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无创产前基因诊断方法研究进展
产前诊断又称宫内诊断,是指在胎儿出生前,通过影像学、生物化学、细胞遗传学以及分子生物学等技术,了解胎儿宫内的发育状态,对先天性缺陷或遗传性疾病作出诊断.产前诊断是预防严重遗传性疾病或先天性缺陷胎儿出生的一项有效而可靠的措施,是优生和提高人口质量的重要保障之一.产前诊断方法根据采样途径或诊断方法是否构成对胎儿的影响可分为创伤性和无创性.前者主要包括羊膜腔穿刺、绒毛取样、脐血取样、胎儿镜和胚胎活检等,虽然诊断精确度较高,但可导致流产或感染等并发症,常在高危孕妇中实施;后者包括超声波检查、直接从母体外周血中获取胎儿细胞、胎儿游离DNA[1]或游离RNA检测,该法既能行产前诊断又无危险性,尽早发现和杜绝异常胎儿,亦适用于大群体筛查,达到优生目的.近年来,胎儿游离核酸和有核细胞结合基因检测取得较大进展,本文就无创产前基因诊断的研究材料、方法学及其产前诊断中的应用进行综述.
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超声诊断创伤性妊娠子宫破裂1例
患者女,23岁.因行刮宫手术后下腹部剧烈疼痛到我院就诊,急行床旁B超检查.超声表现(图1,2):子宫增大,宫底于脐下二指,子宫下段浆膜线连续性中断,子宫肌壁回声偏低,下段右侧后壁呈不规则低至无回声,范围4.0cm×3.0cm×2.6cm,此处壁间及宫腔内、颈管内均可见等号样条索状回声,壁毛糙,中心为无回声,部分条索中心有气体样回声.宫腔内近前壁处可见片状高回声.双卵巢均显示不清.盆腔内左侧紧贴子宫后方见一模糊胎儿图像,其颅骨环不完整,脊柱连续性差,仅见一长为2.1cm的长骨,余长骨均未显示,胎儿内脏亦显示不清.腹盆腔内均可见液性暗区,大深度肝肾间隙为2.6cm,下腹腔肠间隙为3.6cm.超声诊断:①子宫破裂;②部分胎儿游离于盆腔内;③子宫下段肌壁间及宫腔内、颈管内异常回声(肠管嵌入);④宫腔内残留物;⑤腹盆腔积液.术中所见:子宫孕14周大小,子宫右后下段"Y"字破口,长4.0cm,右侧阔韧带有撕伤,小肠回区40.0cm呈淤紫样坏死,肠系膜缺损,小肠呈游离状,破损处肠液溢出.行子宫修补术及部分小肠切除、肠吻合术,术中于盆腔内取出不完整残缺胎儿.
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超声诊断妊娠子宫破裂一例
孕妇31岁,因妊娠30周,突感下腹撕裂性剧痛2 h入院.临床检查:患者烦躁不安、面色苍白、出冷汗,呼吸急促、脉搏增快,血尿.腹部检查:全腹压痛明显,腹壁强直,脐部见一环形凹陷,呈"葫芦形".胎动停止、胎心音消失;触诊触及胎动,听诊未闻及胎心音.临床拟诊:先兆流产,子宫破裂.超声检查(图1):子宫收缩呈球形,偏于一侧,可见子宫破裂口,浆膜层连续性中断,胎头变形,胎儿与子宫腔分离,位于腹腔内,胎儿四周环绕无回声区,且胎头及胎腹旁可探及蠕动的肠管回声.胎心搏动未见,胎膜囊不完整,胎盘亦位于腹腔内,混杂于肠管间,腹腔内可探及程度不等的不规则无回声区,深处约7.0 cm.彩色多普勒血流成像(CDFI):胎心区未见血流信号;脐带内未见血流信号.超声诊断:死胎,胎儿游离于子宫肌层外(提示子宫破裂).急诊手术中见患者子宫收缩呈球形,如孕3个月大小,偏于一侧,仔细检查可见子宫破裂口,浆膜层连续性中断,胎头变形,胎儿位于腹腔内,胎儿四周环绕羊水及血液,胎盘娩出至腹腔,
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孕妇血浆中游离DNA在先天性软骨发育不全产前诊断中的应用
基因病的产前诊断多采取在妊娠期取羊水或绒毛细胞进行基因分析的方法.但这2种取材方法均具有创伤性,可能对胎儿及孕妇生命造成危害.Lo等[1]研究证明,孕妇外周血中存在胎儿游离DNA,为单基因病的非侵入性产前诊断提供了一种新的途径.为探讨该途径临床应用的可行性,我们采用Qiagen公司的DNA分离试剂盒,结合基因扩增限制性内切酶分析技术成功地对1例先天性软骨发育不全(achondroplasia,ACH)的孕妇进行了非侵入性产前诊断.
