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Apollon反义核酸联合苦参碱对肝癌细胞增殖与凋亡影响的研究
目的:研究凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成员Apollon反义核酸(ASO)联合苦参碱对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法:将一定浓度的人工合成的Apollon ASO经脂质体包裹转染肝癌(HepG2)细胞,并联合不同浓度的苦参碱作用于肝癌(HepG2)细胞48 h后,采用WST-8法检测单用Apollon ASO、单用苦参碱、及ApollonASO联合苦参碱对肝癌细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率；Hoechst33258染色观察HepG2细胞凋亡形态；实时荧光定量RT-PCR检测细胞Apollon mRNA的表达水平.结果:Apollon ASO联合苦参碱作用于HepG2细胞48 h后,单用苦参碱的IC50为0.9 mg/mL;苦参碱与Apollon ASO联合使用,IC50为0.43 mg/mL,增敏倍数为2.09,表现为协同作用.流式细胞术检测结果显示,Apollon ASO联合苦参碱能促进HepG2细胞凋亡,其早期凋亡率达36.4％；经荧光显微镜观察,Apollon ASO组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体.实时荧光定量RT-PCR结果表明,不同浓度的Apollon ASO与苦参碱均能显著下调Apollon mRNA的表达水平.结论:Apollon ASO可增强肝癌细胞对苦参碱的敏感性,作用机制可能与共同下调Apollon mRNA表达水平有关,为肝癌的临床治疗提供实验依据.
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Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究
目的:研究小干扰RNA(RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞化疗敏感性的影响.方法:构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi+Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果.RNAi与小剂量Ara C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为(27.622±0.057)％,与细胞对照组(89.770±0.028)％和阴性对照组(84.868±0.057)％相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012.细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为(15.96±1.71)％,明显低于细胞对照组(35.36±2.90)％和阴性对照组(34.97±2.65)％,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013.重组载体和(或)10 μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72 h后,RNAi组和RNAi+ Ara-C组K562细胞增殖抑制率(IR％)明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显.流式细胞术结果显示,RNAi+Ara-C组细胞凋亡率为(30.816±1.06)％,明显高于细胞对照组(4.803±0.112)％、阴性对照组(4.566±0.205)％和Ara-C组(11.61±0.604)％及RNAi组(20.226±0.986)％,差异有统计学意义,F=138.57,P＜0.001.结论:靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性.
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大鼠肝细胞癌变过程中 Survivin 与 Apollon的动态表达研究
目的：探讨大鼠肝细胞癌变过程中survivin和apollon的动态表达及意义。方法：以改良型间断饮用二乙基亚硝胺（ diethylnitrosamine ，DEN）诱导大鼠原发性肝癌模型，观察大鼠肝脏在不同诱癌阶段的病理变化，采用免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应（ RT-PCR）法检测大鼠HCC不同时期survivin和apollon的蛋白及mRNA表达。结果：改良型间断饮用DEN成功诱导了大鼠肝癌模型，诱癌结束时实验组大鼠自然死亡4只，死亡率5．88％（4/68）。实验组存活的16只大鼠15只形成肝癌，诱癌率93．75％（15/16）。免疫组化结果显示：survivin 和apollon 阳性表达率逐渐升高，各组间阳性率比较差异有统计学意义（P＜0．05），survivin 和apollon 在肝癌组中表达呈正相关关系（r＝0．515，p＝0．003＜0．05）。 RT-PCR检测结果显示，survivin mRNA和apollon mRNA表达，随着肝癌程度的加重而增加，与对照组肝组织比较，差异有统计学意义（ P＜0．05）。结论：survivin 、apollon在肝癌组织中呈高表达，提示二者在HCC的发生发展中起重要作用，可作为肝癌早期诊断的潜在标志物。
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Apollon和MMP-2在直肠癌组织中的表达及意义
目的 探讨直肠癌组织中凋亡抑制蛋白Apollon和基质金属蛋白酶-2的表达及其临床意义.方法 采用免疫组化SP法检测38例直肠癌组织和14例正常直肠组织中Apollon和MMP-2的表达情况,分析它们的表达与直肠癌临床病理因素之间的关系.结果 38例直肠癌组织中Apollon和MMP-2的阳性表达率分别为68.42%和73.68%,均显著高于其在正常直肠组织中的阳性表达率(14.29%,0)(P<0.05);Apollon的表达与肿瘤分级和Dukes分期密切相关(P<0.05),MMP-2的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移以及Dukes分期密切相关(P<0.05),Apollon与MMP-2在直肠癌中的表达呈正相关关系(r=0.443,P＜0.05).结论 Apollon和MMP-2参与了直肠癌的发生发展,二者联合检测对了解直肠癌生物学行为有一定的指导意义.
