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三氧化二砷对卵巢癌细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达的影响
目的观察三氧化二砷(As2O3 )对卵巢癌细胞株A2780端粒酶活性的影响.方法应用端粒酶多聚酶联反应-酶联免疫测定(PCR-ELISA)方法检测As2O3作用后卵巢癌细胞系A2780细胞端粒酶活性的变化并使用流式细胞仪检测hTERT蛋白表达.结果 0.25μmol/ L As2O3 (24~72 h) 可抑制卵巢癌细胞系A2780的端粒酶活性及hTERT蛋白表达,抑制作用呈时间依赖性效应.结论 As2O3可以通过降低hTERT蛋白表达进而抑制卵巢癌细胞的端粒酶活性.
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洛铂对卵巢癌细胞侵袭和转移作用的研究
化疗在卵巢癌治疗中具有重要作用,尤其对于晚期卵巢癌的治疗.本研究选用新型的抗癌药洛铂,体外观察它们对靶细胞侵袭和转移能力的作用,初步探讨其对卵巢癌细胞迁移和侵袭能力的抑制,
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PⅢNP与CA125联检在卵巢癌诊断中的意义
卵巢癌是一种危害妇女生命的妇科常见恶性肿瘤,早期诊断是提高生存率的关键。CA125作为一种比较特异、敏感的指标,在卵巢癌的诊断、疗效判断、病情监测等方面的作用在国内外早有较广泛的研究。但由于CA125在卵巢癌细胞中的表达与其病理分型有关[1],故容易漏诊。本文对卵巢癌患者联合Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNP)、CA125检测,以期提高卵巢癌的诊断水平。对象和方法 1 对象 1.1 对照组 35名,年龄37—69岁,平均年龄49±13.2岁,均为我院正常查体者。 1.2 卵巢良性病组 39例,年龄34—66岁,平均年龄43±15.3岁,诊断均经手术后病理确证。
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miR-548p表达上调抑制卵巢癌细胞系SKOV-3的增殖和迁移
目的 探讨miR-548p对卵巢癌细胞系SKOV-3细胞增殖和迁移能力的影响,阐明miR-548p发挥功能的相关作用机制.方法 实时荧光定量PCR分析卵巢癌组织和癌旁组织以及卵巢癌细胞系中miR-548p的表达;用miR-548p模拟物作用于SKOV-3细胞,MTT和Transwell方法检测SKOV-3细胞增殖及迁移;Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶、线粒体凋亡蛋白以及NF-κB.结果 相对于癌旁卵巢组织及人卵巢上皮细胞系,miR-548p在卵巢癌组织以及卵巢癌细胞系中低表达(P<0.05);增加miR-548p的表达可以抑制SKOV-3细胞的增殖及迁移,伴随相关MMP-2、MMP-9以及Bcl-2蛋白的表达减少,Bax蛋白的表达增加(P<0.05);miR-548p的表达增加可显著抑制SKOV-3细胞p-p65含量(P<0.05).结论 miR-548p通过降低p65磷酸化水平调控卵巢癌细胞的增殖和迁移,为卵巢癌的治疗提供了一个新的潜在靶点.
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内皮抑素对人卵巢癌细胞系生长的抑制作用
目的 探讨人内皮抑素对人卵巢癌SKOV3细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法 MTT法检测细胞生长;透射电镜观察细胞凋亡;免疫细胞化学、RT-PCR及Western blot法检测细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达.结果 内皮抑素抑制SKOV3细胞增殖(P<0.01);能诱导SKOV3细胞凋亡;而对细胞中BCL-2和BAX蛋白及mRNA的表达无明显影响.结论 人内皮抑素具有抑制卵巢癌细胞SKOV3生长的作用,其作用机制可能与诱发细胞凋亡相关.
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gadd153基因对卵巢癌细胞生长抑制作用的研究
目的研究生长抑制DNA损伤基因(growth arrest and DNA damage, gadd)对卵巢癌细胞生长抑制和凋亡的作用. 方法 RT-PCR鉴定卵巢癌SKOV3和3AO细胞株gadd153基因表达.通过目的基因的克隆、载体构建技术,将目的基因gadd153重组于plXSN-neo逆转录病毒表达载体;构建的pLXSN-gadd153载体采用脂质体(lipofectin)(DOTAP)的方法,分别转染SKOV3和3AO细胞株;经G418抗性筛选;RT-PCR表达鉴定;足叶乙甙(VP16)诱导,采用流式细胞仪分析(FCM)的方法检测转染前后肿瘤细胞的生长抑制和凋亡. 结果 SKOV3-gadd153细胞生长抑制在G1/G0期,部分细胞进入凋亡的状态;3AO-gadd153细胞生长抑制,未引起凋亡. 结论转染gadd153基因的肿瘤细胞系,诱导表达后可诱发肿瘤细胞生长抑制在G1/G0期,并有细胞进入凋亡状态.证实gadd153基因参与了细胞生长抑制和凋亡过程.
