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卡介菌多糖核酸对PMA诱导的U937细胞功能的影响
目的 研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对PMA刺激的U937细胞分泌炎性因子TNF-α、IL-1β的影响.方法 人髓系白血病细胞U937用PMA诱导成熟后分5组:正常对照组、LPS组、高剂量、中剂量、低剂量BCG-PSN组,培养24h后收集上清,ELISA测定细胞培养上清中TNF-α、IL-1β的浓度.结果 BCG-PSN刺激PMA诱导的U937产生TNF-α明显增多,与正常对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).BCG-PSN刺激PMA诱导的U937产生的IL-1β与正常对照组相比,差异无统计学意义.结论 BCG-PSN可以刺激PMA诱导的U937细胞产生TNF-α,对U937产生的IL-1无明显的影响.
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汉防己甲素对白血病细胞株U937逆转耐药机制的研究
不同浓度Ara-c联合TTD干预U937细胞不同时间,高倍显微镜下观察细胞的形态变化,MTT比色法检测细胞的生长抑制作用,流式细胞术检测细胞周期.发现TTD可能通过将U937细胞阻滞于S期而增强其对Ara-c的敏感性,从而逆转耐药.
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金花茶叶子提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制作用的研究
目的：观察金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞抑制的作用。方法采用CCK-8（ Cell Counting Kit ）试剂盒测量不同浓度的金花茶叶提取物刺激白血病细胞U937细胞24～72h，分5个时段，观察各浓度吸光度值（optical density，OD值）、对应增殖抑制率、佳药效时间。结果 CCK-8测试显示，800ug/ml浓度金花茶叶提取物刺激白血病细胞株U937细胞36h、48h、60h、72h，与正常组细胞数比较，OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义（P＜0.05）；当浓度为400ug/ml时，在48h、60h，OD值和增殖抑制率的差异均有统计学意义（P＜0.05），表明佳药效时间在48h～60h之间。结论高浓度的金花茶叶提取物对人单核细胞白血病细胞株U937细胞有抑制作用。
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冬凌草甲素通过激活ERK途径诱导U937细胞凋亡
目的:研究冬凌草甲素诱导人组织淋巴瘤U937细胞凋亡的机制及ERK激酶在凋亡过程中的作用.方法:噻唑蓝(MTT)法,Hoechst 33258染色法,DNA凝胶电泳及Western blot检测法.结果:冬凌草甲素对U937细胞生长抑制作用呈时间剂量依赖性.27μmol·L-1冬凌草甲素作用细胞12 h后,Hoechst 33258染色细胞,出现明显凋亡小体,并诱导ERK发生磷酸化.ERK磷酸化抑制剂PD98059阻断了冬凌草甲素诱导的细胞生长抑制及DNA片段化.细胞内抑制凋亡蛋白Bcl-XL表达量时间依赖性减少,促凋亡蛋白Bax表达量增加,而ERK抑制剂可逆转这种作用.结论:冬凌草甲素(27μmol·L-1)诱导U937细胞凋亡,这种作用是通过活化ERK激酶,改变其下游Bax/Bcl-XL的表达比率,从而促进U937细胞发生凋亡.
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川芎嗪对白血病U937细胞增殖和凋亡的作用及其机制研究
目的:研究川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对白血病U937细胞增殖与凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:应用CCK-8法检测TMP对U937细胞的增殖抑制,流式细胞仪检测细胞凋亡及周期分布,采用Real-time PCR法检测bcl-2,P27 mRNA表达,Western blot检测bcl-2,caspase-3,cyclin E1,CDK2,P27的表达.结果:川芎嗪呈时间剂量依赖的方式抑制U937细胞的增殖,作用48 h的IC50为160 mg·L-1;并且诱导U937细胞凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期;Real-time PCR及Western blot结果显示川芎嗪使U937细胞中凋亡相关分子bcl-2表达下调,caspase-3上调,周期相关蛋白cyclin E1,CDK2表达下调,P27上调.结论:川芎嗪对白血病U937细胞呈抑制增殖及诱导凋亡的作用,其机制可能是通过影响细胞周期分布,下调bcl-2的表达,终激活caspase-3,启动凋亡途径,诱导细胞凋亡.
