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三氧化二砷对白血病HL-60细胞株分化影响的研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)治疗白血病的作用机制.方法:1)用流式细胞仅检测细胞膜上的CD11b的表达和细胞凋亡率.2)用RT-PCR方法检测c-myc基因在mRNA水平上的表达.结果:2.5 μmol/LAs2O3处理HL-60细胞90 h后,细胞分化的标志性细胞膜抗原CD11b表达明显升高,由(14.5±2.1)%升高到(35.4±5.7)%,P<0.05;NBT阳性细胞由(10.0±2.1)%升高到(31.25±3.4)%(P<0.05),同时c-myc基因在mRNA水平也明显降低.结论:As2O3通过降低c-myc基因表达及上调细胞分化抗原CD11b表达,从而促进HL-60细胞分化.
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曲古霉素A和淫羊藿甙诱导HL-60细胞分化过程中nm23和c-myc及G-CSF表达变化的研究
目的:研究曲古抑菌素A(TSA)、淫羊藿甙(ICA)诱导急性非淋巴细胞白血病HL-60细胞株分化过程中nm23基因的表达变化及其作用机制.方法:通过MTT试验检测HL-60增殖分化变化,观察细胞形态,分析表面标志和硝基四氮唑蓝(NBT)还原反应,观察HL-60细胞分化水平变化情况;通过流式细胞仪检测细胞周期的改变,RT-PCR检测nm23-H1、nm23-H2、G-CSF、c-myc基因表达的变化.结果:HL-60细胞经TSA、ICA作用后增殖受抑制,24、48和72h抑制率分别为(12.73±1.17)%、(38.15±3.32)%和(58.45±3.06)%,向成熟粒细胞系分化,细胞被阻滞在G1期,nm23、c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调.结论:HL-60细胞分化过程中c-myc基因的表达下调,G-CSF基因表达上调与下调nm23基因的表达有关.
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HL-60细胞高三尖杉酯碱诱导后CD44表达变化及机制的研究
目的:研究高三尖杉酯碱(homohar-ringtonine,HHT)诱导HL-60细胞分化后CD44表达变化及其与细胞周期调控的关系,探讨HHT的作用机制.方法:建立HHT诱导分化模型,瑞氏染色观察细胞形态,MTT法检测细胞增殖变化,NBT还原实验测定细胞分化状态,流式细胞术检测细胞表面cD11b表达及细胞周期变化,RT-PCR检测CD44、p27、p21和Cyclin E基因在mRNA水平的表达变化.结果:MTT实验显示,HHT对HL-60细胞产生增殖抑制作用,HL-60细胞G0/G1期细胞百分比明显上升,S期细胞百分比明显下降,P<0.05.半定量分析PCR扩增产物光密度相对表达量显示,HHT诱导后HL-60细胞中CD44基因表达逐渐减弱,p27和p21基因逐渐增强,Cyclin E基因逐渐减弱.CD44与p27表达呈明显负相关,r=-0.686,P<0.05.结论:HHT可能通过下调CD44基因,进而提高p27和p21表达,抑制Cyclin E活性而对HL60细胞产生诱导分化作用.
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半边旗提取物6F诱导HL-60细胞凋亡
目的:探讨蕨类植物半边旗提取物6F杀伤HL-60细胞的作用机制.方法:应用倒置显微镜观察细胞形态、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞光度术、DNA片段形成率等方法检测细胞凋亡.结果:58～231 nmoL/L 6F作用HL-60细胞12～24h后,呈现典型的凋亡细胞的形态学改变,琼脂糖凝胶电泳可见DNA梯状条带,流式细胞光度术结果显示有亚倍体(Sub-G1)峰,DNA片段率结果显示6F诱导HL-60细胞凋亡呈时间和剂量效应关系,6F达到29 umol/L时只需作用3 h即可直接使细胞坏死.结论:6F可诱导HL-60细胞凋亡,药物在一定的浓度范围内是其杀伤HL-60细胞的机制之一.
