HPLC法测定不同产地地菍中三萜类成分含量

目的 建立测定地菍中三萜类成分积雪草酸、白桦酯酸、齐墩果酸含量的HPLC方法 .方法色谱柱为Waters SunFire C18柱(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水,梯度洗脱;柱温30℃;检测波长200 nm;流速0.6 ml/min;进样量25μl.结果 积雪草酸、白桦酯酸、齐墩果酸分别在0.310~6.200μg(r=0.9999)、0.405~8.100μg(r=0.9999)、0.169~3.375μg(r=0.9998)线性关系良好,平均回收率分别为102.08%、101.81%、102.22%.结论 地菍中积雪草酸、白桦酯酸、齐墩果酸含量因产地而异,建立的分析方法简便灵敏、重复性与稳定性良好,适用于地菍药材的质量评价.

积雪草酸阻断大鼠肝纤维化的实验研究

目的:研究积雪草酸对大鼠实验性肝纤维化的影响.方法:将SD大鼠随机分为①模型对照组、②积雪草酸治疗组、③正常对照组和④积雪草酸对照组.①、②组腹腔注射20%四氯化碳花生油6周诱导肝纤维化;③、④组腹腔注射等量花生油做对照.②、④组同时按8mg/kg给予积雪草酸灌胃,每天1次;①、③组则给予等量生理盐水.第6周时,取肝组织做病理检查,并检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和胆红素等的含量.结果:③、④组未发现明显病理改变;②组较①组不但肝纤维化分级显著降低(P＜0.05),而且转氨酶和胆红素水平也显著降低(P＜0.05).结论:积雪草酸可明显阻断四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化,且无明显肝毒性作用.

委陵菜积雪草酸对大鼠酒精性肝损伤的保护作用

研究委陵菜积雪草酸(asiatic acid,AA)对大鼠酒精性肝损伤的保护作用及其机制.将Wistar雄性大鼠随机分成正常对照组,AA对照组(8 mg· kg-1AA),模型组(5.0～9.0 g·kg-1乙醇),及AA高、中、低剂量治疗组(乙醇+8,4,2 mg·kg-1AA).各组灌胃给予相应的药物,每天1次,连续24周.末次给药1.5h后,取血,处死大鼠,采集肝组织.检测大鼠血清AST,ALT,检测肝脏髓过氧化物酶(MPO),肿瘤坏死因子(TNF-α),白细胞介素1(IL-1β),超氧化物歧化酶(SOD),GSH-Px,GSH-Rd,丙二醛(MDA)的水平;采用Western blot法检测肝组织中NF-κB,Toll样受体4(TLR4),CD14,髓样分化因子88(MyD88)和TIR结构域衔接蛋白-β(TRIF),蛋白表达情况;同时做组织学检查,观察肝组织的病理变化.结果显示与模型组相比较,AA治疗后,大鼠血清ALT和AST水平,MDA含量明显降低,SOD,GSH-Px,GSH-Rd,MPO活性明显升高.此外,AA能抑制TNF-α,IL-1β的表达;同时还可抑制TLR4,CD14,MyD88以及核因子NF-κB的水平.组织学检查显示,大鼠肝组织损伤程度均有所减轻.综合以上结果可知委陵菜积雪草酸对乙醇所致的大鼠肝损伤具有一定的保护作用,其机制可能与抑制NF-κB活化减轻炎症反应有关.

3种五环三萜化合物对高钙诱发的小鼠肝MPT的抑制作用研究

目的:研究3种五环三萜化合物齐墩果酸(OA)、乌苏酸(UA)、积雪草酸(AA)对肝细胞线粒体高通透性转运(MPT)的影响.方法:运用体外高钙诱发MPT模型,测定OA,UA,AA对肝细胞线粒体肿胀、线粒体膜电位耗散、线粒体内游离钙释放的影响.结果:正常小鼠肝细胞线粒体中加入50μmol·L(-1)Ca2+即可引起明显的线粒体肿胀、膜电位耗散以及游离钙的释放,而50mg·L(-1)OA,UA,AA均可有效抑制上述过程,且3种化合物的抑制能力存在显著差异.结论:3种五环三萜化合物OA,UA,AA均具有显著对抗MPT,进而保护肝细胞线粒体的功能,且AA的作用强于UA及OA.

