紫草素对人鼻咽癌CNE2和HNE2细胞坏死性凋亡的影响及机制

目的 研究紫草素对人鼻咽癌CNE2和HNE2细胞的抑制作用及可能机制.方法 采用不同浓度、不同处理时间的紫草素处理鼻咽癌CNE2、HNE2细胞及正常人胚鼻咽上皮HENE细胞,检测分析细胞活性、细胞坏死性凋亡、细胞形态、活性氧(ROS)产生及受体相互作用蛋白1(RIP1)和RIP3的表达.结果 紫草素对鼻咽癌CNE2和HNE2细胞的增殖有明显抑制作用,且表现出显著的剂量和时间依赖性.紫草素处理后CNE2和HNE2细胞的早期凋亡率没有明显变化,而坏死细胞比例明显增加(P<0.05).染色后,PI阳性细胞有明显的细胞凋亡特征.IC50浓度紫草素处理后,CNE2和HNE2细胞产生的ROS相对量显著高于0.0μM紫草素处理,RIP1和RIP3的蛋白相对表达量显著高于0.0μM紫草素处理(P<0.05).经NAC或Nec1预处理后,CNE2和HNE2细胞的坏死性凋亡率明显下降(P<0.05).结论 紫草素可明显抑制鼻咽癌CNE2和HNE2细胞的增殖,其作用机制与诱导鼻咽癌细胞产生大量的ROS、上调RIP1和RIP3蛋白的表达,进而激活坏死性凋亡进程有关.

228 人肠道菌E．SP．A-44的无细胞提取物对紫草素的转化

202 紫草、紫草素、紫朱草素对鼠郎格罕氏细胞的诱导作用

右旋紫草素和紫草素促进大鼠肉芽组织增生的组织学研究

紫草软膏质量标准研究

目的 建立紫草软膏的质量标准.方法 采用HPLC法同时测定制剂中左旋紫草素及β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁的含量,色谱柱为Inertsil ODS-3 C18柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为0.05%甲酸水溶液-乙腈(30∶70),流速为1.0 ml/min,检测波长275 nm,柱温25 ℃.结果 左旋紫草素、β,β '-二甲基丙烯酰阿卡宁分别在0.04～0.81 μg (r＝0.999 5)、0.41～10.36 μg (r＝0.999 2)范围内线性良好,两者的平均回收率分别为 103.32%、101.80%,RSD 分别为 1.96%、2.11%.结论 质量标准方法简便、准确,专属性强,可用于紫草软膏的质量控制.

紫草素对宫颈癌SiHa细胞增殖周期的影响

目的 观察紫草素(Shikonin,SK)对人宫颈癌SiHa细胞增殖周期的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养人宫颈癌SiHa细胞,不同浓度SK作用于细胞后,流式细胞术检测细胞增殖指数和周期分布;细胞水平免疫组织化学法观察SiHa细胞G蛋白偶联雌激素受体(GPER)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达.结果 作用48小时后,与空白对照组相比,雌二醇组SiHa细胞增殖指数升高,1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L SK各组SiHa细胞增殖指数下降(P<0.05),同时G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.01);与空白对照组相比,雌二醇组GPER、Cyclin D1蛋白表达增加,1×10-5、1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L SK各组GPER、Cyclin D1蛋白表达水平显著降低(P<0.05),且呈浓度依赖性(P<0.05).结论 紫草素能够抑制人宫颈癌鳞癌SiHa细胞增殖,其诱导G0/G1期阻滞的分子机制可能与GPER、Cyclin D1蛋白相关.

