验检测细胞穿过人工基膜的能力.结果 肺癌A549细胞的细胞质及细胞核中均有PKM2表达;PKM2-shRNA质粒转染A549细胞48h后,可明显下调A549细胞中PKM2 mRNA及蛋白的表达水平,并且明显抑制A549细胞增殖;PKM2 shRNA可减少A549细胞葡萄糖的消耗,还可抑制细胞侵袭能力.结论 在肺癌细胞A549中,抑制PKM2表达可显著抑制细胞增殖、侵袭和糖代谢能力.
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热休克蛋白47-shRNA调节肝星状细胞膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响
目的 了解热休克蛋白47-短发夹RNA(HSP47-shRNA)调节肝星状细胞(HSCs)膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响. 方法 建立日本血吸虫鼠肝纤维化模型,感染前(健康对照组)和感染后笫4、9、14周,分别随机取5只小鼠,提取肝脏组织总RNA,采用RT-PCR检测HSP47 mRNA相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测HSP47蛋白表达情况,用RM-6240BD型多道生理信号系统动态检测模型鼠门静脉压力,流式细胞术检测HSCs膜内皮素受体(ETAR和ETBR)的平均荧光强度(MFI),免疫组织化学法检测感染前和感染后14周的模型鼠肝组织膜受体表达情况,采用线性相关分析方法分析各时间点的HSP47 mRNA相对表达水平与门静脉压力、ETAR和ETBR相对表达量的关系.用HSP47-shRNA质粒转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞和血吸虫肝纤维化模型鼠,并设阴性对照组(空质粒)和空白对照组(PBS),每组12只血吸虫感染模型鼠.采用RT-PCR检测NIH/3T3细胞转染0、24、48 h及模型鼠干预至第14周的HSP47 mRNA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA相对表达水平,Western blotting检测对应蛋白的表达情况,流式细胞术检测膜受体(ET、TGF-β及PDGF的受体)的MFI 两组间均数的比较采用Student-t检验,多组间采用单因素方差分析. 结果 模型鼠感染日本血吸虫后第4、9、14周,RT-PCR结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平分别为0.592±1.031、1.253±2.101和0.651±1.532,较感染前(0.253±0.120)均升高(P＜ 0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与 mRNA变化一致;门静脉压力分别为(3.010±0.250)、(8.850±0.63)和(12.390±0.830) mm Hg,感染后第14周与感染前的(2.350±0.180) mmHg比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术检测结果显示,ETAR的MFI分别为3 245±186、6 108±213和8 784±257,高于感染前的2 104±232 (P＜0.01);ETBR的MFI分别为3 812±158、4 524±197和5 554±156,高于感染前的2 091±237 (P＜ 0.01). 相关性分析结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平与门静脉压力、ETAR和ETBR的MFI均呈正相关(r=0.750、0.750、0.508,P＜ 0.05). 免疫组织化学结果显示,感染后第14周,ETB、TGF-β和PDGF的受体在肝纤维聚集部位呈强阳性表达.HSP47-shRNA转染NIH/3T3细胞48 h后,RT-PCR结果显示,转染组HSP47 mRNA相对表达水平为0.254±2.358,低于阴性对照组的0.911±1.391 (P＜0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平分别为0.656±0.061、1.330±0.155,较阴性对照组的1.521±0.314、2.243±0.142均下调(P＜0.01);流式细胞术检测结果显示,ETBR的MFI为53.433±5.243,高于转染前的30.825±5.460 (P＜0.05),TGF-β及PDGF受体转染前后差异无统计学意义(P＞0.05).转染组小鼠体内干预至第14周后,RT-PCR结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平为2.686±0.711,低于阴性对照组的6.001±0.458 (P＜0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平分别为10.956±2.079和14.071±1.915,均较空白对照组的22.687±1.478和29.065±2.537下降(P＜0.01);流式细胞术检测结果显示,转染组ETAR表达阳性率为(51.48±4.27)％,低于空白对照组的(81.60±6.07)％(P＜0.05);转染组小鼠HSC膜受体ETAR、ETBR的MFI分别为4 249±344和3 706±194,均低于空白对照组的8 538±494和5 052±213 (P＜ 0.05),TGF-β和PDGF受体转染前后差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 HSP47-shRNA可干预活化的HSC和血吸虫肝纤维化鼠,ETR变化为影响肝纤维化尤其门静脉高压的因素.
