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c-Abl与实体瘤关系研究进展
非受体型酪氨酸激酶c-Abl具有多种生物学功能,可参与细胞周期、细胞迁移、细胞凋亡、DNA应激损伤反应修复等重要生命过程的调控,其过度激活与慢性粒细胞白血病的发生、发展密切相关,且在白血病方面的研究详细深入,但在实体瘤研究方面则刚刚起步,文章就c-Abl在实体瘤方面的研究进展进行简要综述.
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非受体酪氨酸激酶c-Abl与Siva-1相互作用及在细胞凋亡中的功能研究
目的:研究非受体酪氨酸激酶c-Abl与Siva-1蛋白的相互作用及其对细胞凋亡的影响.方法:应用免疫共沉淀研究蛋白质相互作用;抗酪氨酸抗体研究蛋白体内磷酸化;体外激酶分析研究体外磷酸化;流式细胞仪测定Sub G1细胞百分比以测定细胞调亡.结果:非受体酪氨酸激酶c-Abl在细胞内及体外均与Siva-1形成复合物,通过体外翻译的c-Abl结合实验表明其为直接的相互作用,其相互作用主要通过c-Abl的SH3结构域与Siva-1直接结合,且Siva-1可以被c-Abl磷酸化.通过c-Abl显性负突变结果表明,酪氨酸磷酸化对Siva-1诱导细胞凋亡至关重要.结论:c-Abl使Siva-1磷酸化可促进Siva-1的细胞凋亡功能.
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血管平滑肌细胞钙化过程中DNA损伤响应分子p21、p53和c-abl的变化
目的 研究钙化发生过程中细胞DNA损伤响应分子表达水平的变化.方法 半定量方法测定钙化细胞中p21、p53、c-abl的mRNA水平,通过免疫印迹法检测p53和chk1磷酸化水平.结果 血管平滑肌细胞在10 mmol β-磷酸甘油酯的诱导下,随着时间的延长,在时间点2,4,6 d时,p21、p53、c-abl的mRNA水平上升,第8天后mRNA水平下降.在前6 d中,p53和chk1磷酸化呈逐步上升趋势.结论 在钙化过程的前期,p21、p53、c-abl的mRNA水平上升,p53和chk1磷酸化水平也呈上升趋势,这表明钙化的发生和DNA损伤响应分子有关.
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卵巢癌中C-kit、C - abl、PDGFRα的表达及意义
目的 探讨酪氨酸激酶受体在卵巢癌中的表达及意义.方法 应用免疫组化SP方法,检测20例正常卵巢组织和60例卵巢癌中酪氨酸激酶受体C-kit、C-abl和PDGFRα的表达.结果 至少含一种酪氨酸激酶受体的阳性率为79%;C-kit、C-abl和PDGFRα在卵巢癌中阳性表达率分别为58.3%,70%,73.3%,其中C-kit和PDGFRα蛋白的阳性表达率较高,明显高于正常卵巢组织,差异有显著性(P＜0.01).C-abl在卵巢癌中表达高于正常卵巢组织,差异无显著性.结论 C-kit和PDGFRα与卵巢癌的发生和发展密切相关,应用酪氨酸激酶抑制剂治疗有可能性.
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c-abl与CDK2在新疆哈萨克族食管鳞癌早期发生中的作用
目的:探讨细胞周期调控因子c-abl、CDK2在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展中的作用.方法:采用逆转录PCR方法在48例新疆哈萨克族食管鳞癌组织及远端无癌组织中检测c-abl、CDK2的表达.结果:在新疆哈萨克族食管鳞癌中:(1)c-abl和CDK2在癌组织与癌旁组织中的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P>0.05).(2)在癌组织中CDK2表达与TNM分期有关(P=0.040<0.05).结论:CDK2表达与食管癌TNM分期有关,两基因直接或间接的通过细胞周期和凋亡在新疆哈萨克族食管鳞癌发生发展及侵袭过程中起作用.