紫草素对 AGS 细胞迁移的影响

目的：观察不同浓度紫草素在不同时间对 AGS 细胞形态及细胞迁移的影响，探索紫草素对 AGS 细胞迁移较佳抑制作用浓度及时间。方法将 AGS 细胞铺于6孔板并培养，待贴壁细胞密度达到70％~80％后，采用划痕法制造细胞迁移模型，分为对照组（DMSO）及实验组（紫草素以 DM-SO 助溶，分别稀释成浓度为2 mM、1.5 mM、1 mM、0.75 mM、0.5 mM 的液体）以1：1000加入孔中，并分别于0、6、12、24 h 观察细胞的形态及细胞的迁移情况，且拍照记录，计算细胞迁移速度及细胞迁移抑制率并进行各组之间的比较。结果高浓度紫草素使 AGS 细胞形态发生改变；紫草素能够抑制AGS 细胞迁移，且终浓度为2μM 时抑制作用明显。同一浓度不同作用时间其对 AGS 细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P ﹤0.05）；同一时间不同浓度紫草素对 AGS 细胞迁移的抑制作用差异有统计学意义（P ﹤0.05）。结论高浓度紫草素能够使 AGS 细胞形态发生改变并凋亡；紫草素抑制了 AGS 细胞的迁移，且该抑制作用与浓度、时间相关，且在终浓度为2μM 作用于 AGS 细胞12 h 时，其对 AGS 细胞迁移的抑制作用明显。

紫草素对人肝癌细胞化疗增敏作用及机制研究

目的 研究紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制.方法 取对数生长期人肝癌HepG2细胞并分别给予紫草素组(紫草素0.5 μg/ml)、顺铂组(顺铂40 μg/ml)和联合干预组(紫草素 0.5 μg/ml+顺铂 40 μg/ml)干预治疗48 h,同步设空白对照组,每组设10个复孔(n=10).检测细胞增值抑制率、细胞周期和细胞凋亡状况并计算细胞凋亡率及Bax mRNA、bcl-2 mRNA、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)表达情况.结果 与顺铂组比较,联合干预组人肝癌HepG2细胞增殖抑制率显著升高(P<0.05),细胞周期G0/G1期显著延长(P<0.05)、G2/M期显著缩短(P<0.01),凋亡细胞数量明显增多、细胞凋亡率显著升高(P<0.01),Bax mRNA表达上调、bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05),且Bax/bcl-2比值显著升高(P<0.01),Caspase-3蛋白表达上调(P<0.05).与空白对照组比较,紫草素组人肝癌HepG2细胞周期G0/G1期延长、G2/M期缩短,bcl-2 mRNA表达下调(P<0.05)、Bax/bcl-2比值升高(P<0.05),Caspase-3蛋白表达上调(P<0.01).结论 紫草素具有提高人肝癌HepG2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关.

紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡

目的 通过研究紫草素诱导Ishikawa细胞凋亡的过程中对PI3K/AKT信号通路的影响,探讨紫草素通过PI3K/Akt信号通路诱导子宫内膜癌细胞凋亡的机制.方法 Ishikawa细胞体外培养,经0.3 μg·mL-1、0.5 μg·mL-1、0.7μg·mL-1紫草素处理细胞后,倒置显微镜观察不同时间Ishikawa细胞生长变化;RT-PCR及Western-blot检测相关蛋白的表达.结果 随着紫草素作用浓度的增加及干预时间的延长,Ishikawa细胞数量逐渐减少;紫草素作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞48 h后,pAkt、Bcl-2的蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而Akt的蛋白表达含量与空白对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 紫草素能够抑制Ishikawa细胞的生长,且呈浓度依赖性;紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡是通过抑制PI3K/Akt信号通路中Akt的磷酸化,从而对Akt下游靶蛋白Bax上调和Bcl-2下调,发挥了诱导细胞凋亡的作用.

紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞雌激素信号通路表达的影响

目的:观察紫草素对子宫内膜癌Ishikawa细胞雌激素信号通路表达的影响.方法:Ishikawa细胞体外培养,经1、3、5M紫草素及相应浓度紫草素中分别加入雌激素10 nM,处理细胞后,用MTT法分别检测治疗24h、48 h、72 h后Ishikawa细胞生长抑制率;Western-blot及RT-PCR法检测雌激素信号通路ERα、CyclinD1、c-myc蛋白表达情况及ERα基因的表达情况.结果:显示随着紫草素作用浓度的增加及干预时间的延长,Ishikawa细胞抑制率明显上升;紫草素作用于子宫内膜癌Ishikawa细胞24 h后,ERα、CyclinD1、c-myc蛋白表达下降,与空白对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05),但是ERαmRNA表达无统计学意义,与空白对照组比较(P＞0.05).结论:紫草素随着浓度的增加及作用时间的延长,能够显著抑制Ishikawa细胞的增殖;紫草素通过抑制雌激素信号通路中ERα、CyclinDl、c-myc蛋白表达,起到抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的作用.

