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环磷酰胺致大鼠膀胱黏膜JNK1表达下调
目的:探讨JNK1在环磷酰胺处理后膀胱黏膜中的作用.方法:SD大鼠12只,随机分处理组(n=6)和对照组(n=6),处理组大鼠腹腔注射环磷酰胺100mg/kg,对照组给予相同剂量生理盐水腹腔注射,24h后无菌取膀胱,HE染色观察膀胱形态结构,免疫组织化学方法检测JNK1蛋白的定位,Real-time PCR检测JNK1 mRNA表达水平,蛋白印迹(Western Blotting)检测JNK1蛋白的表达量,并行数据统计,P＜0.05差异具有统计学意义.结果:HE染色,处理组膀胱黏膜肿胀、弯曲减少,膀胱黏膜呈现毛刺样改变,膀胱黏膜上皮粗糙;免疫组化,JNK1蛋白只表达在膀胱黏膜;Real-time PCR,JNK1 mRNA的表达量处理组显著低于对照组(P＜0.05),Western Blotting,处理组JNK1表达量显著低于对照组(P＜0.05).结论:大鼠腹腔注射环磷酰胺致JNK1在膀胱黏膜中表达下调.
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胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ-阿片受体脱敏和下调的影响
目的:观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体对阿片预处理引起的μ-阿片受体脱敏和下调的影响.方法:以CHO-μ和CHO-μ/IRAS (imidazoline receptor antisera-selected protein,咪唑啉受体抗血清选择性蛋白)细胞作为研究对象,用[35S]GTPγS和3H-二丙诺啡(diprenorphine)结合实验方法,确定胍丁胺-I1咪唑啉受体作用系统对μ-阿片受体脱敏和下调的影响.结果:在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,μ-阿片受体的表达量和对配体的亲和力无显著差异;两细胞中μ-阿片受体对激动剂刺激的反应一致.阿片受体激动剂DAMGO[(D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol)-脑啡肽(enkephalin),10 μmol/L]处理CHO-μ/IRAS细胞30 min μ-阿片受体出现脱敏,而胍丁胺(10 nmol/L～100 μmol/L)不影响μ-阿片受体脱敏过程.DAMGO(1 μmol/L)处理两细胞12 h后可出现μ-阿片受体的下调,胍丁胺(1～100 nmol/L)浓度依赖性地抑制CHO-μ/IRAS细胞中μ-阿片受体的下调,而相同浓度胍丁胺在CHO-μ细胞中无此作用.胍丁胺这一作用能被I1咪唑啉受体阻断剂依法克生(efaroxan,Efa)所阻断.结论:胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体可抑制DAMGO长期处理所致的μ-阿片受体下调,此作用可能与胍丁胺抑制阿片依赖有关.
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吗啡镇痛耐受大鼠中脑导水管周围灰质μ受体和δ受体协同表达下调
目的:测定吗啡镇痛耐受大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)中μ受体和δ受体mRNA和蛋白表达的变化,以进一步探索吗啡耐受的发生机制.方法:健康成年♂Wistar大鼠32只,随机平均分为生理盐水对照组(NS组,n＝16)和吗啡组(MS组,n＝16).采用盲法进行给药和疼痛行为测定.每天早、晚两次皮下注射(sc)药物并于上午注射前、后30 min测定大鼠的热甩尾潜伏期(TFL)作为痛阈指标.NS组和MS组分别sc生理盐水1 mlkg-1和吗啡10 mgkg-1,连续注射7 d,d8早晨各组分别取8只处死,剩余大鼠(分别记为NSN组和MSN组)d8早、晚两次sc纳洛酮0.4 mgkg-1,并在d9处死.以TFL恢复至基础水平作为出现吗啡耐受的标准.采用免疫组织化学染色方法和实时定量PCR法分别检测PAG中μ和δ受体的蛋白表达和mRNA表达.结果:观察期两组大鼠的体重增加量在组间差异无显著性.两组大鼠每天注射前测定的TFL差异无显著性.MS组在d1 sc吗啡后TFL明显升高(P＜0.05);在d2应用吗啡后,TFL升高达到高值,且明显高于d1用药后水平(P＜0.05),随后该组应用吗啡后的TFL逐渐降低,直至d7用药后TFL降至基础水平(P＞0.05).应用纳洛酮后,MSN亚组的TFL与NS组、NSN亚组以及基础值相比差异无显著性.连续应用吗啡7 d后,MS组PAG中μ和δ受体的蛋白表达和mRNA表达均较NS组显著降低(P＜0.05).结论:PAG中μ受体和δ受体共同参与了吗啡耐受机制,而且吗啡耐受大鼠PAG中μ受体和δ受体发生了协同表达下调.