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Apollon反义核酸促进肝癌HepG2细胞凋亡机制的探讨
目的 研究凋亡抑制蛋白(IAP)家族成员Apollon反义核酸(ASO)对人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其机制.方法 将化学合成的Apollon ASO经脂质体包裹后作用于肝癌HepG2细胞48 h,采用WST-8法检测不同浓度的Apollon ASO对肝癌细胞增殖抑制作用,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(PCR)检测细胞Apollon mRNA的表达水平；流式细胞术检测细胞早期凋亡率；Hochest33258染色观察HepG2细胞凋亡形态；线粒体膜电位检测细胞凋亡；比色法测定半胱氨酸蛋白酶(Caspase-3、Caspase-9)活性的改变；蛋白质免疫印记技术检测细胞色素C蛋白的表达水平.结果 Apollon ASO转染HepG2细胞48 h能明显抑制细胞增殖,并呈浓度依赖关系.Apollon ASO能促进HepG2细胞凋亡.不同浓度的Apollon ASO能显著下调Apollon mRNA的表达水平,同时Caspase-3、Caspase-9的活性明显增加,细胞色素C蛋白表达水平也增加.经荧光显微镜观察,ASO组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体.结论 Apollon ASO可下调Apollon mRNA表达水平,抑制HepG2细胞增殖,其诱导细胞早期凋亡可能通过线粒体介导的途径.
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FHIT与Apollon在结肠癌及结肠腺瘤组织中的表达及意义
目的 检测脆性组氨酸三联体(FHIT)和凋亡抑制蛋白Apollon (Baculoviral IAP repeatcontaining protein 6,BRUCE/BIRC6)在结肠腺瘤癌变过程中mRNA的表达水平,探讨FHIT与Apollon在结肠腺瘤及结肠癌形成过程中的作用及临床意义.方法 采用实时荧光定量PCR法检测30例正常结肠黏膜组织、60例结肠腺瘤组织(其中管状腺瘤48例、绒毛状腺瘤12例)、30例结肠癌组织中FHIT mRNA和Apollon mRNA的表达水平.结果 FHIT mRNA在正常对照组、结肠腺瘤组及结肠癌组中的相对表达量呈逐渐降低趋势,绒毛状腺瘤组相较于管状腺瘤组表达降低,差异均具有统计学意义(P＜0.05);ApollonmRNA在正常对照组、结肠腺瘤组及结肠癌组中的相对表达量呈逐渐升高趋势,绒毛状腺瘤组相较于管状腺瘤组表达升高,差异均具有统计学意义(P＜0.05);FHIT与Apollon在结肠腺瘤组和结肠癌组中的表达呈负相关(P＜0.05).结论 FHIT与Apollon在结肠癌的发生发展中发挥一定的作用,共同参与了结肠黏膜的癌变过程,联合检测两者可能有助于对结肠癌的早期诊断.
