首页 > 文献资料
-
维生素E琥珀酸酯诱导人白血病细胞凋亡的发生
本研究选择两株人白血病细胞Raji(人单核细胞白血病细胞株)、Jurkat(人T淋巴细胞白血病细胞株),体外比较观察了VE和VES对细胞的生长抑制作用及其与诱发细胞凋亡的关系.检测指标及结果如下:(1)维生素E和VES诱导细胞凋亡的形态学观察.倒置显微镜下观察维生素E和VES作用72 h后的Raji细胞;制备单细胞层涂片,4℃固定、Hoechst 33258避光染色后,荧光显微镜观察.倒置显微镜下,VES组细胞透亮性下降,并见颗粒、碎片,台盼蓝染色大多为阳性.荧光显微镜下,对照培养细胞的胞核大多数大小一致、染色均匀,VES处理组细胞可见随作用剂量增加而逐渐增多的凋亡细胞核.维生素E处理组的上述改变较相同剂量VES组轻.(2)维生素E和VES对细胞的生长抑制作用.Raji.jurkat细胞分装于24孔培养板,设维生素E组(5、10、20μg/mL)、VES组(5、10、20μg/mL),空白对照组、乙醇对照组、丁二酸组,台盼蓝排除法5 d计数.维生素E和VES对Raji、Jurkat细胞的生长均具有程度不一的抑制作用,维生素E对Jurkat细胞的抑制作用较弱,而Raji细胞对维生素E和VES的反应更为敏感,20μg/mL的VES在24h的抑制率达到30%,72 h抑制率为100%,并表现出时间效应和剂量效应的关系.(3)流式细胞仪检测维生素E和VES诱导细胞凋亡.
-
丹参酮ⅡA诱导白血病细胞凋亡过程中端粒酶活性的改变
目的:观察丹参酮ⅡA(TanⅡA)对HL-60,K562细胞端粒酶活性的抑制作用和对凋亡相关基因的影响,探讨丹参酮ⅡA对造血细胞的作用机理.方法:以HL-60,K562为靶细胞,应用细胞培养技术,流式细胞术,透射电镜观察TanⅡA 对HL-60,K562细胞的作用,利用PCR-TRAP方法检测TanⅡA处理前后HL-60,K562细胞端粒酶活性的改变.结果:经0.5 μg·mL-1 TanⅡA 作用6 d后,HL-60,K562细胞生长明显受到抑制,生长抑制率分别为75.6%和56.3%.经丹参酮诱导后,HL-60 ,K562细胞发生凋亡,出现亚二倍体峰;同时显著下调HL-60及K562细胞的c-myc ,bcl-2基因表达,上调c-fos基因表达.HL-60,K562细胞在TanⅡA作用后,端粒酶活性受到抑制,端粒酶活性抑制率分别为30.8%,50.8%.结论:TanⅡA可明显抑制HL-60和K562细胞的增殖和细胞端粒酶活性,并诱导细胞凋亡.
-
亚硒酸钠诱导NB4细胞凋亡及分化
急性早幼粒细胞白血病(APL)约占成人急性髓性白血病(AML)的10%,APL的特征为在粒系发育过程中,细胞的分化被阻滞于早幼粒阶段.有研究发现:与其他白血病细胞株相比,NB4细胞(APL的细胞株)抗氧化应激的能力较弱,一些临床上有效治疗APL的药物如As2O3,可通过诱导氧化应激进而诱导NB4细胞凋亡.
-
TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响
目的:探讨KCa3.1通道抑制剂TRAM-34对白血病细胞株HL-60细胞增殖及侵袭的影响.方法:取对数生长期HL-60细胞,给予实验组分别加入终浓度25、50、75、100 nmol/L TRAM-34的培养液,给予对照组加入含10％胎牛血清RPMI 1640培养液,同步培养24、48和72 h后加入MTT溶液以检测TRAM-34对HL-60细胞的增殖抑制率;在TRAM-34处理后的每个浓度收集细胞l×106个,采用膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素(Annexin Ⅴ-FITC)/碘化丙啶(PI)双染或PI单染流式细胞术分别检测TRAM-34处理后的细胞凋亡率和细胞周期时相分布情况,采用Transwell检测TRAM-34各浓度24、48 h处理后的穿膜细胞数,采用实时定量PCR检测TRAM-34对CDK6、P53及MMP-2mRNA水平的影响.结果:与对照组相比(0 nmol/L),除低浓度(25 nmol/L) TRAM-34处理24 h对HL-60细胞增殖无影响外,其余浓度和作用时间的增殖抑制率、凋亡率、G0/G1期细胞比例及p53 mRNA水平均升高,S期细胞比例、穿膜细胞数及CDK6、MMP-2 mRNA水平均降低,而且以上差异均有统计学意义(P＜0.05).TRAM-34对HL-60以上指标的作用效果随浓度的升高和作用时间的延长而增强,各浓度间的差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:TRAM-34可抑制HL-60细胞的增殖及侵袭能力,同时可诱导细胞凋亡及G0/G1期阻滞,且TRAM-34作用的时间和浓度均对HL-60细胞恶性行为有影响.
