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长期低剂量亚砷酸钠染毒对人支气管上皮细胞和人角质形成细胞增殖的影响
目的 探讨1.0μmol/L亚砷酸钠慢性染毒对人支气管上皮细胞(HBE)和人角质形成细胞(HaCaT)体外增殖的改变及其调控机制.方法 以体外培养的HBE和HaCaT细胞恶性转化模型为研究对象,应用MTT法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期改变,利用Western blot检测细胞周期相关蛋白cyclin E、cyclin D1、cylin A蛋白的表达.结果 染砷组HBE细胞36代和43代、HaCaT细胞28代和35代相对增殖率均高于传代对照组(P ＜0.01和P＜0.05);细胞周期G1期细胞比例下降(P＜0.05),S期细胞比例上升(P＜0.05);此外,细胞周期相关蛋白cyclin E表达升高(P＜0.05),并在晚期持续性高表达.结论 低剂量亚砷酸钠可通过上调HBE和HaCaT细胞中cyclin E的表达从而使细胞从G1期逃逸至S期,加速细胞增殖,终导致细胞发生恶性转化.
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不同中医证型的慢性胃病变组织中TGFα和Cyclin E表达的变化
目的探索不同中医证型的慢性胃病患者胃病变组织中TGFa和Cyclin E表达变化.方法在慢性胃病患者中,选取具有中医肝胃不和、脾胃虚寒、胃阴不足和寒热夹杂四种证型的患者共135例,进行胃粘膜病变组织的TGFα和Cyclin E免疫组化染色,对它们在各证型中的表达进行比较,并分析两者表达的相关性.结果TGFα和Cyclin E在上述中医证型中的表达有显著性差异,TGFα表达的阳性率分别为25.0%、18.6%、47.1%和42.1%,Cyclin E表达的阳性率分别为20.0%、7.0%、26.5%和31.6%.TGFα和Cyclin E表达存在显著的相关关系.结论在慢性胃病患者中,TGFα和Cyclin E表达在不同中医证型中有明显差异,均在胃阴不足和寒热夹杂型中较高,在肝胃不和及脾胃虚寒型中较低.TGFα和cyclin E表达存在相关关系.
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卵巢癌组织中Cyclin E和Cyclin D表达水平特征及临床意义
目的 探讨细胞周期调节蛋白cyclin E和cyclin D蛋白在卵巢癌组织中的表达情况,及其与病理特征相关性.方法 采用免疫组化法检测40例正常卵巢组织、20例良性卵巢上皮肿瘤组织和40例卵巢癌组织中cyclin E和cyclin D蛋白表达水平,并与病理资料进行交叉比较.结果 cyclin E和cyclin D蛋白在卵巢癌组织、良性组织和正常组织中表达率均呈显著下降趋势(X2=26.813,X2=18.742,P＜0.05).卵巢癌组织中cyclin D蛋白阳性率随组织分级升高、淋巴转移而增高(X2=8.189,X2=14.115,P＜0.05).cyclin E蛋白随阳性率随手术病理分期、组织分级升高、淋巴转移而增高(X2=13.190,X2 =4.682,X2=9.122,P＜0.05).cyclin E和cyclin D表达正相关(r=0.038,P＜0.01).结论 cyclin E和cyclinD均参与了卵巢癌的发生,且与卵巢癌的发展具有相关性并可能起到了协同作用.
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p16、cyclin E在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用
目的探讨p16、cyclin E在宫颈鳞状上皮病变诊断中的应用.方法观察84例宫颈鳞状上皮增生性病变和16例正常宫颈鳞状上皮的免疫组化表达.结果正常宫颈鳞状上皮、良性反应性增生与CINⅠ级p16未见明显阳性表达,cyclin E少数表达(12.9%).高度CIN与鳞状细胞癌p16和cyclin E高表达,分别为78.6%、87.2%.结论p16和cyclin E与CIN有密切关系,尤其是高度CIN和鳞状上皮癌.
