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甲胺磷对鸡脑和脊髓蛋白质磷酸化的作用
目的以甲胺磷为测试药物,经典的迟发性神经毒剂TOCP为阳性对照药物,研究成年鸡脑和脊髓各亚细胞组分蛋白质磷酸化的变化;同时还对不同给药途径和不同剂量甲胺磷诱发母鸡OPIDN的情况进行了考察.
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化学诱变剂诱发基因突变分子机理研究
应用一将突变靶基因与哺乳细胞基因组DNA相分离的实验体系,证明化学诱变剂诱发的基因突变可发生在损伤碱基以外的正常序列中(非定标性突变),并有突变谱特征和突变好发的序列特异性.它的发生依存于化学诱变剂诱发的基因表达改变,应用mRNA差异显示和反义技术分离到两个基因表达序列标识,其相关基因表达被阻断后可分别促进和抑制化学诱变剂诱发的非定标性突变.用体外DNA复制技术证明其发生基础是由于化学诱变剂引发细胞DNA复制保真度的下降,而细胞错配修复功能未发现异常,但DNA聚合酶酶谱发生改变.还证明它的发生可因细胞应激信号通路激活剂所促进,在化学诱变剂作用后有蛋白磷酸化谱和蛋白酪氨酸残基磷酸化谱的改变以及应激激活蛋白激酶的激活和cAMP浓度升高.细胞信号转导通路的激活参与了非定标性突变的发生.
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组蛋白ADP-核糖基化及其生物学效应
与原核生物不同,绝大多数真核生物DNA以结构复杂、高度折叠的染色质为载体,这使得两者在基因表达上具有很大的差异。染色质以核小体为基本组成单位,每个核小体包括一个八聚体的组蛋白(两分子的H2 A-H2 B二聚体,两分子的H3和两分子的H4)以及缠绕其上1.75圈的长约146 bp的DNA,核小体之间以40~60 bp的DNA连接,组蛋白H1与之结合。八聚体的三维结构为球状,而组蛋白亚基的氨基端则游离出来,称为氨基端尾巴(或组蛋白尾巴)。氨基端尾巴上的许多残基可以被共价修饰,不同位点上的不同修饰可形成大量特殊信号。组蛋白的翻译后修饰不仅与染色体的重塑和功能状态紧密相关,而且在决定细胞命运、细胞生长以及致癌作用的过程中发挥着重要的作用,如组蛋白磷酸化就在有丝分裂、细胞死亡、DNA 损伤修复、DNA 复制和重组过程中发挥着直接的作用。
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p120ctn是癌基因还是抑癌基因
癌基因和抑癌基因的表达产物实际上都可以看成是细胞的信号分子,只是它们对细胞行为的影响结果不同而已.目前已知细胞的行为是由许多膜表面的受体、胞内外的信号分子通过各种不同途径作用的结果,信号分子通过各自的信号转导途径或信号转导途径之间共同作用而影响细胞增殖、分化和生物学行为,包括黏附、侵袭和转移等.已发现的细胞信号分子很多,但它们均通过一定的转导通路(途径)而起作用.p120ctn是新近才发现的一种细胞内信号转导分子和细胞黏附分子,参与由上皮型钙黏蛋白(E-cadherin,E-Cad)介导的细胞信号转导和黏附过程,但目前对其作用了解很少.现就它是癌基因信号分子还是抑癌基因信号分子进行综述.一、p120ctn --连环蛋白(catenin,Cat)家族的新成员Cat是黏附分子和细胞内信号分子,其家族成员包括α、β、γ和p120ctn,它们都是糖蛋白.4个成员中p120ctn发现得晚,它的发现可追溯到1988年,当时还未给其以正式名称.1991年,对这一能被Src癌蛋白磷酸化并与细胞转移行为有关的细胞内糖蛋白的研究明朗化,因其分子量为120 000,故称之为p120.
