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心电图机产生干扰的原因和解决办法
心电图机干扰是常见故障,大干扰会使描笔发生剧烈抖动,描笔无法记录心电波形.小干扰会掩盖心电图中的小波形,使描出的图形产生伪差,影响诊断甚至无法诊断.
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番茄丛矮病毒p19蛋白抑制转录后基因沉默作用机制
RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是真核生物体内由双链RNA(double-stranded RNA)介导的同源RNA降解现象.在细胞内,长的dsRNA被Dicer酶切割成21~26核苷酸(nucleotide,nt)的小干扰RNA(small interfering RNA或short interfering RNA,siRNA);siRNA与多种蛋白结合后形成RNA诱导沉默复合物(RNA-induced silencing complex,RISC),同时解链;有活性的RISC可在siRNA的指引下与互补的转录物结合,并导致RNA的降解,这种转录后水平基因沉默(posttranscriptional gene silencing,PTGS)也称RNA沉默(RNA silencing)[1,2].人为地向细胞内导入dsRNA、siRNA,或者是它们的表达载体都可以诱发RNAi,有效地中止同源基因表达.这就为建立基因与表型之间的关系提供了可靠的手段.目前,RNAi技术正因其简捷高效性而广泛应用于功能基因组研究、疾病治疗研究,以及植物抗病毒研究等.
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RNA研究进展
近10年来,人们对RNA领域有了更多更新的研究发现,RNA早已不再局限于编译蛋白质,它还影响着生物体的基因表达、细胞周期及个体发育过程.小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA)和非编码RNA(non-coding RNA, ncRNA)对生物体的生命活动有着重要的调控作用.siRNA引起RNA干扰(RNA interference, RNAi),ncRNA在包括转录调节、染色体复制、RNA剪切及加工、维护mRNA稳定和翻译,甚至在蛋白降解和转运等很多方面发挥作用.鉴于它们在生物体中的重要意义,目前人们正致力于研究它们的功能和机制以及寻找更多的此类RNA.
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小干扰RNA下调GLI1基因的表达对MKN28细胞转移侵袭行为的影响
目的:利用siRNA技术下调GLI1基因的表达,在体外研究GLI1对MKN28胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法脂质体法将GLI1 siRNA转染MKN28胃癌细胞,采用RT-PCR观察GLI1 siRNA转染前后GLI1在mRNA水平的变化情况。培养MKN28胃癌细胞,将细胞分为转染GLI1 siRNA组、阴性siRNA组和对照组后,分别采用Transwell小室法检测各组细胞的侵袭和转移能力。结果转染GLI1 siRNA后GLI1基因表达在24 h和48 h明显下调。侵袭和转移实验显示:GLI1 siRNA组侵袭和转移细胞数目均低于阴性siRNA组和对照组(P<0.05),而阴性siRNA组和对照组间的差异均无统计学意义。结论转染GLI1 siRNA特异下调GLI1基因表达,在体外抑制胃癌MKN28细胞的侵袭和转移,可能是胃癌靶向治疗的靶点。
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RNA干扰现象阻止丙型肝炎病毒基因表达和复制
1995年,康奈尔大学的Su Guo博士在用反义RNA阻断线虫基因表达的试验中发现,反义和正义RNA都能阻断基因的表达.1998年,Andrew的研究证明:在正义RNA阻断了基因表达的试验中,真正起作用的是双链RNA.这些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达,促使mRNA降解,诱使细胞表现出特定基因缺失的表型,称为RNA干扰(RNA interference,RNAi,也译作RNA干预或者干涉).它是体内抵御外在感染的一种重要保护机制.这些双链RNA是体外转录正义RNA时生成的.随后的研究中发现,RNAi现象广泛存在于植物、原生动物、昆虫、线虫和哺乳动物中[1].RNAi的主要作用是可以特异性地使特定的基因沉默,从而起到控制细胞的各种高级生命活动.这为各种疾病如病毒病和肿瘤等的防治打开了一条全新的途径.由于RNAi的重要意义和近年来不断取得研究进展,<科学>杂志在2001年将其列为十大科学成就之一,2002年又将其列为当年十大科学成就之首.同时<自然>杂志也将小干扰RNA(small interfering RNAs,siRNA),评为2002年重大科技成果之一.