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“单亲二倍体导致的NIFTY结果与核型分析结果不一致”的点评
1 原文摘要Uniparental disomy (UPD) is an uncommon chromosome condition,but UPD involving chromosome 21 is rarely reported.We reported here a case who had first trimester screening test for Down syndrome,chorionic villus sampling for fetal karyotyping,quantitative fluorescence polymerase chain reaction (QF-PCR),as well as non-invasive prenatal testing (NIPT) by maternal plasma sequencing.There were discordant results between fetal karyotyping and NIPT due to UPD 21combined with confined placental mosaicism of trisomy 21.This demonstrated that it is possible to detect placental mosaicism by NIPT,but further studies are required to confirm its sensitivity.Therefore,all positive NIPT results must be confirmed by conventional invasive test and karyotyping.QF-PCR has the additional benefit in diagnosing UPD.2论文核心内容及点评本文发表于2013年3月的《Prenatal Diagnosis》杂志.基于孕妇外周血胎儿游离DNA的非侵入性产前检测胎儿非整倍体技术(NIFTY)是当前逐渐走向临床的新技术.这一技术避免了因侵入性取材过程导致的胎儿流产风险,在分子水平实现了快速、早期检出高危非整倍体胎儿的目标.
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非侵入性产前诊断研究及临床应用新进展
由于环境情况不良、生育年龄延迟,出生缺陷的发病率在升高.非侵人性产前诊断是研究热点.通过分离母体血中胎儿细胞、经宫颈收集胎儿细胞,由母体血清中提取胎儿游离DNA及mRNA可对染色体异常疾病、基因异常疾病及RhD血型进行的产前诊断称之为非侵入性产前诊断(non- invasive prenatal diagnosis,因该检查手段并非完全无创,故认为非侵入性产前诊断更为合适)[1].多认为非侵人性产前诊断可以早期对胎儿异常做出较为安全有效的诊断,有利于降低出生缺陷.
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非侵入性产前筛查
围产期出生缺陷与死亡一直是世界范围待解决的难题。在发达国家和中国内地的围产儿死亡原因中,严重的出生缺陷仍占据第一及第二位,因此,预防和减少出生缺陷是降低围产儿死亡率的主要途径之一。目前,在临床上产科医生较为广泛用于检查、诊断及监测胎儿在母体宫内发育的工具是经腹及阴道超声扫描[1-6]。由于现代科技的发展,用于产前检查及产前诊断的超声仪发展日臻完善。自20世纪80年代初至今,由于人们对超声检查的认识及认可,对于超声检查是否会对人类胚胎造成畸形的研究日益增多,虽然部分学者仍持谨慎态度,但大多亦认为其安全性和准确性较高。其中一些国家,如英国及澳大利亚等,近90%~100%的孕妇在妊娠期接受至少1次的超声检查,而大多数欧美国家及现时中国大部分南方城?均把产前超声视为产前常规检查项目之一[2-3]。国家卫生部2003年5月1日颁布实施了《产前诊断技术管理办法》,建议在整个妊娠期中常规进行3次超声检查,时间分别为孕11~13+6周[测量胎儿颈部透明层(nuchal translucency,NT)和筛查唐氏综合征]、孕19~22周[系统筛查胎儿畸形(金标准)]及孕29~32周[7]。此外,作为胎儿宫内诊断的方法目前有侵入性和非侵入性两大类。随着分子生物学技术和医学遗传学的发展,产前诊断技术不断朝早期、快速、准确及无创的方向发展,使越来越多的出生缺陷能够在胚胎发育的较早期被安全及准确地诊断出来。其中非侵入性技术主要包括经宫颈脱落滋养细胞、孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿游离 DNA 的检测等[5-7]。
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检测孕妇血循环中胎儿DNA进行无创产前诊断的研究进展
孕妇血循环中胎儿DNA以两种形式存在,一是存在于进入母体血循环中的胎儿的完整细胞内,二是游离于母体血浆中.分析孕妇外周血循环中完整胎儿细胞DNA或游离DNA,是无创性产前诊断领域的一个日益引人注目的技术,这一技术可以单独使用或与其他无创性检查方法,如超声诊断、孕妇血清学分析等联合应用,使无创性产前诊断技术提高到一个新的水平.近年采用先进的磁珠细胞分选法(magnetic cell sorting, MACS)、流式细胞分选术和激光捕获显微分离(laser capture microdissection, LCM)技术富集分离胎儿细胞,发现孕妇血中存在较丰富的胎儿游离DNA,只要利用足够敏感的方法,就能对胎儿性连锁疾病和其他一些遗传性疾病进行无创早期诊断.本文就母血中胎儿DNA的存在形式、分析方法以及临床应用的进展情况综述如下.