-
miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义
目的:探讨miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义.方法:选择10例非血液系统疾病患儿作为对照组,收集对照组骨髓细胞标本,另选择HL-60和K562白血病细胞株,采用荧光定量PCR检测对照组骨髓细胞、HL-60和K562细胞株的miR-34b相对表达量,并用甲基化特异性PCR检测各组miR-34b甲基化状态.用地西他滨处理HL-60和K562细胞株,用同样方法检测两种细胞株miR-34b相对表达量及甲基化状态.采用脂质体转染法将Has-miR-34b转染至K562细胞株,根据转染是否成功分为未转染组、阴性对照组和Has-miR-34b转染组,记录各组培养后不同时间细胞的增殖情况,并计算增殖抑制率.结果:对照组miR-34b相对表达量为(5.23±0.75),HL-60相对表达量为(0.05±0.01),K562相对表达量为(0.04 ±0.01),3组间比较差异具有统计学意义(F=44.812,P=0.000).HL-60细胞株和K562细胞株分别在启动子区CpG岛存在甲基化状态,10例非血液系统疾病患儿骨髓细胞无甲基化现象.经过地西他滨处理后HL-60和K562细胞株miR-34b表达水平均显著增加(P＜0.05);加地西他滨前后白血病细胞株启动子区CpG岛均存在甲基化,但是加药后甲基化明显减弱,提示地西他滨对启动子区CpG岛甲基化具有抑制作用.培养48、72、96和120 h后Has-miR-34b转染组细胞增殖抑制率分别为24.8％、46.7％、33.6％和24.7％细胞增殖率均显著低于未转染组和阴性对照组,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:白血病细胞株miR-34b启动子区CpG岛甲基化使其表达水平显著降低,这也是miR-34b对细胞株增殖抑制作用降低的原因;miR-34b也有可能是一种抑癌基因参与调控白血病的发生、发展.
-
Wnt5a基因在血液病及白血病细胞株中的表达
本研究观察Wnt5a在部分血液病及白血病细胞株中的表达情况,为进一步研究Wnt5a在血液肿瘤中的作用及其机制打下基础.用人淋巴细胞分离液分离外周血和骨髓单个核细胞,以RT-PCR检测31例病例标本及3种白血病细胞株中Wnt5a的表达.结果表明:5例AML中4例均为阴性或弱阳性,仅1例完全缓解的病例表达呈强阳性.K562、HL-60细胞的Wnt5a表达也为阴性,Jurkat细胞的Wnt5a表达阳性.6例CML的Wnt5a表达均为阴性.4例ALL中3例为表达阳性或弱阳性,1例表达为阴性;2例CLL为阴性表达;2例MM中Wnt5a表达1例为弱阳性,1例为阴性;3例淋巴瘤中有1例为弱阳性,2例为阴性;2例AA、2例IDA、3例ITP、1例ET及PV Wnt5a表达均为阳性或弱阳性.结论:在31例血液病标本及髓系白血病细胞株中,除ALL外,有明显的Wnt5a表达缺失或降低,而非恶性血液病例中Wnt5a表达普遍呈阳性,提示Wnt5a的表达下调可能与髓系白血病的发生有关.
-
几种不同方式诱导Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19的表达
为探讨一个新的细胞凋亡相关基因--TFAR19所参与的凋亡途径,我们研究了几种不同方式诱导白血病细胞株Jurkat细胞凋亡过程中TFAR19表达的变化.采用去除血清,VP-16作用及Fas单抗活化受体等方法诱导Jurkat细胞凋亡后,以RT-PCR方法检测mRNA水平TFAR19的表达,用流式细胞术及Western印迹检测蛋白水平TFAR19的表达.实验结果显示,Jurkat细胞在去除血清12小时,VP-16作用2小时,以及Fas单抗诱导细胞凋亡2小时后,在mRNA及蛋白水平TFAR19的表达都呈增高趋势.结论提示,TFAR19参与了去除血清、DNA损伤及死亡受体激活所诱导的细胞凋亡过程,它在细胞凋亡过程的早期开始发挥作用,TFAR19是细胞凋亡途径中的"终末共同通路"的参与者.