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Z-ajoene引起HL-60细胞G2/M期阻滞及端粒酶表达活性的降低
目的探讨Z-ajoene诱导细胞周期阻断于G2/M期的分子机制以及对端粒酶活性的抑制作用.方法采用MTT法测定Z-ajoene对HL-60细胞的增殖抑制率;以流式细胞仪测定Z-ajoene对HL-60细胞的周期阻断作用,并采用Western blot法测定相关蛋白p34cdc2、cyclinB1、cyclinA的表达水平;TRAP-银染法测定端粒酶活性的变化,同时采用RT-PCR方法检测端粒酶hTRT和TP1 mRNA的表达.结果 10 μmol/L Z-ajoene作用后能明显将HL-60细胞阻滞于G2/M期.在药物作用10 h 后, G2/M期细胞的比例达到顶峰,与对照组比较增加了1.95倍.另外,10 μmol/L Z-ajoene作用后出现cyclinB1蛋白的聚集及p34cdc2蛋白表达的降低,但cyclinA蛋白的水平并无显著性变化.经Z-ajoene作用24 h后,HL-60细胞端粒酶活性显著降低.而不同浓度的药物作用12 h,其端粒酶活性均无显著性变化.在10 μmol/L Z-ajoene作用24 h后,能够降低端粒酶hTRT和TP1 mRNA的水平.结论 Z-ajoene能够在作用较短时间内明显将细胞周期阻断于G2/M期,同时伴有cyclin B1 聚集及p34cdc2的抑制;而HL-60细胞的端粒酶活性仅在药物作用较长时间后才有一定降低,并且端粒酶hTRT和TP1 mRNA的表达也同时降低.结果表明,Z-ajoene的细胞周期阻断作用可能是造成端粒酶缺失及HL-60细胞生长抑制的重要原因.
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CYP3A5基因转染HL-60细胞介导耐药表型的研究
目的探讨CYP3A5基因与白血病细胞多药耐药的关系.方法克隆CYP3A5基因全长cDNA,构建CYP3A5基因真核表达重组质粒,稳定转染HL-60白血病细胞.采用四氮唑蓝法(MTT)测定化疗药的半数抑制量IC50值,采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期及凋亡细胞百分比. 结果空载质粒pcDNA3、重组质粒pcDNA3-CYP3A5稳定转染HL-60细胞.柔红霉素诱导后,HL-60和HL-60/pc细胞出现明显的凋亡峰,凋亡细胞比例分别为7.3%和6.3%;而HL-60/CYP3A5细胞则无明显凋亡峰,凋亡细胞比例为1.2%.HL-60/CYP3A5细胞与HL-60、HL-60/pc细胞相比,显著耐受柔红霉素、阿克拉霉素、长春新碱和三尖杉酯碱,耐药倍数分别为2.89,2.01,4.05和2.79倍(P<0.05);而对鬼臼噻吩甙则无明显耐受,耐药倍数为1.04倍.结论 CYP3A5基因的转录直接导致白血病细胞对蒽环类抗生素及生物碱类药物耐药,而对表鬼臼毒素仍然敏感.
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地西他滨联合柔红霉素对HL-60细胞株凋亡作用的探讨
目的 观察小剂量地西他滨(DAC)单用或联合柔红霉素(DNR)对白血病细胞株HL-60的凋亡作用及对抑癌基因PTEN mRNA表达的影响.方法 以不同浓度的DAC、DNR单药及联合处理HL-60细胞株,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术检测不同时相药物对细胞的凋亡作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测不同浓度组中HL-60细胞PTEN mRNA表达.结果 DAC、DNR单药对HL-60细胞的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,联合用药组的抑制作用则更为明显[72 h抑制率为(80.23±1.71)％,P＜ 0.001];5.0 μmol/L DAC联合1.0μmol/L DNR作用72 h细胞凋亡率高,抑制作用均较DAC和DNR单药组明显(F=30.199,P＜ 0.001);不同浓度DAC与DNR联用后,细胞PTEN mRNA表达量增加,呈浓度依赖性,明显高于对照组及DNR单药组(F=578.218,P＜ 0.001).结论 DAC能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,与DNR联合对HL-60细胞增殖抑制作用有协同效应,其机制可能与DAC的去甲基化作用使PTEN mRNA的表达量增加有关.
