首页 > 文献资料
-
Nucleostemin基因在人卵巢癌中的研究现状
Nucleostemin(NS)是一种可在细胞核仁及核质穿梭的鸟苷三磷酸(GTP)结合蛋白,主要定位于核仁中,其在维持细胞增殖、细胞周期调控、端粒的稳定性、基因组的完整性及干细胞和肿瘤细胞自我更新中发挥着极其重要的作用.有研究提出NS敲除可引起细胞周期阻滞后的DNA损伤和影响核糖体的合成,以及P53依赖NS活性与NS缺失导致细胞周期阻滞的一些争论.卵巢癌是一种妇科生殖系统恶性肿瘤,死亡率较高,五年生存率低于40%,研究证实NS基因在卵巢癌中高表达,本文就NS的生物学功能及在卵巢癌中的作用的做一综述,以提高对其的认识和了解.
-
食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子、表皮生长因子和表皮生长因子受体mRNA的表达
目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子(NS),表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)mRNA的表达及其相互关系. 方法 采用原位杂交技术检测62例食管鳞状细胞癌组织,31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中NS、EGF和EGFR mRNA的表达阳性率,并分析食管鳞状细胞癌患者不同临床病理参数间NS、EGF和EGFR mRNA的表达阳性率及三者之间的相关性. 结果 正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA的阳性表达率分别为21.0%(13/62)、25.8%(8/31)和69.4%(43/62);EGF mRNA阳性表达率分别是40.3%(25/62)、48.4%(15/31)和77.4%(48/62);EGFR mRNA阳性表达率分别是30.6%(19/62),45.2%(14/31)和75.8%(47/62).食管鳞状细胞癌组织中NS、EGF和EGFR mRNA的阳性表达率与肿瘤的组织学分级,浸润深度及淋巴结转移有关(均P<0.05).食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA表达与EGFmRNA和EGFR mRNA的表达呈正相关(分别为r=0.394,r=0.604,P<0.05). 结论 食管鳞状细胞癌组织中NS mRNA与EGF mRNA和EGFR mRNA的表达呈正相关,NS mRNA、EGF mRNA和EGFR mRNA在食管癌的发生、发展过程中可能起重要作用.
-
HL-60细胞Nucleostemin表达下调对PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的影响
目的:探讨HL-60白血病细胞中核干细胞因子Nucleostemin(NS)表达下调对其非依赖P53通路的候选途径PL3 K/AKT/mTOR中相关蛋白表达是否有影响.方法:采用重组慢病毒表达载体NS-RNAi-GV248转染至P53缺失型HL-60细胞中干扰NS的表达.用Western blot技术评价转染后HL-60细胞NS蛋白的表达水平并检测干扰前后PI3 K/AKT/mTOR信号通路中相关蛋白水平的表达变化.结果:重组慢病毒载体NS-RNAi-GV248成功感染了HL-60细胞,在荧光显微镜下可见到GFP荧光表达较强(＜80％).Western blot结果显示,NS蛋白表达明显下调,干扰表达有效;干扰HL-60细胞中NS的表达后AKT、p-AKT、p70s6k、p-p70s6k蛋白变化不明显(t1=2.31,P=0.074;t2=3.62,P=0.069;t3=1.60,P=0.251;t4=2.72,P=0.113),而mTOR复合物中的GβL蛋白表达明显下调(t=15.01,P=0.002).结论:HL-60细胞中NS蛋白可影响mTOR复合物中GβL蛋白的表达,PI3K/AKT/mTOR通路可能为NS非依赖P53作用途径之一.
-
抑制p53缺失和突变型白血病细胞PPP2R5A表达后细胞生物学变化
目的 探讨在p53缺失和突变型白血病细胞内PPP2R5A表达量的下降与细胞生物学变化之间的关系,为寻找核干细胞因子(NS)的非p53依赖性信号转导通路提供依据.方法 利用脂质体转染技术将针对PPP2R5A的siRNA转染到p53缺失或突变型的白血病细胞HL-60、THP-1和Raji细胞内,沉默PPP2R5A基因.RT-PCR法和免疫细胞化学法检测siRNA的转染效果并找出佳转染浓度和时间.倒置显微镜观察转染组和对照组细胞的生长状态并绘制细胞生长曲线.瑞-吉染色观察转染组和对照组细胞的胞核、染色质及形态改变.流式细胞术Annexin V/PI双染法进行细胞凋亡分析,PI DNA染色法进行细胞周期测定.结果 倒置显微镜观察显示转染后细胞生长状态和形态均出现变化,瑞-吉染色显示转染后细胞有凋亡小体形成.细胞凋亡分析和细胞周期测定显示转染组凋亡细胞百分比率增高,G1期和G2/M期细胞百分比上升,而S期细胞百分比减低,表明细胞增殖减弱.结论 抑制p53缺失或突变型白血病细胞PPP2R5A基因后细胞的凋亡、分化有一定变化,提示p53缺失或突变型白血病细胞中PPP2R5A在细胞分化、凋亡调控中扮演一定角色,为验证NS非p53途径的信号通路是否与PPP2R5A有关提供了依据.