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As2O3和/或TGF-β1诱导NB4细胞凋亡中P27Kip1、cyclin E、内源性TGF-β1的变化及其意义
本研究探讨三氧化二砷(As2O3)和/或转化生长因子-β1(TGF-β1)作用于NB4细胞后的细胞凋亡情况、P27Kip1、cyclin E及内源性TGF-β1 mRNA水平的变化及其意义.用MTT法检测As2O3,对NB4细胞的细胞毒性及IC50,用瑞氏-姬姆萨染色观察凋亡细胞形态学的变化,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,半定量RT-PCR检测P27Kip1、cyclin E以及内源性TGF-β1的mRNA水平.结果表明:As2O3、TGF-β1均能明显抑制NB4细胞的生长,促进NB4细胞的凋亡;As2O3对NB4细胞的抑制及促凋亡作用均呈剂量-时间依赖关系,24小时的IC50约为12μmol/L,48小时的IC50约为5μmol/L,72小时的IC50约为3 μmol/L.As2O3和/或TGF-β1均可使NB4细胞出现细胞周期阻滞,5 μmol/L As2O3使NB4细胞阻滞在G2/M期,5 ng/ml TGF-β1使NB4细胞阻滞在G1期,两者联合处理组主要使S期阻滞.As2O3、TGF-β1分别作用于NB4细胞时均可见P27Kip1及内源性TGF-β1的mRNA表达上调,而cyclin E的mRNA表达下调;联合处理组结果显示TGF-β1可增强As2O3上述作用.结论:As2O3及TGF-β1均可诱导NB4细胞凋亡,引起细胞周期分布异常;As2O3及外源性TGF-β1可能通过上调内源性TGF-β1使P27Kip1高表达以诱导细胞凋亡;TGF-β1可能直接抑制了cyclin E的表达,或者通过上调P27Kip1的表达而反馈抑制cyclin E的活性,从而导致NB4细胞周期阻滞.
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P27Kipl和TGF-β1在原代APL细胞凋亡中作用机制的研究
本研究探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)对原代APL细胞凋亡及周期的影响,As2O2作用前后P27Kipl、TGF-β1、cyelin E和bcl-2的变化以及P27Kipl>在As2O3诱导急性早幼粒细胞白血病细胞凋亡中的作用.用细胞形态学及流式细胞仪分别检测原代APL细胞凋亡和细胞周期改变,免疫组织化学法和RT-PCR技术检测药物处理前后细胞P27Kipl、TGF-β1、cyclin E以及BCL-2蛋白和基因表达的变化.结果表明:As2O3与APL细胞共同培养24小时,浓度为1、5、10 μmol/L时,凋亡细胞所占比例分别为1.42%、4.57%、10.67%;至48小时,凋亡细胞分别为8.92%、16.07%和18.90%,明显高于相同浓度的As2O3作用24小时(P<0.05);至72小时,细胞以碎片为主.同一时段随着As2O3浓度的增加,APL细胞凋亡不断增多;同一浓度As2O3作用于APL细胞,随着作用时间的延长,APL细胞凋亡也随之增多.5、10 μmol/L的As2O3作用于APL细胞24、48、72小时可见细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例均明显高于对照组(P<0.05),而1 μmol/L As2O3作用后的细胞周期无明显变化.1、5和10 μmol/LAs2O3作用于APL细胞.P27Kipl蛋白表达增高,P27KiplmRNA与β-actin灰度值之比(P27Kipl/β-actin)分别为0.181、0.489和0.921,表明随着As2O3浓度的增高,P27KiplmRNA表达水平显著上调(P<0.05),P27Kipl表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.55,P<0.05);与对照组相比,TGF-β1蛋白和mRNA表达上调,伴有Cyclin E、BCL-2蛋白和mRNA表达下调,TGF-β1表达与凋亡细胞数之间存在正相关(r=0.51,P<0.05),TGF-β1表达与P27Kipl表达之间也存在正相关(r=0.31,P<0.05).结论:As2O3体外可诱导原代APL细胞凋亡,存在时间-剂量依赖关系,并使细胞周期阻滞于G1期.P27Kipl表达的变化情况与As2O3诱导细胞凋亡的作用效果密切相关,As2O3诱导原代APL细胞凋亡的机制可能是通过上调TGF-β1,从而上调P27Kipl,拮抗Cyclin E和BCL-2的作用,抑制细胞增殖,使细胞周期阻滞于G1期,从而诱导细胞发生凋亡.