响应面法优化PEG积雪草酸脂质纳米粒及促小肠吸收研究

溶剂扩散法制备聚乙二醇修饰积雪草酸(asiatic acid,AA)纳米结构脂质载体(pegylated asiatic acid loaded nanostructured lipid carriers,p-AA-NLC),并结合星点设计-效应面法得到p-AA-NLC的优处方工艺,其中PEG/脂质为8.0％,AA/脂质为22.0％,该条件下的纳米体系荷负电荷(-37.1±0.9)mV,粒径(111.2±2.9) nm,包封率大于90％,载药量适中(15.4±0.2)％.4个指标实验值与模型预测值相比偏差均小于5％,表明实验中建立的模型预测性良好.同时采用大鼠在体肠灌流模型对优化后的p-AA-NLC进行肠吸收考察,药物有效吸收系数(Peff)、吸收速率常数(Ka)等参数评价该亲水性修饰纳米粒的肠吸收情况,结果显示p-AA-NLC组的Peff,Ka较未修饰组有显著提高(P＜0.05),提示积雪草酸纳米结构脂质载体(asiatic acid loaded nanostructured lipid carriers,AA-NLC)经亲水性PEG修饰后其小肠吸收有明显的促进作用.

PEG化脂质纳米粒促进积雪草酸口服吸收研究

采用溶剂扩散法制备聚乙二醇修饰的积雪草酸(asiatic acid,AA)纳米结构脂质载体(pegylated asiatic acid loaded nanostructured lipid carriers,p-AA-NLC),以结扎肠循环模型考察其在小肠的吸收分布情况,HPLC检测健康SD大鼠灌胃给予p-AA-NLC后的胆汁药物浓度,间接评价PEG化脂质纳米粒的促口服吸收作用.结果显示,经PEG亲水性修饰的NLC在小肠黏膜的穿透能力大大提高,小肠内的转运量显著增加,大鼠体内药物排泄峰值Cmax较普通纳米粒(asiatic acid loaded nanostructured lipid carriers,AA-NLC)提高了76%,达峰时间tmax减慢,消除半衰期t1/2延长1倍,AUC0→t为AA-NLC组的1.5倍,提示AA-NLC经PEG亲水性修饰后,口服生物利用度显著提高.

积雪草酸对异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大的影响

目的：探讨积雪草酸（AA）对异丙肾上腺素（ISO）诱导心肌细胞肥大的影响。方法体外培养大鼠心肌细胞H9c2，分为对照组、ISO组和ISO+AA组。ISO组使用10 mmol/L ISO处理H9c2细胞诱导心肌细胞肥大，ISO+AA组加入不同浓度AA和10 mmol/L ISO处理H9c2细胞，对照组加入0.5%二甲基亚砜（DMSO）作为溶媒对照。实时定量PCR检测心房钠尿肽（ANP）、β?肌球蛋白重链（β?MHC）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH?Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、血红素加氧酶1（HO?1）基因的表达，免疫荧光染色测量心肌细胞横截面积，免疫印迹法检测心肌肥大相关信号通路改变，荧光探针DCFH?DA检测细胞内活性氧簇（ROS）水平。结果实时定量PCR显示，与对照组比较，ISO处理48 h后H9c2细胞心肌肥大标志物ANP和β?MHC mRNA表达上调（均P<0.05），而5、10、20μmol/L的AA干预48 h可显著降低ISO诱导的ANP和β?MHC mRNA表达上调（均P<0.05），且具有浓度依赖性；20μmol/L AA处理H9c2细胞12、24和48 h，均能抑制ISO诱导的ANP和β?MHC mRNA表达上调（均P<0.05）。免疫荧光染色测量各组心肌细胞横截面积显示，对照组、ISO组和ISO（10 mmol/L）+AA（20μmol/L）组心肌细胞横截面积分别为（1946±49）μm2、（2952±111）μm2、（2548±59）μm2。与对照组比较，ISO组心肌细胞横截面积增加，而20μmol/L AA能显著降低ISO导致的心肌细胞肥大（均P<0.05）。免疫印迹显示ISO可导致蛋白激酶B（AKT）?糖原合成酶激酶3β（GSK3β）和细胞外信号调节激酶（ERK）?c?Jun氨基末端激酶（JNK）等心肌肥大相关信号通路活化，而20μmol/L AA能够抑制上述信号通路的活化。荧光探针DCFH?DA检测显示，20μmol/L AA能够明显抑制ISO诱导的细胞内ROS水平增加。实时定量PCR检测显示，20μmol/L AA能够明显抑制ISO诱导的GSH?Px、SOD和HO?1 mRNA表达上调。结论 AA可通过抑制AKT?GSK3β和ERK?JNK信号通路减弱氧化应激，从而抑制ISO所致的心肌细胞肥大。

