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055 维生素E琥珀酸酯抗肿瘤的信号传导机制
维生素E琥珀酸酯是维生素E的衍生物，具有选择性抑制肿瘤细胞生长的作用，其抗肿瘤作用机制复杂。本文综述维生素E琥珀酸酯对细胞第一信使系统(TGF-β信号传导、Fas信号传导等)、第二信使系统(Ca~(2+)、cAMP)及其它如细胞周期信号系统等的作用，为探讨维生素E琥珀酸酯抗肿瘤的信号传导机制及临床应用提供基础。
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维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的作用
以人胃腺癌SGC-7901细胞为实验模型,观察了维生素E琥珀酸酯(VES)对其生长的抑制作用,并且采用电镜、流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记检测了VES诱导SGC-7901细胞凋亡情况.结果表明,20μg/ml VES处理SGC-7901细胞4天,细胞生长抑制率达100%,本研究结果还显示VES可诱导SGC-7901细胞经历凋亡,同样在20μg/ml剂量下处理细胞2天,可引起89.96%的细胞凋亡.本研究提示在离体试验条件下VES是人胃癌细胞潜在的生长抑制剂.
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维生素E琥珀酸酯增强阿霉素促进人胃癌细胞凋亡作用及机制研究
目的 探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E succinate,VES)增强阿霉素(Doxorubicin,DOXO)促进人胃癌细胞凋亡作用及其机制.方法 分别以0,10 μmol/L VES,1.5 μmol/L DOXO,10 μmol/L VES+ 1.5 μmol/L DOXO处理人胃癌细胞株SGC-7901 24 h后,MTT法检测细胞增殖情况；倒置显微镜,流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况.Western blot 法检测细胞中Fas、Bid、Bax、caspase-8、caspase-9以及PARP表达情况.结果 VES能够增强DOXO抑制胃癌细胞增殖、促进细胞发生凋亡的作用；联合作用能够增加细胞中Fas、Bax表达；促进Bid、caspase-8、caspase-9以及PARP活化(P＜0.05).结论 VES与DOXO联合应用较单一应用具有更好的抗肿瘤效果.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 阿霉素 胃癌细胞SGC-7901 凋亡 -
死亡受体Fas在人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的应用
目的了解维生素E琥珀酸酯(VES)诱导胃癌细胞凋亡的信号转导途径,方法以人胃癌SGC-7901细胞作为靶细胞,采用细胞免疫化学法、反义寡核苷酸转染法探讨Fas在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中的作用,结果经不同剂量VES处理后,细胞中蛋白表达增加;有剂量-效应关系;用Fas反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞后,降低了VES抑制细胞生长的能力.结论在V ES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中启动了Fas信号途径.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 人胃癌SGC-7901细胞 细胞凋亡 F as -
维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡的研究
采用体外细胞培养的方法,观察了维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的影响,并通过荧光染色和流式细胞仪技术研究其对SGC-7901细胞凋亡的影响.结果表明VES(5、10和20μg/ml)对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用;同时VES可诱导SGC-7901细胞凋亡.提示VES可通过诱导细胞凋亡来抑制胃癌细胞生长.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 人胃癌细胞(SGC-7901) 细胞凋亡 -
维生素E琥珀酸酯抑制人胃癌细胞生长的研究
采用体外细胞培养的方法,观察维生素E琥珀酸酯(VES)对人胃癌细胞(SGC-7901)生长的影响,并利用MTT法比较VES和α-生育酚对胃癌细胞生长的作用效果.结果表明:VES(5、10和20μg/ml)对胃癌细胞生长有明显抑制作用,而α-生育酚在同样剂量对肿瘤细胞生长无抑制作用.这提示VES具有不同于维生素E的抗癌机理.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 人胃癌细胞(SGC-7901) α-生育酚 -
ERK1/2在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
为探讨ERK1/2丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号转导途径在维生素E琥珀酸酯(VES)所诱导的人胃癌SGC-7901细胞凋亡过程中的作用,采用DAPI染色法观察VES诱导细胞凋亡的情况,采用Western Blot法分析VES不同剂量和不同作用时间对ERK1/2磷酸化状态的影响.结果表明,VES明显诱导SGC-7901细胞凋亡,20μg/ml VES作用24h和48h后凋亡率分别为14.2%和89.6%.5、10、20μg/ml VES作用24h时明显降低p-ERK蛋白的表达;而20μg/ml VES作用于细胞时,ERK1/2可瞬时被激活,2h时表达下降,而后又升高,12h达峰值.提示ERK1/2途径可能参与了VES诱导的SGC-7901细胞凋亡,但终参与调节细胞增殖过程.
