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基于液质联用的复方龙胆酊中龙胆、草豆蔻及陈皮的定性定量研究
目的 建立基于液质联用的复方龙胆酊中龙胆、草豆蔻、陈皮的定性定量研究的方法.方法 采用Inertsil ODS-3色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),柱温40℃,流动相为乙腈-0.1％甲酸溶液;采用HPLC分离龙胆苦苷、山姜素、小豆蔻明和橙皮苷.分别采用电喷雾离子源正、负离子模式扫描,选择多反应离子监测方式(MRM)进行定性监测原料药的投料情况及有效成分的定量分析.结果 通过分析供试品与混合对照药材、对照品的一级质谱图的特征峰,判断该中成药是按处方工艺投料.方法学验证结果表明,龙胆苦苷、小豆蔻明、山姜素和橙皮苷依次分别在103.26～619.56 μg (r=0.999 0)、109.50～657.00 μg (r=0.999 5)、105.50～633.00 μg(r=0.996 9)、105.02～630.12 μg (r=0.999 5)范围内线性关系良好;龙胆苦苷、山姜素、小豆蔻明和橙皮苷精密度依次分别为0.81％、0.48％、0.61％、1.55％,平均回收率依次分别为95.08％、93.28％、94.78％、95.04％.结论 该法快速简便、准确可靠、灵敏度高;适用于全面监测和控制复方龙胆酊中龙胆、草豆蔻、陈皮的投料情况及质量.
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山姜素对肺微血管内皮细胞损伤保护机制
目的 研究山姜素对急性人肺微血管内皮细胞(human pulmonary microvascular endothelial cells,HPMECs)损伤的保护机制.方法 应用不同浓度的LPS(0.01、0.1、1.0、10 mg/L)作用于HPMECs,确定造模佳浓度.应用山姜素(40、80、160、320 mg/L)干预HPMECs损伤模型,另选择正常HPMECs为对照组,每组3个重复样本,观察各组HPMECs存活率,检测细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、TNF-α、水通道蛋白-1(APQ-1)蛋白及mRNA表达.结果 与对照组比较,模型组ICAM-1及TNF-α蛋白表达升高,AQP-1蛋白及mRNA表达降低(P＜0.05).与模型组比较,80、160 mg/L山姜素组细胞存活率升高,ICAM-1及TN F-α蛋白表达降低,AQP-1蛋白及mRNA表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论 山姜素通过下调ICAM-1、TNF-α蛋白表达并上调APQ-1蛋白及mR-NA表达,从而对急性HPMECs损伤起保护作用.
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山姜素在人肝微粒体的葡萄糖醛酸化反应研究
目的 研究体外肝微粒体孵育体系中山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况,鉴定参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢的UGT亚型.方法 用体外肝微粒体孵育体系,用HPLC - UV检测方法,检测山姜素的葡萄糖醛酸化代谢情况.将代谢产物进行纯化后,用质谱(MS)和核磁共振(NMR)法进一步鉴定其结构.用商业化重组表达的UGT单酶,鉴定代谢产物的结构和归属可能参与山姜素葡萄糖醛酸化代谢反应的葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)亚型.结果 山姜素葡萄糖醛酸代谢产生一个代谢产物,经结构鉴定为山姜素-氧-单葡萄糖醛酸化产物.人肝微粒体代谢山姜素的动力学行为,符合米方程且动力学参数:Vmax=(101.9±3.0) nmol·min-1· mg-1· pro,Km=(40.6±3.6)μmol·L-1.UGT1A1、UGT1 A3、UGT1 A9和UGT2B15均参与了山姜素的葡萄糖醛酸化反应.结论 山姜素在人肝微粒体孵育体系中会被代谢成为一个单葡萄糖醛酸化产物,且归属了参与的UGT酶.
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HPLC测定草豆蔻中山姜素、小豆蔻明的含量
目的:为评价草豆蔻的质量,建立其中山姜素和小豆蔻明的含量测定方法.方法:高效液相色谱法,用Shim-Pack CLC-ODS柱(5μm,150mm×6mm)以甲醇-水(80∶20)作流动相,流速1ml*min-1,检测波长为300nm,外标法定量.结果:山姜素、小豆蔻明进样量在0.05μg～0.26μg范围内,进样量与峰高呈线性关系(r分别为0.9996,0.9998).山姜素平均加样回收率为101.9%,RSD=0.18%;小豆蔻明平均加样回收率为100.0%,RSD=3.6%,n=5.测定5批草豆蔻样品,山姜素含量0.50%～1.45%,小豆蔻明含量0.07%～0.72%;草豆蔻果皮、茎叶、根茎中此2种成分的含量均在0.2%以下.结论:方法简便、可靠,可用于生药分析.