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抑制缝隙连接形成引起鸡胚晶状体过度生长与晶状体蛋白磷酸化的相关性
目的 为了进一步研究缝隙连接(gap junction,GJ)在生长控制中的作用;探讨抑制GJ形成的可能机制。 方法 把一种专一于鸡眼晶状体纤维细胞质膜中的MIP(major intrinsic protein),称为ND6的单克隆抗体注入20期鸡胚右眼内;左眼不注射,作为对照。ND6处理24h后分析晶状体,包括完整晶状体和匀浆晶状体的蛋白磷酸化水平变化。 结果 处理眼的晶状体明显大于对照眼的晶状体(长径P<0.01;宽径P<0.001);处理晶状体的蛋白磷酸化水平增高(与对照晶状体比较,完整晶状体增高76%;匀浆晶状体增高205%)。 结论 ND6能引起晶状体的过度生长;这种晶状体的不正常生长可能是因为GJ的形成被抑制而引起。MIP是本实验中被磷酸化的蛋白,它的磷酸化可抑制GJ的形成。
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蛋白磷酸化去磷酸化与突触囊泡循环
神经递质合成酶、胞吐相关蛋白、神经递质受体,以及离子通道等蛋白的磷酸化和去磷酸化对神经系统的功能具有重要作用.神经递质的释放往往伴随众多蛋白的磷酸化或去磷酸化过程,包括突触蛋白磷酸化引起突触囊泡从细胞骨架上解离、突触囊泡通过复合体SNARE和Ca2+的介导与突触前膜发生锚靠、融合和神经递质释放,以及以网格蛋白依赖的形式实现突触囊泡从突触前膜上内陷、出芽和缢缩后,从膜上裂解到胞浆中重新形成突触囊泡.因此,蛋白磷酸化和去磷酸化对于神经系统完成神经信号传递具有重要的意义.
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钙结合蛋白S100A11生物学功能及其相关疾病研究进展
S100 家族是一个分子量在 9 ~ 14 kD 之间、以独特的螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix)EF 手型基序为特征的、可以形成二聚体和多聚体的多基因调控酸性钙结合蛋白家族,主要存在于脊椎动物中[1],在细胞内外发挥其独特的生物学功能.S100 家族到目前为止至少包含 21 个成员,其中 16 个S100 蛋白的编码基因位于人 1 号染色体 q21 区域[2].S100 家族是多功能信号蛋白家族,转导钙依赖性细胞调节信号,参与调控多种生物学过程,例如调控蛋白磷酸化和去磷酸化、调节关键酶的活性、调节细胞骨架的组成、参与调控细胞生长、运动和分化、维持胞内外钙离子平衡等[3-5].心血管疾病、中枢神经系统疾病、炎症性疾病、肿瘤等多种疾病[6]与 S100 家族蛋白表达水平改变密切相关.
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β-内酰胺抗生素诱导大肠埃希菌ESBLs基因表达及其抑制机制
目的 了解大肠埃希菌临床菌株超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因及其携带模式、β-内酰胺类抗生素诱导以及组氨酸激酶抑制剂抑制细菌蛋白磷酸化和ESBLs基因表达的作用机制.方法 采用PCR和测序法确定大肠埃希菌主要ESBLs基因(KPC、TEM、SHV、CTX-M)及其携带模式.采用E-test和微量试管稀释法分别测定低抑菌浓度(MIC)和低杀菌浓度(MBC).采用固定化金属螯合层析法、细菌蛋白磷酸化检测试剂盒及实时荧光定量RT-PCR分别检测1/4 MIC青霉素和头孢噻肟诱导或组氨酸激酶抑制剂(氯氰碘柳胺、自行设计的溴化或碘化甲基咪唑)抑制大肠埃希菌耐药菌株蛋白磷酸化和ESBLs基因mRNA水平升高的作用.结果 183株β-内酰胺类抗生素耐药大肠埃希菌临床菌株中,TEM和CTX-M基因检出率(83.1%和77.1%)高于其他基因且以两者同时携带模式为主(65.0%)(P<0.05).1/4 MIC青霉素和头孢噻肟钠能诱导大肠埃希菌耐药菌株蛋白磷酸化及TEM、SHV、CTX-M基因mRNA水平显著升高(P<0.05).200 μmol氯氰碘柳胺、2或10μmol溴化甲基咪唑、20或50 μmol碘化甲基咪唑无抑制或杀灭大肠埃希菌的作用,但能抑制上述抗生素诱导的细菌蛋白磷酸化和ESBLs基因mRNA水平升高(P<0.05),也能提高大肠埃希菌耐药菌株对青霉素和头孢噻肟的敏感性(P<0.05).结论 TEM和CTX-M是本地区β-内酰胺类抗生素耐药大肠埃希菌临床菌株优势ESBLs基因,TEM+CTX-M是ESBLs基因优势携带模式.亚致死量β-内酰胺类抗生素可经TCSS上调大肠埃希菌ESBLs基因表达水平,但可被组氨酸激酶抑制剂所抑制.
