首页 > 文献资料
-
母体血浆靶向性平行测序应用于无创性单基因遗传病的产前诊断
本文发表在2012年的《Clinical Chemistry》上.目前,通过对母体血浆DNA的深度测序可以确定胎儿的遗传基因组和突变基因组,这项技术在许多单基因遗传疾病的无创性产前诊断(NIPD)中有重要应用.在此过程中,相关单倍体剂量(RHDO)分析是十分关键的一步,即通过父母的SNP深度测序数据推断出母体外周血中胎儿的单倍型.临床上筛选致病基因位点时,RHDO的靶向应用可能会减少数据分析的成本及复杂性.因此,证明靶向RHDO分析在NIPD中的可行性是十分必要的.
-
利用孕妇外周血可检测胎儿性别
<胎儿诊断与治疗>杂志2007年第22卷第5期377~382页报道,可以利用母体血浆中游离的胎儿DNA 检测胎儿性别.
-
检测孕妇血循环中胎儿DNA进行无创产前诊断的研究进展
孕妇血循环中胎儿DNA以两种形式存在,一是存在于进入母体血循环中的胎儿的完整细胞内,二是游离于母体血浆中.分析孕妇外周血循环中完整胎儿细胞DNA或游离DNA,是无创性产前诊断领域的一个日益引人注目的技术,这一技术可以单独使用或与其他无创性检查方法,如超声诊断、孕妇血清学分析等联合应用,使无创性产前诊断技术提高到一个新的水平.近年采用先进的磁珠细胞分选法(magnetic cell sorting, MACS)、流式细胞分选术和激光捕获显微分离(laser capture microdissection, LCM)技术富集分离胎儿细胞,发现孕妇血中存在较丰富的胎儿游离DNA,只要利用足够敏感的方法,就能对胎儿性连锁疾病和其他一些遗传性疾病进行无创早期诊断.本文就母血中胎儿DNA的存在形式、分析方法以及临床应用的进展情况综述如下.
-
基于无创性产前基因检测的遗传咨询必须监管其科学性
Chitty和Kroese撰写的评论“如何实现基于无创性产前基因检测(non-invasive prenatal testing ,NIPT)的遗传咨询”中,重申了NIPT的有效性优于传统的产前筛查方法,NIPT检测的是母体血浆中的游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA, cffDNA)。然而,这个比较是基于Norton等进行的一项研究,该研究比较了NIPT与标准的妊娠早期筛查方法,并没有与其他有更高敏感度及特异度的方法进行比较。Norton等的研究团队还进行了一项包含了452901例孕妇的研究,其中74%的孕妇年龄小于35岁,NIPT(基于cffDNA)的异常染色体核型的检出率为75.4%,略低于标准的联合筛查方法(81.6%)。总体来看,联合筛查的检测效能高于NIPT。
-
孕妇血浆和血清中胎儿DNA在产前诊断中的应用
长久以来许多学者致力于研究利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行非创伤性产前诊断,虽然取得了一些重要进展,但母血中的胎儿细胞数量稀少,富集效率不高且价格昂贵,成为常规应用的主要障碍.母体血浆中存在较高浓度胎儿DNA的发现,为非创伤性产前诊断开辟了一个新途径.
-
067母体血浆抑制素A水平对于先兆流产妊娠结局的预见
-
早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的检测
目的:建立一种检测早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的新方法.方法:从50例妊娠7、8、9周的孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测其中的Y性别决定区(SRY)基因.结果:38例早孕孕男胎妇女中32例血浆中出现SRY基因,灵敏度84.21%;12例早孕孕女胎的妇女血浆中均未出现SRY基因,特异度100%.结论:用实时荧光定量PCR技术可用来检测早孕妇女血浆中的胎儿游离DNA,这对无创性早期产前基因诊断方法的建立具有重大意义.
关键词: 实时荧光定量聚合酶链反应 胎儿游离DNA 母体血浆 Y性别决定区基因 -
高通量测序技术在无创性检测胎儿染色体非整倍性中的应用
目的 探讨应用高通量测序技术对孕妇血浆胎儿游离DNA进行无创性胎儿染色体非整倍性检测的可行性和准确性.方法 采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体的非整倍性信息.同时行羊水常规染色体核型分析.统计分析两种方法检测结果的一致性.结果 100名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术检测出8例胎儿染色体非整倍性高风险.采集的100份羊水标本均培养成功,成功率为100%.共检测出7例胎儿染色体核型异常,其中染色体非整倍体异常6例(3例47,XN,+21;1例47,XN,+18;1例47,XN,+13;1例47,XXY;1例47,XXX);嵌合体1例(46,XN[2]/47,XN,+13[33]/47,XN,+13,add(15) (p12) [15]).无创基因检测与羊水染色体核型分析两种方法的κ=0.928(P <0.05),检测结果具有一致性.无创基因检测技术的假阳性率1.01%,灵敏度100%,特异度98.9%,阳性预测值87.5%.结论 应用高通量测序技术在染色体非整倍性无创性检测具有很高的灵敏性,假阳性率很低,在胎儿染色体非整倍性疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.
