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茶多酚抗矽作用的实验研究
矽肺的自由基理论逐渐完善,矽肺的抗氧化治疗取得一定进展[1],如汉防己甲素(简称汉甲)就是其中的代表[2].但人或动物长期服用汉甲后,会出现不同程度的消化道刺激症状及肝脏损害[3],限制了它的广泛使用.近年来,从茶叶中分离提纯的一类无毒无害的多酚类化合物--茶多酚(green tea polyphenols,GTP)因其强大的抗氧化能力,越来越受到医学界的重视.GTP的主要成分是儿茶素类化合物,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)在GTP中占50%～60%.儿茶素类化合物主要结构是2-苯基苯并吡喃.它含有多个酚羟基,容易氧化而释放H+,竞争性地与自由基及氧化物结合,阻断自由基反应链[4],抑制脂质过氧化,具有广泛的生物学效应.本实验根据矽肺的自由基理论,利用GTP清除自由基和抗氧化活性,研究其对体外染尘的大鼠肺泡巨噬细胞(AM)的保护作用及对染尘大鼠肺纤维化的抑制作用.
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汉防己甲素的遗传毒性评价
中药汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)是从防己科植物根内提出的一种生物碱,属于双苄基异喹啉类化合物,药理作用广泛,在心血管、抗炎、抗风湿、抗纤维化和抗癌等方面具有良好的应用前景,我国的70年代后期,开始用于矽肺的治疗[1-2],但是对Tet的遗传毒性研究尚不全面,国内外报道较少,相关文献资料提出Tet具有遗传毒性[3-7],所以对Tet安全性应进行重新评价.
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汉防己甲素诱导大鼠原代肝细胞线粒体途径的凋亡:依赖于caspase和由Endonuclease G(Endo G)介导的不依赖于caspase的凋亡途径
目的汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)具有广泛的药理学作用,但其肝毒性机制尚不明确.本实验主要探讨了汉防己甲素诱导的大鼠原代肝细胞线粒体功能紊乱和经由线粒体途径的细胞凋亡.
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汉防己甲素联合六味地黄丸治疗矽肺的临床疗效观察
目的:探讨汉防己甲素联合六味地黄丸治疗矽肺的临床疗效.方法:选择2016年3月至2017年3月我院收治的46例矽肺患者作为研究对象,并随机分为观察组和对照组,对照组患者给予矽肺宁片治疗,观察组给予汉防己甲素联合六味地黄丸治疗,比较两组的治疗效果.结果:观察组的咳痰、咳嗽、胸痛、呼吸困难等指标的改善情况显著优于对照组,组间比较具有统计学意义(P＜0.05);观察组患者的呼吸道感染情况要显著好于对照组,组间比较具有统计学意义(P＜0.05).结论:汉防己甲素联合六味地黄丸治疗能显著改善矽肺患者的临床症状,提高疾病的治疗效果,改善患者的肺功能指标,值得在临床上广泛推广.
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汉防己甲素对白血病细胞株U937逆转耐药机制的研究
不同浓度Ara-c联合TTD干预U937细胞不同时间,高倍显微镜下观察细胞的形态变化,MTT比色法检测细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞周期.发现TTD可能通过将U937细胞阻滞于S期而增强其对Ara-c的敏感性,从而逆转耐药.
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汉防己甲素治疗急性脊髓损伤的实验研究
目的探讨汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)对急性脊髓损伤(Acute spinal cord injuries,ASCI)的保护作用.方法 74只Wistar大鼠随机分为4组,用改良Allen's打击法制备大鼠截瘫模型,造模前各组分别投给相应的药物,伤后1 h、4 h取损伤区脊髓组织进行形态学观察和生化指标测定.结果汉防己甲素能明显降低组织钙总量和MDA含量,防止镁总量和SOD含量的下降,稳定6-Keto-PGF1a/TXB2的比值,减轻组织病损.结论 Tet对ASCI有保护作用,其作用机制为①扩张微血管,改善微循环,逆转ASCI后早期缺血倾向;②抗氧自由基,减轻组织过氧化损伤,稳定生物膜性结构;③减少ASCI后钙内流,从而阻断继发性损伤的链式反应.
