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N-乙酰半胱氨酸对氢醌抑制HL-60细胞分化的保护作用
目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(NAC)在氢醌(HQ)抑制HL-60细胞向单核系分化过程中所起的作用.方法 将NAC1、2.5、5和10 mmol/分别与HQ 50μmol/L和豆蔻酰佛波乙酯(TPA) 20 nmol/L共同处理细胞,处理48 h后收集细胞.通过硝基四氮唑蓝还原反应鉴定细胞分化；CCK-8检测细胞增殖；活性氧检测试剂盒鉴定活性氧的变化.结果 与HQ和TPA+ HQ组比较,随NAC剂量的增加可以引起细胞增殖的增加,差异具有统计学意义(P＜0.01).在HL-60 细胞向单核系分化的过程中,与TPA+ HQ组比较,细胞的分化能力随着NAC剂量的增加而增强,差异具有统计学意义(P＜0.01),其中NAC 5和10 mmol/L作用为显著.细胞内活性氧(ROS)检测显示,与空白对照组比较,HQ组和TPA+ HQ组含量明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01)；与TPA+ HQ组比较,NAC各个剂量组ROS含量明显降低(P＜0.01).5个时间点测量细胞内活性氧含量差异有统计学意义(F=564.3,P＜0.01).结论 HQ能够抑制HL-60向单核系分化,这种抑制作用会随着NAC剂量的增加而降低,这种影响是通过清除细胞内活性氧来实现的.
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乙醇诱导HL－60细胞凋亡的研究
为了解乙醇导致血液粒细胞、单核细胞、淋巴细胞数量减少的原因,以HL-60细胞为凋亡研究模型,采用流式细胞术和电子显微术等方法探讨了乙醇对细胞凋亡的影响.结果表明,HL-60细胞在50、100、150、200、250mmol/L乙醇处理72g后,各组凋亡细胞比例均比对照组显著增高(P＜0.01),且呈剂-效应关系(r=0.975).说明乙醇对HL-60细胞有促凋亡作用.提示长期饮酒者粒细胞、单核巨噬细胞、淋巴细胞数量减少可能与其促凋亡作用有关.
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清毒片对HL-60细胞尿激酶型纤溶酶原激活剂活性的体外影响
目的:观察中药清毒片对HL-60细胞尿激酶型纤溶酶原活化剂(u-PA)活性的影响.方法:取离心灭菌后的清毒片药物水煎浓缩剂2 mL,以含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液逐步稀释为从1:10至1:1600的12个稀释倍数,分别培养等量细胞,同时以阿糖胞苷作为实验的阳性对照,以培养液作为阴性对照.用MTT法分别测定各浓度药液的细胞增殖抑制率,取上清进行u-PA活性的ELISA检测.结果:清毒片水煎浓缩剂对HL-60细胞有较好的抑制作用,随着药物浓度加大,抑制作用增强,同时细胞上清中的u-PA活性下降.结论:清毒片对急性早幼粒细胞性白血病的治疗作用与其降低白血病细胞u-PA活性水平的作用有关.
关键词： 清毒片 HL-60细胞 尿激酶型纤溶酶原激活剂 -
漆姑草醇提物对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的:研究漆姑草醇提物(HSJ)对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡相关蛋白表达的影响,探讨其诱导凋亡的分子机制.方法:采用不同浓度的HSJ作用HL-60细胞后,Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态变化;Western blot法检测Caspase-3、Caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的表达.结果:HSJ作用后HL-60细胞出现浓染致密的颗粒状荧光及明显的核形态变化;与阴性对照组相比,凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达水平增高,Bcl-2/Bax蛋白的比值降低,差异具有统计学意义(Pp＜0.05).结论:HSJ能诱导HL-60细胞凋亡,其作用可能与降低Bcl-2/Bax蛋白的比值,增加Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平有关.
