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N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响
目的 探讨N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)对人支气管上皮16HBE细胞周期进程的影响及相关分子机制。方法 16HBE细胞经MNNG处理后，噻唑蓝(MTT)法检测MNNG对16HBE细胞增殖的影响，PI染色检测细胞凋亡，Hoechst 33342和PI双染检测细胞坏死，流式细胞术检测细胞周期分布，在周期变化明显的时点应用蛋白免疫印记检测周期相关蛋白含量变化。结果 MNNG能够剂量依赖性的抑制细胞增殖和诱导凋亡，亚致死剂量的MNNG使细胞引起明显的S期和G2/M期阻滞，同时细胞周期相关蛋白p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A含量下降明显。结论 MNNG通过降低细胞p-Cdk2(Thr160)和Cdc25A的含量诱导16HBE细胞发生S期和G2/M期阻滞。
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分子对接法虚拟筛选桂枝茯苓胶囊抗子宫肌瘤的潜在活性成分
目的:运用计算机虚拟对接技术筛选桂枝茯苓胶囊中抗子宫肌瘤的潜在活性成分.方法:选择与子宫肌瘤发病机制高度相关的雌激素受体ER、CDK2、EGFR为靶点,采用软件Molegro Virtual Docker,以选择性抑制剂与靶点的共结晶复合物作为受体模板,建立靶点的活性位点,与桂枝茯苓胶囊中的35种已知主要成分进行分子对接.结果:以选择性抑制剂与靶点的MD Score的1/2为阈值,筛选得到13个化合物与靶点存在较强的相互作用.结论:桂枝茯苓胶囊多个成分能与ER、CDK2,EGFR成功对接,这可能是桂枝茯苓胶囊抗子宫肌瘤作用的活性成分.
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人参皂苷Rh2对食管癌细胞Eca-109细胞周期的影响
目的:探讨人参皂苷Rh2(ginenoside-Rh2,GS-Rh2)对人食管癌细胞Eca-109生长抑制及细胞周期的影响.方法:应用MTT法测定GS-Rh2对细胞的生长抑制作用,HE染色后光镜观察细胞形态变化,应用免疫细胞化学和Western blot检测细胞周期调控因子cyclinE,CDK2(cyclin-dependent kinase 2),p21WAF1基因蛋白表达,采用半定量RT-PCR检测基因mRNA表达.结果:GS-Rh2对Eca-109细胞生长有抑制作用,并呈剂量、时间依赖性.20μg·mL-1GS-Rh2作用1 d后细胞达到半数抑制,作用3 d的Eca-109细胞较对照细胞数目明显减少,细胞形态向正常细胞方向逆转.细胞周期分析显示,随着GS-Rh2药物剂量的增加,G0/G1期细胞数逐渐增加,S和G2/M期细胞数逐渐减少,10μg·mL-1和20μg·mL-1 GS-Rh2处理组和对照组比较有显著性差异.20μg·mL-1SS-Rh2处理细胞后,随着作用时间延长,cyclinE和CDK2蛋白及其mRNA表达水平逐渐增高,而p21WAF1蛋白及其mRNA表达水平逐渐降低.结论:GS-Rh2可以将人食管癌细胞Eca-109阻滞于G0/G1期,诱导肿瘤细胞分化,并且通过影响细胞周期调控因子cy-clinE,CDK2,p21WAF1基因的表达抑制食管癌细胞的增殖.
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细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶2在单纯疱疹病毒复制中的作用
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)与单纯疱疹病毒(HSV)等多种重要人类疾病病毒的复制密切相关.但具体哪种CDK是病毒复制所必需的还不清楚.本文用不同剂量的HSV-1-KOS株(以下简称HSV)感染CDK2功能缺陷型宿主细胞,结果发现HSV在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制具有感染剂量依赖性;一步生长曲线分析结果表明其在CDK2功能缺陷型宿主细胞中的复制较在正常细胞延迟3h;感染6h时CDK2活性被诱导,9h时活性大;CDK2活性增加后HSV-1即进入快速的裂解性复制.提示CDK2可能在HSV复制的启动中起着某种重要作用.