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维生素E琥珀酸酯诱导人食管癌Eca-109细胞凋亡
目的 研究维生素E琥珀酸酯(VES)对人食管癌Eca-109细胞系增殖、凋亡及相关蛋白表达的影响.方法 实验组为不同浓度VES,对照组为同等体积RPMI-1640培养基,分别作用24、48和72 h后,MTT测细胞增殖；电镜观察细胞凋亡的形态学；流式细胞术(FCM)测凋亡率及survivin、caspase-3蛋白表达.结果 各实验组抑制率随VES处理浓度的增加、作用时间的延长而逐渐升高(P＜0.01).实验组细胞呈现不同程度凋亡改变,且随VES浓度增加,凋亡率逐渐升高(P＜0.05).各实验组survivin蛋白表达减少(P＜0.05),caspase-3蛋白表达增加(P＜0.05).Survivin与caspase-3表达呈负相关(r=-0.95,P＜0.05).结论 VES可抑制Eca-109细胞增殖、诱导凋亡,可能与下调survivin蛋白和上调caspase-3蛋白表达有关.
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维生素E琥珀酸酯诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究
目的探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)对人卵巢腺癌细胞系SKOV3的生物学效应及机制.方法依培养基中有无加VES,将培养的SKOV3细胞分为对照组和实验组,通过MTT比色法检测VES对该细胞系杀伤率的影响;通过光学显微镜、透射电镜观察及流式细胞仪分析检测凋亡;利用caspase-3荧光检测探讨VES作用、SKOV3细胞的作用机制.结果VES处理SKOV3细胞后,细胞存活率明显降低,光镜下见明显形态学改变,电镜下见各个时期的凋亡细胞,流式细胞仪测定发现典型的凋亡峰,活性caspase-3荧光强度增加.结论VES能诱导卵巢腺癌SKOV3凋亡并可能通过激活caspase家族实现.
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Heparosan多糖聚合物胶束的制备及体外抗肿瘤活性
聚合物胶束作为新型药物传递系统可以提高疏水性药物的溶解性并具有良好的生物相容性和稳定性.本研究通过合成heparosan多糖-维生素E琥珀酸酯(heparosan-adipic dihydrazide-vitamin E succinate,KV)载体,利用核磁共振氢谱(1H NMR)对其进行结构确证.以疏水性抗肿瘤药多柔比星(doxorubicin,DOX)为模型药物,制备载DOX的KV聚合物胶束(DOX/KV),并对其进行表征.结果表明,胶束形貌为球形,粒径为140～150 nm,zeta电位为-20 mV左右,包封率为80％左右,载药量在10％～15％之间,并且具有良好的缓释行为.选择MGC80-3肿瘤细胞和COS7正常细胞考察体外细胞毒性和细胞摄取情况.体外细胞毒性结果显示,空白胶束对两种细胞几乎没有毒性,载药胶束对MGC80-3细胞的细胞毒性要大于COS7细胞.从细胞摄取考察也可以看出,载药胶束对MGC80-3细胞的摄取量更高.综上,KV可以很好地包载DOX,并且可以提高其对癌细胞的选择性,具有良好的抗肿瘤活性.
关键词： Heparosan多糖 维生素E琥珀酸酯 聚合物胶束 多柔比星 -
微渗析技术研究克拉霉素亚微乳剂相分布
目的:利用微渗析技术研究克拉霉素(clarithromycin,CLA)亚微乳剂相分布,考察离子对增溶剂及NaOH用量对乳剂相分布的影响.方法:以维生素E琥珀酸酯(tocopherol succinate,TS)、油酸为离子对增溶剂,制备CLA亚微乳剂;浓差法测定探针回收率与传递率,以亚微乳剂为渗析介质,用反相渗析法测定回收率.结果:反相渗析法测得回收率为86.2%;90%以上的药物分布于乳剂油相中.结论:微渗析技术可以用于测定乳剂的相分布,TS促进CLA于乳剂油相分布的能力更强,且对体系pH值变化较不敏感.