-
核干细胞因子基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化
目的 探讨核干细胞因子(NS)基因沉默的HL-60细胞在裸鼠体内致瘤性变化.方法 体外合成两条短发夹状RNA(NS-shRNA),选择其中沉默NS基因作用强的一条,转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内,另设阴性对照组和空白对照组.定期观察裸鼠成瘤情况,并取各组裸鼠的肿瘤组织进行病理切片及HE染色,免疫细胞化学染色法测定NS蛋白.结果 NS-shRNA转染HL-60细胞后接种于裸鼠体内长出肿瘤的时间长于对照组(18-19 d vs.14-15 d),瘤体肿块明显小于两对照组,肿瘤终体积小于两对照组[(1282.6±434.1)mm3 vs.(2533.3±683.1)mm3,(2632.5±621.8)mm3],均存在统计学差异(P<0.05);阴性对照组、空白对照组两组间比较无统计学差异(P>0.05).转染组结缔组织及血管比阴性对照、空白对照两组少,肿瘤组织中细胞排列松散,留有很多间隙;HL-60细胞大小不均一更明显,核碎裂和小核细胞增多,核染色质致密程度不均一.瘤巨细胞减少.结论 NS基因沉默的HL-60细胞的致瘤能力减弱,可能与NS基因沉默后HL-60细胞的生物学性状改变有关.
-
RNA干扰抑制膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子基因表达对其增殖的影响
目的探讨体外培养膀胱肿瘤细胞BIU-87核干细胞因子(NS)表达在肿瘤发生和肿瘤细胞自身维护中的作用,以及RNAi技术应用于肿瘤治疗的可行性.方法通过RT-PCR和Northern blot方法检测体外培养的BIU-87细胞中NS的表达情况.采用分子克隆手段构建NS基因特异性siRNA表达载体,细胞转染获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体和pcDNA4/C载体的细胞克隆,Northern blot方法检测阳性克隆NS基因表达丰度的变化,并观察其体外增殖能力的变化.结果RT-PCR和Northern印迹杂交结果均显示所检测的BIU-87细胞有较高水平的NS表达,NS在正常人膀胱组织中无表达.Northern blot检测证明获得稳定整合有pcDNA4/C-NS-Silencer载体的细胞克隆NS的表达丰度明显下调,且其体外增殖速率明显降低(P＜0.05).结论NS表达在BIU-87细胞体外增殖过程中发挥重要作用,通过RNAi技术实现NS基因沉默可能是一种较有前景的肿瘤治疗方法.
-
缺氧对骨肉瘤细胞MG63核干细胞因子表达调节及其机制的探讨
目的:探讨缺氧对骨肉瘤细胞MG63核干细胞因子(NS)表达的调节及其机制.方法:反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质印迹法检测缺氧对NS转录和蛋白表达的影响；蛋白质印迹法检测在雷帕霉素抑制缺氧诱导因--1 α(HIF-1α)表达或激酶抑制剂预处理后NS在缺氧下的变化,检测NS调节的下游因子p53和活性Caspase-3蛋白表达的变化.结果:缺氧6、12和24 h后NS蛋白表达分别升高了1.26(P＞0.05)、1.58 (P＜0.05)和1.92倍(P＜0.01),NS的转录分别升高了1.33(P＞0.05)、1.49 (P＜0.05)和1.54倍(P＜0.05).蛋白激酶B(Akt)抑制剂wortman-nin逆转了缺氧对NS的上调,而细胞外信号调节激酶(ERK)抑制剂U0126、蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89和雷帕霉素则没有逆转缺氧对NS的上调.Akt活性在缺氧6、12和24 h后分别升高了1.51(P＞0.05)、1.56 (P＜0.05)和1.23倍(P＞0.05).尽管缺氧上调了NS的表达,但NS的下游因子p53与活性Caspase-3蛋白表达在缺氧后无明显变化.结论:缺氧通过增强Akt的活性上调了NS的表达.