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siRNA-2提高HL-60细胞对高三尖杉酯碱敏感性的实验研究
目的研究以bcl-2基因为靶标的有效siRNA对HL-60细胞高三尖杉酯碱(HT)药物敏感性的影响.方法通过脂质体将siRNA转入HL-60细胞株并与HT联合培养,于24,48,72 h,用MTT法检测其对细胞生长的抑制,用流式细胞仪检测HL-60细胞bcl-2蛋白的表达率,细胞内活性氧(ROS)水平变化及细胞线粒体膜电位的变化.结果siRNA明显提高HT对HL-60细胞的生长抑制效应,抑制细胞bcl-2蛋白的表达,提高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位(P＜0.05).结论以bcl-2基因为靶标的siRNA能提高白血病细胞HL-60对HT的敏感性.
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17-AAG联合阿糖胞苷、多柔比星对人白血病细胞株的抑制效应
目的 研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG联合阿糖胞苷、多柔比星对人白血病细胞株K562、HL-60的抑制效应,并定量分析其协同、相加或拮抗作用.方法 以不同浓度的17-AAG、阿糖胞苷、多柔比星单独或联合处理K562、HL-60细胞株48 h,四氮唑盐比色法测定细胞生长抑制作用,中效原理法判断联合用药的相互作用.结果 ①三种药物单用或两药联合作用于两种细胞株,均呈现剂量依赖性抑制效应.②17-AAG与阿糖胞苷或多柔比星联合作用于K562、HL-60细胞株,在低抑制效应时呈现拮抗作用,高抑制效应时呈现协同作用.③改变两药的联合比例影响合用效应.结论 热休克蛋白90抑制剂17-AAG作为一类新型的抗肿瘤药物,可有效抑制人白血病细胞株K562、HL-60增殖;其与传统化疗药物阿糖胞苷、多柔比星联合可呈现协同作用;联合用药的比例是影响抑制效应的重要因素.
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bcl-2反义寡核苷酸对HL-60细胞作用的研究
探讨bcl-2反义寡核苷酸对HL-60细胞的作用,将人工合成的bcl-2反义寡核苷酸片段与HL-60细胞共培养,在作用的第0、1、3、5天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长、存活情况,并通过免疫组化法(APAAP法)检测细胞内bcl-2蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况.结果表明: bcl-2反义寡核苷酸可显著地抑制HL-60细胞增殖,而且可下调HL-60细胞内bcl-2的蛋白表达水平,其作用与其浓度和时间呈正相关,同时可诱导细胞凋亡,而bcl-2正义寡核苷酸及对照无此作用.
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7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素诱导HL-60细胞周期阻滞及其机制研究
目的 研究7-乙酰基-鲁山冬凌草甲素(7-acetyl-lushanrubescensin A,ARA)对人急性髓系白血病细胞株HL-60的细胞增殖和细胞周期的影响,并对其作用机制进行探讨.方法 MTT法检测ARA对HL-60细胞增殖的影响;在ARA作用HL-60细胞不同时间后,流式细胞仪检测细胞周期变化;Western印迹检测周期相关蛋白Rb、p(phospho)-Rb(ser795)、p-Rb(ser807/811),细胞周期蛋白(cyclin)D1、cyclin D3、cyclin E2、CDK4及CDK6的蛋白表达;流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)水平.结果 ARA剂量依赖性地抑制HL-60细胞增殖,48 h的IC50为(1.96±0.08)μmol/L.ARA诱导HL-60细胞发生明显的细胞周期G0/G1阻滞,具有时间和浓度依赖性.机制研究显示ARA引起Rb总蛋白出现移行条带,并抑制p-Rb(ser795)位点磷酸化,显著抑制CDK4的蛋白表达,并部分降低cyclin D3和cyclin E2的表达水平,但对cyclin D1和CDK6的作用则不明显.此外,ARA显著增加HL-60细胞内ROS水平,而抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)能够阻断ARA诱导的ROS升高及细胞周期阻滞.结论 ARA能够明显抑制白血病细胞增殖,诱导细胞周期阻滞,其机制可能与抑制Rb活化和降低cyclin D3、cyclin E2和CDK4的表达水平相关,并且ROS在ARA介导的生物学效应中可能有重要作用.
