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富马毒素B1诱发小鼠肝、肾细胞端粒酶活性的变化
目的 探讨富马毒素B1(FB1)对小鼠肝、肾细胞端粒酶活性的影响.方法将60只BALB/C小鼠平均分为4组,3组饮用含FB1(1mg/ml)水,通过TRAP-PCR-ELISA方法检测不同时间小鼠肝、肾细胞端粒酶活性,并对端粒酶活性升高明显小鼠测定其细胞DNA含量.结果不同时间内摄入FB1的小鼠肝细胞端粒酶活性均被激活,其酶活性随摄入FB1时间延长而明显增强.小鼠肾细胞端粒酶活性在实验第90天明显提高.端粒酶活性明显升高小鼠肝、肾细胞DNA含量均有增加.结论 FB1可诱导小鼠肝、肾细胞端粒酶活性升高及DNA合成增加.
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MDS-RAEBT与急性单核细胞白血病临床疗效区别及其与端粒酶活性的关系
目的:探讨难治性贫血伴原始细胞增多转变型(MDS-RAEBT)与急性单核细胞性白血病(AML-M5)临床疗效的区别及其与端粒酶活性的关系.方法:用常规方法提取MDS-RAEBT和AML-M5初诊病人的单个核细胞(mononuclear cell,MNC),并用TRAP(telomeric repeat ampiification protocol,TRAP)法检测两组病人的端粒酶的活性.同时观察以DAE或HAE为基本方案化疗的上述两组病人的临床疗效.结果:MDS-RAEBT组端粒酶的活性表达高于AML-M5组,而完全缓解率(completeremession,CR)却低于AML-M5组.两组之间端粒酶的活性、CR比较均有显著差异.结论:MDS-RAEBT与AML-M5两者之间明显的临床疗效差别可能与端粒酶活性存在一定关系.
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江苏地产白首乌C21甾苷对D-半乳糖衰老模型小鼠的作用研究
目的:研究江苏地产自首乌C21甾苷(CSC)对D-半乳糖(D-gal)衰老模型小鼠的影响.方法:小鼠分为正常组,模型组,CSG低、中、高剂量组(10,20,40mg·kg-1·d-1)和维生索E(Vit E)对照组(100 mg·kg-1·d-1),除正常组外均采用D-gal 10 mg·kg-1颈背部皮下注射,试验期为56 d.检测小鼠血清、心、肝、脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及端粒酶活性.结果:与正常组相比,模型组小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性降低,含量增加,血清、心、肝端粒酶活性降低(P＜0.01);与模型组比较,3个CsG组及Vit E组小鼠血清、心、肝、脑SOD活性升高,MDA含量减少(P＜0.01);低剂量CSG组及Vit E组小鼠血清端粒酶活性有升高的趋势,但差异不显著,中、高剂量CSG组小鼠血清端粒酶活性升高(P＜0.01);3个CSG组及Vit E组均能升高小鼠心脏端粒酶活性(P＜0.01);3个CSG组及Vit E组小鼠肝及脑组织端粒酶活性无明显变化.结论:CSG能拮抗自由基损伤,提高D-gal衰老模型小鼠血清、心、肝、脑组织SOD活性,减少MDA含量,提高血清、心组织端粒酶活性.
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苦参碱对MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响
目的 研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞Fas、VEGF及端粒酶活性的影响.方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,随机分组,实验组细胞加入苦参碱溶液,对照组或阴性对照组细胞加入等量培养液,阳性对照组细胞加入端粒酶抑制剂莪术油.采用倒置显微镜下观察细胞形态学变化;TRAP-ELISA法检测端粒酶活性;免疫细胞化学法检测MCF-7细胞中Fas、VEGF蛋白表达情况.结果 苦参碱对乳腺癌细胞有明显的生长抑制作用和促凋亡作用;不同浓度苦参碱处理MCF-7细胞24、48、72 h后,端粒酶活性随苦参碱浓度增加和作用时间延长而逐渐下降,呈剂量-效应正相关和时间-效应正相关;苦参碱能够上调MCF-7细胞Fas蛋白表达和下调MCF-7细胞VEGF蛋白表达.结论 苦参碱对MCF-7细胞具有明显的生长抑制作用和促凋亡作用,可能是通过上调Fas蛋白表达、抑制端粒酶活性诱导乳腺癌细胞凋亡及通过下调VEGF蛋白表达,抑制肿瘤血管形成等实现的.