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维生素E琥珀酸酯体外防护顺铂肝细胞毒性并增强其抗肿瘤细胞增殖活性
目的研究维生素E琥珀酸酯(VES)对顺铂(CP)肝细胞毒性及联合用药增强抗肿瘤活性的可能.方法用二步灌流法分离人和大鼠肝细胞,接种于胶原铺被的96孔板,细胞贴壁后,分别加入一系列浓度的CP,VES及CP+VES,于48 h用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,并计算半数抑制浓度(IC50);同样方法用于检测CP,VES及CP+VES对人前列腺癌细胞系DU-145和人大肠癌细胞系CCL229的抗增殖作用.结果 CP,VES,CP+VES 1 mg*L-1,CP+VES 5 mg*L-1,CP+VES 10 mg*L-1对人肝细胞的IC50分别为2.35,＞100,2.26,4.25,6.93 mg*L-1;CP,VES,CP+VES 5 mg*L-1,CP+VES 10 mg*L-1,CP+VES 25 mg*L-1对大鼠肝细胞的IC50分别为4.70,＞100,10.94,17.57,23.24 mg*L-1;CP,VES,CP+VES 5 mg*L-1,CP+VES 10 mg*L-1,CP+VES 25 mg*L-1对DU-145和CCL229的IC50分别为6.36,55.36,5.04,4.85,0.58和9.58,39.47,7.29,4.22,2.43 mg*L-1.结论 VES能明显减低CP所致人和大鼠肝细胞毒性,增强CP对DU-145和CCL229细胞的抗增殖作用.
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硫酸乙酰肝素聚合物胶束的制备及其性能的研究
目的 合成硫酸乙酰肝素-维生素E琥珀酸酯(heparan sulfate-vitamin E succinate,HDV)两亲性材料,包载多柔比星形成聚合物胶束,并对其制剂学性质进行考察.方法 通过酰胺反应,合成HDV载体,利用核磁对其结构进行确证.选择超声法制备载多柔比星的聚合物胶束,考察胶束的粒径、形貌、电位、载药量、包封率以及体外释放行为,并对其体外细胞毒性进行了评价.结果 成功地合成了HDV两亲性聚合物材料,制备的载药胶束平均粒径为(105.0±7.3) nm,PDI值为(0.239±0.484),电位值为(-21.4±2.6)mV,包封率为(76.22±0.76)％,载药量为(9.53±0.58)％;体外药物释放实验结果表明,载药胶束具有良好的缓释作用.细胞毒性实验显示,空白胶束对正常细胞和肿瘤细胞都几乎没有毒性,而载药胶束具有较好的抗肿瘤活性.结论 HDV聚合胶束可以有效地包载抗肿瘤药物多柔比星,具有良好的缓释特性和抗肿瘤活性,可作为一种潜在应用价值的抗肿瘤药物载体.
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Bcl-2、Bak及caspase-9、3在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901细胞的凋亡诱导作用及其可能机制.方法 以体外培养的人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,给予不同浓度水平的VES处理不同时间后,采用四甲偶氮唑盐比色(MTT)法观察VES对人胃癌细胞的生长抑制作用;用Annexin-V-FITC 方法检测VES对胃癌细胞的凋亡诱导作用;采用Western blotting方法检测VES处理后的胃癌细胞中Bcl-2和Bak蛋白表达及caspase-9、 caspase-3 酶原的表达.结果 (12.5～50.0)μmol/L的VES作用于人胃癌细胞24 h后就可以抑制胃癌细胞的生长,呈明显的剂量依赖关系;Annexin-V-FITC和PI双染流式细胞仪检测结果表明,50 μmol/L VES处理SGC-7901细胞12 h后即可以引起细胞凋亡,且随作用时间的延长凋亡越明显.Western blotting结果显示,VES可以调节胃癌细胞中与凋亡相关的Bcl-2和Bak蛋白的表达,同时促进caspase-9、caspase-3酶原的裂解与活化.结论 调节Bcl-2和Bak蛋白的表达,并裂解caspase-9、 caspase-3 是VES在体外发挥对人胃癌细胞的生长抑制和凋亡诱导作用的可能机制之一.
