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TP53INP1高表达在砷剂杀伤肺腺癌细胞中的增敏作用
目的 构建TP53INP1高表达的肺腺癌A549细胞,初步研究提高TP53INP1的表达能否提高砷剂对肺腺癌细胞的杀伤作用.方法 构建TP53INP1重组真核表达质粒,以慢病毒为载体将其转染到A549细胞,建立稳定高表达TP53INP1基因的A549-TP53INP1细胞株,以流式细胞术和MTT实验检测As2O3处理后A549-TP53INP1细胞的凋亡和存活率.结果 成功构建稳定A549-TP53INP1细胞株.流式细胞术结果显示,相同剂量As,O3作用下(5～ 40 μmol/L),A549-TP53INP1细胞凋亡率[(15.6±3.5)％]显著高于A549细胞[(10.0±2.5)％](P＜0.05).MTT实验显示,As2O3处理后A549-TP53INP1细胞的IC50值[(44.64±6.84)μmol/L]显著低于A549细胞[(54.25±6.13)μmol/L] (P ＜0.05).结论 TP53INP1高表达可增加砷剂对肺腺癌细胞的杀灭作用,提示TP53INP1可作为砷剂治疗肺癌的增敏靶点.
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含砷类中药治疗恶性血液病药代动力学及代谢机制研究进展
含砷类中药有悠久的应用历史,目前临床用于治疗恶性血液病的砷制剂包括雄黄制剂和砒霜提取液.雄黄制剂包括雄黄单味和含雄黄的复方,含雄黄的复方主要有青黄散、六神丸、复方青黛片等;砒霜提取液主要是As2O3注射液.研究表明,单—砷剂或含砷中药复方治疗恶性血液病,如急性早幼粒细胞白血病(APL)、慢性粒细胞性白血病(CML)、骨髓增生异常综合征(MDS)以及多发性骨髓瘤(MM)等均具有显著疗效[1].医学界对砷制剂治疗恶性血液病的药代动力学及代谢机制进行了深入的研究,归纳如下.
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三氧化二砷抑制小鼠乳腺癌细胞MA-891生长作用及其对端粒酶活性的影响
目的:探讨As2O3在诱导小鼠乳腺癌细胞MA-891凋亡过程中的作用,以及对端粒酶及其亚单位mTERT mRNA活性表达的影响,为进一步进行小鼠体内实验提供理论和实验依据.方法:以小鼠乳腺癌细胞株MA-891为研究对象,将不同浓度的As2O3与MA-891细胞共培养不同时间后,MTT法检测As2O3对MA-891细胞的生长抑制作用；流式细胞术检测As2O3对MA-891细胞凋亡的影响；TRAP-PAGE-银染法检测As2O3作用后MA-891细胞中端粒酶活性的改变；RT-PCR检测As2O3对MA-891细胞鼠端粒酶逆转录酶(mTERT)的影响.结果:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长,24,48h的半数生长抑制浓度(IC50)分别为9.68,5.50 μmol·L-1.5,10,20 μmol·L-1的As2O3诱导MA-891细胞24h后,细胞凋亡率依次为30.21％,48.26％,57.43％.5,10,20 μmol·L-的As2O3作用MA-891细胞24,48h后,端粒酶活性显著下降,抑制程度呈明显的时间和浓度依赖性；银染条带也显示出相同结果.RT-PCR产物显示mTERT mRNA表达显著下降并呈时间和浓度依赖关系.结论:As2O3能显著抑制MA-891细胞生长、诱导细胞凋亡,可能是通过抑制细胞端粒酶及其亚单位端粒酶逆转录酶的活性而发挥作用.
关键词： As2O3 小鼠乳腺癌细胞MA-891 凋亡 端粒酶 端粒酶逆转录酶 -
三氧化二砷治疗复发难治性急性非早幼粒细胞白血病临床观察
三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)在临床上主要用于急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL), 但基础研究证实, As2O3对急性非早幼粒细胞白血病(acutenon-promyelocyticleukemia,ANPL)细胞也具有较强的抑制作用[1,2].
