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大黄酸在Beagle犬体内的毒代动力学研究/单抗NC05017安全性评价研究中的新技术方法/龙胆泻肝丸、关木通、三叶木通及五叶木通的小鼠体内毒性比较
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流式细胞仪工作原理及临床应用
流式细胞术是 20世纪 70年代发展起来的一种快速对单细胞进行定量分析和分选的新技术,随着单克隆抗体技术、激光技术、计算机技术、流体力学、荧光染料等多学科新技术的高度发展,它在生物医学领域的应用越来越广泛.本文着重介绍流式细胞仪的工作原理、临床应用及使用中应注意的问题 .
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190 运用单抗酶联免疫检测法对生药和方剂中的芍药苷和白花素进行定量分析
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抗人干扰素α2b单克隆抗体制备及初步鉴定
本研究以重组人干扰素α 2b蛋白免疫巴比西小鼠,采用淋巴细胞杂交瘤技术,获得3株可稳定分泌抗人干扰素α2b单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1E8、1E10和4E4.ELISA鉴定结果表明,3株单抗的亚型均为IgG1,腹水效价都在10-6以上.免疫印迹鉴定结果证实,3株单抗均可与原核表达的人干扰素α2b发生特异性反应.结果表明,本研究成功获得3株针对人干扰素α 2b的特异性杂交瘤细胞株.
关键词: 重组人干扰素α 2b 单抗 -
传染性法氏囊病病毒VP3抗原表位的鉴定
利用肽扫描技术对4株IBDV VP3的单克隆抗体(HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E)的抗原表位进行了研究.通过Western blot和ELISA鉴定,将HRB-3F和HRB-7B的抗原表位定位于VP3 109~119 aa(位于IB-DV聚合蛋白的864~874 aa),HRB-7C和HRB-10E的抗原表位定位于VP3 177~190 aa(位于IBDV聚合蛋白的932~945 aa).进一步检测其反应原性及免疫原性,结果表明,这两个表位均能与抗IBDV阳性血清反应.将这两个表位短肽免疫BALB/c小鼠,其血清可以和IBDV反应,具有较好的免疫原性.与D6948、HK46和UK661等多株IBDV相应区域的同源性进行了比较,结果显示,这两个表位在多种毒株中同源性为100%.通过IBDV VP3抗原表位的研究,筛出两个新的保守线性表位并进行精确定位,对进一步分析IBDV结构与功能以及建立以表位为基础的抗原抗体诊断方法具有重要的意义.
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PPARγ在大鼠肝纤维化形成过程中的动态变化
研究表明,PPARγ在肝脏代谢功能方面发挥重要调节作用,其功能改变与一些肝脏疾病的发生发展有某种相关性[1].本研究针对大鼠正常肝组织及不同程度的肝纤维化组织中PPARγ的表达进行观察,旨在进一步研究PPARγ与肝纤维化发生机制的关系.1 材料与方法1.1 主要试剂:兔抗鼠PPARγ多抗和抗α-SMA单抗(Santa Cruz公司),Trizol及RT-PCR试剂盒(北京中山生物技术有限公司),PCR引物由上海生工生物工程技术公司合成.
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高压锅水浴法修复组织抗原防脱片技术的应用
目前用于免疫组化的抗体近千种,不同抗体对病理切片的要求不尽相同.有些抗体(单抗或多抗)必须在组织切片经高压修复后才能有效使用,如ER、PR、p53及一些多药耐药标记等.用于免疫组化的病理组织,经福尔马林固定后许多抗原决定簇被醛基交联封闭,无法与抗体结合,采用高温高压(下称常规法)处理这些组织,就可破坏醛基交联,使抗原暴露,从而与抗体有效结合.
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肿瘤坏死因子α抑制剂对妊娠的影响
肿瘤坏死因子α(TNF-α)是类风湿关节炎(RA)发病和维持关节慢性滑膜炎症反应的重要的致炎性细胞因子之一,它在T细胞依赖的炎症性肠病(IBD)发病机制中也起着十分重要的致炎作用.大量临床研究证实,TNF-α抑制剂(TNFAI)可改善RA患者关节功能,减少RA临床活动性,并延缓关节损坏的进展[1].各种TNFAI也逐渐用于治疗其他风湿性疾病,如银屑病、幼年特发性关节炎、强直性脊柱炎等.某些TNFAI被证明对难治性IBD有效.目前经美国FDA批准上市的TNFAI类药物共有3种,它们是依那西普(Etanercept,商品名Enbrel),英利西单抗(Infliximab,商品名Remicade)和阿达木单抗(Adalimumab,商品名Humira).依那西普是Ⅱ型.TNF受体(TNFR-Ⅱ)与IgG1-Fc的融合蛋白,用药方式为皮下注射.英利西单抗是由人IgG1-Fc和鼠Ig可变区组成的嵌合体TNF-α单抗,阿达木单抗是人源IgG1型TNF-α单抗,这2种药物均经静脉注射给药[1].TNFAI的主要不良反应有注射部位反应、感染、肿瘤、淋巴增殖性疾病、神经脱髓鞘病变以及狼疮样综合征[1].由于风湿性疾病多累及生育年龄女性,同时以TNFAI为代表的生物制剂应用越来越广泛,TNFAI对妊娠是否有影响日益受到临床关注.我们复习了2007年2月1日以前PubMed中关于上述3种TNFAI对妊娠影响的临床观察文献,现综述如下.