紫草素对银屑病T淋巴细胞增殖、活化的影响

目的:研究具有凉血、解毒作用的中药单体紫草素对银屑病病理状态下异常活化的T淋巴细胞功能及相关信号转导通路的影响.方法:选取Jurkat E6-1 T淋巴细胞,以佛波醇酯和离子霉素活化Jurkat E6-1 T淋巴细胞,同时将0.5～2μg/mL浓度的紫草素作用于细胞,采用CCK-8法检测T淋巴细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞膜CD69的表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测T淋巴细胞释放白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;用Realtime-PCR和Western blotting法分别观察核转录因子mRNA及蛋白的表达影响.结果:不同浓度的紫草素均可明显抑制细胞增殖、CD69表达及Th1类细胞因子分泌;均可有效降低[Ca2+]i和蛋白激酶C(PKC)磷酸化蛋白的水平;显著降低核转录因子NF-AT mRNA的表达,下调c-Jun的mRNA及蛋白表达并可抑制核因子-κB蛋白的表达.以上各项指标均有一定量效关系.结论:紫草素可以通过抑制过度活化的T淋巴细胞功能从而发挥免疫调控作用,为紫草素治疗银屑病的作用机制及应用前景提供实验依据.

紫草素通过氧化胁迫诱导K562细胞凋亡

目的:研究紫草素(shikonin)诱导人红白血病细胞(K562)凋亡作用并初步探讨其机制.方法:噻唑蓝(thiazolyl blue,MTT)染色法检测紫草素对K562细胞的增殖抑制作用；Hoechst 33258和吖啶橙(acridine orange,AO)/溴化乙啶(ethidium bromide,EB)染色法观察细胞凋亡形态；反转录酶-聚合酶链锁反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)法检测与凋亡相关基因:B细胞淋巴因子基因2相关X蛋白(B-cell lymphoma gene 2 associated X protein,Bax)、B细胞淋巴因子基因2同源3结构域相互作用基团死亡促进因子(BH3 interacting domain death agonist,Bid)、B细胞淋巴因子基因xL(B-cell lymphoma gene xL,Bcl-xL)、p53上调凋亡调控因子(p53 up-regulated modulator of apoptosis,PUMA)、B细胞淋巴因子基因2同源拮抗因子(B-cell lymphoma gene 2 homologous antagonist,Bak)、B细胞淋巴因子-w(B-cell lymphoma-w,Bcl-w)、B细胞淋巴因子基因2相关死亡促进因子(B-cell lymphoma gene 2 associated death promoter,Bad)信使核糖核酸(Messenger RNA,mRNA)表达的变化；荧光染料二乙酸-2',7'-二氯荧光素盐(oxalic acid-2',7'-dichlorofluorescein,DCFHDA)分析细胞内总活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)的变化；荧光染料5-氯甲基二已酸荧光素(5-chloromethylfluorescein diacetate,CMFDA)分析细胞内还原型谷胱甘肽(reduced glutathione hormone,GSH)含量的变化.结果:①0.2～1.6 mg·L-1的紫草素对K562细胞增殖呈浓度依赖性抑制；②0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组细胞出现明显凋亡特征；③0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组促凋亡蛋白Bid,Bad,Bak,PUMA,Bax的mRNA表达显著增加,抑制凋亡蛋白Bcl-w和Bcl-xL的mRNA表达明显下调；④0.2～0.5 mg·L-1的紫草素处理组,细胞内总活性氧含量升高,还原型谷胱甘肽含量降低.结论:紫草素有较强的抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡的作用,该过程伴随细胞内氧化还原状态的改变,紫草素诱导的K562细胞的凋亡与细胞内氧化胁迫有关.