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苦参碱诱导白血病细胞株HL-60分化的实验研究
目的观察苦参碱对HL-60细胞的诱导分化作用.方法采用体外细胞培养技术,从细胞增殖、形态学变化、NBT还原能力测定、非特异性酯酶染色及细胞表面分化抗原测定等方面观察.结果苦参碱在12.5μg/ml-50μg/ml浓度范围内能明显抑制HL-60细胞的增殖,细胞向成熟粒系方向分化,NBT还原反应能力增强,α-NAE染色呈阴性,CD15、CD11b阳性率表达上升而CD33阳性率表达降低,CD14阳性率处理前后无变化.结论苦参碱可能是一种良好的白血病细胞分化诱导剂,具有潜在的抗白血病作用.
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光化学疗法对人白血病细胞凋亡及Fas表达的影响
目的 观察光化学疗法(PUVA)诱导人白血病细胞HL-60、K562、NB4凋亡时对Fas表达的影响.方法 人白血病细胞分别与不同浓度补骨脂素(PS0)、接受或不接受长波紫外线(UVA)照射后共同培养,电镜下观察细胞超微结构改变,荧光定量PCR技术检测细胞Fas基因的表达,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率和Fas蛋白的表达,采用多因素方差分析法进行统计学处理.结果 PUVA处理后的人白血病细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变;PSO、UVA照射及PUVA可使细胞凋亡率增加,可上调白血病细胞Fas在基因、蛋白水平的表达,PUVA的作用显著强于前两者(P<0.01).结论 PUVA可诱导人白血病细胞发生凋亡,作用强于PSO及UVA照射.PUVA诱导白血病细胞凋亡的途径之一为上调HL-60细胞Fas基因表达.
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红芪总黄酮对人白血病细胞诱导分化的影响
目的 研究红芪总黄酮对人早幼粒白血病HL-60细胞诱导分化的作用及其分子机制.方法 HL-60细胞经红芪总黄酮处理后,检测细胞NBT还原能力的改变,用流式细胞仪测定细胞增殖周期及CD11b,C-fos表达.结果 红芪总黄酮作用于HL-60细胞后,NBT还原能力增强;CD11b表达升高;细胞被阻滞于G0/G1及G2/M期,S期细胞数相应减少;C-fos基因表达增强.结论 红芪总黄酮可诱导HL-60细胞分化成熟,其机制可能与上调C-fos基因表达有关.
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鸦胆子油乳诱导HL-60细胞凋亡的研究
目的: 研究鸦胆子油乳诱导HL-60细胞凋亡的作用. 方法: 鸦胆子油乳1∶100, 1∶40, 1∶20 (V/V) 分别处理HL-60细胞6 h,琼脂糖凝胶电泳法,流式细胞仪法,荧光显微镜法,电镜分别观察药物诱导HL-60细胞凋亡的作用.结果: 鸦胆子油乳1∶40组产生明显DNA 梯状条带;流式细胞仪检测药物浓度为1∶40, 1∶20组的凋亡细胞百分率分别为86.8% 和97%;鸦胆子油乳1∶40组在荧光显微镜呈现明显凋亡细胞特征;药物浓度为1∶40, 1∶20组的细胞经电镜观察呈现明显凋亡细胞特征.结论:鸦胆子油乳1∶20 和1∶40组有明显的诱导HL-60细胞凋亡的作用.
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川芎嗪诱导HL-60细胞株分化与分子机制的研究
目的:研究川芎嗪(TMP)诱导HL-60细胞分化并初步探讨其机制.方法:MTT实验测定细胞增殖变化；硝基四氮唑蓝(N BT)还原实验、瑞氏染色细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞表面CDllb,CD14表达率测定细胞分化状态；流式细胞仪检测细胞周期；RT-PCR,Western blot检测c-myc,p27,CDK2和cyclinEl mRNA和蛋白表达.结果:TMP能明显抑制HL-60细胞增殖,呈剂量和时间依赖性.TMP低质量浓度(200～ 300 mg·L-1)促进HL-60细胞分化；300 mg·L-1 TMP处理HL-60细胞后,细胞被阻滞于G0/G1期,c-myc mRNA和蛋白表达水平逐渐减弱；p27 mRNA和蛋白表达水平显著上升；CDK2,cyclinE1 mRNA水平变化并不显著,但其蛋白表达水平则显著下降,呈时间依赖性.结论:小剂量TMP能诱导HL-60细胞的分化,其机制可能是c-myc表达的下调,p27表达的增加,在蛋白水平抑制与cyclinE-CDK2复合物的结合,使细胞周期停滞于G0/G1期.