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胍丁胺-I1咪唑啉受体对μ阿片受体下调的影响及可能机制
目的:观察胍丁胺通过激活I1咪唑啉受体(I1R)对阿片预处理引起的μ阿片受体(MOR)下调的影响及可能的分子基础.方法:以CHO-μ和CHO-μ/IRAS (imidazoline receptor antisera-selected protein)细胞作为研究对象,用[3H]diprenorphine结合实验方法,确定胍丁胺-I1R作用系统对MOR下调的影响以及可能产生的分子基础.结果:在正常CHO-μ和CHO-μ/IRAS细胞中,DAMGO([D-Ala2,N-Me-Phe4,Gly5-ol]-enkephalin,1 μmol*L-1)处理两细胞12 h后均可出现MOR的下调,胍丁胺(1-100 nmol*L-1)浓度依赖性地抑制CHO-μ/IRAS细胞中MOR的下调,而相同浓度胍丁胺在CHO-μ细胞中无此作用.胍丁胺这一作用能被I1R阻断剂依法克生(efaroxan,Efa)所阻断.DAMGO(1 μmol*L-1)预处理两细胞30 min后,MOR均发生内吞.胍丁胺(1 nmol*L-1-1 μmol*L-1)和DAMGO共同预处理两细胞30 min,胍丁胺能浓度依赖性地抑制由DAMGO预处理引起的CHO-μ/IRAS细胞中MOR的内吞,而相同浓度胍丁胺对CHO-μ细胞中由DAMGO预处理引起的MOR的内吞无显著影响,且这一作用同样能被依法克生所阻断,提示胍丁胺通过激活I1R对DAMGO预处理引起的MOR内吞具有显著的抑制作用,这可能是胍丁胺-I1R作用系统抑制MOR下调的分子基础.结论:胍丁胺通过激活I1R抑制阿片激动剂诱导的MOR的内吞,进而进一步抑制MOR下调.
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LPK-26对κ阿片受体的调节作用及其作用机制的研究
目的:从细胞水平探讨LPK-26对κ受体的作用及分子机制.方法:通过[3H]-Dip和[35S]GTPγS放射性结合实验研究LPK-26对CHO细胞上稳定表达K阿片受体的竞争性受体结合特征及LPK-26对κ阿片受体偶联的G蛋白的激活.结果:LPK-26是一种K阿片受体激动剂,其Ki值是0.66 nmol·L-1,与U50,488H相似;并且通过[35S]GTPγS结合实验,LPK-26激活G蛋白的能力明显大于U50,488H.结论:LPK-26可能是一种较为理想的新型镇痛药物.
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缺氧和高浓度葡萄糖对体外培养人视网膜色素上皮衍生因子表达的影响
目的探讨缺氧和高糖对体外培养的人视网膜色素上皮(RPE)细胞血管内皮生长因子(VEGF)和色素上皮衍生因子(PEDF)的影响.方法我们通过实验性研究在氧正常或缺氧(1%O2)加或不加高浓度葡萄糖的条件下,培养的人RPE细胞,通过反转录PCR和实时定量分析检测PEDF和VEGF的表达,使用Western印迹分析检测PEDF和VEGF蛋白水平.结果缺氧情况下,VEGF表达和蛋白水平增加(P=0.001);缺氧加25 mmol/L葡萄糖后增加更加明显(P<0.001).缺氧情况下PEDF表达水平与正常氧环境比较无统计学意义(P=0.251);但加葡萄糖后PEDF mRNA表达水平低于正常对照.结论体外培养的人RPE细胞在缺氧条件下PEDF表达降低不明显,这提示缺氧间接影响体外RPE细胞的PEDF下调,高葡萄糖直接下调PEDF的表达,同时增加VEGF的表达,这可能支持体内高血糖是糖尿病危险的"糖毒性"观点.
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中药下调COX-2蛋白表达治疗慢性萎缩性胃炎的研究概况
慢性萎缩性胃炎是消化系统常见病,目前认为其是胃癌前状态;伴肠上皮化生及不典型增生者更可能向癌变发展.COX-2蛋白的表达在胃黏膜炎性反应及癌变的过程中扮演着重要角色,研究发现中药能有效抑制其表达从而阻止萎缩性胃炎进一步向癌症转化.对中药复方及单味中药抑制COX-2蛋白表达治疗慢性萎缩性胃炎的研究进行综述,以期指导临床与科学研究.