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彩色血管能量成像与cyclin E在甲状腺癌中的表达及其预后的相关性研究
目的 研究甲状腺癌中细胞周期素E (cyclin E)的表达与彩色血管能量成像(CPA)的相关性关系,并探讨其临床预后意义.方法 术前应用CPA技术检测50例甲状腺癌患者及30例甲状腺腺瘤患者的血流信号,及其阻力指数(RI),术后采用免疫组化法检测该组织中cyclin E的表达.结果 50例甲状腺癌cyclin E的阳性表达率(64％)显著高于甲状腺腺瘤组(33.3％,P＜0.05),cyclin E在组织学Ⅲ级的阳性表达率(86.7％)显著高于Ⅰ、Ⅱ级(50％,P＜0.05),伴有淋巴结转移的甲状腺癌cyclin E的阳性表达率为83.3％,无淋巴结转移的cyclin E的阳性表达率为40％,两者比较有统计学意义(P＜0.05).cyclin E的表达强度与CPA血流分级呈正相关(r=0.771,P＜0.05),甲状腺癌的RI值为0.73+0.05,显著高于甲状腺腺瘤组的RI值(0.55±0.06,P＜0.05).cyclin E的表达强度与RI值呈正相关(r=0.857,P＜0.05).同时cyclin E的表达强度与甲状腺癌患者的生存时间呈负相关(r=-0.874,P＜0.05).结论 cyclin E的表达强度与CPA的血流分级及甲状腺癌预后相关,cyclin E的表达是甲状腺癌有效的预后预测因子,为临床早期诊断甲状腺癌和评估预后提供新的理论依据.
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TGF-α和Cyclin E在中医不同证型患者胃病变组织中的表达及相关性
目的:探讨中医不同证型患者的慢性胃病变组织中TGF-α和Cyclin E表达的变化,并分析两者表达的相关性.方法:慢性胃病患者(慢性良性胃病变和胃癌)135例,按中医分为肝胃不和、脾胃虚寒、胃阴不足和寒热夹杂4种证型.对患者慢性胃病变组织进行TGF-α和Cyclin E表达的免疫组化染色,对两者在各中医证型中表达的阳性率进行比较,并进一步分析TGF-α和Cyclin E表达的相关性.结果:TGF-α在4种中医证型中表达的阳性率分别为25.0%、18.6%、47.1%和42.1%.在胃阴不足型与脾胃虚寒型中的表达,有显著性差异(P＜0.05).Cyclin E表达的阳性率则分别为20.0%、7.0%、26.5%和31.6%,在寒热夹杂型与脾胃虚寒型中表达的,有显著性差异(P＜0.05).TGF-α和Cyclin E表达均在脾胃虚寒型低.TGF-α和Cyclin E表达存在显著的正相关关系.结论:在中医不同证型患者中,TGF-α和Cyclin E在胃病变组织中的表达存在差异,TGF-α和Cyclin E的表达存在正相关关系.
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Cyclin E表达失调导致人类结肠癌染色体不稳定
目的:研究Cyclin E的表达失调对人类结肠癌细胞系DLD1染色体稳定性的影响.方法:建立四环素调控的Cyclin E稳定表达的细胞系DLD1tTA-Cvclin E,Western blot检测CyclinE表达.CyclinE持续稳定表达1,3,5,7和14 d后,对细胞进行DAPI染色,在荧光显微镜下计数CIN细胞的百分比.结果:Western blot显示,Cyclin E表达在96 h后达高峰.Cyclin E表达关闭的DLDl细胞中,CIN细胞的百分比波动在0.97%-1.22%之间(t=3.81,P＞0.01);而CycIin E持续表达1,3,5,7和14 d后的DLD1细胞中,CIN细胞的百分比分别为2.41%,3.63%,3.92%,6.17%和8.34%(t=4.77,P＜0.01).结论:Cyclin E的表达失调可导致DLDl结肠癌细胞非整倍体数染色体的形成,也是造成结肠癌CIN的重要因素.