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脱氧佛波醇乙酸酯通过激活PKC/ERK通路诱导急性髓系白血病细胞分化
目的 研究脱氧佛波醇乙酸酯(12-deoxyphorbol 13-acetate,Prostratin,DPA)对人急性髓系白血病(AML)细胞株HL-60、NB4和U937细胞分化的影响,并证明其通过激活蛋白激酶C/胞外信号调节激酶(PKC/ERK)通路诱导细胞分化.方法 1 μmol/L DPA作用HL-60细胞3 d后观察细胞形态的改变;不同剂量的DPA作用HL-60、NB4、U937细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞分化表面标志变化;Western印迹检测ERK蛋白磷酸化的改变;流式细胞仪检测丝裂原活化蛋白激酶激酶(MEK)抑制剂和PKC抑制剂对细胞分化表面标志的影响;Western 印迹检测MEK抑制剂和PKC抑制剂对ERK蛋白磷酸化的影响.结果 DPA可诱导HL-60细胞出现白血病细胞分化的形态.DPA剂量依赖性地诱导AML细胞CD11b表达.DPA在诱导分化剂量范围内可剂量依赖性地引起ERK磷酸化.MEK化学小分子抑制剂U0126可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达;PKC非选择性抑制剂GFX可完全抑制DPA引起的ERK磷酸化和CD11b表达.结论 DPA其通过激活PKC/ERK通路能够明显诱导白血病细胞分化.
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胸腺肽致HL-60细胞DNA损伤的初步研究
目的:观察相对分子质量小于10 000的小分子胸腺肽(thymopeptide, TP)在体外液体培养中对人急性早幼粒细胞白血病细胞系HL-60细胞增殖的影响.并探讨可能的作用机制.方法:在加或不加TP的情况下,体外悬浮培养HL-60细胞.实验分为3组:空白对照组、TP 20 μg/ml和40 μg/ml实验组,每组设3个平行孔;胎盘蓝染色法计数细胞并绘制细胞生长指数曲线;单细胞凝胶电泳法(SCGE)检测细胞出现的DNA损伤;琼脂糖凝胶电泳法检测基因组DNA断裂情况.结果:TP作用于细胞72 h后,较低浓度的TP(20 μg/ml)对HL-60细胞的增殖即有抑制作用;对TP两个实验组的SCGE检测结果显示,HL-60细胞的慧尾现象明显增多;琼脂糖凝胶电泳上出现了相差200 bp左右的DNA梯度现象.结论:TP对HL-60细胞的增殖具有抑制作用,凋亡诱发的DNA损伤可能参与了这一过程.
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浓缩铀诱发人白血病细胞凋亡及相关基因调控研究
目的研究浓缩铀诱发人白血病HL-60细胞凋亡的损伤特征及对凋亡相关基因bcl-2和bax的调控作用.方法研究受浓缩铀内照射不同时间诱发HL-60细胞凋亡的DNA凝胶电泳.运用免疫组织化学技术探讨浓缩铀对HL-60细胞bcl-2/bax的蛋白表达,以及RNA分子杂交技术探讨浓缩铀对HL-60细胞bcl-2 mRNA的转录水平表达.结果在浓缩铀作用下,HL-60细胞的DNA呈现出在核小体间断裂的阶梯状条带形成的凋亡特征;并且观察到对照HL-60细胞中bcl-2蛋白呈高度表达,为(88±7)%,而受浓缩铀辐照后,可下调至(61±5)%.bax在对照细胞中的表达很低,在浓缩铀作用下,未见明显改变.而且受浓缩铀辐照后,可使HL-60细胞中bcl-2 mRNA表达呈明显下调.结论浓缩铀可诱发HL-60细胞凋亡发生,其诱发凋亡的程度随浓缩铀作用时间的延长而增加.并且发现浓缩铀诱发人白血病HL-60细胞的凋亡作用,与其下调凋亡相关基因bcl-2的表达相关联.
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核干细胞因子蛋白在HL-60和K562白血病细胞的表达
目的 检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)蛋白在白血病细胞系HL-60和K562的表达,比较与健康人、良性贫血之间的差异,探讨NS蛋白与急性白血病发病机制之间的关系.方法 采用免疫组化技术分别对HL-60、K562细胞、健康人和良性贫血患者骨髓单个核细胞进行NS蛋白表达水平的检测,并比较NS表达水平的差别.结果 白血病细胞系HL-60、K562细胞均存在NS蛋白高表达现象,主要定位在细胞核,有时浓集在核仁部位,阳性积分明显高于健康人和良性贫血单个核细胞(P＜0.05).结论 NS蛋白在人白血病细胞系HL-60和K562细胞中呈高表达状态,可能与白血病的发生、发展有一定的关联.