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论医院药品价格下调的影响
近几年,国家采取了一系列降低药品价格的政策.药品价格的调整是否从一定程度上减缓了"看病难,看病贵"的问题,是否达到了预期效果?本文将从医院、患者、医药公司和药店以及医药企业四方的角度对药品价格下调产生的影响进行探讨.
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川芎嗪下调Colon26肿瘤细胞免疫抑制的体外研究
目的:体外研究川芎嗪对Colon26肿瘤细胞产生免疫抑制的影响.方法:获取经川芎嗪作用后再培养的Colon26及上清,以不经川芎嗪作用的同步培养细胞及上清作对照;分析川芎嗪作用后是否可下调Colon26肿瘤免疫抑制(MTT法检测NK活性和诱导转化,直接免疫荧光FACS法检测IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达),定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制分子含量的变化,多元相关分析川芎嗪下调肿瘤免疫抑制与免疫抑制分子分泌变化之间的关系.结果:单纯Colon26培养上清中5种免疫抑制分子均可被测到,以TGF-β1含量高,可显著抑制所测5项免疫功能.川芎嗪作用后,第一次传代再培养上清中TGF-β1、IL-6和IL-10含量,及5项免疫功能抑制均明显降低;第二次传代再培养上清中TGF-β1和IL-6含量,及转化抑制、CD3+ζ+和CD3-ζ+表达抑制均显著回升.相关分析显示,TGF-β1与除转化抑制以外的其他4项免疫功能抑制呈正相关,IL-6与转化抑制及CD3-ζ+表达抑制正相关;IL-10与NK杀伤抑制、IL-2Rα及CD3+ζ+表达抑制正相关.结论:川芎嗪作用Colon26肿瘤细胞后可明显下调其免疫抑制分子的分泌,影响其免疫抑制效应的发挥.通过下调肿瘤细胞分泌免疫抑制分子而阻碍肿瘤细胞产生免疫抑制,可能是川芎嗪的抗瘤效应机制之一.
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肿瘤引起T细胞和NK细胞的ζ链水平下调或缺失
ζ(zeta)链是一种跨膜信号蛋白,以二聚体形式表达在T和NK细胞膜上,影响T和NK细胞的活化.在肿瘤患者的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)和外周血淋巴细胞(PBL)中,T和NK细胞ζ链的水平往往比正常人低甚至缺失,从而导致T和NK细胞丧失免疫活性.ζ链水平低下的患者,其存活率常低于ζ链正常的患者而且预后不好.在免疫细胞内,肿瘤诱导活化的caspase能引起ζ链在蛋白水平的降解,而患者体内的巨噬细胞通过产生H202也能降低ζ链的水平,但可被过氧化氢酶抑制.深入研究肿瘤患者ζ链下调机制,对肿瘤的诊断和治疗具有重要意义.
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长时间给予高选择性δ阿片受体激动剂抑制δ受体mRNA表达
我们采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,观察了δ阿片受体肽类激动剂[D-Pen2.5]enkephalin(DPDPE)及非肽类激动剂BW373U86对δ受体mRNA表达的影响,并比较了两者作用的差异性.结果如下:(1)DPDPE作用24及48h可使δ受体mRNA表达水平显著降低,而BW373U86只在24h有显著抑制作用;(2)DPDPE在10-6 mol/L时即可使δ受体的mRNA表达水平显著降低;而BW373U86在10-5 mol/L时才有效.可见长时间(24h)给予肽类及非肽类δ阿片激动剂均可显著抑制δ受体的mRNA表达;DPDPE作用较强,作用时程较长.
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亚砷酸钠对SH－SY5 Y细胞生长和3 MST表达的影响
神经母细胞瘤是儿童常见的恶性肿瘤之一。因其恶性程度高，手术加化疗的方案对于侵润性的神经母细胞瘤效果不佳。砷，俗名砒霜，很早被用来治疗急性粒性白血病。现在发现砷对神经母细胞瘤、胶质瘤，以及来源于肝脏、前列腺、肾脏、子宫颈和胆囊等固体肿瘤也有效［1］。然而，其作用机制尚未完全明了。有报道，肿瘤细胞H2 S合成酶表达上调［2］。那么，砷是否可通过下调H2 S合成酶的表达发挥抗癌作用？本实验采用SH－SY5Y细胞和亚砷酸钠（ NaAsO2）对此问题进行了探讨。
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新基因NS5ATP4表达产物下调细胞周期素B2基因表达的研究
目的探讨新基因NS5ATP4表达产物对细胞周期素B2(cyclin B2)基因启动子转录的调节作用.方法根据文献确定细胞周期素B2的启动子区域,聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素基因因启动子(B2p),克隆至真核报告基因表达载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-cyclin B2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞系,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性:并与pcDNA3.1(-)-NS5ATP4共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果成功获得细胞周期素B2启动子的正确克隆.pCAT3-cyclinB2p和pcDNA3.1(-)-NS5ATP4共转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的10倍,pCAT3-cyclin B2p的0.14倍.结论本文克隆的细胞周期素B2启动子有顺式调节下游基因表达的活性,NS5ATP4对细胞周期素B2基因的转录具有下调作用.