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正交试验优选复方草豆蔻合剂提取工艺
目的 采用正交试验设计对草豆蔻和生姜分别进行提取工艺的研究.方法 乙醇提取草豆蔻,正交试验法考察乙醇浓度,乙醇用量,提取时间,提取次数对山姜素和小豆蔻明含量的影响;乙醇提取姜,正交试验法考察乙醇浓度,乙醇用量,提取时间,提取次数对总黄酮的含量的影响.结果 以山姜素含量为指标,各因素对测定结果影响顺序是乙醇浓度＞乙醇用量＞提取时间＞提取次数,其中乙醇浓度有显著性差异,佳因素排列为A1B2C3D3;以小豆蔻明含量为指标,各因素的影响顺序是:乙醇浓度＞乙醇用量＞提取时间＞提取次数,各因素均无显著性差异,佳因素排列为A1B2C3D2;对山姜素含量,选择D3 和D2 的差别不大,本着经济有效原则,确定A1B2C3D2 为佳工艺.以总黄酮含量为指标,各因素对测定结果影响顺序是乙醇浓度＞乙醇用量＞提取时间＞提取次数,其中乙醇浓度有显著性差异,确定A1B2C3D2 为佳工艺.结论草豆蔻提取佳工艺为乙醇浓度为95%,用量为药材总量的8 倍,回流提取时间为2h,提取次数为2 次;姜提取佳工艺为乙醇浓度为80%,用量为药材总量的10 倍,提取时间为3h,提取次数为3.
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高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明
目的 建立高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法.方法 使用正己烷-醋酸乙酯-甲醇-水(5:5:7:3)为两相溶剂系统,上相为固定相,下相为流动相,体积流量2.0 mL/min,转速800 r/min,温度25℃,固定相的保留率为50%,检测波长300 nm,对草豆蔻粗提物进行分离.结果 从100 mg草豆蔻粗提物中一步分离纯化得到17.2 mg山姜素和25.1 mg小豆蔻明.经HPLC分析,质量分数分别为98.1%、99.2%,其化学结构由1H-NMR和13C-NMR鉴定.结论 与传统的、存在不可逆吸附现象的柱色谱法相比,高速逆流色谱分离纯化草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的方法具有简单、高效、回收率高等优点.
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山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎的保护作用及其作用机制研究
目的 探讨山姜素对葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠的保护作用及其作用机制.方法 C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组和25、50、100 mg/kg山姜素组.模型组和治疗组每天给予3％葡聚糖硫酸钠溶液,连续7 d.治疗组每日ip生理盐水0.5 mL+25、50、100 mg/kg山姜素,对照组和模型组每天ip生理盐水0.5 mL,连续7 d.观察小鼠体质量变化、结肠长度、疾病活动指数(DAI)评分、组织学损伤评分等炎症反应;透射电镜观察肠上皮细胞间连接;免疫组织化学法、Western blotting法检测肠道紧密连接蛋白claudin-2、occludin、ZO-1、STAT3、pSTAT3、IL-6的表达和STAT3/IL-6信号通路的表达情况.结果 与模型组比较,山姜素能够显著缓解小鼠体质量减轻和肠管缩短,降低DAI和组织学评分.山姜素可增强小鼠肠黏膜occludin、ZO-1表达,减弱claudin-2表达,并能够抑制STAT3/IL-6信号通路.结论 山姜素能够上调葡聚糖硫酸钠诱导的溃疡性结肠炎小鼠结肠组织occludin、ZO-1的表达,下调claudin-2的表达,通过调节紧密连接蛋白的表达,保护肠上皮细胞屏障的完整性和通透性.通过抑制IL-6/STAT3通路,减轻结肠炎症反应.
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厚朴温中丸中六种有效成分的含量测定
厚朴温中丸由厚朴、陈皮、甘草、茯苓、草豆蔻、木香、干姜七味药材组成,该方行气温中,燥湿除满.主治寒湿气滞、脘腹胀满或疼痛、不思饮食、四肢倦怠等症.方中厚朴温中益气、下气除满[1],主要成分和厚朴酚与厚朴酚具有镇痛、抑菌、抗炎、抗肿瘤等广泛的药理作用[2].木香行气止痛,健脾消食[3],主要成分木香烃内酯、去氢木香内酯有明显利胆、抗菌的作用[4].草豆蔻燥湿健脾、温胃止呕[5],主要成分小豆蔻明、山姜素能够抗菌、止呕、健脾.现代药理学研究表明厚朴温中丸治疗慢性胃炎、胃溃疡、病毒性肝炎[6]等病症具有明显疗效,目前有关其质量控制方面研究报道较少,且定量指标仅限于厚朴[ 7].本文对厚朴温中丸中厚朴、木香和草豆蔻三味药材进行研究,以山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明、木香烃内酯、去氢木香内酯、厚朴酚为指标性成分,采用高效液相色谱分析方法同时对其进行含量测定,从而可以更全面、有效地控制质量.