紫草素微乳改善大鼠小肠吸收的研究

目的:研究紫草素微乳( Skn-ME)对紫草素(Skn)实验性小肠吸收的改善作用.方法:采用大鼠单向灌流模型和离体外翻肠囊模型,紫外分光光度法测定肠灌流液中紫草素的浓度变化,研究紫草素微乳在大鼠小肠的吸收部位和吸收动力学特征.结果:大鼠在体小肠吸收实验中,紫草素微乳可被大鼠全肠段吸收,在十二指肠、空肠回肠及结肠各肠段的药物吸收速率常数(Ka)分别是0.213 4,0.221 8,0.217 6,0.221 1 min-1;药物表观吸收系数(Papp)分别是0.035 69,0.036 37,0.036 32,0.037 27 cm·min -,结肠段吸收好(P＜0.001).在15 ～60 mg·L-1内,紫草素微乳在小肠的Ka不具有显著性差异.离体小肠吸收实验中,紫草素微乳吸收量和吸收率较紫草素提高106.1％,肠壁通透性增加123.02％.在15 ～60 mg·L-1内,吸收符合Fick's扩散定律,表现出一级动力学过程.结论:紫草素微乳通过提高肠壁通透性一定程度地改善其吸收,在小肠的吸收主要以被动扩散方式吸收.

紫草素诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡机制的探讨

目的:研究紫草素诱导人前列腺癌细胞(PC-3)凋亡及其作用机制.方法:以PC-3细胞为研究对象,以不同浓度的紫草素处理PC-3细胞,另设空白组,处理不同时间后,分别采用噻唑蓝(MTT)法检测紫草素对PC-3细胞增殖抑制情况;显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;蛋白质免疫印迹(Westernblot)检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和磷酸化-细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)蛋白的表达.结果:不同浓度的紫草素对PC-3细胞的生长抑制呈时间和剂量依赖性;形态学观察结果显示紫草素作用PC-3细胞后可使细胞变圆,脱落,皱缩,细胞内出现空泡,周围出现凋亡小体;与空白组比较,不同浓度的紫草素明显升高Caspase-3和Bax蛋白的表达,明显降低Bcl-2蛋白的表达,不同浓度的紫草素作用细胞48 h后可诱导细胞产生ROS,ROS清除剂二硫苏糖醇(DTT)可以明显逆转紫草素诱导的PC-3细胞的生长抑制率,且0.2 mmol· L-DTT可以抑制由紫草素诱导的Caspase-3和ERK1/2的活化.结论:紫草素通过ROS/ERK1/2信号通路诱导人前列腺癌PC-3细胞发生凋亡.

单向灌流法研究紫草素的大鼠在体肠吸收

目的:研究紫草素的大鼠在体肠吸收机制.方法:采用单向灌流模型,紫外分光光度法测定在体肠灌流紫草素的浓度变化,研究紫草素的吸收部位和吸收动力学特征.结果:紫草素在大鼠各肠段的吸收速率常数(Ka)、有效渗透系数(Papp)是结肠>空肠>十二指肠>回肠,且各肠段的Ka和Papp值均无显著性差异;灌流液中不同浓度紫草素的Ka,Papp均无统计差异.结论:紫草素在伞肠道有不同程度的吸收,其中结肠吸收好,药物浓度对紫草素的Papp和Ka值无影响,其吸收机制为被动扩散.

紫草素在Caco-2细胞的摄取特性

目的:研究紫草素(SKN)在Caco-2细胞的摄取特性.方法:以Caco-2细胞单层模型研究紫草素的细胞摄取规律.采用高效液相色谱法测定细胞中SKN浓度,考察时间、pH、药物浓度及抑制剂对Caco-2细胞摄取SKN的影响.结果:SKN在Caco-2细胞中的摄取呈时间依赖性；SKN在0.2 ～3.2 mg·L-1内的摄取呈线性增加,符合被动扩散过程；pH 8.0条件下药物的细胞摄取量(0.350±0.004) mg·g-1显著低于pH 5.0[(0.450±0.008) mg·g-1,P＜0.01]；加入维拉帕米,叠氮化钠及2,4-二硝基酚后,与对照组相比,SKN的细胞摄取量显著低,分别为(0.320±0.007),(0.340±0.003),(0.260±0.007) mg·g-1(P ＜0.01).结论:SKN的细胞摄取机制主要是被动转运；P-糖蛋白未参与SKN的转运过程.

