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Apollon siRNA对慢性髓系白血病K562细胞株阿糖胞苷敏感性影响研究
目的:研究小干扰RNA(RNAi)技术沉默凋亡抑制蛋白Apollon基因联合小剂量阿糖胞苷(Ara-C)对K562细胞化疗敏感性的影响.方法:构建pGPHI-GFP-Neo-Apollon真核表达载体,经阳离子脂质体转染K562细胞,实验分为RNAi组、阴性质粒组、细胞对照组、Ara-C组和RNAi+Ara-C组5组,采用RT-PCR和细胞免疫荧光检测干扰效果.RNAi与小剂量Ara C单独和联合应用后,采用MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:RT-PCR结果显示,实验组Apollon mRNA的相对表达量为(27.622±0.057)％,与细胞对照组(89.770±0.028)％和阴性对照组(84.868±0.057)％相比明显降低,差异有统计学意义,F=57.573,P=0.012.细胞免疫荧光检测结果显示,实验组细胞Apollon蛋白的荧光强度为(15.96±1.71)％,明显低于细胞对照组(35.36±2.90)％和阴性对照组(34.97±2.65)％,差异有统计学意义,F=71.063,P=0.013.重组载体和(或)10 μg/mL Ara-C作用于K562细胞24、48和72 h后,RNAi组和RNAi+ Ara-C组K562细胞增殖抑制率(IR％)明显增高,随着作用时间的延长,抑制效果越明显.流式细胞术结果显示,RNAi+Ara-C组细胞凋亡率为(30.816±1.06)％,明显高于细胞对照组(4.803±0.112)％、阴性对照组(4.566±0.205)％和Ara-C组(11.61±0.604)％及RNAi组(20.226±0.986)％,差异有统计学意义,F=138.57,P＜0.001.结论:靶向Apollon RNAi联合小剂量Ara-C能有效抑制K562细胞增殖并促进其凋亡,显著减少Ara-C使用剂量,明显提高了K562细胞对Ara-C的敏感性.
