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肺癌患者PTEN基因启动子高甲基化的检测
目的 探讨肺癌患者组织、外周血浆及支气管肺泡灌洗液(BALF)中张力蛋白同源的磷酸酶基因(PTEN)启动子异常基因化状况及其在肺癌诊断中的价值.方法 用甲基化特异性PCR方法检测组织、血浆及BALF中的PTEN基因启动子区CpG岛甲基化.结果 45例肺癌患者中,PTEN基因启动子异常甲基化率组织为26.67%(12/45)、血浆为15.56%(7/45),BALF为22.22%(10/45);而非肺癌组织、正常对照血浆、非肺癌患者BALF中未检出甲基化;血浆、BALF中甲基化改变与肿瘤组织甲基化状况显著相关(P<0.01).结论 血浆、BALF中PTEN基因异常甲基化改变的检测在肺癌的早期特异诊断等方面有一定的价值.
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miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义
目的:探讨miR-34b在白血病细胞株表达和启动子区CpG岛甲基化状态及其临床意义.方法:选择10例非血液系统疾病患儿作为对照组,收集对照组骨髓细胞标本,另选择HL-60和K562白血病细胞株,采用荧光定量PCR检测对照组骨髓细胞、HL-60和K562细胞株的miR-34b相对表达量,并用甲基化特异性PCR检测各组miR-34b甲基化状态.用地西他滨处理HL-60和K562细胞株,用同样方法检测两种细胞株miR-34b相对表达量及甲基化状态.采用脂质体转染法将Has-miR-34b转染至K562细胞株,根据转染是否成功分为未转染组、阴性对照组和Has-miR-34b转染组,记录各组培养后不同时间细胞的增殖情况,并计算增殖抑制率.结果:对照组miR-34b相对表达量为(5.23±0.75),HL-60相对表达量为(0.05±0.01),K562相对表达量为(0.04 ±0.01),3组间比较差异具有统计学意义(F=44.812,P=0.000).HL-60细胞株和K562细胞株分别在启动子区CpG岛存在甲基化状态,10例非血液系统疾病患儿骨髓细胞无甲基化现象.经过地西他滨处理后HL-60和K562细胞株miR-34b表达水平均显著增加(P＜0.05);加地西他滨前后白血病细胞株启动子区CpG岛均存在甲基化,但是加药后甲基化明显减弱,提示地西他滨对启动子区CpG岛甲基化具有抑制作用.培养48、72、96和120 h后Has-miR-34b转染组细胞增殖抑制率分别为24.8％、46.7％、33.6％和24.7％细胞增殖率均显著低于未转染组和阴性对照组,组间比较差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:白血病细胞株miR-34b启动子区CpG岛甲基化使其表达水平显著降低,这也是miR-34b对细胞株增殖抑制作用降低的原因;miR-34b也有可能是一种抑癌基因参与调控白血病的发生、发展.
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ATM基因CpG岛甲基化与食管鳞癌易感性的相关性研究
目的 探讨ATM基因CpG岛甲基化与食管鳞癌易感性的相关性.方法 应用亚硫酸氢盐测序PCR(BSP)联合TA克隆测序检测240例食管鳞癌患者组与170例体检健康对照组血浆ATM基因CpG岛甲基化情况;选取前述240例食管鳞癌患者组中的40例食管鳞癌患者标本的食管鳞癌癌变组织和癌旁正常组织,采用经典的免疫组化SP法进行ATM蛋白检测.应用相关性分析ATM基因CpG岛甲基化与ATM蛋白表达阴性的关联.结果 具有吸烟习惯者患食管鳞癌危险性显著高于不吸烟者(P<0.05);有肿瘤家族史者患食管鳞癌危险性显著高于无肿瘤家族史者(P<0.05);240例食管鳞癌患者组CpG岛甲基化阳性率为88.67％,体检健康组CpG岛甲基化阳性率为73.59％,食管鳞癌患者组CpG岛甲基化阳性率明显高于体检健康对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).在40例食管鳞癌癌变组织中有25例ATM蛋白表达为阳性,在40例相应的癌旁正常组织中有38例ATM蛋白表达为阳性,两组差异具有统计学意义(P<0.05),并且ATM基因CpG岛甲基化率与癌变组织ATM蛋白表达阴性结果具有很好的相关性(r=0.994).结论 ATM基因CpG岛高度甲基化状态导致其蛋白表达下调,表明其可能为抑制ATM蛋白表达的重要因素;ATM基因CpG岛高度甲基化可能为食管鳞癌发生、发展的一个重要的分子生物学事件.