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疏肝理气法防治肿瘤转移的作用及分子机制探讨
气机失调是导致肿瘤发生的重要病机之一.肝性条达,主疏泄,其在调节全身气机方面占有重要作用.肝郁气滞证型是肿瘤患者常伴有的临床证型,疏肝理气方药在治疗多种恶性肿瘤中显示出了改善症状、提高生活质量及延长生存期方面的作用,其分子机制与重塑肿瘤免疫编辑过程、调控基因表达以及诱导细胞凋亡等方面有关.疏肝理气法作为治疗肿瘤的基本法则,应受到重视.
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肺癌患者外周血TA活性及CEA mRNA、CK19 mRNA的转录情况及其意义
为了了解肺癌患者外周血细胞TA及CEA mRNA和CK19 mRNA的转录情况及其检测的临床意义,选取肺癌患者103例、肺良性病变患者(疾病对照组)67例和健康人(健康对照组)37名,采集外周血细胞,应用逆转录-套式-聚合酶链反应法(RT-NP-PCR)检测CEA mRNA和CK19 mRNA,端粒末端重复序列扩增-杂交-酶联免疫法检测TA.结果发现,肺癌组三种标志物阳性率均显著高于两个对照组(P<0.01),且CEA mRNA和TA的阳性率均显著高于CK19 mRNA(P<0.01).小细胞肺癌CEA mRNA的阳性率显著低于其他类型肺癌(P<0.05),且显著低于TA(P<0.05).结果表明检测血液CEA mRNA、CK19 mRNA转录和TA有助于发现肺癌细胞血液转移,其中CEA mRNA和TA的诊断价值高于CK19 mRNA;联合检测CEA mRNA和TA有助于鉴别小细胞肺癌.
关键词： 肺癌 血液 癌胚抗原信使核糖核酸 细胞角蛋白19信使核糖核酸 端粒酶活性 -
长春瑞滨诱导人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3凋亡及降低端粒酶活性
目的 探讨长春瑞滨对人上皮性卵巢癌细胞系SKOV3细胞凋亡、端粒酶活性及亚单位人端粒酶反转酶mRNA(hTERT mRNA)表达的影响.方法 将不同浓度的长春瑞滨作用于SKOV3细胞后,用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞计量术检测细胞凋亡;端粒重复序列扩增酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)检测端粒酶活性;RT-PCR检测细胞中hTERT mRNA表达.结果 长春瑞滨可抑制SKOV3细胞增殖,诱导细胞凋亡(P<0.01),降低SKOV3细胞中端粒酶活性及hTERT mRNA的表达(P<0.01),且存在浓度-时间依赖关系.结论 检测端粒酶的活性及hTERT mRNA表达,可能有助于判定长春瑞滨诱导上皮性卵巢癌细胞凋亡的敏感性.
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胸腹水细胞端粒酶活性定性和定量检测
目的探讨端粒酶活性定量检测在诊断良恶性胸腹水中的应用价值.方法采用TRAP-银染定性方法和TRAP-PicoGreen定量方法,对102例已确诊患者的胸腹水细胞进行端粒酶活性分析.结果恶性胸腹水细胞端粒酶活性明显高于良性胸腹水细胞,其定性检测诊断率明显高于细胞病理学.乳腺癌患者胸腹水细胞的端粒酶活性明显高于卵巢癌、肝癌患者胸腹水细胞的端粒酶活性;肺癌患者胸腹水细胞端粒酶活性明显高于肝癌.在良性胸腹水中,感染性胸腹水细胞端粒酶活性高于非感染性胸腹水.结论恶性胸腹水细胞端粒酶活性明显升高.端粒酶活性定量检测较定性检测更敏感、简便,对良恶性胸腹水的诊断和鉴别诊断有一定应用价值.
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端粒酶逆转录酶及c-myc基因反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性的影响
目的研究端粒酶逆转录酶(hTERT)与c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响,探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT和c-myc基因表达的关系.方法应用反义寡核苷酸(ASODN)分别封闭HL-60细胞hTRET与c-myc基因,RT-PCR方法检测基因表达;分别使用TRAP-ELISA法、PAGE-银染法检测细胞端粒酶活性.结果ASODN作用细胞72 h后,hTERT、c-mycmRNA的表达受到不同程度抑制,以30 μmol/L作用组表达量低.TRAP-ELISA检测:hTERTA SODN 10、20、30μmol/L作用组,c-myc ASODN 20、30 μmol/L作用组与未作用组比较,端粒酶活性明显降低(P＜0.05);c-myc ASODN 10μmol/L作用组及c-myc、hTERT SODN作用组与未作用组比较无显著差异(P＞0.05).PCR-PAGE检测:hTERT与c-myc ASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30μmot/L作用组条带少,而同浓度hTERT ASODN作用组较c-myc ASODN作用组条带减少. 结论hTERT与c-myc基因ASODN能够分别抑制该基因mRNA的表达,同时具有下调端粒酶活性作用.
