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同位素标记联合二维液相色谱串联质谱技术筛选T淋巴细胞急性白血病特异标记物
目的:筛选并鉴定T淋巴细胞白血病(T-ALL)的可能标记物.方法:分别收集并纯化初治儿童B淋巴细胞白血病(B-ALL)与T-ALL血清各20份.应用同位素标记联合二维液相色谱串联质谱(iTRAQ-2DLC-MS/MS)和生物信息分析软件(IPA)筛查T-ALL特异性分子标志物.采用ELISA双抗夹心法分别检测上述40例样本中血清可溶性L-选择素(sL-selectin)表达水平,进一步验证2DLC-MS/MS技术的准确性,并计算其统计学意义.结果:有定量信息的非冗余蛋白468个,T-ALL组血清差异蛋白共有38个,其中显著上调蛋白质31个,下调蛋白质7个;T-ALL中sL-selectin表达明显上调,并得到ELISA检测结果证实.结论:T-ALL与B-ALL比较存在相对特异的血清差异蛋白,sL-selectin可作为T-ALL新的肿瘤分子标志物及潜在的治疗靶点.
关键词： T淋巴细胞白血病 蛋白质组 同位素标记 二维液相色谱串联质谱 靶向治疗 -
SIL-TAL1融合基因阳性的儿童急性T淋巴细胞白血病的临床特征及其治疗研究
目的:探讨SIL-TAL1融合基因阳性儿童急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)的临床特征、治疗方案及预后.方法:收集2005年4月至2012年11月间来我院治疗的101例T-ALL患儿的临床资料,比较SIL-TAL1阳性和SIL-TAL1阴性患儿的常见临床特征、早期治疗反应、微小残留病(minimal residual disease,MRD)、无事件生存率(event free survival,EFS)、无复发生存率(relapse free survival,RFS)及SIL-TAL1阳性T-ALL采用BCH-2003方案和CCLG-2008方案治疗的疗效.结果:在101例患儿中共22例携带SIL-TAL1融合基因(21.9％).SIL-TAL1阳性(22例)和阴性患儿(79例)初诊时性别、年龄、对泼尼松反应及中枢神经系统累及均无明显差异,但SIL-TAL1阳性患儿初诊时外周血白细胞水平明显高于SIL-TAL1阴性患儿(P=0.009).两组患儿在诱导缓解治疗后、延迟强化治疗Ⅱ前、维持治疗前的MRD水平无明显差异,但SIL-TAL1阳性患儿中巩固治疗前的MRD高水平者明显多于SIL-TAL1阴性患儿(P＜0.05),延迟强化治疗Ⅰ前的MRD高水平者似有增多的趋势(P＞0.05).两组患儿的5年EFS和RFS没有明显差异.将22例SIL-TAL1阳性患儿按CCLG-2008方案的分型标准重新划分危险度,BCH-2003组(10例)的危险度明显高于CCLG-2008组(12例,P=0.029),但两组患儿在常见临床特征、早期治疗反应、MRD水平、长期预后等方面均无明显差异.结论:SIL-TAL1阳性患儿初诊时外周血白细胞水平较高,临床疗效与SIL-TAL1阴性患儿没有显著差异.同时,SIL-TAL1阳性患儿对早期强化治疗可能反应性较差,BCH-2003方案可能更适于这一亚型的患儿.
关键词： T淋巴细胞白血病 SIL-TAL1融合基因 微小残留病 -
MIP-1α诱导Jurkat细胞穿过人脑微血管内皮细胞单层能力分析
本研究为探究人急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)细胞脑转移发生中枢神经系统白血病的机制及MIP-1α在T-ALL模式细胞Jurkat穿过人脑微血管内皮细胞(HBMEC)过程中的作用.应用real-time PCR、siRNA试验、跨内皮迁移试验和细胞黏附试验,分别检测MIP-1 α的表达、Jurkat细胞穿透能力、迁移能力和黏附力.结果表明,Jur-kat细胞作为研究T-ALL细胞穿过血脑屏障(BBB)机制的模式细胞MIP-1α表达均高于正常人T淋巴细胞以及其他3种T-ALL细胞系(HSB2、CEM、SUP-T1),Jurkat细胞分泌的MIP-1α使其穿过HBMEC单层能力增强.MIP-1 αsiRNA干扰后的Jurkat细胞对HBMEC黏附和跨内皮迁移力下降.结论:Jurkat细胞分泌的MIP-1α参与了Jurkat细胞穿过HBMEC单层的过程.