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汉防己甲素对人多发性骨髓瘤干细胞增殖、凋亡的影响及机制
目的:研究汉防己甲素对人多发性骨髓瘤干细胞CD138-B细胞增殖、凋亡的影响及作用机制.方法:利用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测汉防己甲素对CD138-B细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测汉防己甲素对CD138-B细胞周期的影响以及药物诱导细胞凋亡的作用;应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测汉防己甲素对CD138-B细胞中裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-Caspase)-3,cleaved-Caspase-9蛋白表达的影响.结果:与空白组及溶剂组比较,10,20,30,40 μmol·L-汉防己甲素处理6,12,24 h对CD138-B细胞的增殖均具有显著的抑制作用(P＜0.01);与空白组及溶剂组比较,汉防己甲素30,40μmol·L-1时,G0/G1期细胞显著增多(P＜0.01),S期细胞明显减少(P ＜0.05,P＜0.01),汉防己甲素10,20,30,40 μμmol·L-1时,细胞凋亡率显著增加(P＜0.01);与空白组及溶剂组比较,20,30,40μmol·L-1汉防己甲素处理后,cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-9蛋白表达显著升高(P＜0.01),10 μmol ·L-1汉防己甲素处理时,cleaved-Caspase-3蛋白表达明显增高(P＜0.05).结论:汉防己甲素通过阻滞细胞周期在G0/G1期抑制CD138-B细胞的增殖,通过活化细胞内与凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3,cleaved-Caspase-9促进细胞凋亡.
关键词： 汉防己甲素 多发性骨髓瘤干细胞 细胞增殖 细胞凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶 -
汉防己甲素对人肝癌HepG-2细胞能量代谢的影响
目的:研究汉防己甲素(TET)对人肝癌HepG-2细胞能量代谢的影响,探讨其抗肿瘤作用机制.方法:采用MTT法对细胞增殖进行检测,运用Seahorse Extracellular Analyzer对细胞能量代谢过称进行全时分析.同时,分别对线粒体膜电位变化、ATP含量、ROS含量和呼吸电子传递链复合酶Ⅰ-Ⅳ(NADH脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、细胞色素还原酶、细胞色素氧化酶)进行检测评价其功能变化.结果:TET可抑制HepG-2细胞增殖,IC50为21.96μmol/L.可减少细胞能量代谢,对细胞基础耗氧量、ATP产量、线粒体储备能、非线粒体产能存在不同程度影响.可破坏线粒体功能,降低跨膜电位、减少ATP含量、减少ROS含量、影响呼吸电子传递链复合酶Ⅰ-Ⅳ活力.结论:TET可通过破坏线粒体功能减少细胞能量代谢,发挥抑制HepG-2细胞增殖作用.
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粉防己碱缓释片的制备及质量控制
粉防己碱(汉防己甲素,tetrandine,Tet)是从防己科植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore.的干燥根中提取的一种双苄基异喹啉生物碱,具有抗心律失常、抗高血压、抗炎、抗肿瘤等作用,特别在心血管、免疫系统及抗肿瘤等领域的疗效引人注目[1].
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SPG膜乳化制备汉防己甲素-丹参酮ⅡA-PLGA二元微球及其体外表征
该实验采用SPG膜乳化法制备了汉防己甲素-丹参酮ⅡA-PLGA二元微球,并对其进行了体外表征的研究.傅里叶红外光谱、DSC分析及X射线衍射分析表明,汉防己甲素和丹参酮ⅡA在二元微球中均是以非晶形式存在且高度分散在PLGA载体中;体外释放试验结果表明该二元微球中汉防己甲素在24 h内的累积释放量为6.44％,17 d内的累积释放量达到89.02％;丹参酮ⅡA在24 h内的累积释放量为3.60％,17 d内的累积释放量达到21.24％,体外释药过程符合Riger-Peppas模型.该二元微球具有一定的缓释作用,可明显降低突释,预期达到延长药效时间、减少给药次数的目的,并为中药复方制剂的研究提供新的思路和方法.