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铜绿假单胞菌感染诱导U937细胞凋亡的研究
目的 探讨铜绿假单胞菌 (Pseudomonas aeruginosa,PA) 感染与人巨噬细胞系U937细胞凋亡的关系. 方法 以U937细胞作为PA感染的体外细胞模型,使细胞与细菌浓度比分别为1∶10、1∶20、1∶50及1∶100, 用荧光染色技术、Annexin V/ PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率. 结果 细胞与细菌比例为1∶10时即可引起部分U937细胞发生凋亡,Hoechst 染色法和Annexin-V FITC/PI 双染流式细胞仪检测细胞凋亡率分别为(11.67±1.75)%和(11.68±2.58)%,且U937 细胞凋亡百分率随PA感染剂量增加而增加. 结论 铜绿假单胞菌感染可诱导U937 细胞凋亡,且呈剂量依赖.
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组蛋白H3K27甲基化抑制剂EPZ005687对U937细胞和正常骨髓CD34+细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响
本研究目的在于探讨组蛋白H3 K27甲基化抑制剂新药EPZ005687对白血病细胞系U937细胞和正常骨髓CD34+细胞的凋亡、增殖抑制和细胞周期的影响.以不同浓度的EPZ005687作用于U937细胞,在不同时间点采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡,WST-1法检测细胞增殖,7-AAD流式细胞术检测法检测细胞周期,免疫化学法检测H3K27组蛋白甲基化活性.结果表明:EPZ005687显著诱导U937细胞的凋亡,在0.5、1、5和10 μmol/L浓度下作用于U937细胞48 h后,其凋亡率分别为3.96％±0.79％ 、5.74％±0.73％、13.34％±1.77％和25.24％±2.55％,而EPZ005687对正常骨髓CD34+细胞的凋亡影响较小;在0.5、l、5和10 μmol/L浓度下CD34+细胞凋亡率分别为3.64％±0.62％、4.28％±0.99％ 、6.18％±1.19％和7.56％±1.34％;0.5、1、5和10 μmol/L浓度的EPZ005687分别作用于U937细胞12h至96 h,作用CD34+细胞1至5d,明显观察到EPZ005687显著抑制U937细胞的增殖且呈剂量依赖性,而对正常CD34+细胞的增殖抑制并不明显.细胞周期分析显示,1 μmol/L EPZ005687作用72 h可使U937细胞明显阻滞于C1期(64.18％±13.27％vs 49.43％±12.54％),S期细胞比例明显下降低(9.67％±2.61％vs 15.26％±5.58％),而正常CD34+细胞因多数细胞位于G1期,S期细胞较少而不受其影响.进一步的H3 K27组蛋白甲基化检测分析显示,EZP005687可明显地降低U937细胞的H3 K27组蛋白甲基化,而不降低正常CD34+细胞的H3 K27组蛋白甲基化.结论:组蛋白H3 K27甲基化抑制剂EPZ005687明显抑制U937细胞的增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,但对正常造血细胞CD34+影响较小,可作为一种潜在的血液肿瘤治疗药物应用于临床.
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高三尖杉酯碱联合三氧化二砷诱导人急性髓系白血病U937细胞株凋亡的实验研究
目的:本探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合三氧化二砷(As2 O3)对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测不同浓度HHT及As2O3单用及联用对U937细胞增殖的影响;应用Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术检测二者单用或联用对U937细胞的凋亡诱导作用,Western blot方法检测U937细胞内P-Aktser473、P-AktThr3、BCL-XL、BID、MCL-1与P-MCL-1等蛋白的表达.结果:HHT和As2O3均可明显抑制U937细胞的增殖,诱导其凋亡,两药联合可明显增加U937细胞早期凋亡率,且两药联合作用后U937细胞P-Aktser473、p-AktThr308、MCL-1、P-MCL-1与BCL-XL蛋白表达明显下调,而BID蛋白表达无明显变化.结论:HHT与As2O3联合可通过抑制PI3K/Akt信号通路及下游MCL-1蛋白协同抑制U937细胞.
关键词： U937细胞 高三尖杉酯碱 As2O3 PI3K/Akt信号通路 MCL-1蛋白 -
Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制
目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;AnnexinV/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化.结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01) μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11) μmol/L.0.5 μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0 μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,AnnexinV/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)％,48 h细胞凋亡率为(22.53 ±4.67)％,均高于对照组的(1.35±0.34)％(P＜0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P＜0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)％和(10.07±1.24)％,均高于对照组的(1.32±0.31)％(P＜0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P＜0.05).流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)％,高于对照组的(9.64±0.91)％(P＜0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)％,高于对照组的(5.75±1.28)％(P＜0.05).荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关.