关键词： HSV Cdk2 病毒-宿主细胞相互作用 -
CDK2促进K562细胞早期红系分化
目的 探讨细胞周期调节蛋白CDK2对K562细胞红系分化的影响.方法 分别用CDK2表达质粒和干扰RNA分子转染K562细胞,用Western blot法检测过表达或干扰效率,使用real-time PCR和联苯胺染色法检测K562细胞分化.结果 CDK2在K562细胞红系分化早期呈现表达上升趋势;在K562细胞中过表达CDK2可促进hemin诱导的红系分化;反之,干扰K562内源的CDK2表达会对K562红系分化产生抑制作用.结论 CDK2在K562细胞早期红系分化过程中发挥促进作用.
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抑制cyclinD1表达对乳腺癌细胞增殖及cyclinE、CDK2和p21cip1转录的影响
目的分析探讨人乳腺癌细胞中cyclinD1的表达受到反义RNA抑制后,细胞增殖能力的变化以及cyclinE,CDK2和p21cip1(cip1/waf1/sdi1)基因表达受到的影响. 方法将表达cyclinD1反义RNA的重组质粒转入人乳腺癌细胞,由此抑制细胞中cyclinD1的表达,然后分析细胞生长速率和各时相细胞分布比例的变化,并通过Northern blot分析有关基因的表达水平. 结果 cyclinD1表达受到抑制的细胞与对照相比,细胞增殖速率明显下降,培养至第6d时,生长抑制率为54%.细胞周期各时相的分布比例也有较大的变化,G1期细胞比例上升,而S期及G2/M期细胞比例下降.cyclinE和CDK2的mRNA水平显示出有不同程度的下降,而p21cip1的表达无明显变化. 结论 cyclinD1表达的抑制可明显减弱人乳腺癌细胞的异常增殖,同时表明同为细胞周期调控基因的cyclinE和CDK2的表达与cyclinD1的表达密切相关,而p21cip1的表达不受cyclinD1的影响.
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CDK2在精母细胞和卵母细胞减数分裂中的作用
细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(Cyclin-dependent kinase,CDK)2是驱动细胞通过G1/S期检验点进入S期完成DNA合成的关键性调控蛋白.过去一度认为CDK2在减数分裂中的作用不像在有丝分裂中那么重要.直至2003年在敲除小鼠CDK2基因后出乎意料地发现小鼠生长发育正常,只是不育:生殖细胞减数分裂受到影响.这一发现引起人们重新审视CDK2在细胞增殖中的作用,对CDK2在减数分裂中的作用研究受到关注,本文就此作一综述.
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细胞周期抑制剂SNS-032对小鼠造血干细胞生物活性的影响研究
本研究旨在探讨SNS-032(C17H24N4O2S2)对小鼠骨髓造血干细胞(hematopoietic stem cells,HSC)细胞周期、凋亡、分化及自我更新的影响及其可能的相关机制.利用极限稀释实验检测SNS-032作用前后HSC自我更新的变化,用流式细胞术检测SNS-032作用前后小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+ Sca-1+及Lin-c-kit+ Sca-1-袁型细胞的细胞周期及凋亡的变化,用实时定量PCR检测SNS-032作用前后细胞周期相关基因、凋亡相关基因及HSC自我更新相关基因mRNA表达量的水平.结果显示,SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞中HSC的自我更新能力没有明显变化；加SNS-032处理后,小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+ Sca-1+表型细胞的细胞周期无统计学意义的变化(P＞0.05),小鼠骨髓Lin-c-kit+ Sca-1-表型细胞的G1期细胞增多(P＜0.05)；小鼠骨髓细胞Lin-c-kit+ Sca-1+表型细胞和Lin-c-kit+Sca-1-表型细胞的细胞凋亡增多,与对照相比均无显著性差异(P＞0.05).小鼠骨髓细胞经SNS-032处理后,HSC周期相关基因CDK1、CDK2、CDK7、p27的表达量均明显降低(P＜0.05),而CDK4,CDK6,p21,p18,p19,p16的表达与对照组相比没有明显变化(P＞0.05).凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Puma和p53表达量与对照组相比没有明显区别(P＞0.05),与干细胞自我更新相关的基因中Bim,Sall4,Notch1表达量升高,但与对照组相比没有显著性差异(P＞0.05).结论:SNS-032没有明显的抑刺正常造血干细胞自我更新、分化作用,而且SNS-032没有明显的诱导正常造血干、祖细胞的凋亡作用.
