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实时定量PCR快速检测O1群和O139群霍乱弧菌
根据O抗原的不同,霍乱弧菌可分成200多个血清群,其中仅O1群和O139群能引起暴发流行[1-2].
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Smad 4在去势大鼠下丘脑、垂体中的表达和意义
目的::研究Smad 4 mRNA在去卵巢大鼠下丘脑、垂体中的表达水平和意义。方法:SD大鼠分为3组(每组10只):对照组(月龄<24周雌性大鼠)、去势组(手术切除双侧卵巢大鼠)、治疗组(去势后雌激素治疗雌性大鼠30天),动物处死后迅速取材,提取各组大鼠下丘脑、垂体组织RNA,反转录成cDNA,下丘脑,采用实时定量PCR方法( Real-time quantitative reverse transcriPtion Polymerase chain reaction;qRT-PCR),检测各组大鼠Smad4 mRNA在下丘脑及垂体中的表达。结果:去势组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组0.4±0.22倍(P<0.05),雌激素治疗组大鼠下丘脑Smad4 mRNA水平是正常组2.5±0.79倍(P<0.05);去势组大鼠垂体Smad4 mRNA水平是正常组0.2±0.12倍(P<0.05),垂体中Smad4 mRNA水平是正常组8.8±0.16倍(P<0.05)。结论:去卵巢大鼠下丘脑、垂体表达Smad 4基因,并与雌激素水平变化相关。
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SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测尿液中大肠埃希菌方法的建立
大肠埃希菌(Escherichia coli,E. coli)是引起尿路感染的常见病原菌,其病原学诊断主要依据细菌培养的结果[1],然而常规的培养法检测和鉴定大肠埃希菌需2~3 d的时间,常常延误诊断和治疗.
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联合应用激光微切和实时定量PCR检测单个胰岛的基因表达
目的本研究中,我们联合应用激光微切和实时定量逆转聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰岛的基因表达.
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MicroRNA-451调控心肌肥厚
目的:MicroRNA-451(miRNA-451)在心肌肥厚中的调控作用。
方法:利用Agilent的miRNA表达谱芯片筛查肥厚型心肌病(HCM)患者心肌与正常心肌的miRNA表达差异,筛查出的miRNA利用TaqMan探针法进行实时定量PCR检测。Lipofecta mine 2000转染miR-451的模拟物或抑制物,在体外培养的新生大鼠心肌细胞中高表达或敲低miR-451。心肌细胞用鬼笔环肽(phalloidin)染色后计算表面积。14-3-3ζ蛋白表达用Western检测。 -
实时定量PCR技术(real-time PCR,RT-PCR)
所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 Ct值扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环数。此时扩增是呈对数期增长根据样品扩增的Ct值就可计算出样品中所含的模板量。
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慢性粒细胞白血病患者WT1基因表达及其临床意义
目的 探讨慢性粒细胞白血病(CML)患者骨髓细胞中Wilms瘤抑癌基因(WT1)的表达水平及其临床意义.方法 建立实时定量RT-PCR方法,采用Light Cycler PCR仪检测了46例(109份骨髓细胞cDNA标本)CML患者和23例非白血病患者骨髓细胞中WT1及内参β胆色原脱氢酶(GAPDH)的表达水平,以WT1N=(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×104计算WT1表达水平.结果 23份CML加速期与22份CML急变期患者骨髓细胞中WT1N的中位表达水平分别为103.71和129.44,明显高于64份CML慢性期和对照组(分别为3.44和1.47,P<0.01),对照组与CML慢性期之间WT1基因表达差异无统计学意义;CML加速期与急变期之间WT1基因表达差异也无统计学意义(P<0.05).WT1基因表达水平与BCR/ABL融合基因表达水平具有一定的相关性.对其中7例CML患者行异基因骨髓移植前后动态检测WT1上升可提示白血病复发.结论 CML患者加速急变期骨髓细胞中WT1基因表达升高,具有参考意义.
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白血病患者中胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1基因的表达
目前关于胰岛素样生长因子结合蛋白相关蛋白1(IGFBP-rP1)基因的研究报道主要见于实体瘤 [1-3],尚无与白血病发生、发展的相关报道.我们利用实时定量逆转录酶式聚合反应(QRT-PCR)技术,检测白血病患者不同病程中IGFBP- r P1基因mRNA的表达水平,并与WT1、RbAp46基因进行相关分析,探讨其与白血病发生的关系.