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大黄素对U937细胞凋亡及细胞周期相关基因的影响
本研究旨在观察中药大黄素(Emodin)诱导人髓系白血病细胞株U937细胞的凋亡及凋亡时细胞周期相关基因的变化.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测60 μmol/L大黄素作用前后U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin、野生型P53、P21、TGFβ1、MCL-1等基因表达的变化.结果表明:随着大黄素作用时间的延长U937细胞C-MYC、h-TERT、PIM-2、Survivin基因表达逐渐减少,而野生型P53、P21、TGFβ1基因表达逐渐升高,MCL-1基因表达无明显改变.结论:大黄素诱导的U937细胞凋亡是多因素启动和网络调节的结果.
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硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡机制的深入研究
本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡的机制.通过细胞计数检测细胞增殖,用流式细胞仪分析细胞周期和活性氧(ROS)水平,Western blot检测凋亡信号通路相关蛋白的表达.结果表明,10 nmol/L硼替佐米联合50 nmol/L阿糖胞苷对U937细胞有明显增殖抑制作用.两药联合协同诱导细胞凋亡.两药联合较单药处理能明显协同增加U937细胞ROS的水平,并能明显上调U937细胞中p-P38,p-JNK表达,下调p-ERK的表达.结论:硼替佐米联合阿糖胞苷协同诱导U937细胞凋亡,其机制可能与ROS的损伤导致JNK、P38通路的激活和ERK的下调,从而影响细胞线粒体途径有关.
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硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷诱导U937细胞凋亡的研究
本研究探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米联合低浓度阿糖胞苷(Ara-C)对U937细胞株的作用及机制.通过细胞计数,细胞形态学检查,流式细胞术和Western blot方法检测硼替佐米(10 nmol/L)和(或)Ara-C( 50 nmol/L)处理前后U937细胞的增殖抑制和凋亡及其机制.结果显示,硼替佐米和Ara-C单药均能抑制U937细胞增殖,两药联合的抑制作用更加明显,细胞增殖抑制率在24和48h分别达(55.00±2.81)％和(70.02±3.33)％；硼替佐米联合低浓度Ara-C能协同诱导U937细胞凋亡,促使线粒体跨膜电位下降,阳性细胞率达(38.70±1.54)％.两药联合应用还能协同诱导caspase-9,-8,-3的活化.结论:硼替佐米联合低浓度Ara-C主要通过线粒体途径、可能还通过死亡受体途径诱导U937细胞凋亡.
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全反式维甲酸联合地西他滨对U937细胞系和初发老年AML患者的作用及机制研究
目的:分析全反式维甲酸(ATRA)联合地西他滨(DAC)对p16INK4a(p16)和维甲酸受体β(RARβ)的DNA甲基化以及基因表达的影响,探讨2药联合对U937细胞和老年初发急性骨髓系白血病(AML)患者的抗肿瘤作用及其机制.方法:采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测p16和RARβ的表达,通过甲基化特异性PCR分析p16和RARβ启动子的甲基化水平,应用WST-1法和流式细胞术分别检测ATRA联合DAC对U937细胞的增殖作用及其对分化、凋亡和细胞周期的影响.结果:ATRA联合DAC可以诱导DNA去甲基化,增强p16和RARβ的基因表达;2药联合导致U937细胞的生长抑制和分化、凋亡和周期阻滞;此外,对于不能耐受标准化疗的老年AML患者,ATRA联合DAC联合方案在发挥抗肿瘤活性的同时,伴随着p16和RARβ表达水平的上调,以及骨髓原始细胞的减少,且患者显示良好的耐受性.结论:ATRA联合DAC方案,作为诱导分化和去甲基化的联合治疗策略,具有抗AML作用潜能,有助于优化老年AML治疗策略和改善临床预后.