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紫杉醇对HeLa细胞生长影响的研究
紫杉醇(taxol)是一种从太平洋属短叶紫杉茎皮中提取而得的抗癌新药.近年来经临床前化学和药理研究,已通过临床试用并上市.紫杉醇对多种癌症治疗有效,特别是对卵巢癌和乳腺癌有明显的疗效.一些报道显示,紫杉醇对乳腺癌,卵巢癌细胞有生长抑制和杀伤作用,并可诱发其细胞发生凋亡.但迄今所报道的研究多为进口药物,本文报道国产紫杉醇对HeLa细胞生长的影响.
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人组织因子基因表达载体的构建及其在人卵巢癌细胞系中的表达
本研究旨在克隆人组织因子(TF)并研究其在稳定转染的人卵巢癌细胞系中的表达.采用分子克隆技术构建人TF真核表达载体pcDNA3-TFcDNA;应用脂质体介导的基因转移技术将其导入人卵巢癌细胞系A2780内,采用G418筛选稳定表达的转染细胞,用流式细胞术和RT-PCR进行TF表达水平的检测.结果显示:①构建产物经基因测序证实为pcDNA3-TFcDNA重组体;②稳定转染的A2780细胞内TF mRNA水平显著增高,转染细胞为3.91±0.28,未转染细胞为0.97±0.23(P<0.01);③转染细胞表面TF表达显著增高,转染细胞为(48.56±9.53)%,未转染细胞为(2.73±1.15)%(P<0.01).结论:成功地构建了TF真核表达载体并建立了稳定、高效表达TF的人卵巢癌细胞系A2780/TF,为研究TF在肿瘤高凝状态、肿瘤生长与浸润转移中的作用及其机制,探索抑癌基因治疗新途径建立了实验基础.
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乳腺癌发生模型MCF10 抑癌基因NOEY2启动子区甲基化及mRNA表达
DNA甲基化是常见的表观遗传学变化[1].越来越多的证据表明,抑癌基因启动子区CpG岛甲基化可使其转录沉默,从而解除其抑癌作用,导致肿瘤的发生和发展.NOEY2是近年来发现的抑癌基因,表达于正常乳腺导管上皮细胞和卵巢生发上皮细胞,但在乳腺癌和卵巢癌细胞中表达显著减少或不表达[2, 3].在本实验中检测乳腺癌发生模型MCF10[4]中不同阶段的细胞系NOEY2基因启动子区CpG岛Ⅰ甲基化状态,并与mRNA表达水平进行比较,以研究乳腺癌的发生机制和早期诊断.
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雌激素与IL-6、IL-8在卵巢癌细胞中的调节作用
目的 探讨雌激素与IL-6、IL-8在卵巢癌细胞中的交互调节作用及作用机制.方法 选择兼有雌激素受体(estrogen receptor,ER)及IL-6、IL-8受体表达的卵巢癌细胞系CAOV-3和OVCAR-3作为研究模型,分别探讨17B-雌二醇(estradiol,E2)对IL-6、IL-8及其受体表达的作用以及IL-6、IL-8对EB表达及ER转录活性的作用.结果 一方面E2不仅可经NF-κB途径促进卵巢癌细胞IL-6、IL-8分泌,而且还对二者受体的表达具有一定的调节作用.E2诱导的促IL-6、IL-8分泌作用可被其受体阻断剂他莫昔芬(tamoxifen,Txf)完全阻断.另一方面在无雌激素的条件下,IL-6、IL-8能上调卵巢癌细胞Erα表达及下调ERB表达,且还能分别通过丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和Src活化增强卵巢癌细胞ER的转录活性,该作用可被Txf完全封闭.结论 雌激素与IL-6、IL-8两种细胞因子在卵巢癌细胞中交互调节,由此通过产生的放大信号通路促进卵巢癌的生长和发展.
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非恶性肿瘤疾病中CA125含量变化的检测
自从1981年Bast等利用单克隆抗体OC125在卵巢癌细胞上发现癌抗原CAl25以来,检测血清中CA125一直被用作卵巢癌的辅助诊断指标.CA125是胎儿体腔的一种分化抗原,分布在间皮组织细胞表面.常规检验中发现在其他生殖道恶性肿瘤和肺癌患者血清CA125含量亦明显增加.许多非恶性疾病患者血清CA125也呈上升趋势.