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三氧化二砷持续区域肝动脉灌注治疗肝癌的临床研究
目的 探讨三氧化二砷(As2O3)注射液单药连续区域动脉灌注化疗原发性肝癌的临床疗效.方法 55例手术不能切除的非晚期原发性肝癌患者,随机分为两组:(1)As2O3治疗组26例:患者采用经股动脉肝动脉碘油栓塞后埋置皮下化疗泵,予以连续区域灌注As2O3化疗,20 mg/d,每天1次,共7 d,间隔4周重复,共5疗程.(2)对照组29例:采用经股动脉肝动脉栓塞化疗(TACE),2次TACE15例,3次TACE14例.结果 As2O3治疗组总有效率为34.6%(9/26)、肿瘤复发率为15.4%(4/26)、1年生存率为80.7%(21/26);TACE组分别是31.0%(9/29)、37.9%(11/29)、51.7%(15/29).统计学分析表明,两组的总有效率差异无统计学意义,P＞0.05;肿瘤复发率和1年生存率差异有统计学意义,P＜0.05.As2O3治疗组较对照组不良反应轻微,未见不可逆不良反应.结论 经股动脉肝动脉碘油栓塞后埋置皮下化疗泵予以连续区域灌注As2O3化疗用于治疗原发性肝癌不良反应轻微、疗效确切,具有一定的临床应用前景.
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三氧化二砷联合TPA对K562细胞作用的实验研究
本研究旨在观察三氧化二砷(As2O3)单独或联合12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)对髓系白血病细胞系K562细胞的细胞周期、分化和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.采用TPA、As2O3、TPA联合As2O3分别作用于K562细胞株,在倒置显微镜下观察细胞形态改变,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V法及琼脂糖凝胶电泳观察K562细胞凋亡情况,集落形成实验检测K562集落形成率,流式细胞术检测K562细胞分化及细胞周期改变,Western b1ot检测P38及p-P38蛋白的表达.结果表明,TPA联合As2O3对K562细胞的促凋亡作用较单药组明显增强;As2O3使K562细胞集落形成能力降低;TPA促使K562细胞向单核巨噬细胞分化;TPA使K562细胞阻滞于G1期,As2O3使K562细胞阻滞于G2期,TPA可增强As2O3对细胞周期的影响;TPA与As2O3联用增强As2O3促磷酸化P38蛋白表达的作用.结论:TPA与As2O3联合作用能增强As2O3对K562细胞的促凋亡作用及对其细胞周期的影响.
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高三尖杉酯碱联合三氧化二砷诱导人急性髓系白血病U937细胞株凋亡的实验研究
目的:本探讨高三尖杉酯碱(HHT)联合三氧化二砷(As2 O3)对人急性髓系白血病细胞株U937细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用及相关机制.方法:用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测不同浓度HHT及As2O3单用及联用对U937细胞增殖的影响;应用Annexin-V-FITC/PI双染流式细胞术检测二者单用或联用对U937细胞的凋亡诱导作用,Western blot方法检测U937细胞内P-Aktser473、P-AktThr3、BCL-XL、BID、MCL-1与P-MCL-1等蛋白的表达.结果:HHT和As2O3均可明显抑制U937细胞的增殖,诱导其凋亡,两药联合可明显增加U937细胞早期凋亡率,且两药联合作用后U937细胞P-Aktser473、p-AktThr308、MCL-1、P-MCL-1与BCL-XL蛋白表达明显下调,而BID蛋白表达无明显变化.结论:HHT与As2O3联合可通过抑制PI3K/Akt信号通路及下游MCL-1蛋白协同抑制U937细胞.
关键词： U937细胞 高三尖杉酯碱 As2O3 PI3K/Akt信号通路 MCL-1蛋白 -
三氧化二砷诱导MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控研究
为了研究三氧化二砷(AS2O3)诱导人类骨髓增生异常综合征难治性贫血伴原始细胞过多型(MDS-RAEB)细胞株MUTZ-1细胞凋亡的端粒酶调控机制,采用端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附试验(TRAP-ELISA)检测端粒酶活性;RT-PCR法检测端粒酶逆转录酶(hTERT)、TRF1(TTAGGG repeat binding factor 1)、TRF2(TFAGGG repeat binding factor 2)、bcl-2、bax等基因mRNA水平的表达;磷脂酰丝氨酸(PS)转位等方法检测细胞凋亡.结果表明:1-8μmol/L AS2O3诱导MUTZ-1细胞凋亡呈时间、浓度依赖关系.在该浓度范围内,As2O3可下调细胞端粒酶活性,且端粒酶活性下调与凋亡细胞阳性率呈明显负相关(r=-0.938,P=0.018).MUTZ-1细胞经As2O3作用后,hTERT基因mRNA表达下调,并与端粒酶活性变化呈正相关(r=0.783,P=0.022),但As2O3对TRF1及TRF2基因mRNA表达没有明显影响.MUTZ-1细胞端粒酶活性受抑制同时,伴有bcl-2 mRNA表达下调及bcl-2/bax比值下降.结论:AS2O3可能通过抑制细胞端粒酶活性及hTERT表达,诱导MUTZ-1细胞凋亡.As2O3抑制MUTZ-1细胞端粒酶活性可能是诱导该凋亡机制之一.