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吲哚美辛对白血病细胞增殖和细胞衰老的影响
目的:观察吲哚美辛对白血病细胞体外增殖与细胞衰老的影响,探讨非甾体类抗炎药物对白血病的辅助治疗作用.方法:吲哚美辛30 μmol/L处理U266、K562、U937细胞株,连续培养7d后,以台盼蓝拒染法检测细胞活率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,用细胞衰老检测试剂盒检测各组细胞各时间点(0、4、7 d)的细胞衰老情况,RT-PCR检测增殖抑制基因P21、P27 mRNA的表达水平.结果:药物作用后U266、U937的细胞活率显著降低(P＜0.01).K562细胞活率未发生显著变化.U266、U937细胞均于G2/M期发生不同程度阻滞,K562细胞周期变化不明显.U266、K562、U937的细胞凋亡率升高(P＜0.01).药物处理后,除U937细胞的P27变化不明显外,U266和K562细胞系的P21和P27 mRNA表达水平均显著增高.K562、U937细胞衰老率明显增高(P＜0.01).结论:吲哚美辛对白血病细胞具有抑制作用,但其机制可因白血病细胞的种类不同而异;提示非甾体类抗炎药物可对白血病起辅助治疗作用,但需根据白血病的类型适当选择.
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Toll样受体在U937细胞的表达及其作用研究
本研究探讨急性髓系白血病的免疫治疗中以Toll样受体(TLRs)为靶点的可能性,研究人急性髓系白血病U937细胞TLR的表达及TLR 8受体激动剂ssRNA40/LyoVec对其增殖、凋亡和细胞周期的影响.运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测U937细胞TLR 1-9 mRNA的表达,用流式细胞术检测TLR 8的表达.用不同浓度的TLR 8激动剂ssRNA40/LyoVec作用于体外培养的U937细胞后,采用CCK-8法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期.结果表明:U937细胞表达TLR 1-9,TLR 8激动剂ssRNA40/LyoVec作用于U937细胞明显地抑制了U937细胞生长,抑制率可达70%,且呈明显的量效关系;作用后处于G0/G1期细胞比例由(44.67±1.05)%增高到(54.08±1.19)%,但凋亡细胞的比例无明显变化.结论:TLR 1-9可在U937细胞中表达,TLR 8激动剂ssRNA40/LyoVec具有抗肿瘤细胞增殖的作用,使细胞阻滞在G0/G1期,但无明显的促凋亡作用.
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核糖体蛋白RPL36A siRNA对U937细胞的促增殖、抑凋亡作用
本研究探讨RPL36A基因在急性髓系白血病(AML)病人的表达情况及可能的作用机制.应用RT.PCR检测急性髓系白血病细胞、正常人单个核细胞、U937细胞中RPL36A基因的表达情况;RPL36A siRNA经脂质体介导转入U937细胞,采用MTT法及DNA倍体分析检测细胞增殖.AO/EB、TUNEL、Annexin V/FITV检测细胞凋亡,RT-PCR和Western blot检测RPL36A基因及蛋白表达水平的变化.结果表明:RPL36A在初治AML细胞和U937细胞中表达明显增高;MTT法及DNA倍体分析发现,U937细胞增殖受到抑制.细胞周期阻滞;AO/EB染色、TUNEL、Annexin V/FTTV检测显示,转染RPL36A siRNA的细胞组凋亡率高于对照组;RPL36A siRNA作用可引起U937细胞的RPL36A的mRNA水平的降低和蛋白表达量的下降,且呈时间依赖性(r分别为0.9813和0.9537).结论:AML细胞高表达RPL36A基因,RPL36A基因的高表达可能促进AML细胞的过度增殖并抑制其凋亡.
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CD147对白血病细胞U937侵袭能力的影响
本研究探讨CD147对白血病细胞U937侵袭能力的影响.将U937细胞按照不同的处理方式分为以下4组:正常U937细胞组(对照组),脂多糖(LPS,50 μg/m1)诱导组(LPS组),CD147单克隆抗体(10 μg/m1)阻断组(CD147 mAb组),LPS诱导及CD147单克隆抗体阻断组(LPS+CD147 mAb组).使用RT-PCR和流式细胞术分别检测各组中CD147的mRNA和蛋白表达情况;应用RT-PCR和明胶酶谱法分析基质金属蛋白酶(MMP)的表达及活性;采用体外细胞侵袭实验检测细胞运动和侵袭能力的变化;将DAPI标记的U937细胞经尾静脉注入SCID小鼠体内观察细胞在各组织器官中的转移情况.实验结果显示,LPS在体外能够诱导白血病细胞U937表面CD147的表达,同时增强MMP-2和MMP-9的表达、活化和分泌;使用CD147抗体阻断CD147后,MMP-2和MMP-9的分泌及活性下降;U937细胞经LPS诱导后,其体外侵袭能力增强;U937细胞经尾静脉注入SCID小鼠后发生肺部浸润和转移,并检测到CD147、MMP-2和MMP-9的表达增强,CD147抗体在一定程度上能够抑制上述现象.结论:LPS可诱导U937细胞表面CD147分子表达增加,CD147通过上调U937细胞MMP-2和MMP-9的分泌和活性促进U937细胞的侵袭和转移.