-
应用实时荧光定量PCR技术检测母体血浆中胎儿游离mRNA的研究
目的:探讨孕妇血浆中胎儿游离mRNA含量变化作为产前筛查指标的可行性.方法:选择39例早中孕期(8~14周)孕妇为研究对象,其中15例行人工流产(A组),11例为稽留流产或胚胎发育异常(B组),13例为正常早孕期单胎孕妇(C组),提取其外周血血浆游离mRNA,应用实时荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测胎盘来源的hPL,β-HCG,TFPI2基因,以此确定母体血浆中的胎儿游离mRNA含量,同时检测代表母体与胎儿总游离mRNA的18srRNA基因作为内参.结果:3组孕妇血浆标本中均检测到hPL,β-HCG,TFP12基因及18srRNA基因,且不依赖于胎儿性别,3组样本表达量有差异,B组TFPI2基因显著高于A、C组(P<0.01).结论:实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异性较高,作为非创性产前基因诊断的一种方法可应用于临床.胎儿游离mRNA可能成为产前筛查的有效指标.
关键词: 胎儿游离mRNA 母体血浆 实时荧光定量PCR技术 -
孕妇血浆中胎儿DNA的数量变化的研究
目的:探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律.方法:提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析.结果:在怀男胎的孕妇外周血中均检测到了SRY基因,而在怀女胎的孕妇中未检测到.胎儿游离DNA早出现的时间平均为7.7周,SRY基因拷贝数平均为5.53copies/ml.随孕期的增加,母血浆中胎儿DNA的含量在逐渐增加,并得出各孕周的标准参考值.在分娩后母血中胎儿DNA的含量就显著下降,到分娩后第二天就完全不能检测到.结论:孕妇外周血浆中游离DNA的含量变化具有一定的规律,可以利用其进行无创伤性产前诊断.
-
母体血浆中胎儿游离DNA的研究现状及进展
据统计,我国每年约有100万缺陷儿出生,不但影响了人口素质,也给社会和家庭带来了沉重的经济和精神负担.进行产前筛查和诊断是减少和避免出生缺陷的有效干预手段.传统的产前诊断取材主要包括绒毛、脐血和羊水等,这些胎儿样本均要通过有创性技术获得,增加了感染、流产、早产甚至胎儿宫内死亡的风险.近年来的研究发现在妊娠母体的血浆中存在游离胎儿DNA(cell-free fetal DNA)且含量相对丰富,这一发现为开展无创性的产前诊断提供了新的途径.本文将针对母体血浆中胎儿游离DNA的生物学特性,尤其是在遗传性疾病产前诊断中的研究新进展作一综述.
-
孕妇血浆胎儿游离DNA检测对胎儿染色体拷贝数异常的诊断意义
目的 探讨应用孕妇血浆胎儿游离DNA高通量基因测序技术检测胎儿染色体拷贝数的准确性和实际临床可行性.方法 选择需做产前诊断的153名孕妇,采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数;同时行羊膜腔穿刺进行胎儿染色体核型分析.结果 153名孕妇中,母体血浆游离DNA平行测序技术共检测出6例染色体异常高风险胎儿.羊水分析证实6例均为染色体异常,其中非整倍体5例,分别为47,XYY; 45,X;47,XY,+18;47,XY,+21以及47,XY,+13;染色体结构异常1例,核型为46,XY,der (13; 21)(q10; q10),+21.另检出染色体多态性3例(1例46,XY,21p+;2例46,XY,Yqh-).两种方法检测胎儿染色体拷贝数异常结果一致.结论 母体血浆游离DNA高通量测序分析可以用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,具有无创、灵敏度高、特异性强等优点,在胎儿染色体拷贝数异常疾病的产前检测中具有广泛的应用前景.
-
用实时荧光定量PCR方法检测母血中的胎儿SRY基因
目的从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA,并加以鉴定,预防X连锁遗传病患儿的出生. 方法从孕早期、中期共300名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)的方法检测其中的Y性别决定区(sex-determining region Y, SRY)基因. 结果孕早期怀男胎的孕妇82名,70名 SRY基因阳性,其平均浓度为(58.82±20.90)拷贝/ml,中位数为58.50拷贝/ml.孕中期怀男胎的孕妇90名, SRY基因均为阳性,平均为(152.08±62.61)拷贝/ml,中位数为149.35拷贝/ml.怀女胎的孕妇均为阴性. 结论用实时荧光定量PCR的方法早在孕42天的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿 SRY基因,随孕周的增加,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加.实时荧光定量PCR技术在进行无创伤性产前性别诊断中有重要的价值.