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超声损伤卵巢癌细胞线粒体的体视学研究
目的:研究超声辐照后受损伤卵巢癌细胞线粒体体视学参数的变化.方法:观察超声辐照后细胞超微结构的变化.测量并计算受损伤细胞和对照细胞线粒体的体密度、表面积密度、表面积体积比、平均体积、数密度和平均表面积.结果:超声辐照后部分细胞形态学变化不明显,部分细胞线粒体肿胀、嵴断裂.与对照细胞相比,受损伤细胞线粒体平均体积增大(P<0.005),平均表面积增大(P<0.05),体密度、表面积密度增大(P<0.005,P<0.005),表面积体积比减小(P<0.01),数密度无明显改变(P>0.05).结论:超声辐照可损伤卵巢癌细胞线粒体,受损细胞线粒体肿胀其体积增大较表面积增大明显.
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他莫昔芬联合顺铂对人卵巢癌细胞HO-8910增殖抑制作用的研究
目的:验证他莫昔芬(TAM)和顺铂(DDP)两种药物联合应用抑制人卵巢癌细胞HO-8910增殖作用的有效性.为卵巢癌的内分泌治疗和化学治疗联合应用提供理论依据.方法:以体外培养的HO-8910细胞为研究对象,不同剂量的TAM和DDP联合作用于HO-8910细胞,MTT法检测细胞生长抑制率;免疫组化SP法检测PCNA在细胞中的表达;流式细胞仪PI染色法分析细胞周期分布的改变,并用AV-PI双染色法检测TAM联合DDP对细胞凋亡的影响.结果:TAM和DDP联合用药组与阳性对照组相比,大剂量TAM合用不同剂量的DDP组及中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmol/L)组,细胞生长抑制率有显著性差异(P<0.05);TAM浓度≥1.0μmol/L合用不同剂量的DDP时PCNA表达阳性率有显著性差异(P<0.05);TAM使G1期细胞抑制,DDP作用于G1期细胞,G1期减少,细胞阻滞于s期;TAM和DDP联合应用时随着药物浓度增加凋亡指数逐渐增大.联合用药组组间比较,大剂量TAM合用小剂量DDP(1.7μmol/L)组与中剂量TAM合用大剂量DDP(3.3μmoL/L)组间细胞生长抑制率及PCNA表达阳性率无显著性差异(P>0.05).结论:TAM和DDP联合用药可有效抑制人卵巢癌细胞HO-8910细胞生长及增殖.
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5-氨基乙酰丙酸光动力学疗法对两种人卵巢癌细胞的体外杀伤作用
目的:探讨5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)光动力学疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养人卵巢癌SKOV3和AO细胞的杀伤作用.方法:于体外培养的SKOV3和AO细胞分别加入不同浓度的5-ALA(0.1、0.5、1.0、2.5、12.5 mmol/L)孵育4h,以波长为630 nm的半导体激光进行照射,照射能量密度分别为0.1、0.5、2.5、12.5 J/cm2.用四唑盐(MTT)比色法测定细胞存活率,并与单纯药物对照组(不同浓度5-ALA孵育、无光照)、单纯光照组(无5-ALA孵育、不同能量密度光照)与阴性对照组(无药物孵育、无光照)进行比较.计算5-ALA-PDT对SKOV3和AO细胞的半数杀伤浓度(IC50).结果:5-ALA-PDT处理后两种卵巢癌细胞存活率均明显下降(P<0.05),提示5-ALA-PDT对体外培养的人卵巢癌SKOV3和AO细胞均有杀伤作用,其杀伤作用随5-ALA的浓度和激光能量密度增加而增加,当5-ALA浓度超过2.5 mmol/L或照射能量密度超过2.5 J/cm2时细胞存活率变化不明显.单纯药物对照组、单纯光照组的细胞存活率与阴性对照组相比差异无显著性(P>0.05).5-ALA-PDT对两种卵巢癌细胞杀伤效应强弱不同,对SKOV3及AO细胞的半抑制浓度(IC50)分别为0.34 mmol/L和2.50 mmol/L,两者差异有显著性(P<0.05).结论:5-ALA-PDT可有效杀伤体外培养的人卵巢癌细胞SKOV3和AO细胞,且对两种细胞的杀伤作用有差异,对SKOV3细胞株的杀伤效应要强于AO细胞株.