-
稳定表达GFP的骨髓增生异常综合征转白血病细胞株的建立
目的:建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的骨髓增生异常综合征转白血病的细胞株,评价其生物学特性及其应用.方法:以人骨髓增生异常综合征转化为白血病细胞系SKM-1为母系细胞,通过携带GFP基因的慢病毒进行转染,以有限稀释法获得GFP阳性的单细胞克隆,并将扩大培养后的细胞通过皮下注射的方式进一步在小鼠体内筛选,致瘤后将瘤块分离,继续进行培养,获得SKM-1/GFP细胞株.通过荧光倒置显微镜观察细胞形态,应用流式细胞术检测细胞荧光表达水平,应用CCK-8法检测细胞生长特性,将扩大培养后的SKM-1/GFP细胞接种在免疫缺陷小鼠的皮下,致瘤后观察瘤块以及各个脏器组织的浸润情况.结果:SKM-1/GFP细胞形态和生长特性与SKM-1母系细胞无差异,流式细胞术检测GFP的表达率为100％,体外CCK-8法检测生长曲线显示,SKM-1/GFP细胞与母系SKM-1细胞无明显差异.将SKM-1/GFP细胞接种于NOD/SCID小鼠皮下,14d时可见瘤块形成.30 d时,在荧光显微镜下观察荷瘤小鼠,可见瘤块自发荧光.在荧光显微镜下观察肿块冰冻切片,可见较为均一的GFP阳性细胞.冰冻切片显示,小鼠心、肝、胃、肾均有肿瘤细胞浸润.结论:成功建立了稳定表达GFP的骨髓增生异常综合征转白细胞株SKM-1/GFP,该细胞株可以灵敏地追踪肿瘤细胞,应用于微小残留病的研究,为研究骨髓增生异常综合征转化的急性白血病提供一个新的实验平台.
-
雷帕霉素对白血病细胞株的影响
本研究探讨雷帕霉素对白血病细胞株的增殖抑制作用及其对细胞周期的影响,并分析该药作用前后mTOR mRNA表达水平的变化.采用四唑氮蓝比色试验(MTT)观察雷帕霉素对白血病细胞株KG1、K562和U937的体外增殖抑制作用;应用流式细胞术(FCM)检测雷帕霉素干预后的白血病细胞株的细胞周期的阻滞情况;采用实时荧光定量PCR检测白血病细胞株的mTOR mRNA表达.结果表明:不同浓度的雷帕霉素作用于KG1细胞株时,20 nmol/L为佳有效浓度,细胞被明显抑制,细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡明显,mTOR mRNA的表达水平亦显著降低.与雷帕霉素作用于KG1细胞株相比,雷帕霉素对K562和U937细胞株的作用相对较弱.结论:雷帕霉素与mTOR结合后可以抑制细胞增殖,KG1细胞株对雷帕霉素为敏感.
-
WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性研究
本研究探讨WT1基因启动子和增强子在不同细胞株中的转录活性,为开展基于WT1基因调控的白血病基因治疗奠定基础.以EGFP做报告基因,构建含有WT1基因启动子和增强子的重组表达载体;利用脂质体和电穿孔技术将重组质粒转染13个细胞株,包括WT1基因高表达的白血病细胞株(K562、NB4、THP-1、SHI-1),WT1基因低表达的白血病细胞株(U937和Jurkat);非造血细胞株中WT1基因高表达的MCF-7、T47D、293株细胞和WT1基因低表达的ECV304、SMMC7721、HT-29、SHG44细胞株;利用流式细胞术检测转基因细胞稳定表达EGFP的平均荧光强度.以平均荧光强度代表启动子和(或)增强子的转录活性.结果表明:通过基因重组技术构建了含有WT1基因启动子的表达载体pEWP,以及含有WT1基因启动子和增强子的表达载体pEWPA.就启动子的转录活性而言,在非白血病细胞株中,ECV304细胞EGFP的平均荧光强度高,是空载体(pEGFP-1)的16.54±2.45倍,明显高于白血病细胞株(p＜0.05);MCF-7和SHG44细胞次之,分别为9.46±1.10和7.29±0.73倍,HT-29细胞表达低,仅为0.99±0.02倍.在人类血病细胞株中,K562细胞EGFP的平均荧光强度高,是空载体pEGFP-1的2.93±0.27倍,明显高于Jurkat和SHI-1细胞株(p＜0.05).后二者分别为0.74±0.03和0.84±0.09倍.pEWPA可以使HT-29、SHI-1和K562细胞中WT1基因启动子的转录活性增强,分别增强到4.81、3.06和1.01倍.结论:WT1基因启动子的转录活性与细胞内在WT1基因的表达水平不相关,增强子增强部分细胞株中WT1基因启动子的转录活性,但不具有造血组织特异性.