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p53基因对HL-60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶基因表达的影响
为了研究野生型p53基因转染的HL-60细胞端粒酶活性和人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因表达的变化,采用脂质体法将野生型p53基因转染HL-60细胞,用TUNEL检测细胞凋亡,用端粒重复扩增法(TRAP)-酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性变化,以及用RT-PCR方法检测hTERT mRNA表达的变化.结果显示:转染野生型p53基因的HL-60细胞在32.5℃培养24小时和72小时后,凋亡率分别为8.3%和21.0%,hTERT mRNA和端粒酶活性分别下降至对照组的68.4%和55.8%及27.3%和8.9%.结论:p53基因能下调HL-60细胞hTERT mRNA和端粒酶活性,这可能是野生型p53基因诱导细胞凋亡机制之一.
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急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性定量分析
为建立一种简便、定量检测端粒酶活性的方法应用于白血病病人外周血单个核细胞(MNC)端粒酶活性分析,在应用端粒重复序列扩增法后在扩增产物内加入荧光染料PicoGreen,并在激发光480 nm和发射光520 nm下检测荧光强度.对20例正常人和25例急性白血病病人外周血单个核细胞的端粒酶活性进行了定量分析.结果表明,PicoGreen能特异结合双链DNA,荧光强度随双链DNA量的增加而增加.结论:该方法简便、快速,能定量,可用于急性白血病病人外周血单个核细胞端粒酶活性分析,并提示急性白血病病人外周血单个核细胞的端粒酶活性明显高于正常人.
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c-myc反义寡核苷酸对HL-60细胞端粒酶活性影响及诱导凋亡作用
为了研究c-myc基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞端粒酶活性的影响及其诱导凋亡作用,探讨HL-60细胞端粒酶活性与c-myc基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞c-myc基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,采用流式细胞术进行细胞凋亡检测及细胞周期分析,琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞的DNA断裂情况,应用TRAP-ELISA法测定HL-60细胞端粒酶的活性.结果表明:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,c-myc基因表达明显受抑;S期细胞百分数由55.6%降至30%,并出现早期凋亡峰(凋亡细胞比例占25.2%);琼脂糖凝胶电泳显示DNA凋亡梯形带;端粒酶活性检测发现反义寡核苷酸3,4,5 μmol/L作用组OD450-690分别为1.952±0.14,1.805±0.40,1.616±0.41,与未作用组(OD450-690为2.648±0.42)比较,差异有显著性(P＜0.05);反义寡核苷酸1和2μmol/L作用组及正义寡核苷酸5μmol/L作用组OD450-690分别为2.324±0.36,2.162±0.38,2.466±0.29,与未作用组比较,差异无显著性(P＞0.05).结论:c-myc基因反义寡核苷酸能够通过封闭c-myc基因的表达而诱导HL-60细胞凋亡,阻止细胞由G1期进入S期,并具有下调端粒酶活性作用.
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hTERT反义寡核苷酸对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用
为了研究hTERT基因反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖及端粒酶活性的抑制作用,并探讨HL-60细胞端粒酶活性与hTERT基因表达的关系,应用反义寡核苷酸封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,RT-PCR方法检测该基因表达抑制情况,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖状态,应用TRAP-ELISA、TRAP-PAGE方法检测HL-60细胞端粒酶活性.结果发现:反义硫代寡核苷酸作用于HL-60细胞72小时后,hTERT基因表达明显受抑,细胞生长受抑,增殖能力减弱,其抑制作用具有序列特异性及浓度、时间依赖性.端粒酶活性检测显示:反义寡核苷酸10、20和30 μmol/L作用组OD450-690值分别为1.504±0.47、1.223±0.39,0.944±0.16,与未作用组(2.648±0.42)比较,差异有显著性(P＜0.05);正义寡核苷酸20 μmol/L作用组(OD450-690值为2.376±0.65)与未作用组比较,差异无显著性(P＞0.05).TRAP-PAGE检测表明: hTERT ASODN作用组较SODN作用组端粒酶条带明显减少,以30 μmol/L作用组条带少.结论: hTERT基因反义寡核苷酸能够通过封闭hTERT基因的表达而抑制HL-60细胞增殖,下调端粒酶活性.
