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单纯疱疹病毒潜伏感染的研究进展
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV)是全球分布的病原体之一,其潜伏特性为其治疗带来巨大困难,患者多为终身携带,因此研究HSV病毒潜伏和复发机制在对其治疗和防控中具有重要意义.本文对近年来国内外对单纯疱疹病毒的潜伏感染的建立、维持和再激活以及潜伏感染模型的研究进展进行综述.
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基于系统观对肝细胞癌局部消融治疗的评价与思考
近10年来,在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的综合治疗中,局部消融治疗(local ablative therapy,LAT)特别是射频消融治疗(radiofrequency ablation,RFA)的重要地位日益凸显[1].研究表明,对于早期HCC,RFA中远期疗效与手术治疗相当,可作为首选的治疗方式[2];对于大肝癌也有较满意的疗效[3].然而,LAT开展得越是广泛,就越需要理论上的跟进和认识上的提高;越需要对其特点有全面的认识,看到其固有的不足;越需要对其在HCC综合治疗中的作用有准确的定位[4];越需要基于HCC的系统认识而对LAT进行前瞻性思考.只有这样,才能正确认识和准确评价LAT在HCC综合治疗中的作用,才有利于对LAT的把握和引领.
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生殖器疱疹的研究和治疗进展
生殖器疱疹是一种常见的性传播疾病,容易反复发作,很难彻底治愈,给患者的生理和心理造成极大的困扰.目前对该病复发机制的研究较多,尤其是潜伏相关转录体(LAT)、Us3基因及Toll样受体.本文就近几年的研究和治疗进展做一综述.
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重症胰腺炎术后发生肝右动脉血栓的诊治体会
目的：结合手术效果总结重症胰腺炎（S A P）术后引发的肝动脉的血栓（L A T）进行诊断和治疗的经验。方法：以2011年3月～2013年3月S A P患者术后发生LAT患者共4人为研究对象，通过比较患者手术前后的WBC（白细胞计数）、PLT（血小板计数）、ALT（谷丙转氨酶活力）和AST（谷草转氨酶活力）等水平，总结SAP术后LAT诊治经验。结果：SAP术后1～2月间患者ALT进行升高、常规疗效不佳，则应考虑LAT可能，并进行DSA和超声检查以确诊；采取溶栓手段疗效显著，在治疗1月后患者A L T等指标均明显降低（P＜0.05），且在12月后追踪时各指标降至正常范围。结论：S A P术后1～2月内以A L T等指标进行升高为特征，结合DSA和超声检查能判断LAT发生。采用溶栓方法进行医治，能使明显降低ALT等指标水平，且12月后复查效果良好。
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T细胞衔接活化因子-绿色荧光蛋白真核表达质粒的构建及其在Jurkat细胞的定位
目的:构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与T细胞衔接活化因子(Linker for activated ofT cells,LAT)融合蛋白的真核表达载体,观测LAT-EGFP在Jurkat细胞中的定位表达.方法:利用RT-PCR技术提取并扩增LAT除去终止密码子外的全部序列,克隆到真核表达载体PEGFP-N3,酶切鉴定并测序.瞬时转染到Jurkat细胞中进行表达,荧光共聚焦显微镜观察LAT-EGFP在Jurkat细胞中的表达及细胞定位.提取转染后细胞总RNA,通过RT-PCR的方法检测LAT-EGFP在转录水平的表达.利用Western blot法进一步鉴定融合蛋白的表达.结果:重组载体经酶切鉴定,切出片段长度在750 bp左右与插入序列长度相符,并进一步进行测序鉴定证实连接完全正确.共聚焦显微镜观察表达的LAT-EGFP融合蛋白定位在细胞膜上,并呈点簇状聚集状态.RT-PCR扩增证实了LAT和EGFP的融合蛋白在Jurkat细胞中在转录水平的表达,Western blot分析进一步证明了LAT和EGFP融合蛋白构建成功,并在蛋白水平上有明显的融合表达.结论:成功构建真核表达载体LAT-EGFP,且融合蛋白LAT-EGFP与野生型LAT在Jurkat细胞中的定位一致,具有功能表达效应,这为后续准确研究具有棕榈酰化位点的跨膜接头蛋白的信号转导作用提供了一种良好的研究载体和方法.