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维生素E琥珀酸酯诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究
目的探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)对人卵巢腺癌细胞系SKOV3的生物学效应及机制.方法依培养基中有无加VES,将培养的SKOV3细胞分为对照组和实验组,通过MTT比色法检测VES对该细胞系杀伤率的影响;通过光学显微镜、透射电镜观察及流式细胞仪分析检测凋亡;利用caspase-3荧光检测探讨VES作用、SKOV3细胞的作用机制.结果VES处理SKOV3细胞后,细胞存活率明显降低,光镜下见明显形态学改变,电镜下见各个时期的凋亡细胞,流式细胞仪测定发现典型的凋亡峰,活性caspase-3荧光强度增加.结论VES能诱导卵巢腺癌SKOV3凋亡并可能通过激活caspase家族实现.
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RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞系SKOV3.ip1细胞内Her-2/neu基因表达的研究
目的探讨卵巢癌细胞株SKOV3.ip1细胞转染表达短发卡状RNA(shRNA)的质粒后,SK-OV3.ip1细胞中Her-2/neu基因表达的变化,和对SKOV3.ip1细胞凋亡的影响.方法将针对Her-2/neu基因的shRNA表达载体转染SKOV3.ip1细胞,从mRNA水平、蛋白表达水平和细胞凋亡的变化三个方面评价shRNA表达载体对Her-2/neu基因表达的抑制作用.结果shRNA表达载体可以有效的抑制SKOV3.ip1细胞Her-2/neu基因的表达,使Her-2/neu基因的mRNA和蛋白表达量明显下降,细胞凋亡增多.结论靶向Her-2/neu的shRNA表达载体可以有效抑制Her-2/neu基因的表达.
关键词: RNA干扰 卵巢癌细胞 Her-2/neu基因 -
卵巢癌化疗耐药研究进展
卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤, 其5年生存率仅为20% ~30%[1] .目前认为主要问题是缺乏成功的治疗手段.先期的手术治疗和化疗没有提高生存率,尽管初治患者缓解率很高,多数卵巢癌患者仍会复发.原因是化疗过程中卵巢癌细胞对化疗药物产生了耐药性,导致了患者预后不良,现就近年来卵巢癌细胞耐药的研究进展综述如下.
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卵巢上皮性癌组织和细胞中BRCA1基因的DNA甲基化程度与其mRNA和蛋白表达的关系
文献报道,90%的家族性卵巢上皮性癌(家庭性卵巢癌,指有家族史的卵巢癌患者)与BRCA1基因突变有关[1],而BRCA1基因突变仅发生在极少的散发性卵巢癌(指患者的一级和二级亲属中未发现卵巢癌患者)中[2],但无论是在家族性还是散发性卵巢癌中,约90%的患者其癌组织中的BRCA1 mRNA和蛋白表达水平下降[1].除基因突变外,引起肿瘤抑制基因失活的另一个机制就是DNA甲基化[3].在散发性卵巢癌组织中BRCA1基因的DNA甲基化已有报道[4],然而对于散发性卵巢癌组织中BRCA1基因的DNA甲基化程度与BRCA1基因表达下降的关系仍不是很清楚.本研究对42例散发性卵巢癌组织和7株卵巢癌细胞,应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)技术、RT-PCR技术和免疫组化法检测BRCA1基因的DNA甲基化程度和其mRNA及蛋白的表达,探讨不同病理类型的卵巢癌组织中BRCA1基因的DNA甲基化程度,及其与BRCA1 mRNA和蛋白表达的关系.
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白术内酯Ⅰ拮抗TLR4/MyD88信号通路介导的卵巢癌细胞IL-6的分泌及增强紫杉醇诱导的卵巢癌细胞生长的抑制作用
卵巢癌细胞异常表达Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)可能与患者预后差和无进展生存期较短有关,也可能是紫杉醇化疗抵抗的机制之一.有研究证实,紫杉醇和脂多糖具有一个共同的结合位点TLR4 [1-4].紫杉醇作为TLR4的配体可模拟脂多糖结合TLR4,活化TLR4/MyD88信号通路,上调卵巢癌细胞中白细胞介素6(IL-6)和抗凋亡蛋白的表达,促进卵巢癌细胞的增殖,抵抗紫杉醇的促凋亡作用[5].
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131Ⅰ标记的抗c-erbB-2单克隆抗体免疫靶向治疗卵巢癌的实验研究
卵巢癌是妇科肿瘤中死亡率高的疾病,由于多种客观因素的存在导致卵巢癌的治疗效果欠佳.近年来, 出现了许多新的化疗药物,一定程度上提高了化疗效果,但卵巢癌总的5年生存率仍然徘徊在20%~30%[1].因此,探讨其他治疗方法的意义就显得尤为突出.本研究以癌基因c-erbB-2表达的蛋白即P185蛋白作为治疗的靶点,选用放射性同位素131Ⅰ标记的针对P185蛋白的单克隆抗体(单抗),观察其在体内、外对卵巢癌细胞的杀伤作用.