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阿达木单抗ELISA定量检测方法的建立
治疗性单抗药物已经成为生物医药的重要组成部分,在疾病治疗上具有广阔的应用前景,成功用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病。随着研究的深入及技术的进步,治疗性单抗药物呈现出良好的发展势头[1-2]。阿达木单抗是一种全人源的 IgG1型单克隆抗体,可靶向作用于在自身免疫疾病发病机制中起重要作用的促炎细胞因子--人肿瘤坏死因子(TNF-α)。类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)、多关节型幼年特发性关节炎(juvenile idiopathic arthritis,JIA)、银屑病关节炎(psoriatic arthritis,PsA)和强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者关节滑液中均发现 TNF-α水平增高,这与炎症发生和关节破坏密切相关[3-4]。阿达木单抗可特异性、高亲和地与TNF-α结合,并阻止它与细胞表面 TNF-α受体 p55和p75结合,从而拮抗 TNF-α的生物活性,减少表皮厚度和炎性细胞浸润[5-6]。
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复宏汉霖又一单抗药物提交临床研究申请
2013年12月30日,上海复星医药(集团)股份有限公司下属上海复宏汉霖生物技术有限公司(简称复宏汉霖)研发的第4个单抗药物的临床研究申请(IND)正式拿到上海药监局的受理号。这是复宏汉霖成立四年来的第5个 IND 申请,复宏汉霖 CEO 刘世高对此表示:“我们已成为全国申报生物制品Ⅱ类新药多的公司之一。复宏汉霖已经成为中国单抗研发的第一梯队,目前已提交4个单抗药物品种、5个适应证的临床研究申请。”
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重组单克隆抗体的纯化研究
重组单克隆抗体是新一代生物工程技术产品,其通过特定的靶点发挥药效[1]。随着大规模哺乳动物细胞培养技术的发展,工业化细胞培养液体积可达1万升以上,抗体表达量可达5 g/L以上,极大地加重了重组单抗下游纯化的压力[2-3],下游纯化成为限制重组单抗工业化扩大的主要因素[4-6]。重组单抗杂质控制浓度指标见表1,这些指标必须通过离心、过滤和色谱层析纯化后控制在一定浓度以下[7-10]。重组抗体的纯化一般可以分为细胞培养液澄清、抗体捕获、抗体精制纯化、病毒灭活和纯化工艺的放大等流程。
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全血金标检测试纸条法在HBsAg献血者初筛中的应用
目前,血站对献血者HBsAg的筛查,大多采用ELISA法,虽然该法特异性、敏感性均佳,但因操作繁琐,故不适用于非固定采血点对献血者的快速筛查,而未经筛查直接采集的血液,往往由于该项检验不合格而报废。采用全血金标试纸条法对献血者进行HBsAg初筛,几分钟内即可完成检验,降低了血液报废率。 1 材料与方法 1.1 原理 全血金标试纸采用胶体金免疫技术,在硝酸纤维素膜上预包被金标抗HBsAg单抗(Au-ssAb),硝酸纤维素膜上检测线和对照线上分别包被抗HBsAg单抗(sAb2)和羊抗鼠kgG。检测时,样本血清中HBsAg可与胶体金-抗体结合形成复合物,由于层析作用,复合物沿纸条向前移动。
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细胞因子及抗-CD3单抗对外周血单个核细胞活化作用
探讨联合应用IFN-γ、IL-2及抗-CD3单抗对分离自健康供血者的外周血单个核细胞(PBMC)在体外的诱导活化作用,并以单独应用IL-2作比较,分析了细胞活化的特征性标志.同时通过动态测定这些标志,认识了免疫细胞活化的动态过程.现将研究结果报告如下:
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肿瘤患者外周血细胞毒性CD3-CD56+ NK细胞的扩增
如何提高NK细胞体外增殖效率和细胞毒活性是其应用于临床需要解决的一个主要问题.近Carlens等人建立了一种较为简单的从健康成人PBMC中诱导大量扩增CD3-CD56+ NK细胞的方法,并将获得的以CD3-CD56+ NK细胞为主的细胞群体称为细胞因子诱导的自然杀伤细胞 (cytokine-induced natural killer,CINK).本研究在此基础上用改进的方法从恶性肿瘤患者PBMC中扩增CINK细胞,并比较了其与CD3单抗活化杀伤细胞(CD3AK)或细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)抗肿瘤活性的作用.