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胰腺癌中RUNT相关转录因子3基因的表达及临床意义
人类RUNT相关转录因子3(RUNX3)是RUNT家族中新近受到广泛关注的基因,是一种新近发现的肿瘤抑制基因,能调控细胞的生长发育和凋亡,对细胞的信号转导和其他生物学效应有着重要而复杂的转录调控作用,因其表达下调在人类多种恶性肿瘤的发生发展过程中起重要作用而备受关注[1].RUNX3在胰腺癌中的作用国内尚未见有关研究报道,国外已开始研究[2-3].本研究采用实时定量PCR(realtime PCR)和免疫组化方法,检测胰腺导管腺癌(PDAC)和相应癌旁组织RUNX3 mRNA、蛋白的表达,探讨其临床意义.
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065实时定量聚合酶联反应定量血管内皮生长因子-C及其受体信使RNA作为人类结直肠癌淋巴结转移预测因素
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特级初榨橄榄油可减轻小鼠结肠炎
【据《J Nutr Biochem》2013年1月报道】题:饮食中补充橄榄油多酚减轻由葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠慢性结肠炎(作者Sánchez-Fidalgo S等)
在小鼠慢性结肠炎模型上,西班牙塞尔维亚大学药学院的研究者评估了饮食中的橄榄油多酚的保护作用。研究者将六周龄小鼠随机分四组:标准饮食(SD)、特级初榨橄榄油(EVOO)饮食、橄榄多酚提取物(PE 850ppm)的标准饮食(PE+SD)以及EVOO+PE饮食。30 d后,让小鼠饮用含有3%葡聚糖硫酸钠(DSS)的饮用水3周,诱导产生慢性结肠炎,用疾病活动指数(DAI)和组织学加以评价。研究者通过免疫组织化学的方法和实时定量PCR分析单核细胞趋化蛋白1和肿瘤坏死因子α的mRNA水平来评价细胞增殖,Western blotting检测结肠中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)结、环氧合酶(COX)-2、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、lκBα抑制物和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的表达。 -
体外循环与非体外循环冠状动脉旁路移植术中移植血管血流量测定的对比研究
我们采用手术中的实时定量血流测定,对体外(CCABG)与非体外(OPCAB)循环冠状动脉的旁路移植手术中移植血管血流量进行对比研究.
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膜联蛋白Ⅰ在子宫内膜异位症患者在位内膜组织中的表达变化及其意义
子宫内膜异位症(内异症)是育龄妇女的常见病,发病率达10%[1].虽然,内异症是良性病变,但其病理过程表现出浸润、转移等恶性疾病的特征.目前,有关内异症发生的分子机制尚不清楚.我们利用蛋白质组学研究发现,膜联蛋白家族成员——膜联蛋白Ⅰ(annexin Ⅰ)可能为内异症疾病相关蛋白[2].本研究采用免疫组化、实时定量PCR及蛋白印迹的方法,检测annexin Ⅰ在非内异症患者子宫内膜和内异症患者在位内膜中的表达情况,旨在探讨annexin Ⅰ在内异症发病中的作用.
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孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用
唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征,是新生儿常见的先天性染色体病,其发病率约为1/600~1/800[1],高龄产妇多发.新生儿出生后多智力低下,给社会和家庭带来了极大的负担,本研究采用实时定量PCR技术,测定正常孕妇及妊娠唐氏综合征患儿的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的变化,旨在寻找一种非创伤性、快捷、经济的产前筛查唐氏综合征的新指标.
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病毒性心肌炎心肌组织中骨桥蛋白表达的研究
病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)是常见的心血管疾病之一,近年来发病呈上升趋势.研究表明大量的单个核细胞(T、NK、MΦ等)在局部浸润及其造成的后续免疫损伤在VMC的发病中占有重要的地位[1].骨桥蛋白(OPN)是一种基质功能性非胶原蛋白.已证实OPN在炎症浸润、细胞免疫、组织修复、血管重塑、细胞凋亡等方面扮演着重要角色[2-4].为此,我们以柯萨奇病毒B3(CVB,)感染BALB/c小鼠制作VMC模型,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析CVB3感染后0、4、7、9、14和21 d OPN的表达水平,分析其表达与炎症细胞浸润的关系,为VMC发病机制的研究提供依据.