-
bFGF和VEGF在急性白血病中的表达及对HL-60细胞生长的影响
为了研究急性白血病患者血清及细胞株培养上清中碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)的表达水平,并初步探讨白血病患者VEGF水平的评价方法以及VEGF特异性反义寡脱氧核苷酸(ASODN)的抗血管生成作用,用夹心ELISA法测定患者血清、细胞株(HL-60、U937、NB4、JM和K562)培养上清中bFGF和VEGF浓度,比较其差异,将VEGF血清浓度测定值(pg/ml)、血清浓度测定值经外周血血小板计数标化后标化值VEGF/PLT(pg/106)分别作为比较指示;HL-60细胞经不同浓度VEGF ASODN作用后,利用噻唑蓝、ELISA法分别测定靶细胞的生长状态及其VEGF分泌水平.结果发现:①急性白血病患者血清bFGF阳性率(37.5%)高于健康对照者(10%)(P＜0.01),在5株白血病细胞株中,NB4、U937和K562细胞上清中检测到了bFGF表达;②急性白血病患者及健康者血清VEGF测定值差异无统计学差异,但二者标化值测相差显著(P＜0.05);除U937外,其余4株细胞株培养上清中均有VEGF表达;③HL-60细胞经0.5,1及5 μmol/L VEGF ASODN作用24小时后,其存活率与对照组相比明显降低(P＜0.05);经1,5,20μmol/L VEGFASODN作用24小时后,HL-60细胞培养上清中VEGF浓度均明显低于对照(P＜0.05).结论:在急性白血病患者血管生成调控中bFGF、VEGF均有作用,但以VEGF为主;采用不同计算方法评价患者血清BEGF水平可能得出不同的结论,本研究所用方法较为实际地反应出患者血清中受白血病影响而升高的VEGF量;VEGF ASODN可以抑制急性白血病细胞生长,从而发挥抗血管生成作用.
-
β-连环素在白血病细胞株的异常定位研究
β-连环素是Wnt信号通路关键的信号传递子,其在细胞的异常定位引起下游靶基因的转录是多种实体肿瘤发生的原因之一.由于造血细胞缺少典型的黏着连接(adherens junction,AJ),因此对β-连环素在血液肿瘤的表达及定位并无较多的研究.本研究探讨4种常见的白血病细胞株(Daudi, Jurkat, K562和Thp-1)中β-连环素蛋白的定位及β-连环素基因mRNA的表达水平,了解血液肿瘤中是否有β-连环素蛋白的定位异常,以期发现白血病新的发生机制,为寻找新的特异治疗靶点提供线索.用免疫细胞化学法检测β-连环素在白血病细胞系中的定位,用实时定量RT-PCR法测定β-连环素mRNA表达水平.结果表明:4种白血病细胞株有两种(Jurkat、Thp-1)存在β-连环素的异常定位,且β-连环素mRNA表达增高,但在Jurkat和Thp-1细胞中的β-连环素mRNA 低于Daudi和K562细胞.这4种白血病细胞株中β-连环素基因的mRNA表达水平与其异常定位无相关性.结论:β-连环素定位异常可能参与部分血液肿瘤的发生,引起β-连环素定位异常的机制并不是发生在转录水平.
-
人白血病细胞株对L-门冬酰胺酶敏感性与门冬酰胺合成酶表达水平的相关性
本研究探讨人白血病细胞株门冬酰胺合成酶(asparagine synthetase,AsnS)的表达水平及与白血病细胞株对L-Asparaginase(L-Asp)敏感性的关系.用实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)检测Jurkat,HL-60,U937,NB4,THP-1,Namalwa,Karpas299和K562等8种细胞株基础的和经L-Asp处理后的AsnS表达水平,用CCK-8实验检测细胞对L-Asp处理的敏感性.结果表明,8种细胞株之间AsnS的基础表达水平存在很大程度的变异,经L-Asp处理后细胞株的AsnS表达显著上调(p＜0.05),AsnS低水平表达细胞对L-Asp相对敏感,而AsnS高表达细胞对L-Asp相对耐药.在8种细胞株中,U937对L-Asp高度敏感,其AsnS表达水平低,而K562细胞株对L-Asp天然耐药,AsnS表达水平高.结论:AsnS在天门冬氨酸耗竭后的细胞生物学行为中起着重要的作用,AsnS的表达水平反映了细胞对L-Asp的敏感性,L-Asp在AsnS低表达白血病的治疗中有潜在的应用价值.