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siRNA沉默Cyclin E基因对肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖和侵袭能力的影响
目的:观察siRNA沉默Cyclin E基因表达对肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖和侵袭能力的影响.方法:构建2个靶向Cyclin E基因siRNA载体,转染人肝癌HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞.RT-PCR、Western blot检测转染后HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞Cyclin E基因mRNA和蛋白表达水平.CCK-8试验、软琼脂克隆形成实验检测HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞增殖、克隆形成能力.流式细胞术、transwell试验分别检测HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞周期和侵袭能力.结果:构建的2个Cyclin E基因siRNA载体插入序列与所设计序列均一致；转染HepG2、SMMC-7721和BEL-7402细胞后,干扰1组、干扰2组与空白对照组和阴性对照组比较,Cyclin E mRNA和蛋白表达量均显著降低(P＜0.05),细胞生长速度延缓,软琼脂细胞集落形成数、穿透细胞数均显著降低(P＜0.05),S和G2/M期细胞比例减少,G0/G1期细胞比例增加.结论:沉默肝癌细胞Cyclin E表达水平,可有效抑制细胞生长、增殖和侵袭能力.
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胃癌及癌前病变中P27和Cyclin E蛋白的表达意义
目的:探讨P27和Cyclin E蛋白在胃癌及癌前病变中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系.方法:用免疫组化技术(SP法)对正常胃黏膜(normal gastric mucosa,NGM)、慢性浅表性胃炎(chronic superficial gastritis CSG)、慢性萎缩性胃炎(chronic atrophia gastritis,CAG)伴肠上皮化生、慢性萎缩性胃炎伴非典型性增生各20例和胃癌(gastric carcinoma,GC)60例标本进行免疫组织化学染色,分析P27和CyclinE蛋白表达及其与胃癌临床和病理的关系.结果:各组胃组织中P27和Cyclin E蛋白表达阳性率分别为NGM组100%和5%,CSG组85%和10%,CAG伴肠化组70%和20%,CAG伴不典型增生组45%和30%,胃癌组38.3%和40%.胃癌组和CAG伴不典型增生组P27阳性率显著低于其他组(P＜0.05),Cyclin E阳性率则显著高于其他组(P＜0.05).P27和Cyclin E在胃癌中的表达分别与肿瘤分化程度、浸润深度及肿瘤临床分期相关,P27蛋白的表达尚与有无淋巴结转移相关.P27和Cyclin E蛋白在胃癌中的表达呈显著负相关(r=-0.768,P＜0.05).结论:检测胃癌组织中P27和Cyclin E蛋白的表达有助于判断肿瘤的进展程度,两者联合检测有助于判断肿瘤预后.
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胃癌及慢性胃病患者脾证分型与cyclin E表达的关系
目的探索胃癌、慢性胃病患者脾证分型与cylin E表达的关系.方法在胃癌和慢性胃病患者中,选取具有中医脾虚表现的脾气(阳)虚、脾阴虚患者,和具有脾实表现的脾胃湿热、寒湿困脾证患者,以及按慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生、胃癌分组的患者,进行胃粘膜组织cyclin E免疫组化染色;对各证型的cyclin E表达进行比较,并分析cyclin E在常见胃粘膜病变中表达的差异.结果Cyclin E在上述四种脾证分型的表达有显著性差异,阳性百分率分别为7.9%,27.3%,31.4%和14.3%.在慢性浅表性胃炎、肠上皮化生、不典型增生和胃癌的表达也有显著性差异,阳性率分别为7.5%,28.6%,37.9%和42.6%,后两者已较接近.结论胃癌和慢性胃病患者中,不同的中医脾证其cyclin E表达明显不同,在脾胃湿热和脾阴虚证型中较高,在寒湿困脾和脾气(阳)虚证型中较低.cyclin E表达随病变由慢性浅表性胃炎、癌前病变到癌而逐渐增高,其与胃癌的发生发展密切相关.