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维生素E琥珀酸酯对人胃癌细胞中核因子及抗凋亡基因的影响
目的 本研究以人胃癌SGC-7901细胞为肿瘤模型,在体外探讨维生素E琥珀酸酯(VES)在抑制肿瘤细胞生长、诱导细胞凋亡过程中对NF-γ B组成性激活及抗凋亡基因在转录水平上的调控作用.方法 采用MTT法和Annexin V法分别检测不同浓度水平VES处理人胃癌sGC-7901细胞后细胞的生长和凋亡情况.采用细胞成分分离法获得细胞核总蛋白,然后以Western blot法测定VES处理后核因子蛋白p65在细胞核总蛋白中的含量.用RT-PCR方法检测VES对SGC-7901细胞中抗凋亡基因c-IAP1、c-IAP-2、NAPI、survivin、XLAP的转录调节作用.结果 12.5～50.0 μmol VES作用24h后,sGC-7901细胞的生长被明显抑制.50 μmol VES作用于细胞12h后可诱导细胞发生凋亡,且作用48h后其凋亡诱导作用更明显.Western blot结果发现,VES处理SGC-7901细胞后使细胞核内NF-γBp65蛋白的含量下降,即抑制了NF-γ Bp65向细胞核内的迁移.RT-PCR结果提示,VES处理胃癌细胞后可以在基因水平上抑制抗凋亡基因NAIP和survivin转录,对其他IAPs家族成员-c-IAP1、c-IAP-2、XIAP的转录无下调作用.结论 VES对SGC-7901细胞内NF-γ B组成性激活的调控作用及对抗凋亡基因在转录水平上的抑制作用可能是其抑制SGC-7901细胞生长、诱导细胞发生凋亡的机制之一.
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Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸酯诱导人胃癌细胞凋亡中的作用
目的:研究Bcl-2家族蛋白在维生素E琥珀酸(RRR-α-tocopheryl succinate,α-TOS;vitamin E succinate,VES)诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡线粒体途径中的作用.方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定VES对SGC-7901细胞的半数抑制浓度(IC50值);吖啶橙/溴化乙啶(AO/EB)染色观察细胞凋亡;Mito Tracker Red CMXRos染色观察线粒体膜电位(△ψm)的改变;Western Blot法检测不同剂量VES对人胃癌SGC-7901细胞Bid、Bax、Bcl-2蛋白表达和细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)蛋白表达与定位的影响.结果:VES对SGC-7901细胞的IC50值为101.45μg/ml;VES可引起SGC-7901细胞发生凋亡和线粒体膜电位下降;并引起Cyt C蛋白在细胞内重新定位、Bid蛋白剪切活化、Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达减少.结论:VES可抑制SGC-7901细胞的生长,并通过线粒体途径诱导凋亡,其机制可能是通过剪切活化Bid蛋白、上调Bax/Bcl-2相对水平来实现的.
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染料木素-维生素E琥珀酸酯-聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯纳米胶束的制备研究
目的 制备染料木素(genistein,GEN)-维生素E琥珀酸酯(VES)-聚乙二醇1000维生素E琥珀酸酯(TPGS)纳米胶束,以改善染料木素口服生物利用度.方法 薄膜分散法制备GEN-VES-TPGS纳米胶束,以胶束平均粒径、包封率、载药量为评价指标,单因素实验优化处方及工艺,包括TPGS、VES、GEN的用量、水化体积、水化温度、水化时间;对优选处方工艺的胶束形态、体外释放度及大鼠体内药动学进行了考察.结果 优化得到处方为TPGS 200 mg、VES 30 mg、GEN 6 mg,水化体积15 mL、水化温度50℃、水化时间3h.所制备GEN-VES-TPGS纳米胶束澄明度好,平均粒径为(43.50±1.65) nm,包封率为(98.99±0.69)％,载药量为(2.57±0.04)％;胶束呈球形,可见明显的囊泡结构,GEN原料药和纳米胶束在体外均呈现缓释特征;大鼠ig给药药动学结果显示,所构建的GEN纳米胶束生物利用度为GEN原料药的162.96％.结论 所制备的GEN-VES-TPGS纳米胶束粒径小,稳定性好,显著地提高了GEN口服生物利用度.