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HPV16 E6、P21WAF1、CDK2、Livin在宫颈癌中的表达及其意义
目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)16 E6、P21WAF1、CDK2、livin在宫颈癌中的表达及P21WAF1、CDK2、livin与E6的关系.方法 采用免疫组化SP法检测HPV16 E6、P21 P21WAF1、CDK2、livin在20例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常对照组中的表达.应用图像分析软件分别对此四个因子的表达进行平均光密度分析.结果 E6、P21WAF1、CDK2、livin蛋白于宫颈癌组高于CIN1-2组及正常组(P<0.05),CIN3组高于CIN1-2组及正常组(P<0.05),宫颈癌组与CIN3组之间差异无统计学意义(P>0.05).CIN1-2组与正常组之间差异无统计学意义(P>0.05).E6分别与P21WAF1、CDK2、livin成正相关(相关系数r分别为0.706、0.713、0.711,P<0.05).结论 E6、CDK2与宫颈癌的发生、发展密切相关,E6、CDK2异常高表达可能是宫颈疾病恶变早期事件.livin可能成为宫颈癌潜在的治疗分子靶向.
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CDK2干扰RNA对人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的影响
目的 构建人CDK2的干扰RNA真核表达载体,稳定转染人脑胶质细胞瘤SHG44细胞,经RT-PCR检测后,运用双向电泳-图像分析-质谱技术研究人脑胶质瘤细胞质蛋白质组的改变,探讨CDK2在SHG44细胞中的作用,为人脑胶质瘤的发生、发展的研究及诊断与治疗提供有价值的资料.方法 (1)构建CDK2干扰RNA真核表达载体并用双酶切和测序鉴定.(2)G418筛选阳性转染细胞克隆,制备稳定转染的SHG44细胞系.(3)通过RT-PCR比较转染后CDK2 mRNA的表达量.(4)双向凝胶电泳-质谱技术-数据库搜索,比较转染前后细胞质蛋白质组的变化.结果 (1)成功构建了CDK2干扰RNA真核表达载体PGPU6/GFP/Neo-CDK2-1.(2)获得稳定转染细胞系,命名为PCDK2-1-SHG44细胞.(3)通过双向电泳-图像分析-质谱技术得到细胞质未见表达的蛋白质5个,包括醛缩酶A、波形蛋白等蛋白质.结论 成功建立稳定转染CDK2干扰RNA的SHG44细胞系.质谱鉴定得到的这些差异表达的蛋白质涉及细胞的增殖、细胞凋亡的信号转导调节、正常细胞的恶性转化及发育调控以及肿瘤的发生、发展和耐药性形成.
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喉癌组织中CDK2和VEGF的表达及其意义
目的：探讨喉癌组织中CDK2和VEGF的表达情况。方法：应用免疫组织化学SABC法，选择53例喉鳞癌组织为实验组，38例声带息肉为对照组，检测CDK2和VEGF的表达并进行分析。结果：实验组的CDK2和VEGF表达阳性率分别为79％和87％，而对照组的表达阳性率分别为24％和11％，对比差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：喉癌组织中CDK2和VEGF的表达与喉癌发生发展、预后密切相关，对于早期预测喉癌发生及预后有重要的临床意义。
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shRNA沉默CDK2基因对B16-F1细胞小鼠皮下移植瘤的影响
目的 早期恶性黑色素瘤可以通过手术切除的方式得到缓解,发生转移的黑色素瘤由于其耐药性,预后较差.为探索治疗黑色素瘤的新方法,本研究探讨由慢病毒载体pUL介导的shRNA沉默CDK2基因对黑色素瘤细胞B16-F1皮下移植瘤生长的影响.方法 于C57BL/6小鼠右侧腹股沟皮下注射B16-F1细胞建立移植瘤模型,采用癌灶多点注射的方法分为空白对照组、阴性对照组和实验组(n=5).阴性对照组,采用癌灶多点注射的方法将携带NC-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200,μL,隔日1次,共6次,观察18 d;空白对照组,用与阴性对照组相同的方式方法向瘤体注射PBS,观察18 d;实验组,采用癌灶多点注射的方法将携带CDK2-shRNA的重组慢病毒(滴度为2×108 TU/mL)导入肿瘤灶,每只小鼠200 μL,隔日1次,共6次,观察18d.