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CD59促进LAT介导的T细胞活化
目的：研究CD59分子在LAT（ Linker for activated T cells ）介导的T系淋巴细胞活化中所起的作用。方法：构建LAT-GFP融合蛋白，以逆转录病毒为载体转染Jurkat细胞，建立稳定转染细胞株（ Jurkat-GFP）。分别使用CD59抗体刺激和pSUPER-siCD59干扰质粒（ GFP标记）沉默Jurkat-GFP细胞。免疫荧光观察CD59和LAT分子在细胞膜的表达和定位；MTT比色法检测细胞增殖率的变化；Western blot检测LAT活化信号转导通路中相关蛋白分子磷酸化水平。结果：荧光显微镜下可见Jurkat-GFP细胞绿色荧光表达于细胞膜，转染干扰质粒后细胞膜和细胞质均有绿色荧光表达。激光共聚焦显微镜下可见CD59抗体刺激前CD59和LAT分子均匀分布于细胞膜，且转染干扰质粒的Jurkat-GFP细胞CD59表达量下降。 CD59抗体刺激后CD59分子和LAT分子点状聚集共定位于细胞膜。 MTT结果表明相对于正常Jurkat-GFP细胞，抗体活化后细胞增殖速率明显升高（P＞0.05），而电转干扰质粒后细胞生长减慢。 Western blot 结果表明，CD59抗体刺激后细胞ZAP-70、LCK、PLC-r总蛋白表达无明显差异（ P＞0.05），而磷酸化蛋白表达显著增高（ P＜0.05）。结论：抗体活化后细胞膜上CD59和LAT分子聚集并共定位于细胞膜，且细胞信号转导通路下游分子磷酸化水平增高，进一步证实CD59分子经抗体活化后可促进LAT介导的T细胞信号转导。
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LAT在T细胞成熟分化中的作用
T细胞活化衔接因子(Linker for activation of T cells,IJAT)是一种Ⅲ型的跨膜蛋白,它不具有酶的活性,却能通过连接信号转导途径中的其他衔接蛋白或主要的酶而发挥重要作用.LAT参与多种细胞的信号转导,尤其在T细胞的成熟活化过程中起着重要的跨膜信号传递作用,当T细胞借助TCR识别由MHC分子递交的抗原肽后,LAT胞内段的酪氨酸发生磷酸化,继而募集到在T细胞激活中起重要作用的多种信号分子,对TCR信号转导和T细胞内环境稳定进行调节,在这一过程中,132、171、191和226四个位点的酪氨酸磷酸化起了关键性的作用.
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人T细胞活化衔接因子基因真核表达载体的构建
核表达载体.
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正中神经返支卡压征二例
病例1男,16岁.因双手拇指无力,大鱼际肌萎缩4个月而来我院就诊.专科检查:右手大鱼际肌萎缩(++),左手大鱼际肌萎缩(+),双手拇指外展、对掌受限,双手拇指及大鱼际痛温觉正常.神经电生理检查:双侧拇短展肌肌电图为神经性损害,正中神经远端运动潜伏期(LAT)延长,复合肌肉动作电位(CMAP)波幅降低,正中神经感觉传导速度(SCV)、感觉神经动作电位(SNAP)正常.
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Ⅰ型单纯疱疹病毒在潜伏期表达微RNA以调控病毒自身mRNA的表达
Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)全长10.8 kb,其在潜伏期中,不表达任何病毒源性的蛋白产物,仅表达潜伏相关转录本(LAT).论文作者将8.3Kb的LAT构建入PCDNA3.1载体中并将其转入293T细胞,随后从其总RNA中分离小片段RNA并进行454测序,共测得225 439个小片段RNA序列,其中144 955个序列为细胞内微RNA,有651个微RNA读数可能来源于HSV-1.根据HSV-1茎环结构前体序列预测,这些读数来源于HSV-1的4个茎环结构前体,为6个HSV-1表达的微RNA.其中,读数多的为miR-H2-3p(265)和miR-H4-3p(266).
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LAT与HSV-1的潜伏感染及再激活
单纯疱疹病毒性脑炎的发病大多数是由潜伏的单纯疱疹病毒再激活引起已基本得到公认,但病毒潜伏及再激活的具体机制还不十分明确,本文就国外近年来LAT在单纯疱疹病毒潜伏感染的建立、维持和再激活过程中所起的重要作用作一简要综述.
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小鼠T细胞活化衔接因子基因真核表达载体的构建
目的 构建小鼠T细胞活化衔接因子(LAT)基因的真核表达载体.方法 以小鼠单个核细胞的cDNA为模板,采用PCR扩增LAT基因编码区的全部序列,克隆入真核细胞表达载体pCMV-HA中;测序鉴定目的基因并转染哮喘小鼠脾脏淋巴细胞.结果 PCR扩增的特异性片段长度为729 bp,并以此构建重组质粒pCMV-HA-LAT.质粒测序结果与GenBank中的小鼠LAT基因cDNA序列一致;转染哮喘小鼠淋巴细胞后可检测到LAT蛋白的表达.结论 成功构建了pCMV-HA-LAT重组真核表达载体.