关键词： 哈萨克族食管鳞癌 c-Abl Cdk2 逆转录聚合酶链式反应 -
P73、c-Abl蛋白在卵巢肿瘤组织中的表达及临床意义
目的 研究P73、c-Abl蛋白在卵巢肿瘤组织中的表达情况及相互关系,探讨其在卵巢肿瘤发生、发展中的作用.方法 应用免疫组化SP法检测61例卵巢恶性肿瘤、28例卵巢交界性肿瘤和30例卵巢良性肿瘤组织中P73、c-Abl蛋白的表达情况.结果 P73蛋白在卵巢良性、交界性、恶性肿瘤组织中的表达呈逐渐增高趋势;卵巢恶性肿瘤内P73蛋白的表达与组织分化有关,在低分化癌中有较高表达;卵巢癌患者中P73蛋白阴性表达者的生存期明显长于阳性表达者;c-Abl蛋白在卵巢良性、交界性、恶性肿瘤组织中的表达有显著差异(P<0.01),在卵巢癌中呈高表达;P73蛋白和c-Abl蛋白在卵巢癌中呈正相关性高表达(P<0.01).结论 p73基因以高表达方式参与卵巢癌的发生发展过程,卵巢癌中P73蛋白的高表达与c-Abl蛋白的高表达有关.P73蛋白的表达强度能够反映卵巢癌的恶性程度,可作为判断肿瘤生物学行为的参数和卵巢癌预后的指标.
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hAph2β和c-abl在肝细胞癌中的表达及其相互作用
目的:探讨hAph2β蛋白与c-abl蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的相互作用.方法:RT-PCR和Western 印迹法分析c-abl基因和hAph2基因在肝癌细胞株及永生化人肝细胞株中的表达.脂质体转染、免疫共沉淀和Western印迹法检测hAph2β与c-abl在SMMC-7721细胞中的相互作用.激光共聚焦-荧光显微镜观察hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中的定位.用组织芯片结合免疫组织化学法检测hAph2β和c-abl蛋白在肝癌和相应癌旁组织中的表达差异,统计学分析其表达差异的临床意义.结果:RT-PCR检测结果表明,c-abl mRNA在HepG2、L-02及MHCC-LM3细胞中高表达,在SMMC-7721、BEL-7402、Hep3B和Chang's liver细胞中中度表达,而在Huh-7、MHCC-97L细胞中低表达.Western印迹法检测结果发现,hAph2总蛋白在HepG2、Huh-7、MHCC-LM3和MHCC-97L细胞中高表达,在BEL-7402、L-02细胞中低表达;c-abl蛋白在Huh-7细胞中低表达.免疫共沉淀观察发现SMMC-7721细胞中过表达的hAph2β-GFP和内源性c-abl相互作用.荧光免疫细胞化学检测发现hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中部分共定位.免疫组织化学检测结果表明,hAph2β/c-abl蛋白在人正常肝组织、硬化肝组织、癌旁肝及原发性HCC癌组织中的强阳性率分别为:100%/50%、91.7%/100%、100%/89.5%和50.9%/19.3%,其中hAph2β和c-abl在癌旁肝组织中的表达均明显高于肝癌组织(均P<0.001),2者在56.1%(32/57)的肝癌组织中同时高或低表达.结论:hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中相互作用,在原发性HCC及相关组织中共表达.
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积雪草酸对原代大鼠视网膜神经节细胞低氧损伤的保护作用研究
目的 研究积雪草酸(AA)在体外大鼠视网膜神经节细胞(RGC)低氧损伤中的保护作用,并探讨其作用机制.方法 选取出生1～3d的新生SD大鼠,解剖游离出视网膜,利用Thy1.1抗体包被法纯化获取RGC,定量聚合酶链反应(qPCR)鉴定RGC的纯度.体外给予原代RGC不同时长(0、12、24、48 h)的低氧(1％O2)损伤刺激,TUNEL检测RGC的凋亡情况.预先给予原代RGC不同浓度(0、5、10、20、50 μmol/L)的AA干预后,再以1％O2培养48 h,通过TUNEL凋亡检测、CCK-8细胞增殖检测研究AA在RGC凋亡中的作用.利用Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统对凋亡相关蛋白c-Abl进行检测.结果 低氧条件下(1％O2),RGC的TUNEL凋亡阳性细胞数随着低氧刺激时间的递增呈梯度增加.低氧环境下(1％O2),给予不同浓度的AA干预,TUNEL结果显示10 μmol/L和20 μmol/L AA处理后,RGC凋亡细胞数显著减少(P值均＜0.01).同时CCK-8结果显示10 μmol/L和20 μmol/L AA干预后,RGC的增殖活力明显升高(分别为P＜0.05,P＜0.01).Wes全自动蛋白质印迹定量分析系统结果表明,AA在原代RGC低氧损伤中可以明显抑制c-Abl的磷酸化水平.结论 体外低氧刺激时,AA可以减少RGC的凋亡,对原代RGC的低氧损伤有一定的保护作用,其作用机制与抑制c-Abl的磷酸化激活相关.