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孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用
唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征,是新生儿常见的先天性染色体病,其发病率约为1/600~1/800[1],高龄产妇多发.新生儿出生后多智力低下,给社会和家庭带来了极大的负担,本研究采用实时定量PCR技术,测定正常孕妇及妊娠唐氏综合征患儿的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的变化,旨在寻找一种非创伤性、快捷、经济的产前筛查唐氏综合征的新指标.
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残角子宫妊娠破裂误诊的教训
[病例] 26岁,孕2产0.1997年3月9日因停经15+4周,下腹疼痛4~5天,加重伴肛门坠胀感,恶心、呕吐1天由外院转入.既往月经规律,末次月经1996年11月21日.外院B超检查示腹腔内出血,胎死宫内,前置胎盘状态.既往无痛经史,1996年6月自然流产1次.查体:体温35℃,脉搏120/min,血压68/45 mmHg.重度贫血貌,腹稍膨隆,腹肌紧张,全腹压痛、反跳痛,移动性浊音(+).妇科检查:宫颈举痛阳性,后穹窿饱满,子宫如孕3+月大,触痛,双附件区压痛.血白细胞9.9×109/L,中性粒细胞0.69,淋巴细胞0.31,血红蛋白49 g/L.拟诊:中期姓娠胎死宫内,腹腔内出血、失血性休克,重度贫血.予输血800 ml,输液2 000 ml,3小时后在全麻下行剖腹探查术.术中见腹腔积血3 500 ml,双角子宫(单宫颈),右侧子宫6.0 cm×5.0 cm×4.0 cm,表面破口4.0 cm,破口处可见胎盘,胎膜完全包裹胎儿游离于腹腔内,胎体长14 cm,有正常的附件.左侧另有一正常大小的子宫及左侧附件,切除右侧残角子宫及右附件.术后剖视:妊娠子宫和宫颈不相通.术后诊断:右侧残角子宫妊娠破裂.
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超声诊断中期妊娠残角子宫破裂 1例
患者,女,23岁,孕1产0,因停经3.5个月,下腹部坠痛1 d急诊入院.超声显示:子宫前位,轮廓清晰,形态饱满,宫体大小61.5 mm×61.9 mm×45.2 mm,肌层回声欠均匀,内膜厚 18 mm;紧贴子宫左外上方可见一类圆形包块,内可见一胎儿,双顶径 31.2 mm,颅骨环规整,股骨长径17.8 mm,未见胎动及胎心搏动,胎儿脊柱连续性好;羊水量大深度35 mm;胎囊外部分包有肌性组织,其厚度约1.5 mm,后壁毛糙,有胎盘组织覆盖;双卵巢显示不清,腹腔、肝肾间隙、脾肾间隙及子宫周围均可探及液性暗区,大深度51 mm.超声诊断:(1)异位妊娠破裂(腹腔妊娠破裂可能);(2)盆腹腔积液.急诊手术所见:子宫左侧可见一残角子宫,直径约6 cm,与正常子宫腔不相通,破裂口位于宫角处,有活动性出血,胎盘附着于残角子宫底,胎儿游离于腹腔,男性,长约150 mm,术后诊断:左侧残角子宫妊娠破裂.
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孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究进展
当前,产前诊断越来越受到人们的重视,产前诊断是减少出生缺陷儿的有效措施之一.分为有创与无创性,有创性包括:羊水穿刺、绒毛活检取样(CVS)、胚胎(胎儿)镜、经皮胎儿脐血穿刺等,因为具有创伤性,操作时可能对母亲和胎儿造成一定的风险,因而在临床上限制了其使用.近年来,无创伤性产前诊断越来越受到人们的关注,而孕妇外周血中的胎儿游离DNA的发现为无创伤性产前遗传病诊断提供了重要的研究方法,由于胎儿游离DNA在孕妇外周血中具有含量较高且产后很快被清除等优点,使之成为无创伤产前诊断方法之一.笔者就国内外相关内容的研究进展作如下综述.
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母体血浆中胎儿游离DNA的研究现状及进展
据统计,我国每年约有100万缺陷儿出生,不但影响了人口素质,也给社会和家庭带来了沉重的经济和精神负担.进行产前筛查和诊断是减少和避免出生缺陷的有效干预手段.传统的产前诊断取材主要包括绒毛、脐血和羊水等,这些胎儿样本均要通过有创性技术获得,增加了感染、流产、早产甚至胎儿宫内死亡的风险.近年来的研究发现在妊娠母体的血浆中存在游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA)且含量相对丰富,这一发现为开展无创性的产前诊断提供了新的途径.本文将针对母体血浆中胎儿游离DNA的生物学特性,尤其是在遗传性疾病产前诊断中的研究新进展作一综述.