首页 > 文献资料
-
沉默SIRT2基因对急性粒细胞白血病细胞增殖的影响
目的 SIRT2是组蛋白去乙酰化酶家族成员之一,其参与多种肿瘤的发生和发展.本研究旨在探讨SIRT2基因在人急性粒细胞白血病细胞NB4和耐药细胞HL60/A增殖中的作用,分析SIRT2对于细胞周期的影响,寻找治疗急性粒细胞白血病的新靶点.方法 蛋白质印迹法检测SIRT2在急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4中的表达,针对SIRT2 mRNA不同的靶序列设计并合成shRNA,构建真核表达干扰载体,制备慢病毒并感染HL60/A和NB4细胞,用嘌呤霉素筛选出稳定表达shRNA的细胞,应用蛋白质印迹法验证干扰效率;采用改良MTT法检测沉默SIRT2基因前后HL60/A和NB4细胞增殖的改变;用流式细胞术检测沉默SIRT2基因前后细胞周期的变化.结果 在HL60/A和NB4细胞中SIRT2蛋白表达水平均增高,F=43.22,P=0.002.用慢病毒感染HL60/A(F=184.9,P＜0.001)和NB4(F=354.7,P＜0.001)后,SIRT2基因的蛋白表达水平显著降低.MTT结果显示,与对照组细胞比较,48 h沉默SIRT2基因的HL60/A(F=208.4,P＜0.001)和NB4(F=27.58,P＜0.001)细胞的生长速度变慢;于72 h这种抑制作用更加明显,其中HL60/A的增殖速度明显变慢,F=555.9,P＜0.001.流式细胞术检测细胞周期结果显示,G0～G1期百分比,与对照组HL60/A/con(27.62±1.01)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (37.14±0.03)％(F=7.61,P＜0.001)和HL60/sh2(37.51±3.63)％(F=3.89,P=0.009)比例显著增加;与对照组NB4/con(27.49±0.50)％相比,干扰组NB4/sh1(38.26±1.93)％(F=8.02,P=0.007)和NB4/sh2(35.23±1.11)％(F=3.50,P＜0.001)比例显著增加;S期细胞百分比,与对照组HL60/A/con(51.94±1.15)％相比,干扰组HL60/A/sh1 (40.24±0.66)％(F=3.34,P＜0.001)和HL60/sh2(42.73±2.76)％(F=10.33,P=0.004)比例显著降低;与对照组NB4/con(50.65±0.23)％相比,干扰组NB4/sh1(39.58±1.11)％(F=3.02,P＜0.001)和NB4/sh2(43.82±1.33)％(F=10.42,P=0.011)比例显著降低;G2～M期细胞比例无明显变化.结论 干扰SIRT2基因的表达可使细胞周期阻滞在G0～G1期,从而抑制急性粒细胞白血病细胞HL60/A和NB4的增殖.