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紫草素对白血病细胞HL-60增殖及凋亡作用的影响
目的 研究紫草素诱导人早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的作用机制.方法 MTT比色法检测紫草素对HL-60细胞增殖的影响；Annexin V/PI分析凋亡率；半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2基因水平,分析白血病HL-60细胞凋亡作用与bcl-2表达水平关系.结果 紫草素在1～8 μg/mL浓度范围内能抑制HL-60细胞的增殖,具有时间和浓度的依赖性.2μg/mL紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,凋亡呈时间依赖性.在2 μg/mL紫草素作用下,HL- 60细胞bcl-2表达明显下调.结论 紫草素能够诱导HL-60细胞凋亡,其作用机制与下调bcl-2表达有关.
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热毒清对HL-60细胞产生分泌型肿瘤坏死因子α及肿瘤坏死因子α转换酶mRNA表达的影响
目的：探讨纯中药制剂热毒清抑制肿瘤坏死因子α(TNFα)失控释放的分子机制。方法：采用细胞和分子生物学技术观察热毒清对HL-60细胞分泌炎性细胞因子——分泌型肿瘤坏死因子α(sTNFα)及肿瘤坏死因子α转换酶(TACE)mRNA表达的影响。结果：(1)1∶30稀释的热毒清能有效地控制内毒素脂多糖(LPS)刺激所引起的sTNFα的高分泌。(2)热毒清单独作用HL-60细胞时，对TACE mRNA的表达虽无明显的抑制作用，但对LPS刺激增加表达的TACE mRNA具有明显的抑制效果。结论：热毒清对LPS引起的炎性细胞因子sTNFα的分泌及对sTNFα激活的关键酶——TACE的基因表达具有双重抑制作用，提示热毒清可能是一种TACE良好的天然抑制剂。
关键词： 热毒清 HL-60细胞 肿瘤坏死因子α转换酶 基因表达 -
熊果酸诱导HL-60细胞凋亡机制的探讨
目的:本实验拟用熊果酸干预处理人急性早幼粒白血病HL-60细胞,体外培养实验,证实其对HL-60细胞的增殖抑制和促进诱导凋亡作用,并通过免疫细胞化学方法检测bcl-2,survivin在熊果酸与该细胞株作用后表达,探讨熊果酸诱导HL-60细胞调亡可能的分子机制.方法:荧光显微镜观察细胞形态;流式细胞仪检测细胞周期相分布及细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA;免疫细胞化学方法检测Bcl-2、Survivin蛋白.结果:荧光显微镜下观察,80μmol/LUA作用24 h的HL-60细胞可看到典型的细胞凋亡形态学变化;40umol/L、80umol/LUA可使G0/G1期细胞增多,出现G0/G1期阻滞,S期和G2/M期细胞数减少,凋亡细胞峰(Sub-G1)及凋亡率逐渐增高,Bcl-2、Survivin蛋白表达降低,当UA浓度为40μmol/L时,P<0.01,有显著性差异.结论:UA呈浓度和时间依赖性抑制HL-60细胞增殖,诱导其凋亡机制可能与下调Bcl-2、Survivin蛋白表达有关.