关键词： 大鼠原代视网膜神经节细胞 积雪草酸 c-Abl 神经保护 -
c-Abl抑制剂应用于治疗帕金森病的进展研究
帕金森病(PD)是与衰老相关的常见的神经退行性疾病.近年来,有关PD的动物模型研究和对来自PD患者的脑标本的分析发现多巴胺能神经元中非受体酪氨酸激酶Abelson(c-Abl)的水平和活性增加.c-Abl具有蛋白质底物磷酸化活性,可使α-突触核蛋白和E3泛素连接酶Parkin磷酸化.临床上用于治疗白血病的c-Abl激酶抑制剂,在PD的细胞和动物模型均中显示出神经保护作用,这为临床上使用c-Abl抑制剂治疗PD患者提供了良好的应用前景.文章就c-Abl及其与PD发生发展的病理生理过程的关系进行综述,并对目前c-Abl抑制剂的药理学和安全性相关的问题进行了讨论.c-Abl抑制剂是否能够真正用于临床治疗PD使更多患者受益,仍需要更严格控制、设计良好的试验做进一步的研究.
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C-Abl与血管内皮细胞以及肿瘤发生相关性的研究进展
当多种致癌因素作用于机体时,机体中的某一个或一部分细胞在基因水平上发生改变,从而对自身正常生长失去调控,导致肿瘤的发生.C-Abl属于非受体酪氨酸激酶,广泛参与细胞的多种生理功能,包括骨架重排、诱导凋亡、增殖分化以及DNA应激损伤反应等.大量研究显示,C-Abl在多种肿瘤中发挥重要作用,包括有慢性粒细胞白血病、乳腺癌、骨髓瘤、黑色素瘤、非小细胞肺癌、前列腺癌、大肠腺癌和肝癌等.此外,C-Abl还与内皮细胞屏障以及血管生成有关,这可能是C-Abl参与肿瘤迁移的机制之一.而C-Abl及其抑制物在抗肿瘤治疗中也呈现出两个不同方面的作用.因此,对C-Abl与肿瘤之间的相关性进行研究是非常有意义且十分必要的.现就C-Abl在血管内皮细胞中的作用,及其与恶性肿瘤的相关性做一综述.
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荧光原位杂交技术检测BCR/ABL融合基因的研究进展
1960年Nowell和Hungefford[1]在美国费城(Philadelphia)的2例CML患者细胞中第一次发现了异常的小型染色体命名为Ph染色体,1973年Rowlev[2]通过显带的方法发现Ph染色体是由于9号和22号染色体发生易位产生,随着分子生物学的发展,Ph染色体的分子水平及其致病机理也日渐明确,t(9;22)(q 34;q11)易位的结果是使位于9号染色体长臂3区4带(q34)上的c-abl原癌基因与22号染色体长臂上一个功能未明的断裂点簇集区(breakpoint cluster egion,BCR)发生拼接,形成BCR/ABL融合基因[3,4],随后在ALL,AM L,MPD等白血病均有发现BCR/ABL融合基因的表达[5-8].
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c-abl研究进展
c-abl是从研究反转录病毒中确定的一种细胞原癌基因,其相对应的病毒v-abl初是从abelson小鼠白血病病毒中得到的.c-abl的激活可导致细胞的恶性转化,终导致白血病的发生.本文介绍了abl发现以来国外有关abl基因的研究进展,特别对abl基因的定位、结构及功能特点以及该基因在白血病发展中的作用和地位进行了综述.
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Plk1调节c-Abl表达机制的初步研究
目的 研究Polo样激酶1(Polo-like kinase1,Plk1)对非受体酪氨酸激酶(cellular-abelsongene,c-Abl)表达水平的调控及其作用机制.方法 在293T细胞中过表达带有不同标签的Plk1,研究随着外源Plk1表达量的增加,内源c-Abl表达是否变化.分别通过放线菌酮翻译抑制实验和荧光定量PCR实验,研究Plk1是通过影响c-Abl蛋白稳定性还是转录活性来调节其表达.结果 细胞内c-Abl的表达随着外源Plk1的表达量的增加而增加,Plk1不影响c-Abl蛋白稳定性,但可调节c-Abl转录水平.结论 Plk1可在转录水平调节c-Abl表达.