关键词： As2O3 MUTZ-1细胞 细胞凋亡 端粒酶 骨髓增生异常综合征-难治性贫血 -
As2O3和/或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)和/或转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27Kip1、cyclin E及内源性TGF-β1 mRNA水平的变化及其意义.用MTT法检测As2O3,对NB4细胞的细胞毒性及IC50,用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测P27Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平.结果表明:As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡;As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系,24小时的IC50约为12μmol/L,48小时的IC50约为5μmol/L,72小时的IC50约为3 μmol/L.As2O3和/或TGF-β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞,5 μmol/L As2O3使NB4细胞阻滞在G2/M期,5 ng/ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期,两者联合处理组主要使S期阻滞.As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调,而cyclin E的mRNA表达下调;联合处理组结果显示TGF-β1可增强As2O3上述作用.结论:As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;As2O3及外源性TGF-β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27Kip1高表达以诱导细胞凋亡;TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达,或者通过上调P27Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性,从而导致NB4细胞周期阻滞.
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VPA和As2O3对Molt-4细胞的协同作用及可能机制
本研究探讨丙戊酸钠(sodium valproate,VPA)单药或与亚砷酸(arsenie trioxide,As2O3)联用对人急性T细胞白血病细胞株Molt-4增殖活力的抑制、去甲基化作用及其可能机制.用MTT法检测药物对细胞增殖的抑制作用,利用金氏公式观察两药联用体外抗癌的协同作用.采用半巢式甲基化特异PCR(hnMS-PCR)检测p151NK4B基因甲基化,RT-PCR方法检测p15基因、DNA甲基转移酶DNMT-1、DNMT3A、DNMT3B的表达.结果表明:VPA和As2O3 均可明显抑制细胞增殖,二者联用在体外有相加作用(Q值均大于0.85),在5 mmol/L VPA与10 μmol/L As2O3 联用时抑制率达(70.31±2.54)%.Molt-4细胞p15基因因高甲基化而失表达,经VPA和As2O3联合作用后p15基因甲基化程度明显下降,p15基因表达增强,两药联用时DNMT-1、DNMT-3A、DNMT3BmRNA的表达都有下降.结论:VPA可能通过抑制DNA甲基转移酶DNMT-1和(或)DNMT3B使p15INK4B基因去甲基化,使p15基因表达上调,恢复其活性.VPA和As2O3 均可明显抑制Mol-4细胞增殖,两药合用有协同相加作用,可减少砷荆的副作用.
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AS203逆转人恶性淋巴瘤CA46细胞系p16基因甲基化状态及激活转录的实验研究
本研究旨在探讨三氧化二砷(AS2O3)逆转恶性淋巴瘤CA46细胞株p16基因甲基化状态和调节转录作用及其可能的机制.以高甲基化的恶性淋巴瘤细胞株CA46作为研究基因甲基化与表达关系的实验对象.采用SRB法检测AS2O3对人恶性淋巴瘤CA46细胞系增殖、活力的影响;nMSP法检测药物作用后p16甲基化状态变化;RT-PCR法检测p16、甲基转移酶DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA的表达;利用流式细胞术DNA倍体分析法探讨AS2O3,对恶性淋巴瘤细胞周期的影响.结果表明:①AS2O3作用CA46细胞株72小时后p16基因甲基化程度明显减弱,p16基因异常甲基化的现象被逆转;②未处理组细胞p16基因呈微弱表达,AS2O3作用72小时后p16基因表达增强,0.5 μmol/L组、1.0μmol/L组和2.0μmol/L组p16基因表达阳性条带与β-actin灰度的比值分别为(0.33±0.10)、(0.57±0.11)、(0.67±0.09),阳性对照灰度比值为(0.73±0.13),差异有统计学意义(p<0.01);③与未处理组相比,AS2O3作用72小时后甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B的表达下降并呈浓度依赖性,而DNMTI表达不受影响;④与对照组相比,3组不同浓度AS2O3均能明显抑制肿瘤细胞生长,G0/G1期细胞增加.结论:AS2O3可能通过抑制甲基转移酶DNMT3A、DNMT3B或(和)直接逆转p16基因甲基化状态,使p16基因表达上调,并恢复其活性,从而实现其细胞周期调控功能,将细胞阻滞于G0/G1期,抑制肿瘤细胞的增长.