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PKM2基因对胆管细胞癌迁移、侵袭及增殖的影响
目的:检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在胆管癌(cholangiocarcinoma,CCA)组织中的表达情况,探讨PKM2下调对胆管癌细胞迁移、侵袭及增殖的影响.方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色分别检测胆管癌及对应癌旁组织标本中PKM2的mRNA和蛋白表达水平.利用慢病毒表达载体系统在胆管癌细胞株HuCCT-1 、HCCC-9810中下调PKM2,分别用划痕实验、Transwell细胞侵袭实验和CCK-8比色法检测细胞迁移、侵袭及增殖能力.结果:胆管癌组织中PKM2的mRNA和蛋白表达水平明显高于对应癌旁组织.经qRT-PCR和Western blot方法证实稳定转染PKM2 shRNA的胆管癌细胞中PKM2的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P＜0.05),与空载对照组(PKM2-NC)和正常对照组(PKM2)相比,实验组细胞(PKM2-shRNA)的迁移、侵袭及增殖能力明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2 shRNA能有效地降低胆管癌细胞中PKM2基因的表达,PKM2基因沉默可以抑制HuCCT-1、HCCC-9810细胞的迁移、侵袭及增殖.
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Bmi1基因沉默对人舌鳞癌细胞生物学功能的影响
目的:检测Bmi1 (B lymphoma Mo-MLV insertion region 1)在舌鳞癌细胞与正常舌黏膜中的表达差异,探讨Bmi1基因沉默后对口腔舌鳞癌细胞生物学功能的影响.方法:实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)检测Bmi1蛋白和mRNA在舌鳞癌细胞系和正常舌黏膜组织中的表达情况;采用免疫荧光染色检测Bmi1在舌鳞癌细胞中的分布情况;通过短发夹shRNA有效抑制Bmi1表达后,MTT实验检测其对舌鳞癌细胞增殖能力的影响;划痕实验检测其对舌鳞癌细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测其对舌鳞癌细胞侵袭的影响;克隆形成实验检测其对舌鳞癌细胞克隆形成率的影响;构建移植瘤实验观察其对移植瘤生长的影响.结果:Bmi1在舌鳞癌细胞中高表达,而在正常舌黏膜中低表达(P＜0.05);Bmi1基因沉默后显著抑制舌鳞癌细胞的增殖、侵袭、迁移能力以及抑制体内移植瘤的生长(P＜0.05),这与Bmi1对下游靶基因P16、P14和E-cadherin的调控有关.结论:Bmi1与舌鳞癌多种恶性生物学功能的调控密切相关,可能是舌鳞癌潜在的治疗靶点.
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shRNA干扰沉默RNPC1a基因对SUM1315细胞增殖、迁移及侵袭的影响
目的:研究RNPC1a基因对SUM1315细胞增殖、迁移及侵袭的影响.方法:应用脂质体技术将RNPC1a短发夹RNA(shRNA)转染至SUM1315细胞,通过嘌呤霉素筛选出稳定细胞株,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测其干涉效率,并用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell细胞侵袭实验检测其迁移和侵袭能力.结果:经qRT-PCR和Western blot方法证实稳定转染RNPC1a shRNA的SUM1315细胞中RNPC1a的mRNA和蛋白水平较对照组均明显下降(P＜0.05),同时RNPC1a干扰后细胞的增殖、迁移及侵袭能力均减弱(P＜0.05).结论:RNPC1a shRNA能有效地降低SUM1315细胞中RNPC 1a基因的表达,RNPC1a基因沉默可以抑制SUM1315细胞的增殖、迁移及侵袭.