关键词： 食管鳞癌 CpG岛甲基化 亚硫酸氢盐测序PCR atm基因 ATM蛋白 -
PAI-1基因遗传不稳定性及其+10到+129区域CpG岛甲基化水平与胃癌临床病理特征的关系
肿瘤的发生发展与原癌基因的激活及抑癌基因的失活关系密切,且后者更为重要[1].基因的遗传不稳定性,如微卫星不稳定(MSI)和杂合性缺失(LOH)可能是产生基因突变从而导致抑癌基因功能失调,引起肿瘤发生的重要因素[2].本研究拟探讨胃癌组织PAI-1基因(pai-1位点)的遗传不稳定性及其5'侧翼+10到+129区域CpG岛甲基化水平与胃癌临床病理特征的关系.
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大肠癌的分子生物学特征与临床意义
导致大肠癌(CRC)的主要分子生物学路径有3种:染色体不稳定( CIN)路径,CpG岛甲基化表型(CIMP)路径和纯微卫星不稳定(MSI)路径.每条路径都各具特征,特异性表现在癌前病理改变、致癌机制和自然病史方面.目前,这些路径的分子生物学特征已经得到临床验证,有助于CRC患者及其亲属的诊断、筛查和管理.本讲座概述了近年来有关CRC发生发展分子生物学机制的研究动态,以及分子生物学技术在遗传性和散发性大肠癌基础研究、转化医学与临床应用研究的现状及其前景.
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CpG岛甲基化表型与胃癌
越来越多的证据指出,肿瘤的发生具有多阶段、多基因的特征,是多基因的遗传学(genetics)和表遗传学(epigenetics)共同起作用的结果[1].胃癌也是如此.在胃癌的发生发展过程中涉及基因缺陷,如突变、缺失等导致的编码区结构和功能破坏,还包括表遗传学改变等.当前人们越来越认识到表遗传学机制在肿瘤的发生发展中的重要作用.
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TSLC1和BLU基因在鼻NK/T细胞淋巴瘤中CpG岛甲基化研究
目的 了解鼻NK/T细胞淋巴瘤中抑癌基因TSLC1和BLU的甲基化状况,并探讨其在鼻NK/T细胞淋巴瘤发生发展中的作用及与临床病理参数之间的关系.方法 应用甲基化特异性PCR(MSP)技术,检测30例鼻NK/T细胞淋巴瘤、10例鼻咽淋巴组织增生中TSLC1和BLU基因启动子区的甲基化状况;应用原位杂交方法对30例鼻NK/T细胞淋巴瘤进行EB病毒检测.结果 30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中,TSLC1和BLU基因的甲基化频率分别为83.3%(25/30)和50.0%(15/30),且TSLC1和BLU基因中至少有1个抑癌基因发生甲基化的频率为86.7%(26/30);10例鼻咽淋巴组织增生中,2例发生了TSLC1基因甲基化,而BLU基因全部甲基化阴性而非甲基化阳性.未发现TSLC1和BLU基因CpG岛甲基化与EB病毒感染有关.TSLC1和BLU基因启动子区CpG岛甲基化与临床病理特征之间均无统计学相关性(P＞0.05).结论 30例鼻NK/T细胞淋巴瘤中多基因的启动子甲基化是一种普遍的事件.两种抑癌基因启动子区CpG岛均具有很高的甲基化频率,表明其在鼻NK/T细胞淋巴瘤的发生发展中具有重要作用,可能对肿瘤的早期诊断及预后评估具有重要意义.
