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CDK2、CDK4在金黄地鼠颊囊癌变过程中表达的研究
目的探讨CDK2 、CDK4在金黄地鼠颊囊黏膜从正常黏膜到单纯增生、异常增生及鳞状细胞癌的表达变化及相关性.方法采用DMBA诱导48只金黄地鼠颊囊癌变动物模型,SABC免疫组化法检测CDK2 、CDK4蛋白的表达.结果 CDK2 、CDK4均在异常增生上皮及鳞状细胞癌的表达与正常和单纯增生组相比明显提高(P＜0.05),阳性染色等级随病理等级改变提高(P＜0.05).CDK2与CDK4呈高度正相关.结论 CDK2 、CDK4参与了口腔黏膜癌前病变和鳞状细胞癌的发生与发展.
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c-abl与CDK2在新疆哈萨克族食管鳞癌早期发生中的作用
目的:探讨细胞周期调控因子c-abl、CDK2在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展中的作用.方法:采用逆转录PCR方法在48例新疆哈萨克族食管鳞癌组织及远端无癌组织中检测c-abl、CDK2的表达.结果:在新疆哈萨克族食管鳞癌中:(1)c-abl和CDK2在癌组织与癌旁组织中的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)在癌组织中CDK2表达与TNM分期有关(P=0.040<0.05).结论:CDK2表达与食管癌TNM分期有关,两基因直接或间接的通过细胞周期和凋亡在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展及侵袭过程中起作用.
关键词： 哈萨克族食管鳞癌 c-Abl Cdk2 逆转录聚合酶链式反应 -
食管上皮癌变过程中细胞周期蛋白E细胞周期蛋白依赖性激酶2表达及DNA含量的研究
本文探讨食管上皮癌变过程中DNA含量的变化,以及细胞周期蛋白E(cyclinE)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(cy-clin-dependent kinase2,CDK2)表达的变化及其意义.
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靶向CDK2、cyclinE的siRNA对HepG2细胞周期及凋亡的影响
目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent-kinase 2,CDK2)活性对肝癌细胞株HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:根据基因库中登录的人和鼠CDK2、cyclinE序列,设计并构建CDK2、cyclinE干扰RNA真核表达载体;脂质体法转染肝癌细胞株HepG2细胞,流式细胞术分析CDK2及cyclinE对HepG2细胞增殖的影响;蛋白质印迹法检测CDK2、cyclinE活性的变化caspase-3活性的影响.结果:1.成功构建CDK2及cyclinE干扰RNA真核表达载体psiCDK2、psiCyclinE,用脂质体法导入肝癌细胞株HepG2细胞中,有效表达.2.转染48h后与空载体组相比:psiCDK2、psiCyclinE组G1期细胞增多,G2/M和S期细胞减少;蛋白质印迹法分析表明psiCDK2、psiCyclinE组caspase-3酶原被激活.结论:靶向CDK2、cyclinE的siRNA能抑制HepG2细胞的增殖;靶向CDK2、cyclinE的siRNA能激活caspase-3,诱导肝癌细胞HepG2凋亡.
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CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG2细胞周期和增殖的影响
目的:探讨CDK2 siRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞CDK2 mRNA表达及其对HepG2细胞周期和增殖的影响.方法:利用脂质体转染法将特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒PGenesil-1-CDK2导入HepG2细胞,同时设立阴性对照空载体转染组PGenesil-1-HK.G418筛选稳定表达细胞株扩增培养.并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM),分别检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA和细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞生长增殖率.结果:经1mo的G418筛选得到稳定表达细胞株,与阴性对照组及空白对照组相比,转染组CDK2 mRNA 水平明显下降,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞.结论:RNA干扰技术可明显抑制CDK2基因的表达,引起 HepG2细胞周期阻滞及肿瘤细胞生长抑制作用,为CDK2介导的肿瘤基因沉默疗法提供实验依据.
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SiRNA沉默CDK2和CyclinE对人肺腺A549细胞周期的影响
目的 探讨小干扰RNA沉默CDK2(cyclin-dependent-kinase2)、CyclinE基因表达对人肺癌细胞株A549细胞增殖、及细胞周期的影响.方法 以脂质体Lipofectamine2000将化学合成的CDK2、Cy-clinE siRNA转染人肺癌A549细胞,转染48 h后流式细胞术检测各组细胞凋亡及细胞周期的变化.结果 SiRNA基因沉默后CDK2、CyclinE蛋白表达明显下降,与对照组相比,G1期细胞增加,G2/M及S期细胞减少,A549细胞增殖明显受到抑制,凋亡细胞比例增加.结论 SiRNA沉默CDK2、CyclinE基因表达能抑制肺癌A549细胞的增殖;并激活细胞凋亡通路,诱导人肺腺癌细胞A549的凋亡.