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siRNAs在基因治疗中的应用
利用小分子物质特异性沉默基因表达是一种有效的治疗手段,许多研究正在利用这些小分子物质的作用而创造出新的治疗性药物.小干扰RNAs(small interfering RNAs,siRNAs)有可能成为这类药物中的新成员.本文将从siRNAs的沉默机制、基因沉默效率、表达载体,siRNAs在活体内的应用以及作为可能的治疗性药物等方面,探讨其应用于临床治疗的巨大潜能.
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MAT1基因沉默对胰腺癌细胞生长的影响
我们既往的研究证实,作为调控细胞周期循环的关键基因之一,人类MAT1( ménage à trios 1)基因在胰腺癌组织中表达增强,它参与胰腺癌的发生[1-2]引.转染反义MAT1基因可使胰腺癌细胞出现明显的G1期阻滞[3].为此,本研究应用体外转录法合成靶向MAT1基因的小干扰RNA( small interference RNA,siRNA),转染胰腺癌Capan-2细胞,观察其对细胞的生长抑制效应,探讨siRNA沉默MAT1基因用于胰腺癌基因治疗的可行性.
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小干扰RNA表达质粒载体的构建及其抗乙型肝炎病毒效应
近年研究表明,一些小的双链RNA可以高效特异地阻断体内基因表达,促进RNA降解,在细胞内发挥基因敲除作用,这种现象被称为RNA干扰(RNAi)[1].RNAi技术已被广泛应用于治疗病毒、癌症等疾病的研究.本研究旨在探讨RNAi技术抗HBV的可行性,从而为RNAi治疗乙型肝炎提供实验基础.
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青光眼手术抗瘢痕治疗的新进展
青光眼的病症比较复杂,由于长期高眼压患者眼部组织结构被破坏较严重,如果用一般的抗青光眼手术治疗,术后滤过口的阻塞常常导致远期效果不理想,是一种比较难被治愈的眼科疾病。一般情况下,手术失败基本是由于滤过口出现成纤维细胞增生和瘢痕形成导致滤过口出现阻塞所引起的。青光眼术后瘢痕形成严重影响了手术的效果,本文就目前国内外研究的抗瘢痕治疗的主要新药物(如小干扰RNA、吡非尼酮、干扰素等)的报道进行回顾并进行一些简单的总结。
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siRNA介导的血管内皮生长因子基因沉默对膀胱癌T24细胞增殖的影响
我们应用RNA干扰技术,以血管内皮生长因子(VEGF)为靶点,对人膀胱癌T24细胞进行研究,初步探讨VEGF特异性小干扰RNA(siRNA)作为膀胱癌基因治疗手段的可能.现报告如下.
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A20的基因表达在肝癌细胞对TRAIL耐受中的作用研究
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体( tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand,TRAIL)以其高选择性的诱导癌肿细胞凋亡并且规避对正常细胞的杀伤作用引起了广泛关注,但几乎所有的肝癌细胞系均对TRAIL表现出不同程度的耐药性[1].我们在前期实验中发现肿瘤坏死因子阿尔法诱导蛋白3(tumor necrosis factorαinducing protein 3,A20)泛素化受体相互作用蛋白(receptor interacting protein,RIP)可能是造成肝癌细胞对TRAIL耐受的机制之一[2].我们用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默A20联合TRAIL处理肝癌细胞系HepG2和Hep3B,探讨TRAIL诱导肝癌细胞的凋亡能力及其泛素化调节RIP的机制.
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Sunrivin靶向小干扰RNA诱导大肠癌细胞凋亡的作用
本研究拟用基因克隆技术构建Survivin靶向的小干扰RNA(SiRNA)重组表达载体,探讨用RNA干扰的方法下调大肠癌细胞中Survivin基因的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡,为大肠癌的基因治疗提供理论依据.