观察肿瘤生长情况并绘制肿瘤生长曲线,18 d后杀鼠取瘤称瘤质量,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL检测肿瘤组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测肿瘤组织细胞中CDK2蛋白表达情况.结果 C57BL/6小鼠接种瘤细胞3d后均有肿瘤形成.治疗的第6天空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤体积分别为(48.7±8.4)、(50.0±8.9)和(31.4±8.7) mm3,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤生长速度明显降低,差异有统计学意义,F=8.879,P=0.004.空白对照组、阴性对照组和实验组的肿瘤重量分别为(0.56±0.10)、(0.55±0.11)和(0.28±0.07)g,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,肿瘤体质量明显降低,差异有统计学意义(F=13.659,P=0.001),实验组与空白对照组相比肿瘤生长抑制率为50.2％;空白对照组、阴性对照组和实验组的细胞凋亡指数分别为(7.73±1.08)％、(7.87±1.42)％和(32.27±3.62)％,实验组与空白对照组和阴性对照组相比,瘤细胞凋亡指数显著升高,差异有统计学意义,F=189.748,P＜0.001.实验组与空白对照组和阴性对照组相比,组织细胞中CDK2蛋白的表达显著降低,差异有统计学意义(F=293.346,P＜0.001),实验组相对于空白对照组CDK2蛋白表达的抑制率为50.4％.结论 重组慢病毒CDK2-shRNA沉默CDK2基因的表达能有效抑制B16-F1细胞移植瘤的生长,CDK2基因可能成为黑色素瘤基因治疗的有效靶点.
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cyclin E和cdk2在肺癌中表达及其临床意义
目的:探讨细胞周期调控因子在肺癌发病中的作用.方法:应用免疫组化方法检测细胞周期蛋白E(cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cdk2)在38例肺癌和6例正常肺组织中的表达状况.结果:cyclin E和cdk2在肺癌中阳性率分别为60.5%、65.8%,显著高于正常肺组织(P＜0.05);cdk2表达与肺癌分期密切相关(P＜0.05),而cyclin E表达与肺癌分期、淋巴结转移和病理分型均无相关性(P＞0.05);肺癌中两者共表达率为31.8%.结论:cyclin E和cdk2参与肺癌的发生发展过程,但可能不是反映肺癌生物学特征有价值的标记物.
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Cyclin E与恶性肿瘤
近年研究发现,细胞周期调控机制紊乱是细胞增生失控从而导致癌变的重要原因.
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细胞周期素E与子宫内膜癌
细胞周期是由一系列高度有序并循精确时相的G1-S-G2-M期构成.细胞通过调控Cyc-lin,CDK,CKI及Rb,P53来实现对细胞周期进展速度的调控.肿瘤发生的根本原因就是本应停止增殖或生理性调亡的细胞不停地进入细胞周期,从而导致细胞的恶性增殖.细胞周期素E(CyclinE)正是一种细胞周期调节蛋白,其高表达标志着细胞周期的启动和DNA合成即将开始.
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CDK2在鼻咽癌中的表达及意义
目的 探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)在鼻咽癌和慢性鼻咽炎黏膜组织中的表达水平,及其与鼻咽癌的临床病理关系.方法 免疫组化SP法检测CDK2蛋白在鼻咽癌和慢性鼻咽炎黏膜组织中的表达情况.结果 CDK2蛋白阳性表达主要定位于细胞核,少数有胞浆着色,呈棕黄色或棕褐色不同强度的染色.62例鼻咽癌组织中阳性表达率为69.4%(43/62),慢性鼻咽炎黏膜组织中阳性率为32.0%(9/28),两组间差异有统计学意义(P<0.05).CDK2蛋白表达与鼻咽癌分化程度,淋巴结转移范围,TNM分期有关(P<0.05).结论 CDK2在鼻咽癌组织中的表达明显高于慢性鼻咽炎黏膜组织中的表达,提示CDK2与鼻咽癌的发生、发展有关.CDK2与鼻咽癌分化程度,淋巴结转移范围,TNM分期有关.