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VES抑制Raji细胞增殖中对CDK2和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响
目的比较观察维生素E琥珀酸酯(VES)和维生素E(VE)对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期素依赖性激酶2(CDK2),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响.方法应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法,体外观察VES和VE对Raji细胞的作用.结果 VES和VE对Raji细胞均有程度不一的生长抑制作用,20μg/mlVES对Raji细胞的生长抑制在72h即达100%,而20μg/mlVE的抑制率仅与5μg/mlVES的接近.VES较强的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生,具有剂量效应和时间效应关系,同时VES作用后,细胞内CDK2蛋白,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加.结论 VES通过影响细胞周期调控因子CDK2,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达可能是其抗肿瘤的途径之一.
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腺相关病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡
目的 探讨腺相关病毒介导的CDK2-shRNA对人黑色素瘤细胞A375凋亡,为黑色素瘤的防治提供技术支持.方法 体外合成CDK2及转录终止序列,构建CDK2-shRNA的腺相关病毒载体和包装相应的重组腺相关病毒,荧光显微镜检测转染和感染条件下CDK2-shRNA表达效果,MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡试剂盒检测细胞凋亡,免疫印迹检测cyclin E和E2F1表达.结果 转染和感染的腺相关病毒介导的CDK2-shRNA在A375细胞均有表达且具有较低的细胞毒性;转染和感染的CDK2-shRNA均促进A375细胞发生凋亡;干扰CDK2可降低cyclin E和E2F1表达.结论 相关病毒介导的CDK2-shRNA促进黑色素瘤细胞A375凋亡.
关键词： 腺相关病毒 Cdk2 黑色素瘤细胞A375 细胞凋亡 -
CDK2 shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应
目的：构建CDK2 shRNA慢病毒载体，并在黑色素瘤细胞B16－F1中鉴定其基因沉默效应。方法体外构建3个慢病毒重组目的质粒pUL－CDK2－shRNAs和1个阴性对照慢病毒重组质粒pUL－NC－shRNA，转化感受态细胞，PCR鉴定后进一步测序验证；293T细胞中测定病毒滴度；用重组慢病毒感染B16－F1细胞测定其感染效率，RT－PCR和Western印迹检测其对 B16－F1细胞中CDK2的基因沉默效应。结果 PCR鉴定后进一步测序表明，成功构建了重组慢病毒质粒；病毒滴度为4．5×107～5．5×107 TU／ml；用重组慢病毒感染 B16－F1细胞，当感染复数（MOI）为10时，感染效率可达90％；RT－PCR和Western印迹结果表明，与未感染组和NC－shRNA感染组细胞相比，CDK2－shRNA1、CDK2－shRNA2、CDK2－shRNA3感染的细胞中CDK2 mRNA和蛋白表达均受到不同程度抑制（P＜0．05），以 CDK2－shRNA3感染组的抑制率高，RT－PCR和 Western Blot 检测其抑制率分别为78．5％±4．23％和70．5％±3．54％。结论利用RNAi技术成功构建了3种CDK2－shRNA重组慢病毒载体，均可有效感染B16－F1细胞并具有一定的基因沉默效应，其中以针对靶位点1012－1020的pUL－CDK2－shRNA3基因沉默效应强，为进一步研究CDK2基因沉默对黑色素瘤化疗敏感性的影响奠定了基础。
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树舌多糖GF抑制肝癌细胞SMMC7721增殖及对CDK2基因表达的影响
目的:探明树舌多糖GF(Ganoderma appanatum polysaccharides GF,GAPSGF)对肝癌细胞SMMC7721增殖及CDK2表达的影响.方法:不同浓度树舌多糖GF处理肝癌细胞SMMC7721,采用MTT法检测树舌多糖GF对肝癌细胞SMMC7721增殖抑制作用 ;实时定量聚合酶链反应(Real-Time PCR)检测CDK2 mRNA表达 ;蛋白印迹法(Western blot)检测CDK2蛋白表达情况.结果:树舌多糖GF对肝癌细胞SMMC7721具有明显的生长抑制作用.其中树舌多糖GF2.5 μg/mL组与树舌多糖GF10μg/mL组作用显著,且CDK2的mRNA和蛋白表达下降.结论:树舌多糖GF可能通过降低CDK2表达,抑制肝癌细胞SMMC7721增殖.