关键词： TSLC1基因 BLU基因 鼻NK/T细胞淋巴瘤 CpG岛甲基化 -
p16基因甲基化与食管癌相关研究进展
2005年国际癌症研究署( IARC)全球癌症统计报告显示,2002年全世界食管癌发病人数为462000人,是世界上常见的八大恶性肿瘤之一;2002年全世界食管癌死亡人数为386000人,是全球六大致死性肿瘤之一[1].中国是世界上食管癌高发区之一,其中以环太行山地区为高发(如中国林州市),全国每年发病人数约250000人,占全世界每年发病人数一半以上[2].中国食管癌世界标化病死率为23.40/10万,占各种癌症死亡的23.53％,仅次于肺癌、胃癌,居第3位.那这一严重威胁人类生命健康的恶魔,到底是如何发生发展的?目前尚未完全明了.p16抑癌基因是1993年Serrano和Beach等[3]首先确定的一个编码人类周期素依赖性激酶4( CDK4)抑制因子(P16)的基因,相关研究表明p16基因的失活在食管癌的发生发展过程中扮演着重要的角色.而多数肿瘤组织相关研究表明,p16INK4a基因缺失或突变十分少见,其失活主要是由于其CpG岛甲基化而导致其mRNA转录异常,致使基因转录受阻.本文将就近年来p16基因甲基化与食管癌的相关研究进展做一综述.
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大肠癌分子生物学特征——转化医学与临床应用研究
大肠癌分子生物学技术及其转化应用研究在CRC筛查和诊断方面具有重要临床意义.1大肠癌分子路径大肠癌分子路径主要有三种:(1)染色体不稳定(CIN)路径:占全部散发性CRC病例的70％～85％以上;(2) CpG岛甲基化表型(CIMP)路径:导致散发性CRC的另一条主要路径,包括高度MSI不稳定(MSI)所致的散发性CRC;(3)纯微卫星不稳定(MSI)路径:由于DNA错配修复(MMR)基因胚(种)系突变,例如遗传性非息肉病性大肠癌(HNPCC).
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黑色氧化镍对细胞DNA损伤及基因表达的影响
目的探讨黑色氧化镍(Ni2O3)致癌的机制,寻找镍致癌的敏感性、特异性强的监测指标.方法用单细胞凝胶电泳法观察Ni2O3对人胚肺细胞DNA的损伤.用甲基化敏感酶酶切、硫酸氢钠盐转化和AP-PCR技术观察Ni2O3恶性转化的人胚肺细胞DNA的CpG岛甲基化水平.用mRNA差异表达的方法观察镍暴露的人胚肺细胞与对照细胞基因表达的差异.结果黑色氧化镍可以明显造成人胚肺细胞DNA损伤,20 μg/ml的Ni2O3染毒组细胞彗星尾长/彗星总长为0.487±0.195,而对照组为0.191±0.072,二者差异有显著性(P＜0.01).经镍恶性转化的人胚肺细胞DNA的CpG岛甲基化水平明显升高,而且该细胞与对照细胞间,在cDNA指纹图上约500 bp处存在明显表达差异带Cyclophilin(Cvp).结论经Ni2O3转化的人胚肺细胞Cyp基因片断表达下调.
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miR-203在儿童急性白血病患者中的表达及其临床意义
目的 检测miR-203在儿童急性白血病患者中的甲基化状态及表达情况,探讨其临床意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应检测miR-203启动子区CpG岛的甲基化状态,用实时荧光定量聚合酶链反应检测miR-203的相对表达量,分析其与临床指标间的关系.结果 31例儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)、15例儿童急性髓系白血病(AML)及23份非恶性血液病患儿骨髓标本(对照组)均未检测到miR-203的甲基化现象.miR-203在对照组、儿童急性白血病组、ALL组及AML组的相对表达量分别为16.93±6.31、48.97±10.38、55.88±12.91、24.28±9.10,儿童急性白血病组、ALL组与对照组相比,差异有统计学意义(P值分别为0.011和0.009),儿童AML组与对照组相比,差异无统计学意义(P=0.514).各项临床指标中,miR-203的表达与初诊ALL患儿的性别、免疫分型、染色体核型、是否检出融合基因、BCR-ABL基因表达、SIL-TAL1基因表达、泼尼松试验及急性白血病患儿的性别、染色体核型、是否检出融合基因、SIL-TAL1基因表达相关(P值均＜0.05).其中在ALL危险度分组两两比较中,中危组与高危组两组间miR-203的表达差异有统计学意义(P=0.022).结论 miR-203在大部分急性白血病患儿中不受甲基化机制调控.miR-203可能作为原癌基因参与儿童急性白血病尤其是ALL的形成.miR-203的高表达可能与急性白血病患儿尤其是ALL患儿的不良预后相关.