基于系统药理学方法筛选抗急性髓系白血病的中药活性分子

目的:筛选抗急性髓系白血病(AML)中药活性分子.方法:搜集治疗急白草药及化合物,通过系统药理学方法预测药物成药性质,潜在靶点以及潜在巯基消耗特性.选择口服生物利用度、类药性和巯基消耗活性较高的紫草素作为验证分子.构建潜在活性化合物-靶点、靶点-疾病网络,通过拓扑学特性筛选关键靶点及潜在活性分子.利用谷胱甘肽(glutathione,GSH)试剂盒及邻苯二甲醛(OPA)荧光法检测加入紫草素后还原型GSH含量变化.数字表达谱芯片检测紫草素100 μg·L-1处理HL-60细胞48 h后基因表达.结果:在治疗AML的40味草药的4 024个化合物中,经过口服生物利用度(0B),类药性(drug-likeness,DL)及巯基消耗特性筛选获得72个分子,后通过与AML相关靶点联系筛选出10个潜在活性化合物.实验验证紫草素消耗细胞及化学体系内GSH,预测靶点能够调控基因芯片的差异基因(100 μg·L-1,48 h).结论:本方法可用于研究中药的物质基础,有助于挖掘治疗AML中药活性分子,为抗AML药物研究提供借鉴.

两种新疆紫草细胞系紫草素生物合成关键酶基因的表达差异分析

目的:为了从遗传表达角度解析两种新疆紫草细胞系中紫草素类化合物红色系高产和白色系低产的原因.方法:采用Real-time PCR的方法获得不同生长时期新疆紫草红色高产系和白色低产系紫草素生物合成关键酶基因的表达规律及相对表达量差异.结果:新疆紫草红色高产系和白色低产系在不同生长时期其关键酶基因(HMGR、PAL、4-CL、C4H、GDPS、PGT)的表达水平除个别时间段的个别基因外,红色高产系生长周期内紫草素生物合成关键酶基因的表达量均远大于白色低产系,其中以生长旺盛的第5-17天尤为明显.在不同生长时期其关键酶基因的表达随生长周期时间变化而波动,红色高产系中关键酶基因的表达随时间变化的曲线为倒U型,而白色低产系中此曲线呈U型趋势.结论:新疆紫草白色低产系同样具备有合成紫草素类化合物的潜力,并且白色系紫草素类生物合成途径的障碍发生位置应当在PGT酶促反应的下游.

紫草素抑制表皮生长因子促HaCaT细胞增殖的机制

目的:研究紫草素抑制表皮生长因子(EGF)促HaCaT细胞增殖的机制及miR-21在其中的可能作用.方法:MTT法检测EGF、紫草素、miR-21模拟剂及miR-21抑制剂对HaCaT细胞增殖的影响;Western Blot法检测紫草素、EGF、miR-21模拟剂及miR-21抑制剂对HaCaT细胞PCNA表达的影响.结果:EGF浓度依赖性促进HaCaT细胞增殖:紫草素浓度依赖性抑制HaCaT细胞增殖;miR-21抑制剂、紫草素抑制EGF对HaCaT细胞的促增殖作用以及PCNA蛋白表达的上调作用,EGF、miR-21模拟剂部分逆转紫草素抑制HaCaT细胞增殖的作用以及对HaCaT细胞PCNA蛋白表达的下调作用.结论:紫草素可明显抑制EGF对HaCaT细胞的促增殖作用,其机制可能为通过抑制miR-21的表达,达到抑制HaCaT细胞增殖的作用.

紫草素诱导细胞凋亡及凋亡信号途径研究进展

细胞凋亡又称程序性细胞死亡，是指细胞为维持内环境稳态由基因控制的自主有序性死亡。细胞凋亡主要通过内质网、线粒体和死亡受体3种途径介导。紫草素是一类萘醌类化合物，为中药紫草的主要有效成分之一，具有多种生理活性，其抗肿瘤功效是目前研究热点。紫草素抗肿瘤机制与3种细胞凋亡信号途径密切相关。本文就紫草素诱导细胞凋亡及细胞凋亡信号途径的研究进展作一综述。