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双环醇下调细胞周期素B2基因启动子转录活性研究
目的探讨双环醇对细胞周期素(cyclin)B2启动子转录活性的调节作用.方法根据文献报道的结果确定细胞周期素B2的启动子DNA序列区域,以聚合酶链反应(PCR)扩增细胞周期素启动子(B2p),克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-cyclinB2p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性:并与双环醇共刺激的HepG2细胞,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果成功获得细胞周期素B2启动子的止确克隆.pCAT3-cyclinB2p和双环醇(106Mol/L)瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的2.4倍,pCAT3-cyclinB2p的0.35倍.结论细胞周期素B2启动子有顺式激活下游基因的活性,双环醇具有对细胞周期素B2基因有下调作用.
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地塞米松对特发性眼眶炎性假瘤体外培养成纤维细胞增生的抑制及其机制
背景 特发性眼眶炎性假瘤(IOIP)是一种常见的眼眶疾病,病因和发病机制尚未完全阐明,以糖皮质激素为主的治疗效果欠佳. 目的 观察地塞米松对IOIP组织体外培养成纤维细胞的作用,探讨糖皮质激素在IOIP治疗中可能的作用机制.方法 收集2011年11月至2012年1月在北京同仁医院眼科中心切取的6例6眼IOIP组织(IOIP组)和3例因泪腺脱垂行泪腺复位术患者的眶部结缔组织(对照组),采用组织块培养法对2种组织进行体外培养以获取眼眶成纤维细胞,对培养的细胞进行组织形态学观察,采用免疫组织化学法检测培养细胞表面生物标志物的表达;采用WST-8法观察2个组培养的成纤维细胞的增生情况,并绘制生长曲线.将培养的细胞接种至96孔板,将不同浓度地塞米松(0、1×10-3、1×10-4、1×10-5和1×10-6mol/L)加入培养板分别作用24、48和72 h,采用WST-8法观察地塞米松对细胞增生的影响;采用ELISA法检测各组成纤维细胞中ICAM-1的相对表达量.结果 IOIP组织和正常眼眶体外培养的成纤维细胞均呈长梭形,两端有较长突起;免疫细胞化学染色可见2种组织中培养的细胞中vimentin呈阳性表达,而desmin、S-100、细胞角蛋白(CK)均呈阴性表达.与正常眼眶组织培养的成纤维细胞相比,IOIP组织培养的细胞生长速度较快.随着地塞米松浓度的增加,成纤维细胞的增生值(A值)逐渐下降,0、1 × 10-3、1 ×10-4、1×10-5和1×10-6mol/L地塞米松组成纤维细胞增生值的总体比较差异有统计学意义(F浓度=36.27,P=0.00),随着地塞米松作用时间的延长,成纤维细胞增生值逐渐下降,总体比较差异有统计学意义(F时间=3.69,P=0.00).无地塞米松培养组培养24、48和72 h,成纤维细胞中比较ICAM-1表达量分别为0.298±0.008、0.312±0.003和0.319±0.011,表现为逐渐升高的趋势,而不同浓度地塞米松作用后随着时间延长ICAM-1表达量均逐渐降低,总体比较差异有统计学意义(F时同=3.11,P=0.00),随着地塞米松浓度的增加,ICAM-1表达量均逐渐下降,总体比较差异有统计学意义(F浓度=75.17,P=0.00). 结论 IOIP的发生和发展可能与眼眶成纤维细胞中ICAM-1表达增强有关,地塞米松可能通过下调细胞中ICAM-1的表达而抑制眼眶成纤维细胞的增生,从而发挥抗炎和治疗作用.
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DAB2IP与肿瘤的发生发展
基因DAB2IP(disabled homolog 2-interacting protein,DAB2 interacting protein),也被称为AIP1(ASK1-interacting protein 1),其编码的蛋白是Ras GTPase活化蛋白家族[Ras GTPase-activating protein(GAP)]的新成员之一.作为一个肿瘤抑制基因,DAB2IP常在前列腺癌、乳腺癌、肺癌、肝癌等肿瘤中表达下调,其机制与启动子甲基化及Ezh2相关.DAB2IP不仅参与肿瘤的增殖、存活和凋亡过程,还与肿瘤转移密切相关.