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树舌多糖GF对siRNA干扰沉默CDK2基因表达的辅助作用
目的:探讨树舌多糖GF辅助siRNA干扰沉默CDK2基因表达的作用.方法:本实验采用人肝癌细胞SMMC7721为研究对象,将中药树舌多糖GF2.5μg·mL-1与siRNA干扰序列191联合应用,采用Real-time PCR方法检测CDK2基因mRNA水平表达情况.结果:树舌多糖GF2.5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3%.结论:树舌多糖GF2.5μg·mL-1与191序列合用比单纯应用191序列抑制率提高3%,表明树舌多糖GF对RNAi技术沉寂肝癌CDK2基因有一定的辅助作用.
关键词： 树舌多糖GF 肝癌细胞SMMC7721 siRNA Cdk2 辅助作用 -
周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用
周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5, CDK5)是CDKs家族的成员之一,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,具有与其他的CDKs成员同源的序列~[1].CDK5早是从Hela细胞中分离并克隆,并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57%的同源性~[2],故又称为cdc2相关的蛋白激酶.
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Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其临床意义
背景：近年来，组织芯片技术已越来越多地应用于恶性肿瘤相关研究。TGF-β信号通路在恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用。目的：应用组织芯片技术研究 TGF-β信号通路相关分子 Runx3、Smad4、Cdk2、p21在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征和预后的关系。方法：收集130例行胃癌根治术患者的癌组织（n =130）癌旁组织（n =248）标本石蜡块，制成组织芯片，以免疫组化方法检测 Runx3、Smad4、Cdk2、p21表达。结果：胃癌组织 Runx3、Smad4、Cdk2、p21异常表达率分别为67.7%、35.4%、63.8%和70.0%，分别显著高于癌旁组织的14.1%、12.5%、18.1%和37.1%（P <0.05）。Runx3异常表达与胃癌组织学分型和淋巴结转移有关（P <0.05），Smad4和 p21异常表达仅与胃癌组织学分型有关（P <0.05），Cdk2异常表达与胃癌组织学分型、淋巴结转移和 TNM 分期有关（P <0.05）。除 Cdk2仅与 Runx3相关外，Runx3、Smad4、p21在胃癌中的异常表达两两相关。Kaplan-Meier 生存分析显示，Runx3、Smad4、p21异常表达组5年生存率分别显著低于相应正常表达组（P <0.05）；Cox 比例风险模型显示Runx3和 Smad4为胃癌患者的独立预后因素。结论：Runx3、Smad4、Cdk2、p21可能在胃癌的发生、发展中起一定作用。由于四者间存在相互影响，Runx3和 Smad4能否作为判断胃癌预后的指标尚待进一步研究。
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CDK2别构小分子抑制剂的虚拟筛选和体外活性研究
目的 根据CDK2的晶体结构(PDB ID:3PXF),在已验证的别构口袋处,拟筛选出CDK2新型别构小分子抑制剂.方法 通过计算机辅助药物设计方法,基于CDK2蛋白晶体别构位点进行虚拟筛选,综合分析化合物与CDK2的作用模式;构建CDK2体外激酶活性检测体系,对化合物进行初步的体外生物活性研究.结果 虚拟筛选得到打分前1 000名的化合物,终挑选并购买10个候选化合物.其中,化合物S2和S5表现出较好的抑制效果,在100 μmol/L的浓度下对CDK2活性的抑制率分别为57.59％和41.64％.结论 综合利用虚拟筛选、结构分析以及生物活性测试,筛选出具有明显的CDK2抑制活性的先导化合物S2和S5,为设计开发新型的CDK2别构小分子抑制剂奠定了基础.
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白藜芦醇抑制耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖的研究
目的 观察白藜芦醇对耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖和细胞周期的影响及探讨其靶点蛋白质.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、光学显微镜观察观察白藜芦醇对MCF-7/ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响,Western blot法、亲和甄别磁珠法鉴定白藜芦醇的靶点蛋白质.结果 白藜芦醇作用MCF-7/ADM 72 h之后,细胞增殖大量下降并且呈剂量依赖关系,而对正常肝细胞毒性很小.白藜芦醇可导致MCF-7/ADM细胞阻滞于G0/G1期.Cdk2、myosin和actin蛋白可能是白藜芦醇的靶点蛋白质之一.结论 白藜芦醇可能是1种新发现的Cdk2的抑制剂,同时通过作用于细胞的骨架结构蛋白质来干扰细胞的有丝分裂过程,使细胞周期延长从而导致MCF-7/ADM的增殖受到抑制.提示白藜芦醇是1种活性强、低毒的抗癌化学前体分子.