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CDK2、P57在子宫内膜腺癌中的表达及意义
目的 研究CDK2、P57在子宫内膜组织中的分布和表达,探讨其在子宫内膜腺癌发病中的作用.方法 运用原位杂交方法 检测CDK2、P57在14例正常子宫内膜、19例非典型增生子宫内膜、45例子宫内膜腺癌中的表达情况.蛄果CDK2蛋白在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜、子宫内膜腺癌的阳性表达率分别为7.14%、36.84%、71.11%,各组之间的差异有显著性(P<0.05).CDK2蛋白的阳性表达率在不同组织学分级、淋巴有无转移之间具有显著性差异(P<0.05),而在肌层浸润、不同手术一病理分期、年龄之间的差异均无显著性差异(P>0.05).P57蛋白在正常子宫内膜、非典型增生子宫内膜、子宫内膜腺癌的阳性表达率分别为71.43%、52.63%和44.44%,各组之问的差异有显著性(P<0.05).P57阳性表达缺失与组织学分级、淋巴有无转移有显著性差异(P<0.05),与子宫肌层浸润程度、不同手术～病理分期、年龄之间的差异无显著性差异(P>0.05);P57蛋白表达与CDK2呈负相关(P<0.05).结论子宫内膜腺癌中存在CDK2蛋白的异常表达3LP57蛋白表达下降或缺失,促进了细胞的生长和肿瘤的发展,是子宫内膜腺癌的发生、发展中的重要事件.
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探究增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因与细胞周期的相关性
目的：探究与分析增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达与细胞周期之间的相关性。方法：选取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕标本，按照增生性瘢痕的时间段将所采集的标本进行分组，共分为3个月组、6个月组、1年组及2年组，每组各10份标本，另选择同时期采集到的10份正常标本作为常规对照组。观察与对比各个标本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情况，同时对成纤维细胞周期进行检测。结果：3个月组、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与对照组相比差异均有统计学意义（P<0.05）；6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与3个月组相比差异均有统计学意义（P<0.05）；3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与6个月组相比差异均有统计学意义（P<0.05）。增生期瘢痕早期高比例在细胞分裂周期中的S期间及G2/M期，结果可见，针对此细胞周期进行相关的基因调控干预，可对增生性瘢痕进一步发生发展起到有效抑制作用。结论：处于不同增生性瘢痕的时期中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达趋势大致相符，增生性瘢痕细胞周期的分布情况与上述三个蛋白执行功能的情况呈相互对应的关系，为临床研究提供可靠依据。
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华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及周期的影响
目的 探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及周期的影响.方法 应用噻唑蓝还原法(MTT)检测华蟾素注射液对HepG-2细胞增殖的影响;应用流式细胞术(FCM)检测HepG-2细胞周期分布;采用逆转录-多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测华蟾素注射液对HepG-2细胞CyclinA和CDK2mRNA表达水平的影响;应用比色定量法检测华蟾素注射液对HepG-2细胞内CDK2及CyclinA活性的影响.结果 华蟾素注射液可以抑制HepG-2细胞增殖,其抑制作用具有时间和剂量依赖性;可将HepG2细胞阻滞于S期;抑制HepG-2细胞CDK2、CyclinAmRNA水平表达;使HepG-2细胞CyclinA、CDK2活性降低.结论华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,并将细胞阻滞于S期,诱导细胞凋亡,机制可能是通过影响CyclinA、CDK2活性,下调CDK2、CyclinAmRNA水平表达实现的.
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Cyclin E/CDK2及p27在胃癌细胞周期G1/S调控中的研究
目的 探讨胃癌组织中Cyclin E/CDK2和p27蛋白表达及细胞增殖与胃癌发生及发展的关系.方法 采用流式细胞术检测Cyclin E/CDK2及p27蛋白在胃癌组织及正常胃壁组织细胞中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤细胞分化程度、癌组织浸润深度及有无淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析.结果 胃癌组织及正常胃组织细胞增殖指数分别为(40.62±5.07)％和(24.99±3.1 1)％,二者比较有显著性差异(P＜0.01);FCM检测胃癌组织及正常胃组织细胞中Cyclin E蛋白表达荧光强度分别为(482.67±19.45)A.U.和(442.46±20.49) A.U.,CDK2蛋白表达荧光强度分别为(469.04±21.62)A.U.和(436.64±11.24)A.U.,p27蛋白表达A.U分别为(449.10±19.98)A.U.和(502.17±18.78)A.U.,二者比较均有显著性差异(P＜0.01).结论 胃癌具有旺盛的增殖能力.Cyclin E、CDK2及p27蛋白的异常表达引起了细胞异常增殖,从而引起早期胃癌的发生.联合检测Cyclin E、CDK2及p27蛋白的表达可为临床上胃癌早期诊断提供实验依据,对于提高临床上胃癌早期诊断的准确率具有重要的意义.