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流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达
本研究旨在探讨流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及IFN-γ应用于T淋巴细胞白血病治疗的临床价值.以不同浓度IFN-γ诱导培养Jurkat细胞48小时,用流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、IL-6、TNFα和IFN-γ表达,并采用流式细胞术检测膜上IL-2受体(CD25)的表达.结果表明:IFN-γ诱导Jurkat细胞IL-2和TNF-α的表达呈浓度依赖性升高,未检测到IL-6表达,CD25表达明显升高.结论:Jurkat细胞能被IFN-γ诱导高表达Th1细胞因子和CD25,流式微珠阵列法能准确客观地反映Th1/Th2细胞因子表达的动态变化.
关键词： 流式微珠阵列 Th1/Th2细胞因子 IFN-γ T淋巴细胞白血病 -
苦参碱诱导T淋巴细胞白血病JM细胞凋亡相关基因表达变化及其机制的研究
本研究探讨苦参碱诱导T淋巴细胞白血病JM细胞凋亡相关基因的表达变化,并进一步分析其机制.用0.4 mg/ml苦参碱诱导JM细胞4天,分别提取对照组及苦参碱诱导组细胞总RNA,采用凋亡相关基因Atlas cDNAExpression Array Kit筛选出苦参碱诱导JM细胞前后差异表达的凋亡相关基因,并用Western blot验证部分基因表达变化.结果表明,JM细胞经苦参碱诱导后,基因芯片杂交结果显示31个基因有差异表达.其中caspase 8表达上调迭5倍以上.Western blot证实caspase 8表达变化与苦参碱作用时间呈正相关.结论:苦参碱可诱导JM细胞多个凋亡基因差异表达,其中caspase 8表达上调较为显著.
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去甲斑蟊素诱导T淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡作用及其机制
目的 研究去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)在体外对急性T淋巴细胞白血病细胞株Jurkat细胞凋亡的作用及其机制.方法 取对数生长期的Jurkat细胞分别加入不同浓度的NCTD和(或)10 mg/L的长春新碱(VCR),倒置显微镜下观察不同时间Jurkat细胞形态、密度及结构的变化;采用MTT比色法测定NCTD及VCR两种药物作用于细胞72 h后对细胞增殖抑制作用的影响;实时荧光定量RT-PCR法对p53及survivin基因表达量进行检测.结果 NCTD及VCR作用组细胞形态出现不规则,胀大、变形现象明显,分布稀疏,大量细胞死亡,两者在相同时间点上对细胞的影响无明显差别.MTT法检测结果表明:NCTD增殖抑制作用呈现时间-浓度依赖关系,佳浓度及时间在20 mg/L,作用72 h时.NCTD与VCR两者对Jurkat细胞均有抑制作用(P＜0.05),两者的抑制率相比无显著性差异(P＞0.05),且两者联合可增加细胞增殖抑制率(P＜0.05).应用实时荧光定量RT-PCR技术定量表达p53及survivin基因,结果显示NCTD组p53基因表达较对照组细胞株明显上升(P ＜0.001),相反survivin基因较对照组明显下降(P＜0.01).结论 (1) NCTD抑制Jurkat细胞株的增殖抑制作用具有时间-浓度依赖关系;(2)NCTD与VCR对细胞增殖均有抑制作用,两者的影响无显著性差异,且两者联合可增强对细胞的增殖抑制作用;(3)NCTD促进Jurkat细胞株细胞凋亡、抑制增殖的机制可能与上调p53基因表达量及下调survivin基因表达量有关.
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Notch及Wnt信号通路与急性T淋巴细胞白血病
急性T淋巴细胞白血病(T acute lymphoid leukemia,TALL)是一种高度恶性的血液系统恶性肿瘤,在儿童和成人中发病率较高,且患者常伴随表达T细胞免疫表型的不成熟淋巴细胞浸润骨髓.流行病学显示,T-ALL分别占儿童ALL的10％～15％及成人ALL的25％.