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Apollon和Caspase-9在人脑胶质瘤中的表达
目的 探讨apollon和Caspase-9在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义.方法 按Kernohan方法将84例胶质瘤分为Ⅰ级15例,Ⅱ级32例,Ⅲ级23例,Ⅳ级14例；另外75例正常脑组织作为对照组.采用免疫组化SP法检测apollon和Caspase-9的表达.结果 胶质瘤组apollon阳性表达率明显高于对照组(77.38％ vs.9.33％),而Caspase-9的阳性表达率明显低于对照组(40.47％ vs.90.67％)(P＜0.05).随着胶质瘤恶性程度的增高,apollon蛋白的表达逐渐增强,而Caspase-9蛋白的表达逐渐降低；apollon与Caspase-9蛋白表达呈负相关(r=-0.263,P＜0.05).结论 Apollon蛋白的过度表达和Caspase-9蛋白低表达与脑胶质瘤恶性程度相关,并可能作为评价胶质瘤恶性程度生物学指标.
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放射线或化疗药物对人口腔癌细胞株SAS中Apollon表达的影响
[目的]研究放射线、化疗药物对Apollon基因的表达的影响.[方法]应用细胞培养技术,对口腔癌细胞株SAS细胞进行放射线照射及化疗药物处理,应用siRNA干扰技术抑制Apollon基因表达,提取细胞RNA及蛋白,并用Real Time PCR法及Western blot法对所提RNA及蛋白进行检测,后用MTT assay对经各种处理后的细胞存活率进行检测.[结果]放射线使SAS内Apollon基因过表达.化疗药物则能抑制SAS内Apollon基因表达.5-Fu或5-Fu+放射线照射的情况下,经Apollon siRNA处理的细胞与对照比,癌细胞存活率降低(P＜0.01).[结论]抑制Apollon基因表达,有利于提高治疗的敏感性.Apollon失活可能对口腔癌治疗有益.
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原花青素联合Apollon siRNA抑制肝癌HepG2细胞增殖及凋亡
目的 研究原花青素联合凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)家族成员Apollon小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对人肝癌(HepG2)细胞增殖、凋亡的影响.方法 设计并合成Apollon siRNA的序列,将一定浓度的人工合成的Apollon siRNA经脂质体包裹转染肝癌(HepG2)细胞,运用实时荧光定量RT-PCR检测Apollon mRNA的表达水平,蛋白质免疫印记技术检测Apollon的蛋白表达水平,并筛选出Apollon siRNA的有效序列,并进一步联合不同浓度的原花青素作用于肝癌(HepG2)细胞48 h后,采用WST-8法检测单用Apollon siRNA、单用原花青素、及Apollon siRNA联合原花青素对肝癌细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞早期凋亡率;Hoechst 33258染色观察HepG2细胞凋亡形态.结果 设计的三对Apollon siRNA序列,筛选出其中有一对(NO.2)能明显下调Apollon mRNA与蛋白的表达水平,Apollon siRNA联合原花青素作用于HepG2细胞48 h后,单用原花青素的IC50为25.24 mg·L-1;Apollon siRNA与原花青素联合使用,原花青素的IC50为9.99 mg·L-1,增敏倍数为2.53,表现为协同作用.流式细胞术检测结果 显示:Apollon siRNA联合原花青素能促进HepG2细胞凋亡,其早期凋亡率达25.2%;经荧光显微镜观察,Apollon siRNA组可见核高强度荧光的细胞,并见凋亡小体.结论 Apollon siRNA可增强肝癌细胞对原花青素的敏感性,作用机制可能为共同促进肝癌细胞早期凋亡有关,为临床上肝癌的治疗提供理论基础.
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口腔癌组织中的Apollon表达及临床意义
目的 探讨Apollon在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学方法,检测了53例口腔鳞状细胞癌组织中的Apollon蛋白表达水平.结果 所有病例非癌上皮细胞中的Apollon免疫染色远远弱于癌细胞.新辅助化疗病例化疗后Apollon标记指数显著低于治疗前(t= 1.307,P＜0.05).仅接受手术治疗病例在活检与手术之间Apollon标记指数的变化尽管无显著性,但是标记指数的减少却与预后显著相关(P＜0.05).结论 口腔癌组织中的Apollon表达可能与口腔癌的发生、发展显著相关.口腔癌组织中的Apollon表达变化可能具有预后价值.