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WT1基因在乳腺癌组织中表达的研究
目的 探讨乳腺癌组织中WT1基因表达水平及其临床意义.方法 采用实时定量RT-PCR方法,检测110例乳腺肿瘤及其邻近正常乳腺组织中的WT1基因及内参照GAPDH的表达水平,以WT1_N=(WT1拷贝数/GAPDH拷贝数)×10~4计算WT1表达水平,并计算同一患者肿瘤组织与正常组织中WT1_N比值,定义为T/N_(WT1)比值,分析WT1基因表达(T/N_(WT1))水平与临床病理参数的关系.结果 102例乳腺癌组织中WT1_N明显高于其周围邻近正常乳腺组织中的表达(P<0.01),而8例乳腺良性肿瘤组织与其相应的正常乳腺组织中WT1_N表达水平差异无统计学意义(P>0.05).乳腺癌组织中WT1_N及其T/N_(WT1)比值明显高于乳腺良性肿瘤组织(P<0.01),且T/N_(WT1)比值与有无淋巴结转移、乳腺癌病理类型、雌激素受体(ER)状态及孕激素受体(PR)状态无相关性.WT1基因表达水平与IL-8基因表达水平具有很好的相关性(r=0.723,P<0.01).结论 乳腺癌组织高表达WT1,乳腺癌组织中WT1表达水平可作为评价疾病进展及判断预后的指标.
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紫外线对大鼠晶状体泛素mRNA表达水平的影响
目的 探讨紫外线对体外培养的大鼠晶状体泛素mRNA表达的影响.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)检测紫外线照射后培养1 h、6 h、12 h、24 h和48 h的晶状体泛素mRNA的表达水平.结果 紫外线照射后泛素mRNA表达水平下降,照射后1 h泛素mRNA表达水平低,之后有所恢复,照射后48 h,其mRNA表达水平基本恢复,与对照组相比没有显著性差异.结论 紫外线照射可能通过降低大鼠晶状体泛素基因表达而抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,影响晶状体蛋白降解.
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SYBR-Green实时定量PCR用于Vero宿主细胞DNA残留量的检测
目的:建立基于SYBR-Green荧光染料实时定量PCR检测Vero宿主细胞DNA残留量的方法.方法:提取Vero细胞基因组DNA,设计细胞基因组高度重复顺序AGMr( HindⅢ)-1基因片段的特异性引物,通过PCR扩增AGMr( HindⅢ)-1序列中一段特异性cDNA片段,克隆至pGEM-T Vector,重组质粒经酶切及测序鉴定合格后命名为pGEM-T/AGMr( Hind Ⅲ)-1-S.结果:使用重组质粒和细胞基因组DNA分别作为检测标准品,均取得了良好的结果,其检测灵敏度分别达到了0.03 fg·μL-1和0.03 pg· μL-1.结论:SYBR-Green实时定量PCR可用于Vero宿主细胞DNA残留量的准确定量.
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荧光探针定量PCR技术
PCR技术是通过对基因的选择性片段进行体外高效扩增,实现目的基因的检测.荧光探针定量PCR(FQ-PCR)是一种新的基因定量检测技术,国外文献多用"实时定量PCR(real time quantitative PCR)"或"TaqMan PCR(以美国PE公司商标命名)".该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针,巧妙地把核酸扩增(PCR)、杂交及光谱技术结合在一起,从而实现了对目的基因的准确定量检测,正发展成为临床实验诊断的常规技术.
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实时定量RT-PCR检测不同肝病患者外周血甲胎蛋白mRNA的表达水平
甲胎蛋白(AFP) mRNA是肝组织的一个特异性表达基因,近年来发现其在部分肝癌患者外周血中呈阳性表达,引起了许多学者的关注[1,2].我们采用实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对不同肝病患者的外周血AFP mRNA进行了定量检测,以探讨其在诊断肝癌微转移病灶的可行性.