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靶向突变K-ras基因的小干扰RNA体内外抑制肺癌细胞生长的研究
目的 探讨应用小干扰RNA(siRNA)敲除突变K-ras基因对肺癌细胞H441体内外生长的抑制作用.方法 构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasV12,转染H441细胞后应用半定量RT-PCR及Western blotting检测突变K-ras基因mRNA及蛋白质的表达变化,噻唑蓝法检测H441细胞增殖速度的变化,流式细胞仪检测H441细胞凋亡率的变化.裸鼠皮下移植pSilencer3.1-K-rasV12处理的H441细胞,观察其成瘤性的改变.结果 测序证实pSilencer3.1-K-rasV12真核表达载体构建成功.RT-PCR灰度比值结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-ras mRNA相对表达量分别为:93.7%±2.2%、95.1%±2.5%、43.6%±3.1%,差异有统计学意义(F=78,P<0.01);Western blotting结果示空载体组、阴性对照组、实验组K-ras蛋白相对表达量分别为:98.1%±2.4%、97.5%±2.0%、33.5%±3.7%,差异有统计学意义(F=93,P<0.01);经pSilencer3.1-K-rasV12作用的H441细胞生长受到明显抑制(P<0.05),凋亡率较对照组明显升高(F=8.9,P<0.01),H441细胞在裸鼠体内生长受到明显抑制.结论 靶向突变K-ras基因的siRNA可以抑制肺癌H441细胞在体内外的生长速度,诱导细胞凋亡,为肺癌的基因治疗提供了新的思路和方法.
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小干扰RNA阻抑人端粒酶催化亚基基因表达对肾癌细胞增殖及凋亡的影响
为研究RNA干扰对肾癌基因治疗作用,2004年本研究以针对人端粒酶催化亚基(human telomerase reverse transcriptase ,hTERT)基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染肾透明细胞癌株786-0细胞,观察其对786-0细胞hTERT表达及增殖、凋亡的影响.
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靶向保罗样激酶的小干扰RNA体内外抑制胃癌细胞生长的研究
目的观察敲除保罗样激酶(plk)1基因对胃癌细胞MKN45体内外生长的抑制作用,探讨plk1基因作为胃癌基因治疗靶点的可行性及有效性.方法应用RNA干扰技术(RNAi)抑制MKN45细胞plk1基因的表达,实时定量 PCR(real-time quantitative PCR)及蛋白印迹(western blotting)检测plk1 mRNA及蛋白质的表达变化,流式细胞仪检测MKN45细胞周期分布及凋亡率的变化,噻唑蓝(MTT)法检测MKN45细胞增殖速度的变化.裸鼠皮下移植plk1小干扰RNA(siRNA)处理的MKN45细胞,观察其成瘤性的改变.western blotting检测成瘤标本的plk1蛋白质的变化.结果 MKN45细胞经plk1 siRNA作用后,plk1 mRNA及蛋白质水平在一定时间内均明显降低,更多的MKN45细胞聚集于G2/M期附近(P<0.05);经plk1 siRNA作用的MKN45细胞在48及72 h凋亡率高于对照组(P<0.05);生长速度亦明显缓于对照组(P<0.05);在裸鼠体内成瘤性明显减低(P<0.05);但各组体内成瘤标本的plk1蛋白表达无明显改变.结论靶向plk1的siRNA可以抑制胃癌MKN45细胞在体内外的生长速度,plk1有可能成为新的胃癌治疗靶点.
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CADY细胞穿膜肽作为siRNA递送载体的研究进展
如何将小干扰RNA(siRNA)分子高效安全地递送至靶细胞内,使其有效沉默靶基因,是制约RNA干扰技术临床应用的瓶颈.近年来,基于细胞穿膜肽的siRNA递送技术发展迅速,其中,次级两亲性细胞穿膜肽CADY细胞毒性低、无免疫原性且能与siRNA非共价结合形成稳定的纳米复合物,在多种细胞系中具有良好的递送效率,已成为极具应用前景的siRNA递送载体.本文主要对CADY的研究设计思路、结构特点、空间构型、穿膜机制、结构优化和应用方面进行综述.