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内嵌汉防己甲素纳米粒的复合微球的制备与体外评价研究
为将汉防己甲素(tetrandrine,Tet)经呼吸道输送至病变部位,该文制备了一种具有“内嵌”聚乳酸羟基乙酸共聚物(PLGA)纳米粒子的复合微球,并对其形貌、释药性能、细胞毒性、细胞摄取等进行了研究.采用乳化扩散溶剂挥发法制备了载Tet的PLGA纳米粒子,以甘露醇为基质,运用喷雾干燥法制备了复合微球.采用扫描电子显微镜、动态光散射激光粒度仪、共聚焦显微镜对其性状、粒径进行表征.运用反相高效液相法对复合微球的载药量、包封率、释药特性进行了考察,采用M TT法对复合微球与Tet原料药的细胞毒性进行了对比,并用共聚焦显微镜观察了微球的细胞摄取行为.结果显示所制备的复合微球粒径为1 ～3 μm,处在佳沉降粒径之间,“内嵌”的PLGA纳米粒子粒径为189 nm,在模拟人肺部环境下,复合微球快速溶蚀,释放出单分散性良好的纳米粒子.与Tet原料药相比,复合微球具有一定的缓释性能,对肺癌A549细胞有更强的细胞毒性.细胞摄取实验表明细胞对纳米粒子有较强的透膜能力,摄取过程呈时间依赖性.该研究为开发新颖的肺癌化疗给药系统提供了依据.
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清胰汤和汉防己甲素对香猪重症急性胰腺炎的治疗作用及血药浓度测定
目的:探讨中药复方清胰汤及汉防己甲素(Tet)单独或联合应用时对香猪重症急性胰腺炎的治疗作用及其机制,并测定血清大黄素、血浆Tet的含量,比较血药浓度与疗效之间的关系.方法:采用胰管逆行加压推注牛磺脱氧胆酸钠诱发香猪重症急性胰腺炎模型,然后将动物随机均分4组,分别接受相应药物治疗;并在造模前后不同时间采集各组动物门静脉和腔静脉血,检测血清淀粉酶活性及白细胞介素1、6(IL-1、IL-6)含量;用高效液相色谱检测其血清大黄素及血浆Tet的含量;光镜观察制模后96h胰、肺等组织病理变化及动物死亡情况.结果:与对照组比较,清胰汤和Tet均可降低重症急性胰腺炎香猪的死亡率(联合组动物全部存活),减轻其胰腺及胰外器官的病理性损伤,显著降低不同时间点血清淀粉酶活性及门静脉、腔静脉血清IL-1、IL-6的含量(P＜0.05或P＜0.01),且联合组各时间点血浆Tet含量显著高于单用药组(P＜0.05或P＜0.01).结论:清胰汤及Tet可通过多个环节治疗重症急性胰腺炎,二者联合应用可提高血药浓度,并在疗效上体现出协同效应.
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环孢菌素A联合汉防己甲素逆转人白血病耐药细胞株K562/A02细胞多药耐药的分子生物学机制
目的 多药耐药(muhidrug resistance,MDR)是导致肿瘤化疗失败的主要原因,本研究探讨环孢菌素A(cyclosporine A,CsA)及汉防己甲素(tetrandrine,Tet)联合应用对人白血病耐药细胞株K562/A02细胞MDR的逆转作用及其分子生物学机制.方法 K562/A02细胞经CsA和Tet作用后,以流式细胞仪(FCM)检测细胞内柔红霉素(daunorubicin,DNR)浓度和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gP)的表达,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测多药耐药基因(muhidrug resistancegene,mdr1)mRNA表达水平.结果 K562/A02细胞内DNR浓度为K562的19%,CsA(1 ms/L)及Tet(0.1mg/L)单独及联合作用K562/A02细胞48 h后细胞内DNR的浓度分别为K562的60%、65%、98%.K562和K562/A02细胞P-gP荧光强度分别为0.18%和96.51%,K562/A02细胞经CsA(1 mg/L)和Tet(0.1 mg/L)单独及联合处理后细胞P-gp荧光强度分别为75.32%,76.86%和48.61%.K562/A02细胞经过两药单独作用后耐药株mdr1-mRNA下调微弱,联合用药下调效果明显.结论 环孢菌素A和汉防己甲素均可逆转白血病细胞的耐药,且两药联合作用逆转效果增强,具有协同作用.