-
针对核干细胞因子腺病毒干扰载体构建与干扰作用观察
目的 构建针对核干细胞因子(Nucleostemin)基因寂寞的RNA干扰腺病毒载体,观察其干扰作用.方法 根据克隆的全长Nucleostemin基因(1 650 bp,GenBank接受序号:AY825265)设计RNA干扰反向重复序列,采用分子生物学组装腺病毒载体,制备高效价RNAi重组腺病毒.实验分为Backbone-P1P2重组腺病毒感染组(P1P2干扰组)、Backbone-P3P4重组腺病毒感染组(P3P4干扰组)、Backbone空质粒病毒感染对照组(B组)和无病毒感染对照组.不同剂量腺病毒液RNAi(分别为60、30、15和7.5μL)转染F6细胞及U937细胞,采用蛋白质印迹法检测F6细胞及U937细胞中核干细胞因子的蛋白表达水平,采用实时荧光定量PCR (QPCR)检测U937细胞中核干细胞因子的mRNA表达水平.计数法绘制细胞生长曲线,判定细胞活力;流式细胞术检测细胞周期变化.结果 靶向核干细胞因子基因的腺病毒RNA干扰载体(Backbone-P1P2,Backbone-P3P4)被成功构建.蛋白质印迹法检测结果显示,F6细胞内不同梯度浓度腺病毒RNA干扰后,核干细胞因子表达量分别为1.23、4.48、5.03和5.75,随P3P4片段RNA干扰浓度梯度下降而核干细胞因子表达量呈上升趋势.P1P2干扰组蛋白水平为0.219±0.051,与空质粒转染对照组的2.174±0.196比较明显降低,F=279.4,P＜0.001;P3P4干扰组蛋白水平为0.0164±0.003,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=363.4,P＜0.001.P1P2干扰组基因表达水平为1.585±0.20,与空质粒转染对照组的3.932±0.271比较明显降低,F=145.9,P＜0.001;P3P4干扰组基因表达水平为1.328±0.251,与空质粒转染对照组比较明显降低,F=149.9,P＜0.001.细胞周期实验发现,核干细胞因子干扰后,P1P2腺病毒RNA干扰组为44.89±4.04,与空质粒转染对照组的54.74±3.28对比减低,F=10.75,P=0.031;P3P4干扰组为45.00±3.82,与空质粒转染对照组对比减低,F=11.23,P=0.029;S期+G2M期细胞P1P2干扰组为55.11±2.81,与空质粒转染对照组的45.26±1.72对比升高,F=26.82,P=0.007;P3P4干扰组为55.00±2.64,与空质粒转染对照组相比明显升高,F=28.67,P=0.006.表明核干细胞因子在细胞周期中阻碍G2/M检验点通过.结论 成功构建针对核干细胞因子基因沉默的RNA干扰腺病毒载体,该病毒载体可特异有效的沉默下调核干细胞因子基因的表达,为今后研究核干细胞因子功能奠定了基础.
-
食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子蛋白和mRNA的半定量表达
目的 探讨食管鳞状细胞癌组织中核干细胞因子(NS)蛋白和mRNA的半定量表达情况.方法 应用免疫组化SABC法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法,检测62例食管鳞状细胞癌组织及其相对应的31例癌旁不典型增生组织和62例正常食管黏膜组织中NS蛋白和mRNA的半定量表达情况.结果 正常食管黏膜组织、癌旁不典型增生组织和食管鳞状细胞癌组织中,NS蛋白阳性表达率分别为17.7%(11/62)、41.9%(13/31)和69.4%(43/62),组间比较,差异有统计学意义(χ2=33.676,P＜0.01).食管鳞状细胞癌组织中,NS蛋白阳性表达率与其组织学分级、侵袭程度及淋巴结转移密切相关(均为P＜0.05),而与年龄、性别和病理分型无关(均为P＞0.05).食管鳞状细胞癌组织中,NS mRNA的相对含量(0.971±0.121)高于癌旁不典型增生组织(0.913±0.085)和正常食管黏膜组织(0.866±0.103),组间比较,差异有统计学意义(F=14.829,P＜0.01).不同组织学分级、不同侵袭程度及有无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织之间,NS mRNA的相对含量差异均有统计学意义(均为P＜0.05),NSmRNA的相对含量与年龄、性别和病理分型无关(均为P＞0.05).结论 食管鳞状细胞癌组织中,NS mRNA的表达升高,其高表达与食管鳞状细胞癌的发生发展有关.