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三氧化二砷对骨髓瘤细胞系U266抑制增殖及诱导凋亡的机制研究
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)在体外对骨髓瘤细胞系U266的生物学效应及其机制.用MTT法观察As2O3对U266细胞增殖的影响,用流式细胞术、DNA凝胶电泳法分析As2O3对U266细胞凋亡的影响,以RT-PCR法检测2 μmol/L As2O3不同处理时间对U266细胞人端粒酶逆转录酶蛋白催化亚单位(hTERT)mRNA的表达变化,用Western blot法检测As2O3不同处理时间对U266细胞pmcaspase-3、bcl-2及hTERT蛋白水平的表达变化.结果表明:As2O3能明显抑制U266细胞增殖,半数抑制浓度(Ic50)为2μmol/L;As2O3能诱导U266细胞凋亡,呈现剂量和时间依赖性;2 μmol/L As2O3不同时间处理U266细胞后procaspase-3蛋白及hTERT mRNA、蛋白表达呈时间依赖性降低,而bcl-2蛋白表达未发生变化.结论:As2O3通过改变线粒体跨膜电位,触发了U266细胞的线粒体凋亡途径,导致了caspase-3的活化,终诱导U266细胞凋亡;hTERT表达下调也是As2O3诱导U266细胞凋亡的重要作用机制.
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白血病基因产物靶向治疗的基础和临床研究
全反式维甲酸(ATRA)和三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)获得了很大成功,已经成为白血病靶向治疗研究的代表性模式.ATRA与As2O3的作用靶点均为异常转录因子PML-RARα,前者通过针对RARα,而后者通过PML SUMO化后使PML-RARα致病蛋白降解,导致APL细胞分化和凋亡.ATRA与As2O3联合治疗初发APL,证实了两药的相互协同作用,获得了迄今为止成人急性白血病治疗的好疗效.酪氨酸激酶抑制剂格力维(Gleevec)在慢性粒细胞白血病(CML)治疗中获得了成功.联合应用格力维与砷剂治疗CML已在临床和实验中初步证实其有效性,这一治疗方案是基于针对ABL异常的酪氨酸激酶活性与降解BCR-ABL融合蛋白的双重靶向作用.白血病多靶点联合治疗的思路将进一步拓展至ANLL-M2b型白血病,为该类白血病提供新的治疗方案,有可能使该类白血病获得更为有效的治疗效果.
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As2O3对NB4细胞蛋白酶体β1亚基的影响
本研究探讨As2O3对于NB4细胞蛋白酶体β1亚基的影响,以阐明As2O3在治疗急性早幼粒细胞白血病中的作用.以0.5 μmol/L As2O3干预NB4细胞,分别提取干预24小时及48小时后的总蛋白:以Western blot检测蛋白酶体β1亚基及PML-RARα融合蛋白表达变化,并进行灰度分析.结果表明:经As2O3干预的NB4细胞中蛋白酶体β1亚基表达在As2O3干预24小时后明显升高,48小时后回落至基线水平.PML-RARα融合蛋白表达在干预24小时后明显降低,48小时后维持在明显低水平.结论:As2O3对于NB4细胞中蛋白酶体β1亚基有诱导上调作用,且与As2O3诱导NB4细胞PML-RARα融合蛋白降解及NB4细胞分化凋亡有一定的关系.
关键词： As2O3 NB4细胞 PML-RARα融合蛋白 蛋白酶体 -
三氧化二砷持续缓慢静脉输注法的疗效分析
三氧化二砷(As2O3)已经被证实对急性早幼粒细胞白血病(APL)有着显著的疗效.应用As2O3诱导治疗或联合治疗,能够降低APL患者的复发率,并能改善APL患者尤其是高危患者的生存质量[1-3],同时给不能耐受蒽环类化疗方案的患者提供了一个替代治疗的选择[4],然而,临床研究中发现,常规静脉给药时,部分患者在治疗早期出现类维甲酸综合征样的高白细胞血症,并发生致命的颅内出血、弥散性血管内凝血(DIC)和白血病中枢神经系统浸润,导致患者早期死亡,我们以往的研究显示,As2O3持续缓慢静脉输注法能明显减轻As2O3治疗中的这些副作用[5].