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肿瘤相关基因启动子甲基化在非小细胞肺癌细胞株中的作用研究
目的探讨基因甲基化在肺癌发生中的作用.方法南京医科大学附属南京第一医院呼吸科、复旦大学附属中山医院肺科和上海市肿瘤研究所于2004年10月至2005年12月应用甲基化特异性的多聚酶链反应(MSP)和RT-PCR检测甲基化的发生和mRNA的转录水平.结果肺癌细胞株A549部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、RASSF1a和CDH1等,完全甲基化的靶点包括MGMT、CDH13等;SH-77部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、WT1和CDH1等,完全甲基化的靶点包括RASSF1a和MGMT;SPC-A1部分甲基化的靶点包括p16INK4a、p73、CDH1、MYOD1和CDH13等,完全甲基化的靶点包括WT1和RAR-β.RASSF1a、WT1、MYOD1、MGMT和RAR-β等5个基因发生甲基化的细胞株其mRNA的转录水平均低于未发生甲基化的细胞株甚至完全不转录.结论NSCLC细胞株中抑癌基因经常发生启动子CpG岛的甲基化,并且甲基化可能与抑癌基因mRNA转录水平下降相关.
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DNA甲基化与膀胱癌研究进展
DNA甲基化(DNA methylation)是在DNA序列不变的情况下,控制基因表达,维护染色体的完整性和调节DNA重组及某些特定基因组区域的转录活性,是恶性肿瘤普遍存在的分子生物学改变.肿瘤相关基因启动子CpG岛甲基化状态异常广泛见于肿瘤,有望作为临床肿瘤诊断的分子标记[1].膀胱癌是泌尿系常见的恶性肿瘤,而膀胱癌与DNA甲基化关系近年来已成为膀胱癌研究热点之一.
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小干扰RNA组蛋白去乙酰化酶1对人胰腺癌细胞甲基化的作用研究
基因甲基化是抑癌基因失活的主要机制.胰腺癌中许多抑癌基因因CpG岛异常超甲基化而失活,如人类错配修复基因1(human mutL homolog 1,hMLH 1)、维甲酸受体β基因(retinoic acid receptor,RAR-β)等.组蛋白去乙酰化后的异染色质蛋白1(heterochromatin protein 1,HP1)可募集DNA甲基转移酶,从而使基因启动子CpG岛甲基化[1].甲基化CpG结合蛋白通过与组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)复合体相互作用而实现其抑制作用[2].甲基化抑制基因转录有赖于抑制性染色质环境.HDAC1过表达可导致组蛋白去乙酰化.本研究通过小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术研究HDAC1在胰腺癌中对DNA甲基化的影响.
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SYNE1基因启动子甲基化对大肠癌早期诊断的价值
目的 评价SYNE1基因启动子CpG岛甲基化在大肠癌早期诊断的潜在价值.方法 采用甲基化特异性聚合酶链反应检测94例大肠癌组织(A组)及其癌旁正常组织(B组)和26例大肠腺瘤组织(C组)中SYNE1基因启动子CpG岛甲基化水平,分析其与大肠癌临床病理资料的关联.结果 A组SYNE1甲基化阳性率80.9％,高于B组的17.0％和C组的23.1％ (P＜0.01).工期大肠癌组织SYNE1基因甲基化阳性率66.7％(8/12),高于中低级腺瘤的6.7％(1/15)(P＜0.01).SYNE1基因甲基化水平与大肠癌临床病理特征之间无显著相关性(P＞0.05).结论 SYNE1基因甲基化是大肠癌发生的早期基因事件,SYNE1基因是大肠癌早期诊断的候选基因.
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肺癌患者血清P16基因甲基化检测意义
肺癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一,肺癌的早期诊断对其治疗效果十分重要.p16基因是一种重要的抑癌基因,研究肺癌中p16基冈启动子区CpG岛甲基化的发生状态具有很大的临床意义[1].用于检测CpG岛甲基化的特异聚合酶链反应(methylation specific PCR,MSP)方法 ,为DNA甲基化的研究提供了新手段.本文采用MSP技术检测肺癌患者全血中p16基因的甲基化情况,探讨其与肺癌发生发展的关系和作为肺癌早期诊断指标的可能性,现报道如下.