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川芎嗪联合三氧化二砷对人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞增殖的影响
目的 探讨川芎嗪(TMP)联合三氧化二砷(As2O3)对人急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株HL-60增殖的影响及其治疗APL的作用机制.方法 采用HL-60和脐带内皮细胞系ECV-304两种细胞株,分为空白组、TMP组、As2O3组、TMP+ As2O3组,每组设4个复孔,经TMP单独或联合As2O3作用后,应用噻唑蓝(MTT)实验测定HL-60细胞增殖变化；检测HL-60细胞血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白表达；台盼蓝染色计数绘制ECV-304细胞生长曲线；流式细胞仪检测ECV-304细胞早期凋亡率；倒置显微镜观察ECV-304细胞贴壁情况.结果 TMP能明显抑制HL-60、ECV-304细胞增殖,且能加强As2O3抑制增殖的作用;VEGF mRNA和蛋白表达在TMP与As2O3联合处理后明显减少;TMP与As2O3均能诱导ECV-304细胞早期凋亡,降低细胞贴壁能力,联合作用后效果均明显增强.结论 TMP联合As2O3抑制APL HL-60细胞增殖作用增强,抗血管新生是其治疗APL的可能机制.
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Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡的影响
目的观察caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞凋亡的抑制作用,筛选有效ASODN.方法用脂质体介导法将针对caspase-3 mRNA不同序列的4条ASODN导入HL-60细胞中,γ-射线照射.应用电泳法检测DNA梯状条带;Hoechst 33258-碘化丙啶染色,荧光显微镜分析凋亡细胞百分率;流式细胞术进行细胞凋亡定量.结果以caspase-3 mRNA 5'非编码区(-62至-46位)与编码起始区(-1至16位)ASODN转染,当转染终浓度≥3μmol/L时,DNA电泳梯状条带消失,流式细胞术亦未见明显的亚二倍体峰;荧光染色分析,凋亡细胞百分率比未转染对照组和错配寡核苷酸对照组显著降低(P＜O.01),且随转染终浓度的增加,凋亡抑制率显著增加.另外,5'非编码区ASODN的抑制作用显著强于编码起始区ASODN(P＜0.05). 结论 caspase-3 mRNA ASODN可抑制γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡,其作用有序列特异性及剂量依赖性.
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端粒酶逆转录酶及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响
目的研究端粒酶逆转录酶(hTERT)与c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响,探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT和c-myc基因表达的关系.方法应用反义寡核苷酸(ASODN)分别封闭HL-60细胞hTRET与c-myc基因,RT-PCR方法检测基因表达;分别使用TRAP-ELISA法、PAGE-银染法检测细胞端粒酶活性.结果ASODN作用细胞72 h后,hTERT、c-mycmRNA的表达受到不同程度抑制,以30 μmol/L作用组表达量低.TRAP-ELISA检测:hTERTA SODN 10、20、30μmol/L作用组,c-myc ASODN 20、30 μmol/L作用组与未作用组比较,端粒酶活性明显降低(P＜0.05);c-myc ASODN 10μmol/L作用组及c-myc、hTERT SODN作用组与未作用组比较无显著差异(P＞0.05).PCR-PAGE检测:hTERT与c-myc ASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmot/L作用组条带少,而同浓度hTERT ASODN作用组较c-myc ASODN作用组条带减少. 结论hTERT与c-myc基因ASODN能够分别抑制该基因mRNA的表达,同时具有下调端粒酶活性作用.
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γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学研究
目的观察γ-射线诱导HL-60细胞凋亡的形态学变化. 方法应用Hoechst33258荧光显微镜及透射电子显微镜进行观察. 结果γ-射线诱导HL-60细胞死亡的主要方式是凋亡,凋亡细胞具有典型的形态特征,细胞核染色质凝集边聚;发现细胞核经多种形式形成核碎块;并可见具有不同内含物的凋亡小体;内质网增多,参与形成核碎块. 结论同一因素诱导同一细胞凋亡,细胞核的变化可有多种形式.γ-射线诱导K562和CEM细胞凋亡的形态学变化与HL-60细胞的不同,反映出同一因素诱导不同细胞凋亡的途径有一定的差异.