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人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究
为了研究人端粒重复序列结合因子(TRF1)蛋白质在急性白血病(AL)及正常骨髓组织中的表达水平,AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系,定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平,并应用经倍比稀释的TRF1 33-277纯化蛋白质作为定量标准,建立以抗TRF133-277单克隆抗体的定量Western blot的方法,而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平;另外,应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性,以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系.结果表明:20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低,差异具有显著性(P＜0.01);急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低,但差异无统计学意义(P＞0.05);化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高,但仍低于正常(P＜0.01);化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高,差异具有显著性(P＜0.01);AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人(P＜0.05)和首次缓解者(P＜0.01);初发未治时,ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者,但差异无统计学意义(P＞0.05).TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关(P＜0.001).结论:TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低,且与疗效及端粒酶活性相关.
关键词： 急性白血病 人端粒重复序列结合因子 蛋白质表达水平 端粒酶活性 -
宫颈上皮癌变过程中人端粒酶逆转录酶基因扩增与人乳头状瘤病毒的表达
宫颈癌作为威胁女性生命的恶性肿瘤,其发生和细胞异常凋亡与高危型人乳头状瘤病毒( HPV)感染密切相关.人端粒酶逆转录酶( hTERC)基因的扩增可激活端粒酶活性而维持端粒长度,使细胞逃避凋亡而发生无限制增殖,进而发生癌变.HPV感染可致细胞DNA发生突变而致癌.我们分析了hTERC基因扩增和高危型HPV感染在宫颈上皮癌变过程中的意义及相关性,以期为临床早诊早治、监测病情和评估预后提供一定的科学依据.
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系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群的端粒长度和端粒酶活性
本研究检测19例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T、B细胞亚群的端粒长度和端粒酶活性,初步探讨其在SLE发病中的作用.
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大肠癌患者外周血循环癌细胞端粒酶活性的表达及其临床意义
目的 探讨大肠癌患者外周血循环癌细胞端粒酶活性的变化与临床意义.方法 外周血经梯度离心分离单个核细胞,其中可含有循环癌细胞,再应用聚合酶链反应-酶联免疫吸附(PCR-ELISA)方法检测120例大肠癌患者外周血循环癌细胞端粒酶活性.结果 120例大肠癌患者中 65 例端粒酶活性明显升高,阳性率为54.12%,端粒酶活性的表达与大肠癌的病理类型,分化程度无明显相关性,但与淋巴结的转移明显相关 .结论 外周血循环癌细胞端粒酶活性水平与大肠癌的转移密切相关.
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端粒酶在肿瘤检测中的研究进展
1994年Kim等[1]利用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)方法检测了101种肿瘤标本和100个独立的永生化细胞系、发现90种肿瘤标本和98个永生化细胞系中含有端粒酶活性,而同时检测的良性肿瘤及正常体细胞中未发现端粒酶活性.许多证据[2,3]表明,除了生殖细胞、胚胎干细胞、活化的淋巴细胞、月经期的子宫内膜组织及表皮的基底层细胞外,大部分的体细胞端粒酶呈阴性,而在约85％～95％的人类肿瘤中端粒酶被激活.
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CA125、端粒酶及细胞学联合诊断良恶性腹水的临床研究
目的:通过联合检测腹水脱落细胞CA125、端粒酶活性及细胞学检查,为临床鉴别诊断良、恶性腹水提供依据.方法:采集52例各种类型腹水患者腹水,用TRAP-PCR-ELISA银染法检测腹水脱落细胞端粒酶活性,放射免疫分析法检测腹水CA125及病理科常规细胞涂片行细胞学检查.结果:联合检测恶性腹水阳性率58.82%,单检细胞学阳性率29.41%,两者相比有显著差异(P＜0.01).结论:联合检测腹水脱落细胞CA125及端粒酶活性能提高癌性腹水检出率,是腹水良、恶性鉴别及诊断的良好方法.
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以端粒酶为靶点的人参健脾丸治疗原发性肝癌38例分析
目的:分析以端粒酶为靶点的中药人参健脾丸治疗原发性肝癌的情况.方法:选58例均属中晚期肝癌患者,经PCR-TRAP法检测,均具有端粒酶活性,治疗组38例行TACE法治疗同时配合人参健脾丸口服;对照组单纯采用TACE法.结果:人参健脾丸能有效降低肝癌患者体内TLMA的活性;减轻化学介入治疗对消化道的毒副作用、对骨髓的抑制;改善患者的生活质量;提高T淋巴细胞的活性而起到抗肿瘤的效应.结论:人参健脾丸作为端粒酶抑制剂在原发性肝癌的辅助治疗中具有重要的意义.