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凋亡抑制蛋白Apollon与肿瘤的相关性
Apollon是凋亡抑制蛋白家族的一员,能与Smac、HtrA2及caspase相互作用抑制细胞凋亡.Apollon在白血病、乳腺癌、脑瘤、口腔癌及胃癌等肿瘤中高表达,可能与肿瘤的发生与预后有关,并且可能导致某些肿瘤的耐药.
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Apollon反义核酸对HL-60细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究Apollon对HL-60细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用反义核酸技术下调HL-60细胞中Apollon的表达,采用M T T法检测细胞增殖能力,以AnnexinV-PI法检测细胞的凋亡.结果 Apollon反义核酸可以抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡.结论 Apollon调节了HL-60细胞增殖和凋亡能力,是白血病潜在的治疗靶点.
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Apollon反义寡核苷酸对K562细胞增殖、凋亡和耐药的影响
目的 探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖、凋亡及耐药的影响.方法 设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missense oligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡,并用MTT法检测K562细胞对依托泊苷、长春新碱及联合用ASODN的耐药性.结果 Apollon ASODN对K562细胞的生长抑制作用随浓度和时间增加而增加.Apollon ASODN在终浓度为600nmoL/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.01),联合用药组对细胞的半数抑制浓度低于单药组.结论 Apollon ASODN可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞的凋亡,Apollon ASODN与依托泊苷和长春新碱联合作用可降低细胞生存率,降低细胞耐药性.
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Apollon凋亡抑制蛋白与肿瘤治疗的研究进展
凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosisprotein,IAP)家族是在病毒、真核生物、哺乳动物等多个物种中广泛存在的进化高度保守的一类抗细胞凋亡调节因子,目前共发现IAP家族中有XIAP、c-IAP1、c-IAP2、NAIP、Apollon、Livin、Survivin、ILP-2等8个成员,其中Apollon、Livin、Survivin、XIAP是其中的主要成员,抑制细胞凋亡作用较强[1].Apollon在人体多种恶性肿瘤中高表达.本文就Apollon基因生物特性、组织表达及功能以及其在肿瘤治疗中的应用等研究进展进行综述.
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沉默Apollon对乳腺癌MCF-7/顺铂细胞的顺铂耐药性影响
目的 观察Apollon对乳腺癌耐药细胞株MCF-7/顺铂(DDP)的顺铂耐药性影响.方法 采用小于扰RNA(siRNA)瞬时转染技术沉默Apollon;噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度顺铂(10、20、40、80、100 μmol/L)对转染后细胞24 h的增殖抑制作用;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后MCF-7/DDP细胞中相关基因mRNA的水平变化;Western blot检测转染后细胞中蛋白水平的变化.结果 在乳腺癌耐药细胞株MCF-7/DDP中Apollon mRNA和蛋白表达水平分别为MCF-7细胞的(1.70 ±0.21)倍(P=0.007)和(2.23±0.33)倍(P=0.003);转染Apollon siRNA后的MCF-7/DDP与未转染组比较,对顺铂的敏感性增强,顺铂半数抑制浓度(IC5.)由(81.39 ±3.67) μmol/L,下降到(33.24±2.01) μmol/L(P=0.002);转染后细胞中Apollon、β-连环蛋白(β-catenin)在mRNA及蛋白水平相较于未转染细胞均出现明显下降,分别为未转染细胞的(0.43±0.16)倍(P =0.005)、(0.54 ±0.10)倍(P =0.006)和(0.23 0.08)倍(P=0.003)、(0.44±0.20)倍(P=0.005);采用lμmol/L WAY-262611处理转染后的细胞,Apollon mRNA及蛋白水平无明显改变(P=0.890、0.730),β-catenin mRNA[(1.91 ±0.23)倍(P=0.004)]及蛋白水平[(2.21±0.31)倍(P=0.002)]显著升高.结论 沉默Apollon能增加乳腺癌耐药细胞MCFG/DDP对顺铂的敏感性,其作用机制可能与降低β-catenin表达水平有关.