积雪草酸对高血脂小鼠骨量丢失的保护作用

目的 探讨积雪草酸对高血脂小鼠骨量丢失的保护作用.方法 60只8周龄SPF级雄性C57BL/6 J小鼠按体重随机分为6组,每组10只:空白对照组[CON,生理盐水:5 mL/(kg·d)]、高脂饲料组[HFD,生理盐水:5 mL/(kg·d)]、高脂饲料+低剂量积雪草酸组[HFD+AA-L:5 mg/(kg·d)]、高脂饲料+中剂量积雪草酸组[HFD+AA-M:10 mg/(kg·d)]、高脂饲料+高剂量积雪草酸组[HFD+AA-H:20 mg/(kg·d)]、高脂饲料+辛伐他汀组[HFD+SIM:20 mg/(kg·d)].除空白组之外,其他组别采用高脂饲料连续喂养16周并同时给药进行干预.实验结束后,经眼眶采血收集血清、两侧股骨和胫骨.结果 高脂饲料引起小鼠血清胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)和Ⅰ型胶原C末端肽(CTX-I)水平升高,超氧化物歧化酶(SOD)和Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PINP)水平下降(均P＜0.05),且胫骨近端骨密度下降,骨微结构受损,骨形成率下降,其股骨生物力学指标降低.HFD+AA-M、HFD+AA-H和HFD+SIM组均可明显降低小鼠血清TC、MDA、CTX-I水平,升高SOD和PINP水平(均P＜0.05),增加骨密度和改善骨微结构,提高骨生物力学指标,HFD+AA-H组效果稍优于HFD+AA-M,但稍逊于HFD+SIM组.HFD+AA-L组小鼠血指标、骨密度、骨微结构和骨生物力学均无明显改善(P＞0.05).结论 积雪草酸[10、20 mg/(kg·d)]灌胃给药可预防高血脂小鼠的骨量丢失,其机制可能通过促进骨形成,抑制骨吸收,增加机体的抗氧化能力.

积雪草酸对TNF-α诱导的HaCaT细胞增殖的抑制作用

目的探讨积雪草酸对TNF-α诱导的人角化细胞系HaCaT增殖的影响及其可能机制.方法分别通过MTT实验和PI染色流式细胞术检测不同浓度TNF-α对体外HaCaT细胞增殖能力和细胞周期的影响.采用免疫荧光染色法检测不同浓度积雪草酸对TNF-α诱导HaCaT细胞NF-κB核转位的影响.通过Western印迹法检测NF-κB信号通路中p-NF-κB、NF-κB的表达水平.结果TNF-α诱导的HaCaT增殖实验结果显示,与正常对照组相比,模型组中细胞存活率明显升高(P＜0.01),S期细胞比例显著升高(P＜0.05),G2期细胞比例显著降低(P＜0.05),p-NF-κB表达显著升高(P＜0.01);与模型组相比,10、25和50μmol/L积雪草酸组细胞存活率显著下降(均为P＜0.05),10和40 μmol/L积雪草酸组G2期细胞比例显著升高(P＜0.05),p-NF-κB表达显著降低(P＜0.05).结论积雪草酸可能通过抑制NF-κB信号通路来抑制角质形成细胞的增殖,可以作为治疗银屑病的潜在药物.

积雪草酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用研究

结果 与模型组相比,积雪草酸能够显著降低脑梗死体积和脑含水量,减少脑组织中的IL-1β和TNF-α含量(P<0.01,P<0.05).结论 积雪草酸对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有显著的保护作用,其机制可能与降低脑组织中的IL-1β和TNF-α含量有关.

积雪草酸对PC12细胞氧糖剥夺/复氧损伤的保护作用

积雪草酸脂质纳米粒的微观结构及其对肠吸收动力学的影响

目的:制备和表征积雪草酸(asiatic acid,AA)的脂质纳米粒AA-SLN和AA-NLC,考察微观结构及其对大鼠在体肠吸收动力学的影响.方法:以单硬脂酸甘油酯及油酸为脂质载体,采用溶剂扩散法制备AA-SLN和AA-NLC,从包封率、载药量、粒径、形态、晶型等方面进行表征,并运用大鼠在体单向灌流模型,考察AA及其纳米粒间的肠吸收差异.结果:制备的AA-SLN和AA-NLC粒径分别为(208±24)和(310±11) nm,包封率分别为(67.6±5.5)％和(77.9±4.8)％.纳米给药后,药物吸收剂量分数(fa)和肠腔有效吸收系数(Peff)较原料明显提高(P＜0.05);随着给药剂量的增加,fa,Peff和吸收速率常数(Ka)均有所下降;由于NLC与SLN微观结构存在差异,吸收百分率及参数均有差异.结论:纳米粒子对AA在大鼠小肠的吸收有促进作用,微观结构的差异影响小肠吸收.