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极化调节蛋白aPKC-ι与cyclin E在肝癌中的表达及意义
目的 探讨细胞极化调节蛋白aPKC-ι与Cyclin E在肝细胞肝癌(HCC)及其癌旁组织中表达情况及关系.方法 采用RT-PCR方法 检测aPKC-ι基冈在9例正常肝、43例HCC及其癌旁组织中的表达}免疫组化检测aPKC-ι,Cyclin E蛋白的表达,对所得结果 进行分类和统计分析.结果 aPKC-ι在HCC中的基因表达值为0.844±0.315,明显高于癌旁0.530士0.217及正常肝组织0.372±0.130(P=0.009);aPKC-ι蛋白在HCC、癌旁组织阳性率分别为58.1%(25/43)、23.6%(10/43),分化程度越低、分级越晚表达越高,表达有显著性差异(P<0.05);Cyclin E蛋白在HCC、癌旁组织阳性率分别为65.1%(28/43)、51.6%(22/43),分化程度越低、分级越晚表达越高,表达有显著性差异(P<0.05);aPKC-ι蛋白的表达与Cyclin E蛋白的表达呈正相关(P<0.05).结论 aPKC-ι和Cyclin E在HCC的表达提示其在HCC侵袭、转移中发挥重要作用;两者在HCC中共表达,为进一步研究肝癌侵袭转移机制提供了理论依据.
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PTEN与cyclin E在子宫内膜腺癌中的表达及其意义
目的探讨PTEN与cyclin E在子宫内膜腺癌发生、发展中的作用及其相互关系.方法应用免疫组化SP法,检测12例正常增生期子宫内膜、41例子宫内膜增殖症包括14例单纯型增生(SH),19例复合型增生(CH)、8 例不典型增生(AH)和45例子宫内膜腺癌组织中PTEN、cyclin E的表达;结果在增生期子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌中PTEN阳性表达率呈下降趋势,分别为91.7%(11/12)、43.9%(18/41)和37.8%(17/45),增生期子宫内膜高于子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌 (P<0.001),PTEN在SH中的阳性表达率(78.6%,11/14)高于CH、AH(分别为26.3%,5/19;25.0%,2/8)(P<0.05);cyclin E在增生子宫内膜、子宫内膜增殖症和子宫内膜腺癌中的阳性表达率分别为0、26.8%(11/41)和73.3%(33/45),子宫内膜腺癌中的阳性表达率高于增生子宫内膜、子宫内膜增殖症(P<0.001),在SH、CH和AH中的阳性表达率呈递增趋势,分别为7.1%(1/14)、26.3%(5/19)、62.5%(5/8), SH与AH相比,差异有显著性(P<0.05);45例子宫内膜癌中,所有PTEN蛋白阳性的肿瘤均为分化较好、组织学分级为G1级的子宫内膜腺癌,阳性表达率为56.7%(17/30). Cyclin E表达随组织学分级的升高而升高,但差异无显著性;子宫内膜腺癌组织中PTEN与cyclin E表达呈负相关(Phi r=-0.463,P<0.05).结论 PTEN基因失活参与子宫内膜腺癌的发生、发展,cyclin E基因激活是子宫内膜腺癌发生的重要事件,两者呈负相关.
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周期蛋白E与胃肠道肿瘤
周期蛋白E(cyclin E)表达异常在许多肿瘤形成中起重要作用.分析cyclin E的结构、功能、作用机理及其与视网膜母细胞瘤蛋白(pRB)、周期蛋白依赖性激酶抑制因子(cyclin-dependent kinases inhibitors,CKIs)之间的关系,有助于说明cyclin E对胃肠道肿瘤的发生机制,而且cyclin E与胃肠道肿瘤临床病理分期及患者的预后有关,cyclin E可能成为肿瘤免疫治疗靶基因.
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丙戊酸钠诱导Siha细胞周期阻滞的实验观察
目的:研究丙戊酸钠对人宫颈癌Siha细胞增殖和细胞周期的影响.方法:MTT检测生长抑制,流式细胞仪检测细胞周期,蛋白质印迹法检测p21WAF1/CIP1、p-CDK2和cyclin E蛋白.结果:丙戊酸钠以剂量依赖性方式抑制Siha细胞生长IC20和IC50分别为2.0 mmol/L和8.0 mmol/L;丙戊酸钠上调G0/G1期比例由(74.92±0.60)%升高至(84.475±1.11)%,P=0.001,下调S期(13.19±0.70)%降为(7.72±1.40)%,P=0.004和G2/M(11.89±1.30)%降为(7.81±0.31)%期比例,P=0.006.丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1蛋白,下调cyclin E和p-CDK2蛋白.结论:丙戊酸钠上调p21WAF1/CIP1表达和抑制cyclin E表达,使细胞阻滞于G0/G1期,抑制Siha细胞生长.