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乙型和丙型肝炎病毒对ERK信号转导途径的影响
0引言在病毒性肝炎的发病机制中,病毒蛋白对肝细胞信号转导通路的影响是病毒感染以后形成慢性感染、肝纤维化、肝细胞癌的重要的分子生物学机制,对于慢性肝炎的预后也有重要意义[1-3].细胞外信号调节激酶(extracellularsignal-regulated kinase,ERK)是丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)亚族之一.MAPK是生物体内重要的信号转导系统之一,参与介导生长、发育、分裂、分化、死亡以及细胞间的功能同步等多种细胞过程.在哺乳动物细胞中已发现和克隆了ERK、JNK/SAPK、p38/RK、ERK5/BMK1四个MAPK亚族.这些MAPK能被多种炎性刺激所激活,并对炎症的发生、发展起重要调控作用.MAPK对细胞从整个G1期到S期起决定性作用.具有双重特异性的MAP激酶的激酶(MEK1和MEK2)磷酸化和激活后,可以激活ERK1和ERK2.激活的ERK可使许多效应蛋白磷酸化,这些效应蛋白包括细胞进展至S期所必需的蛋白表达的转录因子[4].MAP激酶系统很明显在细胞周期的G1期起作用,也可能在G2/M期起作用.已经证明细胞进入有丝分裂期后,内源性ERK1和ERK2生化活性降低[5-6],也有人认为正常的MEK/ERK活性对细胞进入有丝分裂期是必需的[7-8].
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蛋白磷酸酶抑制剂对离体海马组织tau蛋白磷酸化的影响
老年变性型痴呆(AD)患者神经元内出现神经原纤维缠结(NFT)、老年斑(SP)的形成及神经元的丢失为其主要病理学改变.NFT的核心是过度磷酸化的tau蛋白.我们于2001年11月至2003年8月年采用离体培养海马片,经用磷酸酶抑制剂冈田酸(okadaic acid)处理后,观察tau蛋白磷酸化的改变及其相关酶的变化,以期寻找一种适于研究的体外AD模型.
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蛋白磷酸化检测技术在肝细胞癌中的应用
蛋白磷酸化检测技术的临床应用有助于肝癌标记物的筛选以及肝癌发病机制和磷酸化蛋白治疗靶标研究.临床资料1.样本采集:12例肝细胞癌标本来自2008年5~8月大连医科大学附属第二医院普外科手术切除标本,标本采集经伦理委员会讨论通过.所有病例均经术后病理确认.其中男性8例,女性4例,年龄47~56岁,平均51岁.标本置于-80℃冰箱保存.
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磷酸化蛋白PED/PEA-15在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
本研究利用蛋白磷酸化检测技术筛选和鉴定肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma HCC)组织中的磷酸化蛋白,检测到磷酸化蛋白PED/PEA-15在肝细胞肝癌组织中表达,进一步利用Western blot检测PED/PEA-15(s-116)在肝细胞肝癌的表达情况.