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抑白生血糖浆对HL-60细胞增殖分化的影响
目的 观察抑白升血糖浆(YBSX)含药血清对白血病HL-60细胞增殖分化的影响.方法 正常大鼠ig给予YBSX后取血制备含药血清.体外传代培养HL-60细胞,观察测定细胞生长情况.通过NBT还原试验、酸性磷酸酶(ACP)和非特异性酯酶(α-NAE)活性测定观察细胞分化情况.利用同位素掺入方法检测细胞内DNA和蛋白质合成速率.结果 YBSX含药血清对第一代HL-60细胞增殖影响不明显;对第二代、第三代细胞生长具有明显抑制作用,细胞增殖率呈进行性下降.YBSX含药血清明显升高HL-60细胞NBT还原率和α-NAE阳性细胞数,增强ACP活性(P＜0.01);降低细胞内3H-TdR和3H-Leu掺入量.结论 YBSX可抑制HL-60细胞增殖,诱导其向成熟细胞分化.
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灵芝菌丝体多糖对HL-60细胞凋亡的影响
目的:研究灵芝菌丝体粗总多糖(MGLP1)、总多糖(MGLP2)对HL-60细胞凋亡的影响.方法:MGLP1,MGLP2与HL-60细胞共培养,MTT法检测MGLP1,MGLP2对HL-60细胞增殖的抑制作用;琼脂糖凝胶电泳法和流式细胞检测法定性定量检测细胞凋亡.MGLP1,MGLP2作用于小鼠脾细胞,再将共培养上清液(MGLP1-S-CM, MGLP2-S-CM)作用于HL-60细胞,同法定性定量检测它们对HL-60细胞凋亡的诱导作用.结果:MGLP1, MGLP2在体外对HL-60细胞的增殖无明显的抑制作用,且不能明显的诱导HL-60细胞凋亡.但MGLP1, MGLP2作用于脾细胞的共培养上清液却可以明显的诱导HL-60细胞凋亡.结论:MGLP1, MGLP2无直接促进HL-60细胞凋亡作用,但可通过脾细胞间接诱导HL-60细胞凋亡.
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4种刺激剂及抗炎药对HL-60细胞生成IL-8的影响
目的:探讨4种刺激剂脂多糖(LPS)、佛波脂(PMA)、甲酰三肽(fMLP)和钙离子载体A23187及抗炎药物对HL-60细胞生成白细胞介素8(IL-8)的作用.方法:用ELISA方法测定IL-8的含量.结果:LPS对3种浓度HL-60细胞IL-8生成均有刺激作用,PMA,fMLP 0.01,0.1,1,10 nmol·L-1和A23187 0.01,0.1 nmol@·L-1亦有明显促进作用.Asp,Sali,Hcort在1×10-5 mol·L-1和Iso 1×10-6～1×10-4 mol·L-1可明显抑制IL-8生成.结论:本研究建立了可靠的筛选IL-8生成抑制剂的模型,表明异丹叶大黄素具有明显的IL-8生成抑制作用.
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二乙酰二脱水卫矛醇诱导白血病HL-60细胞凋亡及其机理
目的研究二乙酰二脱水卫矛醇(DADAG)诱导人白血病HL-60细胞凋亡及其机理.方法 MTT法观察DADAG的体外抗增殖作用;透射电镜、DNA梯形条带和流式细胞仪检测HL-60细胞凋亡;Western blotting法和caspase-3检测试剂盒分析DADAG诱导HL-60细胞凋亡与Bcl-2家族成员和caspase-3的关系.结果 DADAG明显抑制HL-60细胞增殖和诱导细胞发生凋亡.8 μg*mL-1 DADAG处理HL-60细胞不同时间后,Bcl-XL蛋白水平呈时间依赖性地下降,而Bad蛋白水平上调.DADAG处理HL-60细胞24 h后,caspase-3酶活性达峰值.Caspase-3抑制剂z-DEVD.fmk可部分逆转DADAG诱导HL-60细胞凋亡的作用,而caspases广谱抑制剂z-VAD.fmk可完全逆转此作用.结论 DADAG诱导HL-60细胞凋亡依赖caspase-3途径的激活,而caspase-3的激活可能与Bcl-2家族成员密切相关.