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VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究
目的研究VP-16诱导HL-60细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白(HSP)表达的变化. 方法琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异. 结果 VP-16作用HL-60细胞0.5?h出现早期凋亡特征.作用4?h可见明显的DNA梯状条带.与未凋亡的细胞比较,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调;VP-16作用2、3及4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加;诱导22?h比诱导4?h时去除VP-16后孵至22?h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了3.4倍. 结论 1.HL-60细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前.2.凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加,经2、3及4?h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著.这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上.3.VP-16作用细胞时间增长至22?h,HSP的保护作用可能消失.
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原花青素诱导HL-60细胞分化及其机制的研究
本研究旨在探讨原花青素(proanthocyanidin,PAC)诱导人急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的可能机制.用PAC 20 mg/L处理HL-60细胞24h,CCK-8法检测细胞生长状况,分析PAC对HL-60细胞的增殖影响;应用光学显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术分析细胞周期变化和测定细胞分化抗原CD14、CD11b表达;Western blot检测P21、Cyclin D1和CDK4表达变化.结果表明,PAC 20 mg/L作用HL-60细胞24h,细胞抑制率明显增高(73.2±1.5)％(P＜0.01),髓系细胞分化抗原CD14表达明显增高(P＜0.01),CD11b表达稍增高,细胞周期中G0/G1期细胞百分率明显增高(P＜0.05),S期细胞明显减少(P ＜0.01);PAC 20 mg/L与HL-60细胞共培养4h,部分细胞向成熟阶段细胞分化;PAC 20 mg/L处理HL-60细胞12、24和48 h,P21蛋白表达增加,Cyclin D1和CDK4蛋白表达降低.结论:PAC能抑制HL-60细胞增殖并诱导其分化,细胞周期阻滞于G0/G1,其机制可能与P21蛋白表达上调和Cyclin D1及CDK4蛋白表达下调有关.
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抗CD44单克隆抗体A3D8对HL-60细胞AP-1表达的影响
目的:探讨抗CD44单克隆抗体A3D8对急性髓系白血病细胞转录因子AP-1表达的影响.方法:用A3D8干预人白血病细胞株HL-60,采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期变化;RT-PCR及Western blot检测A3D8对HL-60细胞中c-JUN及c-FOS在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:A3D8对HL-60细胞生长有抑制作用;A3D8可诱导细胞周期G0/G1期阻滞;A3D8可降低HL-60细胞c-JUN mRNA及蛋白表达水平,而对c-FOS mRNA及蛋白表达无影响.结论:A3D8通过下调c-JUN转录及蛋白表达影响急性白血病细胞转录因子AP-1活性,抑制白血病细胞生长.
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厚朴酚对HL-60细胞增殖和凋亡的作用及分子机制研究
目的:探讨厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:采用MTF法检测不同浓度厚朴酚(5、10、20、40、80和160 μg/ml)作用于HL-60细胞24 h和48 h后的细胞增殖情况;应用光学显微镜检观察细胞形态学的变化;DAPI染色后在荧光显微镜下观察细胞核形态学变化;用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡的改变;用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测BCL-2和BAX的mRNA水平;用West-ern blot检测caspase家族蛋白表达变化.结果:厚朴酚能够明显抑制HL-60细胞的增殖,并随时间延长及剂量增加,细胞增殖抑制率也明显升高(P ＜0.05);HL-60细胞经厚朴酚处理后体积明显变小、且有凋亡小体产生,细胞核固缩、碎裂,呈现典型的凋亡形态学改变;40 μg/ml厚朴酚处理HL-60细胞24 h后细胞早期凋亡率为(11.7±2.4)％,与对照组(1.4±1.1)％相比具有显著统计学差异(P＜0.05);RT-PCR检测结果表明,厚朴酚可上调BAX、下调BCL-2的mRNA表达;Western blot检测结果表明,厚朴酚可提高caspase-3、caspase-8和caspase-9的剪切片段表达.结论:厚朴酚对人急性髓系白血病HL-60细胞增殖具有较明显的抑制作用,并可诱导HL-60细胞凋亡,其机制与caspase激活、促进BAX蛋白表达以及抑制BCL-2蛋白表达相关.