-
核干细胞因子蛋白在HL-60和K562白血病细胞的表达
目的 检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)蛋白在白血病细胞系HL-60和K562的表达,比较与健康人、良性贫血之间的差异,探讨NS蛋白与急性白血病发病机制之间的关系.方法 采用免疫组化技术分别对HL-60、K562细胞、健康人和良性贫血患者骨髓单个核细胞进行NS蛋白表达水平的检测,并比较NS表达水平的差别.结果 白血病细胞系HL-60、K562细胞均存在NS蛋白高表达现象,主要定位在细胞核,有时浓集在核仁部位,阳性积分明显高于健康人和良性贫血单个核细胞(P＜0.05).结论 NS蛋白在人白血病细胞系HL-60和K562细胞中呈高表达状态,可能与白血病的发生、发展有一定的关联.
-
膀胱癌Nucleostemin表达的临床意义
目的 膀胱癌患者肿瘤组织中Nucleostemin基因表达的改变,并探讨其相关的临床意义.方法 选取海南医学院第一附属医院泌尿外科2016年3月～2017年4月收治的膀胱癌82例,取癌旁非肿瘤组织作为对照.Nucleostemin基因mRNA表达量使用RT-PCR荧光定量PCR检测.结果 膀胱癌组织中Nucleostemin的2-△Ct值为0.294±0.046,显著高于对照膀胱组织的0.127 ±0.018(P ＜0.01).Nucleostemin的2-△Ct值膀胱癌患者的性别和年龄无显著相关性(P＞0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在TNM临床Ⅲ、Ⅳ期患者为0.352±0.058,显著高于Ⅰ、Ⅱ期患者的0.263±0.037(P ＜0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在浸润深度达到肌层的患者为0.316±0.51,显著高于未达到肌层的0.235±0.032(P ＜0.05).Nucleostemin的2-△Ct值在中、低分化患者为0.327±0.054,显著高于高分化的0.262±0.033(P ＜0.05).Nucleostemin2-△Ct值在淋巴结有转移患者为0.346±0.055,显著高于无转移的0.269±0.038(P ＜0.05).结论 膀胱癌组织中Nucleostemin基因高表达,其表达变化可能参与膀胱癌的发生、发展、侵袭和转移过程.
-
Nucleostemin基因与卵巢癌关系的研究进展
核干细胞因子(NS)在大多数干细胞和肿瘤细胞中表达,是干细胞和癌细胞维持自我复制、增殖所必需的蛋白质,并保持细胞在不分化状态,维持干细胞的扩增,抑制其向成熟细胞的转化,是肿瘤细胞和干细胞通过G2/M检验点的特异性调控因子.卵巢癌是妇科生殖系统恶性肿瘤中病死率较高的疾病,NS的病理生理作用主要涉及细胞的增殖及凋亡等方面.NS信使RNA以及NS蛋白在卵巢癌实体瘤中特异性高表达,并且与病理分级呈正相关.因此,深入了解卵巢癌生物学特征,是治疗卵巢癌的关键.