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氧化砷诱导胰腺癌细胞凋亡的实验研究
目的观察As2O3对胰腺癌细胞株体外生长和裸鼠腹腔种植腹水生成的影响及其作用机制.方法O.125～2 μmol/L的As2O3与胰腺癌细胞株SW-8902共同孵育,观察不同浓度、不同作用时间对胰腺癌细胞生长的抑制作用、作用后胰腺癌细胞的凋亡特征及Fas Fas L表达的变化.80只BALB/C-nu/nu裸鼠腹腔内接种胰腺癌细胞株SW-8902,并随机分为4组,然后分别腹腔内注射生理盐水及不同剂量的As2O3,观察各组裸鼠的生存时间.结果1～2 μmol/L的As2O3作用后,胰腺癌细胞呈典型的凋亡特征性改变,流式细胞仪检测在G1期前出现亚二倍体凋亡峰,DNA电泳呈现特征性Ladder,细胞核内可见染色质浓缩、碎裂和边聚.As2O3也可显著抑制荷胰腺癌裸鼠腹水的生成,延长生存期(P＜O.01),Fas、Fas-L表达在As2O3作用后2 d上升,3 d达高,以后表达量下降.结论As2O3诱导胰腺癌细胞凋亡,抑制裸鼠胰腺癌腹腔种植及腹水的生成,延长生存期.Fas、Fas-L表达上调是As2O3诱导肿瘤细胞凋亡的途径之一.
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15例儿童急性早幼粒细胞性白血病临床及治疗研究
目的 探讨儿童急性早幼粒细胞性白血病(APL)的临床特点及其治疗.方法 选取2002年6月～2007年3月我院诊治15例APL患儿.单剂AS2O3诱导分化治疗,达到完全缓解后采用DA/HA/IDA方案与ATRA/AS2O3序贯治疗.辅以小分子肝素抗凝治疗,必要时加用白细胞置换术.观察其临床特点、血常规、出凝血指标、肝肾功能、心电图,监测PML/RARa融合基因、染色体的变化.结果 15例患儿2例早期死亡,12例PML/RARa融合基因阳性者均得到完全缓解.AS2O3治疗1周白细胞上升高,治疗两周开始下降,D-Dimer正常,出血倾向减轻或消失.治疗6～8周CR.结论 单剂AS2O3诱导分化治疗,对PML/RARa融合基因阳性,存在染色体t(15;17)患者,均能完全缓解率.且毒副反应较小.早期小分子肝素钙应用配合血浆输注,必要时行白细胞单采术帮助大多数患儿安全度过DIC,获得长期生存.
关键词： 儿童 急性早幼粒细胞性白血病 临床特点 As2O3 -
AQP9在As2O3联合AZT治疗肝癌中的作用探讨
目前,化疗仍然是肝癌治疗的主要手段,将三氧化二砷(As2O3)应用于肝癌的治疗虽大大地提高了疗效,但是毒副作用较大.为此,本实验组将3'-叠氮-2',3'-脱氧胸腺核苷(AZT)作为As2O3的增敏剂与As2O3联合起来用于肝癌的治疗,在保证疗效的基础上有效地减少了As2O3的用量,但AZT的增敏机制未明,水通道蛋白9 (AQP9)的深入研究为明确AZT的增敏机制提供了重要线索.
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As2O3在肿瘤治疗中的不良反应防治策略研究进展
三氧化二砷(As2O3)作为一种化疗药物,在多种肿瘤的治疗中取得了一定的疗效,被广泛应用于基础研究和临床研究中.然而不良反应限制了其在临床中的应用,因此如何减少不良反应是As2O3在肿瘤治疗中的研究重点.本文就As2O3在肿瘤治疗中的不良反应机制及减少不良反应的方法 做一综述.
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c-Myc和Fas在三氧化二砷体外诱导HL-60细胞凋亡中的变化与作用的研究
目的:探讨三氧化二砷(As2O3)在体外诱导急性早幼粒白血病(acute promyelo-cytic leukemia,APL)细胞HL-60凋亡的分子机制.方法:采用MTT方法检测As2O3对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和Fas蛋白表达,RT-PCR检测c-Myc和Fas的mRNA表达.结果:4.0μmol/L的As2O3作用96 h可抑制70%的HL-60细胞,并使细胞周期阻滞在G0/G1期,诱导细胞凋亡,P<0.01;Fas蛋白表达升高,作用72 h后阳性率由对照组的9.63%增加为32.84%,P<0.01;Fas mRNA表达升高,c-Myc的mRNA表达降低,P<0.01.结论:As2O3诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Fas蛋白及mRNA表达,下调c-Myc的mRNA表达.