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Apolloon反义寡核苷酸对K562细胞增殖和凋亡的影响
目的 探讨Apollon反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN)对白血病细胞K562增殖及凋亡的影响.方法 设计合成特异性的Apollon硫代磷酸ASODN及其对照错义寡核苷酸(missense oligonucleotide,MSODN),脂质体介导转染K562细胞后,采用MTT法检测K562细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞的凋亡.结果 Apollon反义寡核苷酸对K562细胞的生长抑制呈浓度-时间依赖性.Apollon ASODN在终浓度为600 nmol/L作用K562细胞时,能明显抑制其增殖,K562细胞凋亡率显著增加(P＜0.01).结论 Apollon反义寡核苷酸可下调Apollon基因表达,有效抑制K562细胞的增殖,并促进K562细胞凋亡.
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Apollon在人脑胶质瘤的研究进展
Apollon是近年来新发现的凋亡抑制因子,具有广泛的生物学作用,有研究发现Apollon在多种肿瘤中表达明显升高,可能与肿瘤的发生与预后有关,但具体参与机制仍不明确.本文就Apollon在人脑胶质瘤中的生物学特性方面的研究进展做一综述.
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Apollon siRNA提高肝癌细胞化疗敏感性的实验研究
目的 以小干扰RNA (siRNA)沉默肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞内Apollon的表达,并检测对化疗药物的增敏效果.方法 转染siRNA于HCC细胞,采用Western blot检测Apollon siRNA处理对Apollon蛋白表达的影响.5-FU或阿霉素处理后,以MTT及ELISA评价经siRNA处理的HCC细胞的增殖抑制及凋亡情况.结果 ApollonsiRNA抑制了Apollon蛋白表达.沉默Apollon导致了细胞增殖显著降低及细胞凋亡水平的提高,提高了化疗药物对HCC细胞的生长抑制效果及化疗药物所诱导的HCC细胞凋亡发生水平.结论 Apollon siRNA可提高HCC细胞对化疗药物的敏感性.抑制Apollon可能是一个重要的、可行的HCC治疗标的.
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新辅助化疗前apollon在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 调查乳腺癌标本中apollon免疫组化表达是否能够预测新辅助化疗(NAC)后的病理完全缓解(pCR).方法 采用免疫组化技术检测124例乳腺癌患者活检组织内的apollon、Her-2、ER(雌激素受体)及PR(孕激素受体)表达.通过实体肿瘤反应评价标准(RECIST)评价NAC疗效.分析不同型乳腺癌的pCR率.分析apollon状态与Her-2状态、ER状态、PR状态、淋巴结状态及肿瘤大小之间的相关性.采用免疫组化技术比较了NAC前后乳腺癌切片内apollon的表达变化.结果 pCR率为18.5%(23/124)并与apollon、ER及PR表达关系密切:apollon阴性>apollon阳性、ER阴性>ER阳性及PR阴性>PR阳性.Apollon与Her-2状态、ER状态、PR状态及淋巴结状态相关.另外,化疗显著下调了肿瘤细胞内apollon的表达.结论 Apollon阴性表达可能是pCR的一个预测因子.
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Apollon和Smac凋亡基因在白血病中的表达
Apollon是新近发现的IAP家族成员,主要通过结合Smac,HtrA2以及caspase等3种机制发挥其抑凋亡作用.着重阐述了Apollon及Smac基因与凋亡的关系及在白血病中的表达.