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白藜芦醇对人急性T淋巴细胞白血病的体外治疗作用及其机制
目的：探讨白藜芦醇对人急性T淋巴细胞白血病的体外治疗作用及其机制。方法以人T淋巴细胞白血病细胞（Hut78）作为白藜芦醇的作用靶细胞，分别用6．25、12．5、25、50、100、200μmol／L白藜芦醇处理Hut78细胞24 h，用100μmol／L白藜芦醇处理Hut78细胞12、24、48 h，采用CCK-8法测算细胞抑制率。经100、200μmol／L白藜芦醇分别处理Hut78细胞12、24 h后，用流式细胞术分析Hut78细胞的凋亡情况。 Hut78细胞经100、200μmol／L白藜芦醇处理48 h，采用Western blotting法检测细胞中C-myc蛋白的表达。结果白藜芦醇在大于6．25μmol／L时显著抑制Hut78细胞的增殖，并呈剂量-时间依赖性（P均＜0．01）。白藜芦醇可诱导Hut78细胞凋亡，随浓度增加凋亡细胞增多（P均＜0．01）。白藜芦醇可呈剂量依赖性下调C-myc蛋白表达（P均＜0．01）。结论白藜芦醇有明显的体外抗人急性T淋巴细胞白血病效应，其作用机制可能与下调C-myc蛋白表达有关。
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卡瓦胡椒素B对急性T淋巴细胞白血病细胞增殖、凋亡的作用
目的：研究卡瓦胡椒素 B 对急性 T 淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞增殖、凋亡的作用及机制。方法用不同浓度卡瓦胡椒素 B 处理 T-ALL 细胞株 CEM-C7（糖皮质激素敏感）及 MOLT-4（糖皮质激素耐药）细胞后，通过3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲酯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑（MTS）法观察卡瓦胡椒素 B 对CEM-C7及 MOLT-4细胞生长速度和倍增时间的影响，通过流式细胞术检测卡瓦胡椒素 B 对 CEM-C7及MOLT-4细胞凋亡的影响，通过 Western blot 方法检测 Bim、Bcl-2、活化型 Caspase-9的表达。用不同浓度卡瓦胡椒素 B 处理 T-ALL 患儿标本后通过 Western blot 方法检测 Bim 和 Bcl-2的表达。结果MTS 结果显示：卡瓦胡椒素 B 显著抑制 T-ALL 细胞株的增殖，呈剂量和时间依赖性（P ＜0．01）。流式细胞术检测凋亡结果显示：卡瓦胡椒素 B 显著诱导 T-ALL 细胞株凋亡，呈剂量依赖性（P ＜0．001）。Western blot 结果显示：卡瓦胡椒素 B 在T-ALL 细胞中增加活化型 Caspase-9及 Bim 的表达，降低 Bcl-2的表达，在 T-ALL 患儿标本中增加 Bim 的表达，降低 Bcl-2的表达，均呈剂量依赖性。结论卡瓦胡椒素 B 能够显著抑制 T-ALL 细胞株的增殖，诱导其凋亡，卡瓦胡椒素 B 可能是通过上调 Bim 的表达及下调 Bcl-2的表达，激活 Caspase-9而起抗癌作用，且与是否糖皮质激素耐药无关。
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依鲁替尼对急性T淋巴细胞白血病CCRF-CEM细胞株细胞增殖的作用
目的 研究依鲁替尼对急性T淋巴细胞白血病细胞CCRF-CEM细胞株增殖抑制的作用.方法 使用不同浓度的依鲁替尼作用于CCRF-CEM(人急性T淋巴细胞白血病细胞)细胞株,分别作用24、48、72 h后,采用CCK8检测细胞抑制率,采用Annexin V-FITC/PI荧光双染色测定细胞的凋亡率,观察依鲁替尼对CCRF-CEM的凋亡影响.结果 不同浓度依鲁替尼作用CCRF-CEM细胞后,细胞增殖抑制率明显升高(P＜0.01)并且抑制率随药物浓度增高而增高.在同一浓度依鲁替尼作用细胞后,不同的作用时间,抑制率也有明显的变化(P＜0.01),呈时间依懒性,但在低浓度下,72h细胞的增殖抑制率比48h低.依鲁替尼作用细胞后,细胞凋亡率明显升高(P＜0.01),并且呈药物浓度依赖性.结论 依鲁替尼可以诱导T淋巴细胞CCRF-CEM凋亡,并且依赖药物浓度和作用时间.