关键词： 丙戊酸钠 宫颈肿瘤 细胞周期 p21WAF1/CIP1 cyclin E -
P27、CyclinE在非小细胞肺癌中表达及其与预后的关系
目的研究P27、cyclin E在非小细胞肺癌(NSCLC)中表达及其与患者预后生存期之间关系,明确其表达的意义及在判断肺癌预后方面的价值.方法收集临床手术切除的NSCLC组织材料,确定其临床病理特征,随访患者生存情况.免疫组化方法检测P27、cyclin E在NSCLC组织中表达与NSCLC患者预后关系.结果86例NSCLC组织中,P27蛋白表达阴性者、细胞阳性率≤50%者及＞50%者分别占5.8%、69%、24.4%,以胞浆阳性为主.处于增殖状态的支气管上皮细胞呈cyclinE阳性表达,主要位于细胞核,着色较浅;NSCLC组织中cyclin E阳性率为36%(31/86),主要位于细胞核,着色较深;P27蛋白的细胞阳性率高低与患者的生存期有关,P27低表达者的平均生存期(32.8个月)明显低于P27高表达者的平均生存期(49.6个月)(P＜0.01);CyclinE表达与NSCLC的预后有关,cyclinE(+)者的平均生存期(27.97个月)低于cyclinE(-)者的平均生存期(46.08个月)(P＜0.05);P27低表达-cyclinE(+)者的平均生存期(15.84个月)明显低于P27高表达-cyclinE阴性者的平均生存期(55.24个月)(P＜0.01).结论cyclinE表达与支气管上皮细胞的增殖有关;P27低表达、cyclinE过表达是NSCLC预后差的有意义标志;联合检测P27、cyclinE表达对判断NSCLC的预后更有价值.
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Cyclin E与恶性肿瘤
近年研究发现,细胞周期调控机制紊乱是细胞增生失控从而导致癌变的重要原因.
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Cyclin E、p27及Ki-67蛋白在颅内肿瘤患者中的表达及意义
目的 探讨分析Cyclin E、p27及Ki-67蛋白在颅内良恶性肿瘤组织中的表达差异,并分析其临床意义.方法 分别选取脑膜瘤28例为良性组,胶质瘤32例为恶性组,另选取正常脑组织19例为对照组,采用免疫组化方法检测各组标本中Cyclin E、p27及Ki-67的表达水平.结果 Cyclin E在恶性组、良性组以及对照组中的阳性率分别为85.7％ (24/28)、21.9％ (7/32)和0％ (0/19),3组Cyclin E阳性率具有显著差异(P＜0.05).p27在恶性组、良性组以及对照组中的阳性率分别为21.4％ (6/28)、81.3％ (26/32)和94.7％(18/19),3组p27阳性率具有显著差异(P＜0.05).Ki-67在恶性组、良性组以及对照组中的阳性率分别为78.6％ (22/28)、18.8％ (6/32)和0％ (0/19),3组Ki-67阳性率具有显著差异(P＜0.05).结论 Cyclin E、p27及Ki-67蛋白在不同脑组织中呈现差异性表达,其表达水平差异可能是颅内肿瘤发生发展的机制之一.
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细胞周期素E与子宫内膜癌
细胞周期是由一系列高度有序并循精确时相的G1-S-G2-M期构成.细胞通过调控Cyc-lin,CDK,CKI及Rb,P53来实现对细胞周期进展速度的调控.肿瘤发生的根本原因就是本应停止增殖或生理性调亡的细胞不停地进入细胞周期,从而导致细胞的恶性增殖.细胞周期素E(CyclinE)正是一种细胞周期调节蛋白,其高表达标志着细胞周期的启动和DNA合成即将开始.