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四株中国狂犬病病毒核衣壳蛋白和糖蛋白抗原性分析
狂犬病病毒核蛋白(NP)单克隆抗体可以清楚地区分狂犬病病毒和狂犬病相关病毒.用抗狂犬病病毒单抗还可以在同一血清型内进一步的分组以及分析毒株传播的宿主动物和地理位置,从而有可能找到流行的线索.病毒间的差异同样表现在与病毒GP单抗的特异反应中.用特异性GP单抗进行中和试验对大量毒株的分析,认识到一些狂犬病街毒在GP抗原结构上与疫苗株有明显不同,疫苗免疫的失败和疫苗株与街毒之间抗原差异的程度有关.为了解我国狂犬病毒NP和GP抗原变异情况,用抗NP和GP单克隆抗体分析的方法对我国人用狂犬病疫苗株(aG)、实验室减毒株( CTN-181)及分离自宁夏的2株街毒进行了NP和GP抗原结构的分析和研究.
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人活化血小板单抗导向血栓免疫偶联物的制备及性质研究
目前血栓部位的检测技术大都存在着检测速度慢,灵敏度低,易造成误诊等不足.如果采用高亲和特异性的血栓单抗与核素标记相结合的导向显像方法进行检测,会使检测迅速、灵敏,使血栓的临床检测方法获得突破.
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人外周血NK细胞3种纯化方法的比较
NK细胞是机体抵抗肿瘤生长和病毒感染的重要的免疫监视细胞.近年来,关于NK细胞本质及其功能和机制的研究已成为免疫学研究的热点内容之一.但国内NK细胞的研究大多是检测NK细胞毒活性和NK细胞数量,很少直接观察NK细胞的特征及其功能特点,NK细胞分离纯化,是进行NK细胞基础与临床研究的基础和基本手段.我们分别采用Percoll不连续密度梯度离心法、单抗铺皿法(Panning)及补体依赖的细胞毒法对人外周血NK细胞进行了初步分离纯化,现将结果报告如下.
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CD19抗体介导抗动物B细胞型淋巴瘤(LB-TA287)作用的实验研究
联合应用抗肿瘤McAb和LAK细胞,使其产生抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC),是提高LAK细胞疗效很有希望的方法之一.为此,我们观察了单抗CD19介导抗动物B细胞型淋巴细胞瘤作用的影响.试验的靶细胞为TA2小鼠B细胞型淋巴瘤(LB-TA287)模型,由本室建立.
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双特异单抗聚合体清除血液HBsAg及HBV的研究
目的研究第二抗体交连的双特异单抗聚合体对乙肝病人血液HBsAg及HBV的清除能力,并初步探讨其机制. 方法用羊抗鼠IgG单抗将鼠抗人CR1单抗及鼠抗HBsAg单抗连接构建成双特异单抗聚合体(heteropolymer, HP),将HP加入到乙肝病人枸橼酸钠抗凝全血中,离心测定血浆中HBsAg及HBV的含量变化;设立对照组,并采用放射免疫、荧光定量PCR以及细胞酶联等测定方法研究细胞结合的HBsAg及HBV的含量变化及红细胞膜CR1分子数量的变化. 结果由二抗构建的HP可在5min内将全血中95%以上的HBsAg及51%的HBV结合到红细胞上,使血浆中HBsAg的含量从3010ng/ml降到138ng/ml;HBV DNA病毒也从7.2×1011 copies/L下降到3.5×1011 copies/L.红细胞在结合抗原物质的同时伴有CR1分子的丢失,但红细胞无溶血反应. 结论由二抗构建的HP与文献报道的生物素-亲合素构建的HP具有相同的生物学功能,并更有助于对抗原物质的结合与清除,以红细胞为载体的HP清除系统可能具有重要的医药或临床治疗研究价值.
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CD44s和CD44v6在大肠癌中的表达及其临床意义
本研究选择免疫球蛋白超基因家族中的CD44分子的标准型(CD44s)及其变异型CD44v6两种单抗,应用免疫组化的方法对20例正常大肠粘膜和82例大肠癌原发灶组织进行研究,探讨细胞粘附分子(CAMs)的表达与大肠癌浸润转移影响及各因素的内在联系.