-
短发夹状RNA真核表达载体对HL-60细胞生存素基因表达的影响及诱导凋亡作用
近研究发现,白血病细胞凋亡受阻与生存素(survivin)的过度表达有关.为此,我们设计了survivin特异性短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体,利用脂质体转染急性粒细胞白血病细胞株HL-60细胞,检测转染前后细胞survivin基因mRNA和蛋白表达以及凋亡情况,探讨以survivin为靶点,将RNA干扰(RNA interference,RNAi)用于白血病基因治疗的可行性.
-
黄芩苷诱导白血病细胞株K562凋亡及下调bcr/abl基因表达
黄芩苷是从唇形科植物黄芩根中提取的黄酮类化合物,具有抗炎、抗变态反应、保肝利胆等药理作用,并有广泛的抗肿瘤活性[1].本研究以黄芩苷作用于白血病细胞株K562,探讨其对K562细胞增殖、凋亡的影响及其可能的机制.
-
2-甲氧基雌二醇对白血病细胞周期的影响及其机制
2-甲氧基雌二醇(2-ME2)是17β-雌二醇在体内的生理代谢产物.近来研究发现诱导肿瘤细胞发生周期阻滞是2-ME2发挥其抗肿瘤作用的重要机制.但目前关于2-ME2对白血病细胞周期影响的报道尚少.我们以淋系白血病细胞株CEM和髓系白血病细胞株K562作为研究对象,初步探讨2-ME2对白血病细胞周期的影响及可能的作用机制.
-
青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响
青蒿素是一种低毒、有效的抗疟药,近发现其有抑制实体瘤细胞增殖的作用[1,2].我们研究了青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响及可能机制,以期为其抗白血病新用途提供实验证据.
-
bcl-2部分编码区的反义RNA促进烷化溶血磷脂诱导的白血病细胞凋亡
bcl-2抗凋亡基因在白血病细胞株常有高表达,引起对化放疗的耐受,封闭该基因的转录和翻译都将诱导白血病细胞凋亡,且对化放疗敏感.本研究通过比较逆转录病毒载体介导的全部和部分编码区的bcl-2反义基因瞬时和稳定表达在对抗bcl-2作用、降低内源性bcl-2蛋白水平和对烷化溶血磷脂ET 18-OCH3 (ALP)诱导白血病细胞凋亡的影响的差异,探讨了短片段bcl-2反义RNA作用特点,以期为硫代寡聚脱氧核苷酸的治疗白血病和对ALP协同体外净化白血病细胞提供实验基础.
-
HAM方案治疗相关性急性髓性白血病16例
相关性白血病(TRAL)是指肿瘤或非肿瘤疾病病人接受化、放疗若干年以后发生的急性白血病,其发病机制是因为药物或放射性作用,使静止期细胞内的DNA损伤,引起染色体畸变,导致白血病细胞株产生,且有逐年增多的趋势.1995年7月～1999年10月,我们采用HAM方案诱导治疗此类白血病16例,效果良好.
-
Axl及其配体蛋白Gas6在急性白血病中的表达及其与诱导缓解治疗疗效之间的关系
Axl属于受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinases,RTK)家族成员,在基因转录调节中起重要作用,参与对细胞存活、增殖、黏附、迁移及抗凋亡的调节[1-2].Gas6为Axl的生物配体,已经发现Gas6-Axl与多种肿瘤细胞的增殖、存活、血管发生、侵袭有关[3-5].Hong等[6]在关于Gas6-Axl与白血病细胞株的体外研究中,发现Gas6-Axl可激活PI3K/Akt和Raf/MEK/ERK信号通路,从而介导白血病细胞多药耐药的发生.目前有关Gas6-Axl在急性白血病(AL)患者中的表达情况及其与多药耐药的关系报道甚少,为此我们采用实时定量RT-PCR法检测74例AL患者骨髓单个核细胞(MNC)中Axl、Gas6 mRNA的表达水平,并分析二者间的相互作用及其与临床疗效、多药耐药的关系.