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p73基因在甲氨蝶呤诱导髓性白血病细胞系U937细胞凋亡过程中的表达
为了探讨甲氨蝶呤(MTX)诱导U937细胞凋亡过程中p73 mRNA的表达变化,用MTX诱导U937细胞凋亡,凋亡指标采用细胞形态学、DNA片段电泳、流式细胞术检测DNA含量及细胞周期的变化等方法;采用半定量反转录PCR(RT-PCR)检测p73 mRNA的表达变化.研究结果显示:MTX可诱导U937细胞凋亡.5μmol/L的MTX作用于U937细胞6 小时,可见部分细胞体积缩小,染色质明显浓缩和核碎裂.DNA片段电泳,MTX处理组可见清晰的梯形条带.流式细胞仪检测发现MTX作用于U937细胞6,8,10小时,细胞的凋亡率分别为5.15%,11.43%和14.7%,并使细胞阻滞在G2/M+S期,而对照组细胞不发生凋亡.半定量RT-PCR结果显示在U937细胞凋亡前后,p73mRNA的表达无明显变化.结论提示,在MTX诱导U937细胞凋亡过程中,p73的mRNA水平表达差异无显著性.
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索拉非尼通过抑制WNT信号通路诱导白血病细胞株U937凋亡
本研究观察多激酶活性抑制药物索拉非尼对急性白血病细胞株U937细胞增殖活力的影响及诱导凋亡的作用,并探讨其可能的作用机制.以不同浓度的索拉非尼作用于U937细胞48小时后,使用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖活力变化;Annexin V/PI染色后通过流式细胞仪观察索拉非尼对U937细胞株的促凋亡作用;PI染色后利用流式细胞仪分析细胞周期中各期细胞比例变化;Western blot检测GSK-3β、β-catenin、Cyclin-D1蛋白表达变化.结果表明,同对照组相比较,索拉非尼以浓度依赖方式抑制U937细胞增殖,使细胞阻滞于G1/G0期并促进其调亡(p<0.05).Westem blot检测结果显示,与索拉非尼处理前后相比,WNT通路中失活型GSK-3β蛋白、β-catenin及cyclinD1表达均下调,并呈现出浓度依赖性.使用GSK-3β抑制剂氯化锂上调失活型GSK-3β蛋白后仍得出同样趋势(p<0.05).结论:索拉非尼通过减少WNT信号通路负向调节蛋白GSK-3β失活,进而下调β-catenin,cyclin-D1水平,使U937细胞阻滞于G1/G0期并促进其凋亡.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用及机制研究
本研究探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人急性单核细胞白血病细胞株U937的作用.采用磺酰罗丹明B(SRB)法检测EGCG对U937细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测EGCG对U937细胞周期的影响;采用RT-PCR、Westren blot法分别检测p16 mRNA、蛋白的表达;采用nMSP法检测U937细胞p16甲基化状态变化;采用RT-PCR法检测DNA甲基转移酶1(DNMT1)、DNMT3A、DNMT3B基因mRNA的表达.结果表明:EGCG可以剂量依赖性和时间依赖性地抑制U937细胞增殖(r=0.71),且呈剂量依赖性诱导G0/G1期细胞阻滞;EGCG可以呈剂量依赖性上调U937细胞p16 mRNA、蛋白的表达;EGCG可以呈剂量依赖性减弱U937细胞p16甲基化程度;EGCG可以剂量依赖性地下调U937细胞DNMq3A、DNMT3B mRNA表达,而对DNMT1 mRNA的表达无影响.结论:EGCG在体外通过抑制DNMT3A、DNMT3B和(或)直接使异常高甲基化的p16启动子CpG岛DNA去甲基化,恢复p16 mRNA水平和蛋白水平的表达,调控U937细胞阻滞于G0/G1期,抑制U937细胞的增长.
关键词： 表没食子儿茶素没食子酸酯 急性单核细胞白血病 U937细胞 p16基因