-
Nucleostemin与卵巢癌增殖凋亡及化疗敏感性的研究进展
卵巢癌一直高居妇科恶性肿瘤病死率之首。卵巢癌细胞化疗耐药成为其临床治疗效果欠佳、病死率增加的根本性原因，因此寻找卵巢癌铂类药物耐药相关的机制对于提高卵巢癌化疗疗效至关重要。核干细胞因子（ Nucleostemin ）的病理生理作用主要涉及细胞的增殖及凋亡等方面。 Nucleostemin信使RNA以及Nucleostemin 蛋白在卵巢癌实体瘤中特异性高表达，并且与病理分级呈正相关。因此，深入研究Nucleostemin与卵巢癌化疗敏感性及分子机制十分关键。
-
Nucleostemin基因及PCNA在非小细胞肺癌组织中的检测及意义
目的：探讨Nucleostemin基因及PCNA在非小细胞肺癌（NSCLC）组织中的检测及意义。方法：采用免疫组织化学SP法对53例NSCLC患者的非小细胞肺癌组织和15例癌旁正常者的组织中NS蛋白进行检测，并对其与NSCLC患者临床病理特征关系进行分析。结果：NS蛋白在NSCLC中的表达率为54.7%（29/53）明显高于癌旁正常组织中的表达率0（0/15），NS蛋白腺癌组织的表达率为65.2%（15/23）明显高于鳞癌组织的表达率46.7%（14/30），高、中分化组织的表达率42.9%（15/35）明显低于低分化组织的表达率77.8%（14/18），比较差异均有统计学意义（P<0.05），与患者TNM分期及淋巴结转移无关（P>0.05）。NSCLC组织中PCNA阳性率71.7%（38/53）明显高于癌旁正常组织6.7%（1/15），差异有统计学意义（P<0.05）。结论：NSCLC患者非小细胞肺癌组织中，NS基因mRNA和蛋白存在明显的高表达趋势，PCNA阳性率显著增高，有利于肿瘤细胞恶性增殖，因而是一种临床应用价值较高的肿瘤分子标志物。
-
沉默EC9706核干细胞因子基因对裸鼠移植瘤生长的作用
目的:观察由RNAi诱导的EC9706核干细胞因子(NS)基因沉默对裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法:BALB/c裸鼠15只,分为3组,siRNA干预组皮下注入pRNAT-U6.1-siNS2转染的EC9706细胞,无关siRNA对照组皮下注入pRNAT-U6.1-siC转染的EC9706细胞,空白对照组皮下注入正常EC9706细胞,接种5周分别测定各组裸鼠移植瘤体积,并应用RT-PCR技术检测裸鼠移植瘤组织中NS mRNA的表达.结果:无关siRNA对照组及空白对照组于第4天在接种部位出现肉眼可见的肿块,siRNA干预组于第6天在接种部位发现肉眼可见肿块.第5周各组裸鼠成瘤率均为100%.空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组瘤体大小分别为(1 806.40±77.75)mm3、(1 702.20±88.60)mm3和(847.00±82.25)mm3,3组相比差异有统计学意义(P＜0.05).空白对照组、无关siRNA对照组和siRNA干预组移植瘤组织中NS mRNA的表达量分别为0.681±0.033、0.685±0.034和0.497±0.056,3组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:沉默EC9706细胞的NS基因可抑制裸鼠移植瘤生长,降低裸鼠体内NS mRNA的表达.沉默NS基因有可能成为治疗食管癌的新策略.
-
沉默核干细胞因子基因对HL-60白血病细胞形态学和细胞化学影响的检测
目的 探讨体外沉默白血病细胞核干细胞因子(NS)基因转染后细胞形态学和细胞化学特征改变与细胞生物学行为的关系.方法 体外合成NS特异性短发夹状RNA(shRNA)转染HL-60白血病细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法评价NS基因沉默和NS蛋白合成抑制效果,倒置显微镜观察活体细胞形态,Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,血液分析仪测定细胞大小、粒度和均一性变化,髓过氧化物酶(MPO)、α-乙酸萘酯酶(α-NAE)和过碘酸-雪夫反应(PAS)测定反映细胞化学特征变化.结果 沉默NS基因导致HL-60白血病细胞发生了形态学变化,细胞核和细胞质出现了进一步分化和成熟特征,Wright-Giemsa染色观察到细胞核碎裂现象,血液分析仪发现细胞变得大小不均并有较多核碎裂和无核的细胞碎片存在,细胞内定MPO、α-NAE酶活性和PAS反应增强.结论 沉默NS基因表达能促使HL-60细胞进一步分化、成熟,细胞形态学和细胞化学特征发生相应改变,这些形态学变化可以作为研究细胞生物学行为改变的依据之一.
-
核干细胞因子与肿瘤干细胞
恶性肿瘤是导致人类死亡的主要原因之一,但并非所有恶性肿瘤细胞均有致瘤性.肿瘤干细胞指具有自我更新和无限增殖潜力的少量细胞群体,与干细胞的特性类似.核干细胞因子(NS)基因在干细胞处于早期多潜能状态时高表达,细胞开始分化后,其表达几乎完全消失.此外,多种癌细胞中NS基因亦高表达,而在分化的成体组织中不表达.NS基因表达与癌细胞的恶性程度有关.本文就NS与肿瘤干细胞作一综述.