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Sr2+辅助卵母细胞激活技术改善卵母细胞胞质内单精子注射受精失败患者的妊娠结局
卵母细胞胞质内单精子注射(intra-cytoplasmic sperm injection,ICSI)技术不受精子数量和形态影响,具有受精率高、多精受精率低等优点,已成为辅助生殖领域尤其是治疗男性不育的重要手段.该技术将精子直接注射到卵母细胞胞质内,绕过了自然受精过程中的诸多环节,因此常用于体外受精障碍者.尽管如此,临床上仍有1.29% ~ 3.00%的ICSI周期存在受精率低甚至受精完全失败[1].研究表明,卵母细胞激活不充分可能是导致ICSI受精失败的重要因素之一[2].辅助卵母细胞激活(assisted oocyte activation,AOA)技术可以有效地克服因卵母细胞激活不足引起的受精失败或受精率低,并能获得正常发育的胚胎[2-3].辅助激活的方法包括电脉冲、机械刺激、乙醇、Ca2+载体、蛋白质合成抑制剂和蛋白磷酸化抑制剂应用等[4-6].近年来有报道,Sr2+已成功应用于诱导小鼠和人类卵母细胞的激活[7-8].本研究拟采用ICSI技术结合Sr2+辅助处理,评估Sr2+作为卵母细胞的激活剂能否有效改善ICSI周期的临床结果,现报道如下.
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2006年版NCCN慢性髓细胞白血病治疗指南概要
慢性髓细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是起源于多能造血干细胞的恶性增殖性疾病.常以外周血白细胞异常升高及中性中、晚幼粒及成熟细胞、嗜酸粒细胞、嗜碱粒细胞增多为其特征.该病于1845年由Gragie等首先记载,1960年Nowell等在美国费城(Philadelphia)的2例患者中发现异常的小型染色体,即Ph染色体,是由9号和22号染色体相互易位即t(9;22)(q34;q11)而形成,易位导致9号染色体长臂末端(9q34)的c-ABL原癌基因在第2外显子的5'端发生断裂,并与22号染色体长臂末端(22q11)的c-BCR基因3'端发生融合形成BCR-ABL融合基因.该融合基因编码的BCR-ABL融合蛋白具有异常激活的酪氨酸激酶活性,导致自身酪氨酸残基及许多重要的底物蛋白磷酸化,从而激活多条信号传导途径,使细胞在不依赖细胞因子的情况下发生恶性转化、过度增殖、分化和凋亡受抑制.本文以NCCN(National Comprehensive Cancer Network)2006年第1版CML治疗指南为依据对目前主要的治疗方法及其进展作简要的介绍.
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紫外线诱导的p53表达状态不同的人结肠癌HCT116细胞中差异表达磷酸化蛋白的DNA损伤修复通路分析
目的 探讨p53野生型及p53缺失型的人结肠癌HCT116细胞在紫外线照射后磷酸化蛋白质组的表达差异及其不同DNA损伤修复通路.方法 将紫外线照射30 s后继续培养4 h的人结肠癌细胞系HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-的细胞总蛋白进行磷酸化蛋白质谱检测,对所获得的差异蛋白进行基因本体论(GO)功能富集分析,继而用SRING数据库软件分析DNA损伤修复的蛋白互作网络,后采用Reactome软件分别绘制HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-细胞中DNA损伤修复通路.结果 HCT116 p53+/+和HCT116 p53-/-细胞经紫外线照射前后差异表达的磷酸化蛋白分别为148个和210个,重叠的磷酸化蛋白有57个,其中上调、下调趋势一致的有39个.在p53野生型HCT116细胞中,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在染色质修复与组蛋白修饰、DNA损伤修复上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白主要参与核苷酸切除修复;而在p53表达缺失的情况下,紫外线诱导特异表达的磷酸化蛋白功能富集在mRNA加工、转录调控、细胞黏附上,差异表达的DNA损伤修复相关的磷酸化蛋白,主要参与非末端同源重组修复.结论 p53状态不同的HCT116细胞经紫外线照射后诱导磷酸化的蛋白不同,而且磷酸化蛋白富集通路和DNA损伤修复途径也不相同.
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慢性脑灌注不足对tau蛋白磷酸化及其相关酶表达的影响
神经原纤维缠结(neurofibrillar tangles, NFTs)是阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)的标志性病理特征之一,tau蛋白的过度磷酸化被认为是NFTs形成的关键[1].