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人SUMO-2 shRNA干扰表达载体构建及其对细胞增殖的影响
目的 构建干扰人SUMO-2表达的shRNA重组质粒载体,并筛选下调人SUMO-2表达的稳定细胞株.方法 设计并合成针对人SUMO-2的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染HCT116细胞后经嘌呤霉素筛选获稳定表达细胞株,并通过免疫印迹鉴定SUMO-2的表达.结果 成功构建干扰人SUMO-2表达的pLKO.1质粒载体,可在HCT116细胞中稳定表达,且能有效抑制SUMO-2蛋白质的表达.功能研究初步证明干扰SUMO-2表达可抑制细胞增殖并使处于细胞周期G1期的细胞比例上升.结论 获得了干扰人SUMO-2表达的pLKO.1-shRNA质粒载体,以及下调SUMO-2表达的HCT116稳定细胞株.
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p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响研究
目的:利用p15-shRNA表达栽体干扰细胞周期相关基因p15,探讨p15基因对人肝癌HepG2顺铂耐药细胞周期和耐药性的影响.方法:用梯度浓度的顺铂诱导HepG2细胞耐药并建立动态耐药模型HepG2/顺铂/2.0,以不同浓度(30、60、90 nmol·L-1)的干扰质粒p 15 -shRNA Y2和阴性对照质粒(shRNA-F)转染HepG2/顺铂/2.0细胞后48 h检测p15荧光阳性细胞,筛选佳干扰浓度；以筛选结果转染HepG2/顺铂/2.0细胞,与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,检测细胞存活情况、周期分布和p15、Bcl-2、Bax的蛋白表达.结果:佳干扰浓度为60 nmol·L-1;与未转染细胞和阴性对照转染细胞比较,p15-shRNA Y2转染细胞的存活率明显增加,G1期细胞明显减少,p15、Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白表达明显增加(P均＜0.01).结论:p15-shRNA可抑制p15基因表达,干扰细胞周期使G1期的比例减少,增加HepG2/顺铂/2.0对顺铂的耐药性.
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热休克蛋白47-shRNA调节肝星状细胞膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响
目的 了解热休克蛋白47-短发夹RNA (HSP47-shRNA)调节肝星状细胞(HSCs)膜受体对日本血吸虫鼠肝纤维化的影响. 方法 建立日本血吸虫鼠肝纤维化模型,感染前(健康对照组)和感染后第4、9、14周,分别随机取5只小鼠,提取肝脏组织总RNA,采用RT-PCR检测HSP47 mRNA相对表达水平,蛋白质印迹(Western blotting)检测HSP47蛋白表达情况,用RM-6240BD型多道生理信号系统动态检测模型鼠门静脉压力,流式细胞术检测HSCs膜内皮素受体(ETAR和ETBR)的平均荧光强度(MFI),免疫组织化学法检测感染前和感染后14周的模型鼠肝组织膜受体表达情况,采用线性相关分析方法分析各时间点的HSP47 mRNA相对表达水平与门静脉压力、ETAR和ETBR相对表达量的关系.用HSP47-shRNA质粒转染小鼠成纤维细胞NIH/3T3细胞和血吸虫肝纤维化模型鼠,并设阴性对照组(空质粒)和空白对照组(PBS),每组12只血吸虫感染模型鼠.采用RT-PCR检测NIH/3T3细胞转染0、24、48 h及模型鼠干预至第14周的HSP47 mRNA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA相对表达水平,Western blotting检测对应蛋白的表达情况,流式细胞术检测膜受体(ET、TGF-β及PDGF的受体)的MFI.两组间均数的比较采用Student-t检验,多组间采用单因素方差分析. 