关键词： 环孢菌素A 汉防己甲素 K562/A02细胞 多药耐药 P-糖蛋白 -
汉防己甲素在肿瘤治疗中的研究进展
汉防己甲素(tetrandrine, Tet)，又称粉防己碱，是从中草药粉防己的根块中提取的双苄基异喹啉类生物碱，是粉防己的主要有效成分。早期研究表明Tet具有消炎、镇痛、降压、抗纤维化等广泛的药理作用。临床用于治疗高血压、矽肺、肝纤维化等疾病，已取得了较好疗效。近年来的研究证实Tet是天然的非选择性的钙通道阻滞剂，又是钙调蛋白的拮抗剂，有着良好的应用前景。本文就近年来Tet在肿瘤治疗研究的主要进展作一回顾。
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汉防己甲素对大肠杆菌脂多糖致急性肺损伤大鼠肺微血管通透性的影响
目的 探讨汉防己甲素(Tet)对大肠杆菌脂多糖(LPS)所致急性肺损伤(ALI)大鼠肺微血管通透性的影响.方法 将健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组:即正常组、模型组、Tet预防组和Tet治疗组,除正常组外,其他3组采用大肠杆菌LPS静脉注射造成急性肺损伤模型,Tet预防组和Tet治疗组分别于注射LPS前后30 min内缓慢静脉注射Tet注射液(20 mg/kg),正常组给予等量生理盐水.于初始(0)、0.5、2、4、6 h 5个时间点采集动脉血测定PaO2和PaCO2,实验结束时测定肺湿重/干重比值(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)中性粒细胞百分比;ELISA法测定外周血及BALF中炎症介质TNF-α浓度,采用硫代巴比妥酸比色法测定肺下叶匀浆丙二醛(MDA)含量,取肺上叶行组织病理学检查及肺损伤评分.结果 Tet预防组0.5、2、4、6 h,Tet治疗组2、4、6 h PaO2高于模型组(P＜0.05);两Tet组肺泡灌洗液中TNF-α、MDA含量、W/D比值、肺损伤评分和BALF中性粒细胞百分比均低于模型组(P＜0.05).光镜检查显示两Tet组肺脏病理改变较模型组均有所改善.结论 Tet对内毒素所致急性肺损伤大鼠有保护作用.
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肝纤维化的中医药治疗及其特点
中医药抗肝纤维化的实验研究始于20世纪70年代末,如韩经寰的强肝软坚汤研究.此后有桃仁提取物、桃仁提取物合虫草菌丝、丹参、汉防己甲素等研究.
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泡球蚴组织的体外培养及在药物筛选中的应用
目的 建立泡球蚴组织的体外培养模型,对4种药物的体外抗泡球蚴疗效进行初步筛选. 方法 泡球蚴组织体外培养9周后,分为7组:阿苯达唑组、汉防己甲素组、己酮可可碱组、苦豆碱组、氧氟沙星组、未用药组和二甲基亚砜组.在加药24 h和18 d后,分别取样固定并在电子显微镜下观察超微结构.实验期间对囊泡计数.实验结束后,将培养物接种BALB/c小鼠进行活力测试. 结果 汉防己甲素和己酮可可碱在体外能抑制泡球蚴的生长(P＜0.005),氧氟沙星对泡球蚴没有作用(P＞0.005),苦豆碱能促进泡球蚴生长.接种各药物组培养物的BALB/c小鼠饲养80 d后处死并解剖,发现所有小鼠的腹腔中均有泡球蚴生长. 结论 汉防己甲素和己酮可可碱在体外对泡球蚴有一定的抑制作用,氧氟沙星和苦豆碱对寄生虫无治疗作用.活力测试提示所选药物只能抑制寄生虫生长而无杀灭作用.
