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塞来昔布联合吉非替尼对HCC827细胞凋亡影响机制探讨
目的 探讨Cox-2抑制剂塞来昔布联合吉非替尼对肺癌EGFR 19号外显子E746-A750缺失细胞株HCC827细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 RPMI1640培养HCC827细胞,分为正常对照组、塞来昔布组、吉非替尼组、塞来昔布加吉非替尼组.塞来昔布与吉非替尼药物浓度均为5、10、20、40、80 μmol/L.药物干预细胞48 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测细胞中Cox-2和p-EGFR蛋白表达.结果 MTT结果显示,塞来昔布和吉非替尼单独用药时HCC827细胞的增殖受到明显的抑制,且随着药物浓度的增加,抑制作用逐步增强,药物剂量与细胞增殖抑制率呈正相关;塞来昔布与吉非替尼联合用药时对HCC827细胞呈现出更强的抑制作用,与单独用药相比差异有统计学意义,P＜0.001;对照组细胞凋亡率为(0.26±0.09)％,塞来昔布组为(4.86±0.37)％,吉非替尼组为(8.53±0.78)％,塞来昔布+吉非替尼组为(23.28±1.63)％,组间比较差异有统计学意义,F=111.291,P＜0.001,且两药联合时具有交互效应,F=90.440,P＜0.001;蛋白质印记法结果显示,用药组较对照组Cox-2(F=185.351,P＜0.001)和p-EGFR(F=61.328,P＜0.001)蛋白水平均有不同程度的下调,其中两药联合组下调为明显.结论 塞来昔布与吉非替尼具有良好的协同作用,其机制可能与诱导凋亡、抑制EGFR的活化和下调Cox-2蛋白的表达有关,在治疗非小细胞肺癌中联合用药可能会具有较大的应用潜力.
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正电子发射型计算机断层显像剂18F-FEA-Erlotinib与11C-Erlotinib在HCC827荷瘤小鼠中的显像效果对比研究
目的 通过对比[18F]氟乙基-埃罗替尼与[11C]埃罗替尼在HCC827荷瘤鼠中的正电子发射型计算机断层(PET)显像,评价新PET显像剂18F-FEA-Erlotinib的应用潜力.方法 经一步亲核取代反应制得18F-FEA-Erlotinib,而11C-Erlotinib经[11C]碘代甲烷(11CH3I)甲基化反应合成;先由18F-FEA-Erlotinib在HCC827荷瘤鼠中进行1 h Micro-PET动态显像,探索其体内生物分布并确定佳显像时间;然后分别进行18F-FEA-Erlotinib与11C-Erlotinib的1 h静态显像,并勾画感兴趣区域(ROI),测定每克组织百分注射剂量率(％ ID/g),进行半定量分析.结果 经动态显像结果确定1h为佳显像时间.1h静态显像中,18F-FEA-Erlotinib图像中,肿瘤边界清晰,分辨率、对比度高.lh静态显像半定量研究发现,18F-FEA-Erlotinib显像中,肿瘤/脑、肿瘤/肺、肿瘤/骨骼、肿瘤/肌肉的比值分别为5.87±1.21,2.97±0.58,3.33±0.60,3.80±0.72;11C-Erlotinib显像中,肿瘤/脑、肿瘤/肺、肿瘤/骨骼、肿瘤/肌肉的比值分别为5.48±1.45,1.10±0.34,2.63±0.54,2.10±0.63.结论 18F-FEA-Erlotinib显像肿瘤摄取高,靶/非靶比值较11C-Erlotinib显像更高,显像清晰,具有较好应用潜力.
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上调miR-34b表达可增强HCC827细胞对埃克替尼的敏感性
目的:探讨上调miR-34b的表达对HCC827细胞对埃克替尼敏感性的影响及其机制.方法:应用细胞转染技术获得miR-34b高表达的HCC827细胞,并将HCC827细胞分为空白对照组、转染组、埃克替尼组及埃克替尼与转染联合组,采用MTT法测定各组细胞增殖的情况,运用流式细胞术分析各组细胞凋亡率及生长周期的变化,同时应用Real-time PCR及Western Blot方法检测各组c-MET基因mRNA及蛋白的表达水平.结果:miR-34b转染后,HCC827细胞的增殖能力下降,凋亡率升高(P<0.05);miR-34b转染后,埃克替尼对HCC827细胞的抑制率较埃克替尼组明显上升,半数抑制浓度(IC50)明显下降(P<0.05);转染组及埃克替尼与转染联合组的c-MET水平较对照组有所下降(P<0.05).结论:上调miR-34b表达可以抑制HCC827细胞增殖,促进其凋亡,并可以增强HCC827细胞对盐酸埃克替尼的敏感性;其机制可能与miR-34b反馈抑制c-MET有关.