积雪草中积雪草酸的分离、纯化及其含量测定

分离纯化积雪草中积雪草酸,并建立高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography,HPLC）测定积雪草酸的含量.方法超声提取积雪草中积雪草酸,将粗提物用石油醚-丙酮体系在硅胶柱上梯度洗脱,HPLC法测定积雪草酸的含量.色谱条件:采用Waters Symmetry C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相为乙腈- 10 mmol·L-1乙酸铵溶液( 38:62,V/V),检测波长为210 nm,流速为1.0 mL·min-1,柱温25℃,进样体积为20μL.结果积雪草酸在浓度10～200 mg·L-1线性关系良好（R2=0.9995）,其日内、日间RSD均小于5.4％,回收率为100.5％.积雪草中积雪草酸含量为0.99 g· kg-1.经提取、分离、纯化得到积雪草酸白色粉末,纯度为79.0％.结论本实验所用分析方法简便、准确、重复性好,可用于积雪草酸的含量测定:所用提取分离及纯化积雪草酸的方法可使中药中积雪草酸得到有效富集.

积雪草酸提取工艺及其在70种中药中质量分数的测定

积雪草酸(asiatic acid,AA)是存在于天然产物中的一种五环三萜类化合物.研究[1-7]表明,AA及其衍生物具有治疗皮肤创伤、抗炎、抗抑郁、抗阿尔茨海默病、抗肿瘤和修复神经损伤、保护心脑血管等多种药理作用.由于目前尚不能对AA进行化学合成,因此对天然产物中AA的提取工艺的研究具有广泛应用前景.

蒲桃茎化学成分及其体外细胞毒活性研究

目的 研究蒲桃(原变种)Syzygium jambos var.jambos茎的化学成分.方法 利用硅胶、葡聚糖凝胶、氧化铝和制备液相等各种色谱技术进行分离和纯化,根据波谱数据分析鉴定化合物结构;利用MTT法评价分离化合物对人肝癌细胞Huh-7细胞毒作用.结果 从蒲桃茎醋酸乙酯和甲醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为麦珠子酸(1)、urolithin A (2)、邻苯二甲酸二正丁酯(3)、桦木酸(4)、熊果酸(5)、1-(4-methoxyphenyl)-1,2-propanediol (6)、2,6-dimethoxy-1,4-benzoquinone (7)、邻苯二甲酸二异丁酯(8)、β-谷甾醇(9)、3-乙酰-熊果酸(10)、积雪草酸(11)和阿江榄仁酸(12).细胞活性测试结果表明在50 μmol/L浓度时化合物1、7、10、11+12混合物对Huh-7细胞均未表现出显著的细胞毒作用.结论 除化合物4,其他11个化合物均为首次从植物分离获得,所测试化合物均无明显细胞毒活性.

连翘化学成分研究

目的 研究连翘Forsythia suspense果实的化学成分.方法 采用硅胶色谱技术及重结晶等方法进行分离纯化,通过现代波谱技术鉴定化合物的结构.结果 从连翘80％乙醇提取后水沉部位分离得到1 1个化合物,分别鉴定为乙酰齐墩果酸(1)、异降香萜烯醇乙酸酯(2)、β-香树脂醇乙酸酯(3)、长管大青素A(4)、甲基-β-D-吡喃葡萄糖(5)、商陆种酸(6)、积雪草酸(7)、连翘苷(8)、齐墩果酸(9)、β-谷甾醇(10)、β-胡萝卜苷(11).结论 化合物1、4～7均是首次从该属植物中分离得到.