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基于siRNA全身给药的治疗肿瘤的临床研究
小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)可在体内选择性地沉默特定基因,这对探索人类疾病的发病机制有着重要意义。但siRNA是否适用于人类疾病的治疗仍需进一步研究。siRNA是目前公认的极可能为治疗癌症带来全新的治疗手段,其具有同时抑制多种目标基因表达的潜力,有望实现大限度发挥抗肿瘤功效的同时而不伴随毒性增加。siRNA的抗癌作用在癌症动物模型中已得到证实,应用在人类疾病的治疗是否也有着同样的效果仍有待进一步确证。现阶段, siRNA用于治疗实体瘤的Ⅰ期临床试验已部分完成。基于siRNA的疗法,正在成为一种令人期待的全新肿瘤疾病治疗途径。
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端粒酶靶向的RNA标记探针在肿瘤活体显像的研究
目的:探讨端粒酶靶向的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)标记探针在肿瘤靶向活体显像中的应用价值.方法:化学合成端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)靶向和人类基因无关靶向的siRNA双链.通过螯合剂NHS-MAG3的偶联作用对siRNA进行放射性核素锝[99mTc]标记.构建HepG2肝癌荷瘤裸鼠模型,以HE染色和免疫组织化学方法鉴定肿瘤组织的病理情况和hTERT的表达水平.经裸鼠尾静脉注射7.4 MBq放射性标记的siRNA,分别于注射后0.5、1、3、6h进行显像.通过在肿瘤和对侧正常组织勾画感兴趣区(region of interest,ROI),比较肿瘤与非肿瘤(T/NT)比值.经裸鼠尾静脉注射1.85 MBq探针,分别测定并计算2、4、6h每克肿瘤及血液的组织放射性分布(%ID/g).使用t检验方法进行统计学评价.结果:标记率为(73.4±3.0)%,放射化学纯度大于92%,比活度达25.9 GBq/μmol.HE染色中肿瘤组织可见病理性核分裂相.hTERT抗体免疫组织化学显示褐色浓染区域主要集中于细胞核.注射hTERT靶向探针的荷瘤裸鼠显示出清晰的肿瘤影像,而对照组则无法显示肿瘤.注射后6h,实验组探针的肿瘤影像明显强于对照组.注射后0.5、1、3、6h后,实验组的T/NT比值由2.68 ±0.21升至5.86±0.30,而对照组由1.55 ±0.16降至1.28 ±0.12.注射后2、4、6h后,实验组的肿瘤放射性分布由(0.71 ±0.14)% ID/g增加到(0.97±0.15)%ID/g,而对照组的肿瘤分布则不断降低,提示实验组探针的靶向性.结论:端粒酶靶向的小干扰RNA标记探针具备肿瘤体内靶向显像的潜在应用价值.
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微RNA对心脏发育影响的研究进展
近来研究表明,一类名为小RNA的非编码RNA分子掌握真核细胞许多功能,影响基因表达、细胞周期调控和个体发育等多种行为[1-4].小RNA是指21~28 nt的调控RNA分子,主要包括①微RNA(miRNA),②小干扰RNA(siRNA),③其他小RNA:包括核糖体开关,反义核酸等非编码RNA.小RNA具有十分重要的调控功能,已成为目前国际上的研究热点[5].由于miRNA对个体发育具有重要的调控作用,miRNA已成为发育生物学领域的研究热点,本文将就miRNA在心脏发育中的作用作简要综述.
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转化生长因子β1小干扰RNA抑制SGC-7901腹膜转移
腹膜转移是进展期胃癌根治术后常见的复发形式,是胃癌患者的主要死亡原因.研究表明,转化生长因子β1(TGF-β1)与肿瘤的生长、浸润和转移关系密切[1].小干扰RNA(siRNA)技术是一种新兴的基因治疗技术,能高效、特异性地降解细胞内有关基因的mRNA,目前已成为探寻肿瘤相关基因领域的一个重要热点[2].本研究自行构建能在细胞内转录出功能性siRNA的载体,对人胃癌细胞株SGC-7901行稳定转染,探讨TGF-β1siRNA在胃癌腹膜转移基因治疗上的意义.