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食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化的意义
目的研究食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛甲基化与其mRNA表达的关系.方法选取4种食管癌细胞系OE21,OE19,OE33和TE7,经重亚硫酸钠处理后,采用限制性酶切图谱分析(COBRA)和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,在DNA甲基转移酶抑制剂5-氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CdR)处理前后,对其MT-3基因CpG岛的甲基化情况及mRNA的表达情况进行对比研究.结果 4种食管癌细胞系的MT-3基因均存在不同程度的CpG岛超甲基化.经5-aza-CdR处理后,超甲基化状态解除,mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P=0.002).结论食管癌细胞系中MT-3基因CpG岛的超甲基化可抑制其mRNA表达.当其超甲基化解除后,MT-3基因的mRNA表达水平也会相应升高.
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细胞因子信号转导抑制分子3与肿瘤关系的研究进展
细胞因子与相应的受体结合可导致信号传导通路的活化,而将细胞因子的信号由胞膜传到胞浆并终传至胞核,并引起目的基因的表达.已经发现的10余条细胞因子信号传导通路[1-3],其中Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)系统涉及细胞因子的范围较为广泛.过去研究细胞因子信号的传人较多,较少观察这些信号是如何中止或衰减.细胞因子信号转导抑制分子(suppressor of cytokine signaling,SOCS)系统由3个实验室用不同方法同时发现[4-6],正好解释了JAK/STAT信号系统的负调节机制.现已明确,JAK/STAT信号转导通路的激活与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关,SOCS分子主要通过对该通路的负性调节而抑制信号转导,其激活及表达具有潜在抑瘤作用.
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p16、hMLH1基因甲基化与结肠癌的相关性研究
目的 检测正常黏膜、结肠腺瘤、结肠癌中p16、hMLH1基因CpG岛甲基化状态,评价其在结肠癌发生中的作用及临床意义.方法 收集四川省人民医院2008年10月～12月结肠组织标本60例,其中结肠癌 20例、腺瘤20例、正常组织标本20例.采用特异性甲基化PCR(MSP)方法检测p16、hMLH1基因的CpG岛甲基化状态.结果 MSP方法检测发现p16启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与腺瘤组、正常组比较有显著性差异(P=0.020、0.020),而腺瘤组与正常组比较无显著性差异(P>0.05).hMLH1启动子CpG岛甲基化阳性表达率结肠癌组与正常组比较有显著性差异(P=0.047),结肠癌组与腺瘤组、腺瘤组与正常组比较无显著性差异(P>0.05).p16、hMLH1基因CpG岛甲基化与Dukes分期、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度具有相关性(P<0.05),与肿瘤部位、性别无相关性(P>0.05).结论 p16、hMLH1启动子区CpG岛甲基化是促进结肠癌发生的重要基因事件,且可能与结肠癌Duke分期相关.
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内皮素受体B基因启动子上游CpG岛甲基化对神经嵴细胞迁移的影响
目的 探讨内皮素受体B(EDNRB)基因启动子上游CpG岛甲基化对肠神经系统(ENS)发育中神经嵴细胞迁移的影响.方法 采用甲基化特异性PCB(MSP)技术检测2007年9月-2008年12月华中科技大学同济医学院附属协和医院经病理检查等证实的16例先天性巨结肠症(HD)患儿挛缩段组织标本中EDNRB基因启动子上游cpG岛甲基化状态;采用荧光定量PCR(SYBRGreen法)检测HD患儿病变组织标本(包括扩张段、移行段和挛缩段3段组织)中EDNRB基因mRNA的相对表达量.并收集同期16例非HD患儿的正常结肠组织标本作为对照.结果 HD患儿挛缩段标本行MSP检测,甲基化率为12.5%(2/16例);非HD患儿正常组织均未发现甲基化.16例HD患儿病变组织标本(包括扩张段、移行段、挛缩段)荧光定量PCR检测发现2例甲基化病变组织标本(包括扩张段、移行段、挛缩段)中EDNRB基因表达水平较非甲基化组织明显下调,差异有统计学意义(P<0.05).结论 在HD发病机制中,EDNRB基因启动子上游CpG岛甲基化可能对ENS发育中神经嵴细胞的迁移有一定影响.
