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Akt特异性抑制剂MK2206诱导U937及RS4;11细胞凋亡及其机制
目的:本研究探讨Akt激酶抑制剂MK2206对U937及RS4;11细胞增殖、凋亡的影响,并分析其可能的作用机制.方法:以不同浓度MK2206处理U937及RS4;11细胞24、48 h,用CCK-8法绘制细胞增殖曲线;AnnexinV/7-氨基放线菌素D(7-AAD)双标记法分析细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞周期的变化;实时定量PCR检测Bax、Bcl-2、XIAP、CDK1、caspase-3基因mRNA表达的变化.结果:MK2206对U937及RS4;11细胞增殖具有抑制作用,且抑制效应呈一定的时间和剂量依赖性,U937细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.48±0.15)和(0.09±0.01) μmol/L,RS4;11细胞24、48 h的半数抑制浓度(IC50)分别为(0.91±0.02)和(0.68±0.11) μmol/L.0.5 μmol/L MK2206作用于U937细胞及1.0 μmol/L MK2206作用于RS4;11细胞24 h、48 h,AnnexinV/7-AAD标记的阳性细胞升高,U937细胞组24 h细胞凋亡率为(4.18±0.70)％,48 h细胞凋亡率为(22.53 ±4.67)％,均高于对照组的(1.35±0.34)％(P＜0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P＜0.05);RS4;11细胞组24 h和48 h细胞凋亡率分别为(5.74±0.58)％和(10.07±1.24)％,均高于对照组的(1.32±0.31)％(P＜0.05),且48 h细胞凋亡率较24 h更为明显(P＜0.05).流式细胞术检测细胞周期结果显示,U937细胞组G2/M期细胞比例为(96.78±9.11)％,高于对照组的(9.64±0.91)％(P＜0.05);RS4;11细胞组G2/M期细胞比例为(14.19±3.82)％,高于对照组的(5.75±1.28)％(P＜0.05).荧光定量PCR检测结果示,两种细胞中Bax、caspase-3 mRNA相对表达水平升高,而Bcl-2、XIAP表达水平降低,同时伴CDK1 mRNA水平的减少,与各自对照组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:MK2206能有效抑制U937及RS4;11细胞增殖及促进细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G2/M期,其促凋亡机制与上调Bax与caspase-3基因表达、下调Bcl-2与XIAP基因表达有关,细胞周期G2/M期阻滞与CDK1基因表达水平下降有关.
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芒柄花素联合MK2206对不同亚型乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 体外观察芒柄花素联合Akt抑制剂MK2206对不同分子亚型人乳腺癌MC卜7、BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测芒柄花素单独或联合MK2206对4种不同分子亚型乳腺癌细胞增殖的抑制作用.流式细胞术分析单独用药及联合用药对乳腺癌细胞生长凋亡的影响.实时荧光定量PCR法检测实验组中凋亡相关基因Bcb2和Bax的表达.蛋白质印迹法检测磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,t-Akt)蛋白表达.结果 芒柄花素和MK2206均能抑制4种乳腺癌细胞的生长,呈剂量依赖性.选择80 μmol/L芒柄花素和20 nmol/L MK2206单独和联合处理4种细胞.联合用药后的抑制率高于单用药组,其中BT-474及MDA-MB-231细胞的联合用药组产生了协同作用,Q＞1.15.两种药物均可诱导4种细胞凋亡,两药联用可使BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞凋亡率显著增加,P＜0.01.实时荧光定量PCR与蛋白质印迹法检测结果发现,单独用药能上调Bax及下调Bcl-2基因表达水平,并下调p-Akt蛋白表达水平,其中BT-474、SK-BR-3和MDA-MB-231细胞的联合用药组效果更显著,P＜0.01.结论 MK2206联合芒柄花素可抑制4种不同亚型乳腺癌细胞的增殖,诱导凋亡,联合用药效果更显著,4种细胞效果有差异,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断PI3K/Akt信号转导途径有关.
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依维莫司和MK-2206联合用药协同抑制肝癌细胞增殖
目的 研究哺乳动物西罗莫司(雷帕霉素)靶蛋白(mTOR)抑制剂与AKT激酶抑制剂联合用药对肝癌细胞增殖的抑制作用.方法 mTOR抑制剂西罗莫司及衍生物依维莫司单独作用HepG2和BEL-7402肝癌细胞0,1,3,6,12和24 h,或与胰岛素样生长因子1受体抑制剂NVP-AEW541或AKT激酶抑制剂MK-2206联合作用24 h,Western蛋白质印迹法检测不同时间点mTOR激酶下游分子p70S6K和AKT激酶活性;依维莫司与MK-2206单独或联合作用肝癌细胞72 h,分别采用平板克隆和CCK8法检测细胞生长增殖和存活力.结果 单用西罗莫司和依维莫司可显著抑制肝癌细胞中p70S6K激酶活性(P<0.01),并在不同时间点反馈激活AKT激酶活性(P<0.05);NVP-AEW541或MK2206和依维莫司联合作用肝癌细胞后显著抑制AKT激酶的反馈激活(P<0.01);与使用依维莫司或MK-2206相比,联合使用依维莫司和MK-2206作用肝癌细胞后,显著抑制肿瘤细胞的克隆形成能力;肝癌细胞增殖率较依维莫司单用下降>45％(P<0.01).结论 肝癌细胞对西罗莫司及衍生物的耐药可能是通过反馈激活PI3K/AKT通路导致的,依维莫司联合使用MK-2206可协同抑制肝癌细胞的生长和增殖.
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Akt抑制剂MK2206对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:研究新型Akt抑制剂MK2206对体外培养的人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:以不同浓度的MK2206作用于人乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞,采用MTT法检测细胞的增殆抑制率,FCM法检测细胞的凋亡率,Western印迹法检测细胞中caspase-3、多聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、bcl-2、bax、磷酸化Akt(phosphorate-Akt,p-Akt)和总Akt(total-Akt,T-Akt)蛋白表达水平的变化.结果:0.1、1、10和100 nmol/L MK2206作用细胞24 h后,可明显抑制T47D和MDA-MB-231细胞的增殖和诱导细胞凋亡,其作用随着药物浓度的增加而增强.MK2206可促进乳腺癌细胞中caspase-3和PARP蛋白剪切,上调bax蛋白表达,下调bcl-2和p-Akt蛋白的表达,且均呈剂量依赖性,但对T-Akt表达却无明显影响.结论:MK2206可抑制乳腺癌T47D和MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制Akt磷酸化从而阻断P13 K/Akt信号转导途径有关.
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MK2206对三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响
[目的]探讨Akt抑制剂MK2206对三阴性乳腺癌顺铂耐药细胞株MDA-MB-231/DDP生长活性及耐药性的影响.[方法]使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、MK2206单药或联合作用于MDA-MB-231/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;高效液相色谱法检测细胞内DDP药物浓度的改变;Western Blot、Real-time PCR分别检测细胞内Akt蛋白及MDR相关基因(MDR1、BCRP、MMP7、GST-π)的表达水平.[结果]MK2206单药对MDA-MB-231/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的MK2206可明显增强MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的敏感性,增加细胞内顺铂浓度,使细胞内Akt蛋白及MDR相关基因(MDR1、BCRP、MMP7、GST-π)的表达水平明显降低.[结论]MDA-MB-231/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内Akt蛋白的过度表达有关,MK2206有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转MDA-MB-231/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与降低细胞内MDR1、BCRP、MMP7、GST-π的基因表达水平有关.