海南狗牙花枝叶化学成分的研究

目的 研究海南狗牙花Ervatamia hainanensis枝叶的化学成分.方法 采用硅胶、Sephadex LH-20、ODS及RP-HPLC进行分离纯化,并根据理化性质和波谱数据鉴定化合物的结构.结果 从海南狗牙花枝叶氯仿部位中分离得到13个化合物,分别鉴定为冠狗牙花定(1)、19-海尼山辣椒碱(2)、19-表海尼山辣椒碱(3)、冠狗牙花定羟基伪吲哚(4)、老刺木碱(5)、乌苏酸(6)、积雪草酸(7)、8α-hydroxypinoresinol (8)、丁香脂素(9)、狗牙花脂素(10)、飞龙掌血内酯(11)、threo-2,3-bis-(4-hydroxy-3-methoxypheyl)-3-methoxy-propanol (12)、β-谷甾醇(13).结论 化合物6～8、10～12为首次从狗牙花属植物中分离得到,化合物9为首次从该植物中分离得到.

积雪草皂苷酸水解产物中1个新苷元的分离和鉴定

目的 研究积雪草Centella asiatica皂苷水解产物的化学成分,以期发现新的三萜皂苷元.方法 通过硅胶、凝胶柱色谱对积雪草皂苷酸水解产物进行分离,经核磁共振、质谱、红外光谱、紫外光谱等波谱手段对化合物的结构进行鉴定.并对部分化合物的体外抗肿瘤活性进行了测试.结果 从积雪草皂苷酸水解产物中分离得到4个单体苷元化合物,鉴定为2α,3β,23-三羟基乌苏-6,12-二烯-28-酸(1)、积雪草酸(2)、6β-羟基积雪草酸(3)、terminolic acid (4).结论 化合物1为1个新的乌苏烷型苷元,命名为积雪草-6-烯,并且其对所测试的肿瘤细胞HL-60、A549、U873无抑制活性.

积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞增殖活性的影响及其机制探讨

目的 探讨积雪草酸对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期的影响及其机制.方法 MTT法检测积雪草酸对肿瘤细胞的抗增殖作用;Hoechest33258染色法检测细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及细胞周期的变化;RT-PCR法检测细胞survivin和bcl-2 mRNA表达水平的变化.结果 积雪草酸在浓度10～70μmol/L显著抑制RPMI 8226细胞的增殖,呈时间及浓度依赖性,作用24、48、72 h的IC50值分别为(42.25±4.57)、(24.88±3.51)、(19.83±2.88)μmol/L.积雪草酸可诱导细胞发生凋亡,出现典型的凋亡小体.积雪草酸诱导细胞发生早期凋亡,并呈浓度依赖性.积雪草酸25～40μmol/L,能将RPMI 8226细胞阻滞在G2期,G2期细胞比例随积雪草酸浓度增大而逐渐增高.积雪草酸使survivin和bcl-2 mRNA表达下降,并与细胞的凋亡程度呈负相关.结论 积雪草酸能通过调控细胞周期的进程和诱导细胞凋亡从而抑制RPMI8226细胞增殖,其诱导凋亡的机制可能与下调survivin和bel-2的转录水平有关.

积雪草酸自组装胶束的构建及其大鼠体内药动学研究

目的 以两亲性材料壳聚糖-去氧胆酸聚合物为载体制备积雪草酸(AA)自组装胶束(AA-CS-DCA PMs),并研究胶束在大鼠体内的药动学特点.方法 采用超声分散法构建AA-CS-DCAPMs,采用包封率、载药量、粒径、Zeta电位等指标对胶束进行表征,通过体外释放考察胶束的释药特性.进一步建立清醒大鼠胆汁引流模型,采用柱前衍生化HPLC方法测定胆汁中药物质量浓度,并通过达峰时间(tmax)、峰浓度(Cmax)、药物排泄速率-时间曲线下面积(AUC0～t)评价口服胶束的体内药动学特点.结果 所构建的载药胶束粒径为(70.5±9.8) nm,Zeta电位为(38.4±0.8) mV;药物AA包封率为(77.8±1.2)％,载药量达到(11.7±0.2)％;体外释放试验中,药物没有明显的突释现象,具有缓释特征.载药胶束经胆汁排泄的Cmax (26.05±3.04) μg/h是对照组(原料药)(9.19±1.12) μg/h的2.8倍,tmx显著延长(2hvs 1 h),体内消除明显减慢,其消除半衰期t1/2 (2.68±1.71)h是对照组(1.49±0.38)h的1.8倍.反映药物吸收程度的生物利用度AUC0-t,与对照组相比提高了200％[(99.05±12.83) μgvs (33.56±8.33) μg].结论 AA经自组装胶束包封后,体内药物水平明显提高,作用时间延长,极大提高了AA的口服生物利用度.