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蝎素组分Ⅲ对Jurkat E6-1细胞中LAT和SLP-76表达的影响
目的 研究蝎素组分Ⅲ(SVC-Ⅲ)对Jurkat E6-1细胞LAT和SLP-76表达的影响,并探讨SVC-Ⅲ参与细胞免疫调控的可能机制.方法 不同浓度SVC-Ⅲ(100 ng·mL-1、10 ng·mL-1、1 ng·mL-1、0.1 ng·mL-1)与植物凝集素(PHA)共同刺激培养Jurkat E6-1细胞.72 h后收获细胞,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测细胞内信号分子LAT和SLP-76 mRNA表达变化情况.结果 高浓度SVC-Ⅲ(100 ng·mL-1)明显抑制Jurkat E6-1细胞LAT 和SLP-76的mRNA的表达(P＜0.05),低浓度SVC-Ⅲ(0.1 ng·mL-1、1 ng·mL-1、10 ng·mL-1)对Jurkat E6-1细胞LAT和SLP-76的mRNA的表达没有明显作用(P＞0.05).结论 SVC-Ⅲ能够抑制Jurkat E6-1细胞LAT和SLP-76的表达,在一定程度上阻止T细胞信号进一步的传递,从而抑制Jurkat E6-1细胞的活化能力.并且SVC-Ⅲ可抑制PHA诱导的Jurkat E6-1细胞的活化,其作用机制可能与早期活化相关的LAT和SLP-76等的表达相关.
关键词： 蝎素组分Ⅲ Jurkat E6-1 LAT SLP-76 -
涉毒青年男性罪犯内隐自我评价的研究
目的:探讨初入狱青年男性涉毒罪犯在能力和品质两维度上的自我评价倾向.方法:采用内隐联想测试任务对23名男性涉毒罪犯的内隐自我评价特性进行了测试.结果:两个IAT测验中,自我相关性词和消极词相联结时的平均反应时均显著大于其和积极词相联结时的平均反应时,且能力IAT效应略大于品质IAT效应(边缘显著性).结论:涉毒罪犯对自我能力和品质两维度的内隐评价均存在显著的积极认知,且对自身能力的期望要高于对自身品质的期望.
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HSV-2 LAT过表达vero细胞中microRNA的表达谱变化
目的 分析过表达疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)潜伏相关转录子LAT后vero细胞microRNA表达谱的表达变化.方法 通过化学合成的方法获得LAT基因的全长序列.构建HSV-2 LAT逆转录病毒表达载体pRetroQ-AcGFP1-C1,包装获得HSV-2 LAT基因过表达的逆转录病毒.利用microRNA芯片技术,分析感染逆转录病毒HSV-2 LAT后vero细胞microRNA表达谱的变化,得到因LAT基因过表达而产生变化的microRNA.结果 通过microRNA芯片分析,逆转录病毒HSV-2 LAT感染vero细胞后,可引起hsa-miR-23a*、kshv-miR-K12-3、hsa-miR-943、hsa-miR-634、hsa-miR-1270 5种microRNA2倍以上上调；使hsa-miR-181a-2* 、hsa-miR-450b-5p、hsa-miR-31、hsa-miR-24、kshv-miR-K12-12* 5种microRNA2倍以上下调.结论 LAT基因过表达后可引起vero细胞microRNA表达谱的变化.
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L-氨基酸转运体与肿瘤的关系
近年来,国外有许多关于L-氨基酸转运体(L-type amino acid transporter,LAT)与肿瘤关系的研究报道,认为LAT与肿瘤细胞的生长、增殖、血管生成相关,是预测肿瘤不良预后的病理因素.目前国内LAT与肿瘤关系的研究较少,本文将二者关系研究进展进行综述.
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CD59在T细胞LAT脂筏内移位及跨膜信号转导中的作用
目的 用前期构建好的LAT-EGFP质粒转染Jurkat细胞,探讨单克隆抗体交联CD59前后CD59与接头蛋白分子LAT在Jurkat细胞活化转导中的相关作用.方法 采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后共聚焦显微镜下观察细胞膜上LAT-EGFP分子分布的变化；利用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD59抗体交联前后Jurkat细胞的增殖效应；用Western blot技术检测CD59抗体交联前后LAT磷酸化情况.结果 共聚焦显微镜下可观察到CD59抗体交联后LAT-EGFP由散在分布为主变为点簇状分布为主；CD59抗体交联刺激组Jurkat细胞增殖能力增加；Western blot结果表明CD59抗体交联后LAT磷酸化水平增加.结论 抗体交联CD59能使接头蛋白分子LAT进入脂筏,并增强T细胞信号转导效应.
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中药抗病毒胶囊对豚鼠复发性生殖器疱疹模型LAT的作用
目的 探讨抗病毒胶囊对复发性生殖器疱疹的作用机理.方法 Hardy豚鼠制作复发性豚鼠生殖器疱疹模型,进行荧光定量PCR检测LATs拷贝量,比较组闯差异.结果 在LATs拷贝量方面,中药组和西药组同生理盐水组相比差异均有统计学意义,中药组LATs拷贝量较西药组低,但差异无统计学意义.结论 中药抗病毒胶囊可以减少LATs拷贝量,这对于降低其复发率有重要意义.