-
核干细胞因子基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达
目的: 建立并采用实时定量PCR法检测核干细胞因子(nucleostamin,NS)基因在胃癌、结肠癌和直肠癌组织中的表达,研究该基因在胃肠道癌症诊断中的意义.方法: 构建NS基因和内参基因GAPDH标准品,并采用RT-PCR和实时定量 PCR 检测43例胃癌、结肠癌和直肠癌患者肿瘤组织NS基因的表达.结果: RT-PCR结果显示NS基因在胃癌组织中的阳性率为90%(27/30),在直肠癌组织中的阳性率为83.3%(5/6),在结肠癌组织中的阳性率为100%(7/7).NS基因在胃肠道肿瘤组织中表达上调,表达水平与病理分期未见显著相关性,但表达量与癌组织分化程度显著相关,分化程度较低的癌组织NS表达较高,分化程度较高的癌组织NS表达较低(P＜0.05).结论: NS基因过表达可能在胃肠道肿瘤的发生中起着一定的作用,该基因可能会成为胃肠道肿瘤治疗的靶基因之一,检测该基因的表达有助于胃肠道肿瘤的诊断.
-
T7启动子介导体外构建Nucleostemin特异性短发夹状干扰RNA
目的体外构建合成针对Nucleostemin(核干细胞因子,NS)基因的短发夹状干扰RNA(shRNA),用于进一步研究以该基因为靶目标、RNA干扰(RNA interference,RNAi)为手段的白血病基因治疗可行性.方法从Nucleostemin基因的三个变异体cDNA共同序列中筛选出2个3'端为AA的21个碱基片段作为shRNA合成的对应序列,9个碱基的5'-UCUCUUGAA-3'作为Loop环.以23个碱基的5'-GGATCCTAATACGACTCACTATA-3'作为T7启动子(T7 Promoter)序列,构建shRNA的体外合成双链DNA模板,一条链5'端无AA,顺序为启动子、shRNA正义信息链、Loop环、shRNA反义信息链,共70个碱基;另一条是该链的互补链,5'端带有AA,共72个碱基.在T7 RNA聚合酶(T7 RNA polymerase)作用下合成shRNA,纯化后通过凝胶电泳比较灰度值确定shRNA浓度;shRNA作用于HL-60细胞,通过观察细胞形态变化和NS-mRNA抑制率验证干扰效果.结果体外合成的两条shRNA电泳无降解和弥散现象,浓度分别为5.24 μmol·L-1和3.35 μmol·L-1;干扰HL-60细胞48 h后,细胞密度和聚集程度下降,细胞之间大小相差悬殊,经shRNA-NS-2作用的HL-60细胞一部分由圆形变成了梭形并有明显的伪足;与对照组相比NS-mRNA抑制率分别达到37.82%和71.88%.结论体外成功构建和合成了两条针对Nucleostemin基因的shRNA,且抑制该基因表达的作用明显,shRNA-NS-2使HL-60细胞形态发生了改变.所合成的shRNA-NS-2可作为进一步研究该基因和探索白血病的基因治疗的工具.
-
核干细胞因子在肿瘤细胞中的差异表达及意义
目的:通过检测核干细胞因子(Nucleostemin,NS)基因在多种肿瘤细胞中的差异表达情况,探讨NS基因与肿瘤细胞增殖调控的相关性.方法:体外培养子宫颈癌细胞、乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)、肝癌细胞(HpeG2)与正常肝细胞,提取对数生长期肿瘤细胞总RNA,以RT-PCR方法检测NS在mRNA水平的差异表达;提取肿瘤细胞的总蛋白,以Western blot方法检测NS在翻译水平的差异表达.结果:肿瘤细胞中NS基因均有较高水平的表达,尤其以乳腺癌细胞、乳腺导管癌细胞、肝癌细胞(SMCC-7721)与肝癌细胞(HepG2)中NS基因表达量为高,而正常肝细胞未检测到NS的表达.结论:NS在肿瘤细胞中的高表达具有普遍性,而在终末分化的细胞中不表达,判断NS基因参与了肿瘤细胞的增殖调控,其为肿瘤的基因治疗和基因诊断提供了一个新的途径和指标.