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SSH技术筛选β干扰素真核表达载体转染细胞的下调基因
筛选β-干扰素质粒转染下调相关基因.以β-干扰素表达质粒pcDNA3.1(-)-IFN β转染HepG2细胞,同时以空载体pcDNA3.1(-)为对照;制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并合成cDNA,经RsaI酶切后将来自pcDNA3.1(-)转染的cDNA分成两组,分别与两种不同的接头adaptor1和adaptor2衔接,再与来自pcDNA3.1(-)-IFNβ转染的cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析.成功构建人β-干扰素质粒转染下调相关基因差异表达的cDNA.所获得的50个克隆中,随机挑选37个克隆均含有插入片段,将这些克隆进行序列测定,并通过生物信息学分析获得其全长基因序列,结果共获得22种编码基因,其中3种为未知功能的基因.筛选到的cDNA序列,包括与细胞生长调节、物质代谢和细胞凋亡密切相关的一些蛋白编码基因.
关键词： β-干扰素 下调 抑制性消减杂交技术(SSH) -
乳香诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡中对Bcl-2基因调节
研究乳香诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡中对 Bcl- 2 基因蛋白的影响.采用 DNA 片段百分率及免疫组化法检测30 例急性非淋巴细胞白血病细胞及白血病细胞株 HL60 细胞经 100 μg/ml乳香处理前、后 Bcl-2 基因蛋白表达水平 .结果:乳香具有诱导急性非淋巴细胞白血病细胞及 HL60 细胞凋亡[1]及下调 Bc l-2 基因蛋白表达水平.结论:乳香具有诱导急性非淋巴细胞白血病细胞及 HL60 细胞凋亡作用及下调 Bcl-2 基因蛋白.Bcl-2 基因蛋白表达水平下调可能是乳香提取物诱导急性非淋巴细胞白血病细胞凋亡重要机制之一.
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人SUMO-2 shRNA干扰表达载体构建及其对细胞增殖的影响
目的 构建干扰人SUMO-2表达的shRNA重组质粒载体,并筛选下调人SUMO-2表达的稳定细胞株.方法 设计并合成针对人SUMO-2的shRNA寡核苷酸,并将其克隆至pLKO.1质粒载体上,转染HCT116细胞后经嘌呤霉素筛选获稳定表达细胞株,并通过免疫印迹鉴定SUMO-2的表达.结果 成功构建干扰人SUMO-2表达的pLKO.1质粒载体,可在HCT116细胞中稳定表达,且能有效抑制SUMO-2蛋白质的表达.功能研究初步证明干扰SUMO-2表达可抑制细胞增殖并使处于细胞周期G1期的细胞比例上升.结论 获得了干扰人SUMO-2表达的pLKO.1-shRNA质粒载体,以及下调SUMO-2表达的HCT116稳定细胞株.
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下调FMNL3基因表达对SW620细胞体外增殖及侵袭能力的影响
目的 探讨下调FMNL3基因表达对SW620细胞体外增殖和侵袭能力的影响.方法 用脂质体转染法将FMNL3干扰质粒pcDNA3.1-EGFP-FMNL3-shRNA1(shRNA1组)和pcDNA3.1-EGFP-FMNL3-shRNA2(shRNA2组)转染结直肠癌SW620细胞,以无关序列(pcDNA3.1-EGFP-FMNL3-scramble)转染为阴性对照(scramble组),以未转染质粒的SW620为正常对照(NC组).荧光显微镜下评估转染效率,实时荧光定量PCR法检测FMNL3基因的干扰效率,MTT实验检测FMNL3基因沉默前后SW620细胞生长和增殖情况,Transwell小室法检测干扰前后细胞的体外侵袭能力变化.结果 各组转染效率分别为scramble组 (74.35±5.93)%,shRNA1组(72.33±7.65)%,shRNA2组(73.17±4.32)%,差异无统计学意义(P>0.05);与NC组相比,转染48 h各组细胞中FMNL3 mRNA表达水平分别为scramble 组(93.35±6.33)%,shRNA1组(16.44±4.37)%,shRNA2组(18.51±5.16)%,两个shRNA组细胞FMNL3 mRNA表达水平显著下调,其中shRNA1组下调多,干扰效率高;与NC组和scramble组细胞相比,shRNA1和shRNA2组细胞48 h和72 h体外增殖活力明显下降(均P<0.05),其48 h穿出Transwell小室人工基底膜的细胞数明显减少(P<0.01).结论 下调FMNL3基因表达后,结直肠癌SW620细胞的体外增殖和体外侵袭能力均明显下降,FMNL3可能正向调控结直肠癌细胞的增殖和侵袭.