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imatinib对大鼠SAH后早期颅脑损伤的影响
目的 研究imatinib对蛛网膜下腔出血后早期颅脑损伤的作用及相关机制.方法 收集160只Wistar大鼠,先将98只大鼠分为假手术组(n=20)、SAH组(n=26)、SAH+ imatinib组(n=26)、SAH+ imatinib+ LY294002组(n=26).采用血管内穿刺法制作SAH模型,假手术组不刺破血管,其余操作相同.再将30只SAH大鼠分为control siRNA组(n=10)、c-AblsiRNA组(n=10)和c-Abl siRNA+ imatinib组(n=10).计算各组大鼠的病死率,采用Western blot检测p-PDGFRα、c-Abl、p-Akt、p-GSK3β蛋白水平,Tunel荧光法检测神经元凋亡,评价出血后24、72 h各组大鼠SAH严重程度、神经评分;另取32只大鼠用于检测出血后48 h脑组织含水量,伊文思蓝检测血-脑屏障通透性变化.结果 imatinib显著降低出血后24 h病死率及神经元凋亡,减轻脑水肿,减少出血后48 h伊文思蓝渗出,提高72 h后神经评分(P＜0.05),但不减少出血量.出血24 h后p-PDGFRα、c-Abl蛋白表达显著增加,p-Akt、p-GSK3β表达稍增加(P＜0.05),imatinib显著下调p-PDGFRα、c-Abl表达,上调p-Akt、p-GSK3β的表达(P＜0.05),LY294002可拮抗imatinib作用(P＜0.05).沉默c-A bl基因表达,p-GSK3β、p-Akt的表达显著增加,神经元凋亡明显减少(P＜0.05),在此基础上使用imatinib对p-GSK3β、p-Akt蛋白表达及凋亡无影响(P＞0.05).结论imatmib减轻SAH早期颅脑损伤,改善神经功能,可能与抑制c-Abl、增加Akt/GSK3β磷酸化有关.
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血管紧张素Ⅱ诱导足细胞c-Abl的表达改变
目的 探讨血管紧张素Ⅱ( AngⅡ)诱导下大鼠肾脏及条件永生性小鼠足细胞c-Abl的表达变化.方法 采用AngⅡ泵(400ng·kg-1·min-1)植入SD大鼠皮下的方法建立AngⅡ输注模型,24只大鼠成模后被随机分为AngⅡ输注2周组、AngⅡ输注4周组、AngⅡ输注+替米沙坦(ARB,3 mg·kg-1·min-1)干预2周组及4周组,同时设生理盐水输注组和健康对照组,每组6只.分别于成模后2周末、4周末处死大鼠取肾.电镜下观察肾脏足细胞超微结构的改变；免疫荧光法检测肾脏c-Abl表达；实时PCR及Western印迹检测c-Abl mRNA及蛋白水平的改变.对于体外培养条件永生性小鼠足细胞,免疫荧光法检测足细胞肾脏c-Abl的表达,实时PCR及Western印迹法检测足细胞在AngⅡ不同作用浓度(10-9 mol/L～10-6 mol/L)及不同作用时间点(0h、3h、6h、12 h、24 h)c-Abl mRNA和蛋白水平的变化.结果 (1)免疫荧光检测结果显示肾脏足细胞有c-Abl表达；实时PCR及Western印迹结果显示AngⅡ输注2周组和4周组大鼠肾脏c-Abl表达增加(P＜0.05),ARB干预组大鼠肾脏c-Abl表达较同期AngⅡ输注组均有降低(P＜0.05).(2)体外培养的条件永生性小鼠足细胞胞质及胞核有c-Abl表达.AngⅡ可诱导培养的小鼠足细胞c-Abl mRNA及蛋白表达增加(P＜0.05),且呈时间和剂量依赖性.结论 c-Abl在肾足细胞及体外培养足细胞均有表达,AngⅡ可诱导c-Abl表达上调.c-Abl可能参与了AngⅡ诱导的足细胞损伤.