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维生素E琥珀酸酯增强DR5抗体对Raji和K562细胞的凋亡作用
目的:探讨VES增强抗DR5单抗mDRA-6诱导白血病细胞凋亡作用及可能机制.方法:MTT法检测VES及mDRA-6对白血病细胞Raji和K562细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染分析白血病细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR5表达;免疫印迹技术检测细胞DR5蛋白表达.结果:MTT检测表明,浓度为10 μg/mL的mDRA-6作用12 h,Raji及K562细胞死亡率分别为21.98%和5.23%,而5 μmol/L、10 μmol/L、20 μmol/L的VES分别与mDRA-6共同作用于Raji或K562细胞,Raji细胞死亡率分别增加至24.67%(P>0.05)、35.65%(P<0.01)和40.22%(P<0.01),K562细胞死亡率分别增加至6.00%(P>0.05)、7.89%(P<0.01)、8.67%(P<0.01).AnnexinⅤ/PI 双染检测2 μg/mL 的mDRA-6 单独作用Raji 及K562 细胞12 h,细胞凋亡率分别为20.79%和7.74%,2 μg/mL的mDRA-6与10 μmol/L的VES共同作用Raji及K562细胞12 h,细胞凋亡率分别增至43.18%和16.99%.Raji和K562细胞表面DR5自然表达分别为42.35%和14.92%;10 μmol/L的VES作用Raji、K562细胞12 h后,细胞膜DR5表达率分别增加至70.08%和16.38%.免疫印迹技术检测显示,不同浓度的VES均可增加Raji和K562细胞DR5蛋白表达.结论:VES增强mDRA-6对白血病细胞系Raji和K562细胞的凋亡诱导作用,可能是VES增加了Raji和K652细胞膜DR5表达及细胞DR5蛋白表达所致.
关键词： 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体5 单克隆抗体 凋亡 维生素E琥珀酸酯 -
VES抑制Raji细胞增殖中对CDK2和Bcl-2/Bax蛋白表达的影响
目的比较观察维生素E琥珀酸酯(VES)和维生素E(VE)对人单核细胞白血病Raji细胞的抗增殖作用及对细胞周期素依赖性激酶2(CDK2),细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的影响.方法应用荧光显微镜、流式细胞仪、免疫细胞化学染色等技术方法,体外观察VES和VE对Raji细胞的作用.结果 VES和VE对Raji细胞均有程度不一的生长抑制作用,20μg/mlVES对Raji细胞的生长抑制在72h即达100%,而20μg/mlVE的抑制率仅与5μg/mlVES的接近.VES较强的生长抑制作用与诱发细胞凋亡的明显增加同步发生,具有剂量效应和时间效应关系,同时VES作用后,细胞内CDK2蛋白,Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达增加.结论 VES通过影响细胞周期调控因子CDK2,细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达可能是其抗肿瘤的途径之一.
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FADD在VES诱导人胃腺癌细胞凋亡中的作用
目的了解带有死亡结构域的Fas相关蛋白(FADD)在维生素E琥珀酸酯(VES)诱导胃腺癌细胞凋亡过程中的作用. 方法以人胃腺癌SGC-7901细胞作为靶细胞,采用Western Blot法、Lipofect转染法、DAPI染色法探讨FADD在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中的作用. 结果经不同剂量VES处理后,SGC-7901细胞中FADD蛋白表达增加, 呈剂量-效应关系;该细胞经FADD反义寡核苷酸转染与正义寡核苷酸转染相比,VES处理的细胞中FADD蛋白表达下降;用FADD反义寡核苷酸转染SGC-7901细胞后,降低了VES诱导的细胞凋亡率.结论 FADD在VES诱导SGC-7901细胞凋亡过程中起着重要的作用.
关键词： 维生素E琥珀酸酯 人胃腺癌SGC-7901细胞 细胞凋亡 FAD D