结果 模型鼠感染日本血吸虫后第4、9、14周,RT-PCR结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平分别为0.592±1.031、1.253±2.101和0.651±1.532,较感染前(0.253±0.120)均升高(P＜ 0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;门静脉压力分别为(3.010±0.250)、(8.850±0.63)和(12.390±0.830) mm Hg,感染后第14周与感染前的(2.350±0.180) mm Hg比较,差异有统计学意义(P＜0.01).流式细胞术检测结果显示,ETAR的MFI分别为3245±186、6 108±213和8 784±257,高于感染前的2 104±232(P＜ 0.01);ETBR的MFI分别为3 812±158、4524±197和5554±156,高于感染前的2091±237 (P＜ 0.01).相关性分析结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平与门静脉压力、ETAR和ETBR的MFI均呈正相关(r=0.750、0.750、0.508,P＜ 0.05).免疫组织化学结果显示,感染后第14周,ETB、TGF-β和PDGF的受体在肝纤维聚集部位呈强阳性表达.HSP47-shRNA转染NIH/3T3细胞48 h后,RT-PCR结果显示,转染组HSP47 mRNA相对表达水平为0.254±2.358,低于阴性对照组的0.911±1.391 (P＜ 0.01);Western blotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平分别为0.656±0.061、1.330±0.155,较阴性对照组的1.521±0.314、2.243±0.142均下调(P＜0.01);流式细胞术检测结果显示,ETBR的MFI为53.433±5.243,高于转染前的30.825±5.460(P＜0.05),TGF-β及PDGF受体转染前后差异无统计学意义(P＞ 0.05).转染组小鼠体内干预至第14周后,RT-PCR结果显示,HSP47 mRNA相对表达水平为2.686±0.711,低于阴性对照组的6.001±0.458 (P＜0.01);Westernblotting结果显示,HSP47蛋白表达情况与mRNA变化一致;Ⅰ型、Ⅲ型前胶原mRNA相对表达水平分别为10.956±2.079和14.071±1.915,均较空白对照组的22.687±1.478和29.065±2.537下降(P＜0.01);流式细胞术检测结果显示,转染组ETAR表达阳性率为(51.48±4.27)％,低于空白对照组的(81.60±6.07)％(P＜0.05);转染组小鼠HSC膜受体ETAR、ETBR的MFI分别为4249±344和3706±194,均低于空白对照组的8538±494和5052±213 (P＜0.05),TGF-β和PDGF受体转染前后差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 HSP47-shRNA可干预活化的HSC和血吸虫肝纤维化鼠,ETR变化为影响肝纤维化尤其门静脉高压的因素.
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shRNA干扰蛋白激酶D-2基因提高Tca8113对化疗药物的敏感性研究
目的：探讨蛋白激酶D（PKD）-2基因沉默对Tca8113细胞增殖、细胞程序性死亡及对化疗药物敏感性的影响。方法构建针对pkd-2基因的shRNA干扰质粒及空载体对照组质粒，建立pkd-2基因沉默的稳定细胞株；采用甲基噻唑基四唑（MTT）方法检测shRNA干扰后细胞株的增殖情况及对化疗药物的半数抑制质量浓度（IC50）；采用流式细胞术检测pkd-2基因沉默前后细胞程序性死亡率及对化疗药物的敏感性；采用免疫组化方法检测pkd-2沉默后细胞中P糖蛋白（P-gp）的表达。结果筛选并建立pkd-2基因沉默的稳定细胞株；经shRNA干扰后Tca8113细胞的增殖速度与野生型细胞相比差异无统计学意义，但IC50明显降低；pkd-2沉默后Tca8113细胞程序性死亡率明显上升，且对化疗药物的敏感性显著提高；与野生型对照组Tca8113相比较，shRNA-pkd-2基因沉默的Tca8113经化疗药物诱导后P-gp表达明显下降。结论 shRNA干扰技术特异性沉默Tca8113中的pkd-2基因，促进了肿瘤细胞的程序性死亡，降低对化疗药物的IC50，并明显提高肿瘤细胞对化疗药物的敏感性，同时降低了P-gp的表达。