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cAMP-PKA参与辐射诱导p27Kip1蛋白的表达调控
目的研究电离辐射反应中p27Kip1表达调控机理.方法将p27Kip1蛋白编码全长基因克隆导入原核表达载体pGEX4T-2,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达后再经GST-Sephrose 4B柱亲和层析、纯化,获取的GST-p27Kip1融合蛋白作为磷酸化底物,并进行体外磷酸化检测.结果PKA具有磷酸化p27Kip1蛋白的功能,该反应能被PKA的特异性抑制剂H89所抑制;照射后细胞内源性的PKA对p27Kip1的磷酸化程度减弱.结论cAMP-PKA在电离辐射诱导细胞周期检查点蛋白p27Kip1表达降低的调控机理中起到主要作用.
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ERK1/2通路参与大鼠肠系膜动脉平滑肌细胞ETB受体上调表达
目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号转导通路在血管平滑肌细胞内皮素-1 B型受体(ETB)上调中的作用.方法用大鼠肠系膜上动脉离体培养模型,以敏感的离体小血管张力描记技术记录血管张力变化,实时PCR定量ETB受体mRNA,PhosphoELISA法测定细胞内磷酸化的ERK1/2蛋白水平.结果大鼠肠系膜上动脉培养3 h,细胞内ERK1/2蛋白磷酸化水平明显增高,培养24 h ETB受体mRNA表达水平显著上调,选择性ETB受体激动剂蛇毒类似物(sarafotoxin 6c,S6c)引起的收缩增强;与特异性ERK1/2通路阻滞剂SB386023共同孵育24 h,S6c引起的大收缩Emax明显下降,ETB受体mRNA水平也显著降低.结论ERK1/2信号转导通路参与大鼠肠系膜上动脉离体平滑肌细胞ETB受体上调过程.
关键词: 信号转导 细胞外信号调节激酶1/2 ETB受体 血管平滑肌 蛋白磷酸化 -
DARPP-32与脑功能障碍
多巴胺和环磷酸腺苷调节的磷蛋白(DARPP-32)是在多巴胺信息传递及整合过程中的一个关键分子,其通过自身不同位点的磷酸化对蛋白质磷酸化和去磷酸化过程发挥着双向调控的作用,整合多种胞内信号转导,调节神经元的电学和化学性质以及动物的生理行为反应,参与多种生理功能和病理过程.本文就DARPP-32的结构、功能和其调节作用及其在脑功能障碍相关疾病研究中的应用予以综述.
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血必净可通过抑制蛋白酶激活受体1信号途径减轻热损伤诱导的内皮屏障破坏
血管通透性增加导致急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是中暑热休克病理生理的核心。蛋白酶激活受体1(PAR1)是凝血酶受体,在响应细胞外刺激导致内皮屏障功能破坏中起关键作用。然而,PAR1在热应激诱导内皮通透性中的作用是未知的。因此,近期国内学者进行了一项实验研究,检测经热刺激处理的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)中PAR1蛋白的表达;通过应用小干扰RNA(siRNA)、特异性中和抗体和血必净,观察PAR1对血管内皮细胞通透性、F-肌动蛋白重排和膜突蛋白磷酸化的影响;评价给予PAR1抑制剂RWJ56110、抗PAR1抗体和血必净对热休克相关ALI/ARDS小鼠PAR1的抑制作用。实验结果显示:热应激2 h后可诱导内皮细胞PAR1蛋白表达,引起内皮细胞基质金属蛋白酶1(一种PAR1激活剂)的释放;经过60 min或120 min热刺激后,可促进血管内皮细胞通透性增加和F-肌动蛋白重排,该效应可通过RWJ56110、抗PAR1抗体和siRNA所抑制。PAR1介导膜突蛋白磷酸化,可导致F-肌动蛋白重排和内皮屏障功能的破坏。为证实体外实验的研究结果,分别给中暑小鼠体内注射RWJ56110和抗PAR1抗体两种PAR1抑制剂,结果显示,二者均可显著减轻实验动物肺水肿、肺微血管通透性、蛋白渗出和白细胞浸润。此外研究者还发现,血必净可抑制PAR1膜突蛋白信号通路;体内外实验显示其具有维持内皮屏障功能的作用。这些结果表明,PAR1可能是中暑患者潜在的治疗靶点。