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汉防己甲素体外抗泡球蚴作用的研究
目的比较汉防己甲素、阿苯哒唑和汉防己甲素脂质体体外抑制原头节作用,探讨汉防己甲素抗泡型包虫病的作用. 方法将汉防己甲素、阿苯哒唑和汉防己甲素脂质体分别配制成20 μg/ml、40 μg/ml、80 μg/ml 3个浓度,并且选择低、中剂量的汉防己甲素和阿苯哒唑合用,加入RPMI1640培养基中,体外培养泡球蚴原头节,观察计数每天的死亡率,直到所有的用药组头节全部死亡. 结果汉防己甲素、阿苯哒唑低、中、高浓度组与相应的对照组比较,原头节死亡率的差异均有统计学意义(P<0.05);汉防己甲素脂质体在中、高浓度下与对照组的原头节死亡率差异有统计学意义(P<0.05);联合用药组与单药组的原头节死亡率差异亦有统计学意义(P<0.05). 结论汉防己甲素体外具有抑制泡球蚴原头节的作用,并且与阿苯哒唑联合使用时具有一定的协同作用.
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汉防己甲素抗血吸虫病小鼠肝纤维化实验研究
目的探讨汉防己甲素抗血吸虫病肝纤维化作用. 方法采用免疫组化法、VG染色及多媒体病理图文定量分析,观察汉防己甲素治疗前后血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏的病理改变及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量的变化,并与未治疗组及生理盐水对照组比较. 结果汉防己甲素治疗组肝内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量明显下降,与生理盐水对照组及未治疗组比较,差异有显著性(P<0.01). 结论汉防己甲素可降低血吸虫病小鼠肝内Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的含量,从而发挥抗肝纤维化的作用.
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汉防己甲素联合伊马替尼对K562/G01细胞诱导凋亡作用及其相关机制
本研究探讨伊马替尼(imatinib,IM)和汉防己甲素(tetrandrine,Tet)单用和联合应用对K562/G01细胞的凋亡诱导作用及其可能机制.应用MTT法检测IM和Tet单用及联合用药对细胞增殖抑制的作用,用流式细胞术(FCM)检测细胞周期和凋亡率,用实时荧光定量PCR检测caspase-3、BCL-2 mRNA的表达,应用Western blot分析caspase-3、BCL-2蛋白的表达情况.结果表明,1.0 μmol/L IM和/或1.5 μmol/L Tet单用及联合作用于K562/G01细胞48 h后,对细胞增殖的抑制率分别是(22.74±0.05)％、(20.34±0.57)％、(44.28±0.60)％,两药联合应用较单药抑制作用明显.流式细胞术检测显示,Tet作用后细胞向G1/S期转化;Tet 1.5 μmol/L、3μmol/L与1.0μmol/L IM联合应用48 h的早期凋亡率分别为(7.81±0.16)％、(14.10±0.28)％,诱导凋亡作用比单药组明显增加.FQ-PCR和Western blot检测均显示单独应用Tet和IM后caspase-3表达上调,BCL-2表达下调,联合用药组作用更显著.结论:单独应用Tet对K562/G01细胞有诱导凋亡的作用,两药联合应用具有明显的协同效应,且具有时间和剂量依赖性,其机制可能与上调caspase-3 mRNA及其蛋白表达和下调BCL-2 mRNA及其蛋白的表达有关.
关键词： 汉防己甲素 伊马替尼 慢性粒细胞白血病 K562/G01细胞 细胞凋亡