关键词: 实时荧光定量聚合酶链反应 母体血浆 Y性别决定区基因 -
荧光定量PCR法在不同孕期通过母体血浆检测胎儿RhCcE血型
目的 比较荧光定量PCR法(FQ-PCR)在不同孕期通过母体血浆检测胎儿RhCcE血型的准确性.方法 随机采集孕期8 ~38周的孕妇外周血334份,分离血浆,提取游离胎儿DNA,用FQ-PCR方法检测胎儿RhCcE血型,利用胎儿脐带血标本检测的结果做验证.结果 在妊娠8 ~≤12、13~≤20及21~38周的孕妇中,RhCcE血型各基因型的FQ-PCR检测结果与脐带血血清学检测结果比较:C基因型正确率分别为94.1%(16/17)、91.6% (22/24)、100% (18/18),漏检率为5.9%( 1/17)、8.3%(2/24)、0% (0/18);c基因型正确率分别为97.6%( 41/42)、100% (55/55)、100% (30/30),漏检率为2.4% (1/42)、0% (0/55)、0% (0/30);E基因型正确率分别为97.8% (46/47)、98.4% (60/61)、100%( 35/35),漏检率为2.1% (1/47)、1.6%(1/61)、0%(0/35).结论 随着孕期的增加,FQ-PCR法检测胎儿RbCcE血型的准确性相应增加,孕晚期时达100%.
-
不同妊娠状态下母体循环中胎儿游离DNA-SRY基因的定量检测
目的 依据孕妇血浆中存在游离胎儿DNA的理论,从孕妇外周血浆中分离出胎儿DNA并加以鉴定,预防X连锁遗传病患儿的出生.方法 从孕早期、中期及晚期共80名孕妇外周血浆中分离胎儿DNA,采用实时荧光定量PCR (real-time fluorescence quantitative polymerase chain-reaction,FQ-PCR)方法对不同妊娠状态下孕妇外周血中游离的胎儿DNA(fDNA)进行定量分析,初步探讨游离fDNA在不同妊娠状态下的浓度变化,为尽早应用于临床提供科学依据.结果 早孕组28例血浆标本中有25例检测到SRY基因,其平均浓度为58.82 copies/ml,实测浓度范围为33.7~126.2 copies/ml;中孕组20例血浆标本中均检测到SRY基因,其平均浓度为152.08 copies/ml,实测浓度范围为37.7~390.2 copies/ml;晚孕组32例血浆标本中均检测到SRY基因,其平均浓度为212.34 copies/ml,实测浓度范围为87.90~493.56 copies/ml.组间两两比较,差异有统计学显著性意义(P<0.01).结论 用实时荧光定量PCR的方法早在孕62 d的孕妇外周血浆中就可以检测到胎儿SRY基因,随孕周的增加,母血中胎儿DNA的量也在逐渐增加.实时荧光定量PCR技术在进行无创性产前诊断中有重要的价值.
关键词: 实时荧光定量聚合酶链反应 母体血浆 Y性别决定区基因 -
妊娠与甲状腺功能减退
妊娠时,甲状腺除受下丘脑一垂体一甲状腺轴调控外,尚受胎盘一甲状腺轴的调控.胎盘细胞可合成大量人绒毛膜促性腺激素(hCG),hCG与促甲状腺激素有相同的α亚单位、相似的β亚单位和受体亚单位,所以对甲状腺细胞TSH受体有轻度的刺激作用,并具有TSH样的生物活性,尽管活性仅是TSH的1/4 000,然而在妊娠早期(5周内),母体血浆中hCG浓度以每1.7 ~2天增加1倍的速度递增,此时游离T3(FT3)、游离T4(FT4)升高.妊娠妇女血清TBG浓度从孕6~ 10周开始增加,在孕20~24周达到平台,并持续妊娠的全过程,血清TBG达到非妊娠时基值的1.5 ~2倍[1],这是因为雌激素引起肝脏TBG合成增加以及TBG的糖基化使TBG代谢清除率减慢和半衰期延长[2].由于TBG浓度的增加,血清总T4 (TT4),总T3(TT3)的浓度增加,产生高甲状腺素血症.到妊娠晚期FT3,FT4水平开始下降,并维持在正常范围或低界水平.