关键词： 白藜芦醇 MCF-7/ADM细胞 Cdk2 -
胃癌中Cdk2和p21的表达及其与临床病理和预后的关系
目的 研究Cdk2和p21在胃癌中的表达及其与临床病理和预后的关系.方法 将130例胃癌组织和248例癌旁胃组织标本石蜡块制成组织芯片,采用免疫组化法检测Cdk2及p21的表达.结果 胃癌组织组Cdk2及p21阳性表达率分别为63.8％(83/130)和70.0％(91/130),明显高于癌旁组织的18.1％(45/248)和37.1％(92/248)(P＜0.05).p21的阳性表达与胃癌的分化程度有关,Cdk2的阳性表达与胃癌的分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P＜0.05).p21阳性表达组5年生存率低于阴性表达组.多因素分析显示,Cdk2和p21的表达可作为胃癌独立的预后因素.结论 Cdk2及p21在胃癌的发生、发展中可能起重要作用,可作为判断胃癌预后的指标.
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周期素A和CDK2在结直肠癌中的表达及其临床意义
目的 研究周期素A(cyclin A)和CDK2在结直肠癌中的表达及其临床意义.方法 手术切除并经病理学确诊的结直肠癌及相应的癌周正常组织石蜡标本30例,采用免疫组化SP法检测周期素A及CDK2的表达.结果 结直肠癌中周期素A阳性表达率为67%,明显高于癌周正常组织的10%;结直肠癌中CDK2阳性表达率为50%,亦明显高于癌周正常组织的7%.两者的表达水平与直肠癌的分化、浸润深度及淋巴结转移有相关性.结论 周期素A和CDK2的高表达为结直肠癌发生的早期现象,两者参与了结直肠癌的发生过程.
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细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27kip1在垂体腺瘤中的表达
目的 观察细胞周期相关蛋白cyclin E、cdk2和p27kip1在垂体腺瘤中的表达情况,探讨其与垂体腺瘤临床生物学行为的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测37例非侵袭性垂体腺瘤和21例侵袭性垂体腺瘤组织中cyclin E、cdk2和p27 kip1蛋白的表达情况.结果 在侵袭性垂体腺瘤中cyclin E和cdk2的表达明显高于非侵袭性垂体腺瘤(均P<0.01),p27kip1的表达明显低于非侵袭性垂体腺瘤(P<0.01);cyclin E与cdk2在垂体腺瘤中的表达呈正相关(r=1,P<0.01),两者与p27kip1的表达呈负相关(均r=-1,P<0.01);cyclin E和cdk2的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈正相关(r=0.685,r=0.667,均P<0.01),而p27kip1的表达与垂体腺瘤的侵袭性呈负相关(r=0.659,P<0.01).结论 cyclin E、cdk2及p27kip1的表达情况可以作为判断垂体腺瘤的侵袭性和预后的指标.
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甲状腺乳头状癌中MCM7、CDK2、p27蛋白的表达及意义
目的 探讨MCM7、CDK2及p27蛋白与人甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)发生、发展的关系.方法 采用免疫组织化学SP法检测40例PTC、30例甲状腺腺瘤、30例结节性甲状腺肿及20例正常甲状腺组织中MCM7、CDK2、p27蛋白的表达.结果 PTC中MCM7、CDK2蛋白的阳性表达率分别为100.00%(40/40)、80.00%(32/40),两者均明显高于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织(P<0.01,P<0.01).PTC中p27蛋白的阳性表达率为22.50%(9/40),明显低于甲状腺腺瘤、结节性甲状腺肿及正常甲状腺组织(P<0.01).PTC中MCM7与CDK2蛋白的表达呈正相关(r=0.550,P<0.01),MCM7、CDK2及p27蛋白的表达呈负相关(r=-0.334,P<0.05;r=-0.413,P<0.01).结论 MCM7、CDK2蛋白的高表达及p27蛋白的低表达变化与PTC可能存在关联,三者联合检测或许可以作为临床早期诊断和评价甲状腺肿瘤细胞增殖活性的潜在的参考指标.
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白花蛇舌草对人肝癌HepG2细胞Cdk2和E2F1 mRNA表达的影响
目的 探讨白花蛇舌草抗人肝癌细胞株HepG2增殖的作用机制. 方法 体外培养人肝癌细胞株HepG2,MTT法检测HepG2细胞的增殖活力,流式细胞术检测HepG2细胞周期,相对荧光定量PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶2 (cyclin-dependent kinase,Cdk2)和核转录因子E2F1 mRNA的表达. 结果 HepG2细胞的存活率随着给药浓度的增大而降低,抑制作用呈现剂量依赖性;和空白组比较,给药组G0/G1期细胞百分含量明显升高(P＜0.05),S期细胞百分含量明显减少(P＜0.01),PI指教明显减少(P＜005),Cdk2和E2F1 mRNA水平显著下调(P＜0.01或P＜0.05). 结论 白花蛇舌草可能通过下调Cdk2和E2F1的mRNA表达,将HepG2细胞阻滞在G0/G1期,从而抑制HepG2细胞的增殖.