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厚朴温中丸中六种有效成分的含量测定
厚朴温中丸由厚朴、陈皮、甘草、茯苓、草豆蔻、木香、干姜七味药材组成,该方行气温中,燥湿除满.主治寒湿气滞、脘腹胀满或疼痛、不思饮食、四肢倦怠等症.方中厚朴温中益气、下气除满[1],主要成分和厚朴酚与厚朴酚具有镇痛、抑菌、抗炎、抗肿瘤等广泛的药理作用[2].木香行气止痛,健脾消食[3],主要成分木香烃内酯、去氢木香内酯有明显利胆、抗菌的作用[4].草豆蔻燥湿健脾、温胃止呕[5],主要成分小豆蔻明、山姜素能够抗菌、止呕、健脾.现代药理学研究表明厚朴温中丸治疗慢性胃炎、胃溃疡、病毒性肝炎[6]等病症具有明显疗效,目前有关其质量控制方面研究报道较少,且定量指标仅限于厚朴[ 7].本文对厚朴温中丸中厚朴、木香和草豆蔻三味药材进行研究,以山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明、木香烃内酯、去氢木香内酯、厚朴酚为指标性成分,采用高效液相色谱分析方法同时对其进行含量测定,从而可以更全面、有效地控制质量.
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山姜素对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响
目的 观察山姜素对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其机制.方法 利用体外培养的新生大鼠心肌细胞,给予200 mmol·L-1H2O2作用的同时给予不同浓度的山姜素作用24 h,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3及Bcl-2表达.结果 山姜素可显著抑制心肌细胞凋亡(P＜0.01),其作用具有时间和浓度依赖性;同时改变细胞周期分布,与模型组比较,山姜素不同浓度组的细胞凋亡率有显著性差异(P＜0.01).结论 山姜素可抑制H2O2导致的心肌细胞凋亡,并且改变细胞周期分布,从而促进心肌细胞的增殖.
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山姜素对急性重症胰腺炎大鼠肺损伤中水通道蛋白-1表达的影响
目的：探讨山姜素对急性重症胰腺炎（ SAP）肺损伤的保护作用是否与水通道蛋白（ AQP）-1表达相关。方法选取60只雄性SD大鼠，随机分为正常对照组（ Control组），假手术组（ Sham组）、模型组（ SAP组）、山姜素治疗组（ Alpinetin组）每组15只。以逆行注入15 g／L 熊去氧胆酸钠（1 ml／kg）30 s注射制作SAP模型。各组均于造模8 h后剖杀，提取肺组织。检测肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性、湿／干重比及对肺脏进行病理学评分；取材测定血清肿瘤坏死因子（ TNF）-α含量；RT-PCR检测肺组织AQP-1 mRNA的表达，免疫组化法检测肺组织AQP-1的表达。结果 SAP组与Sham组相比，SAP组肺组织损害程度明显升高（P＜0.01），血清TNF-α，MPO活性明显增加（P＜0.05）。 AQP1-mRNA与AQP-1蛋白表达显著下调（P＜0.05）。 Alpinetin组与SAP组相比，Alpinetin组肺干／湿比值、肺组织病理损害程度、血清 TNF-α明显降低（P＜0.05），AQP-1 mRNA 和 AQP -1蛋白表达则明显升高（P＜0.05），AQP-1表达水平与TNF-α呈负相关。结论应用山姜素能够对 SAP肺损伤起到明显的保护作用，其机制可能与抑制肺组织分泌TNF-α和上调AOP-1水平有关。
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草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的HPLC测定及提取工艺优化
目的:建立起高灵敏度的草豆蔻中山姜素和小豆蔻明的HPLC测定方法和佳提取工艺.方法:利用高效液相色谱测定山姜素和小豆蔻明含量,采用L16(45)正交试验设计法,考察乙醇浓度、提取次数、提取温度、提取时间和溶剂用量对二者提取的影响,并对其稳定性进行探讨.结果:色谱柱Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm × 150 mm,5 μm),流动相梯度:0～16 min,甲醇-1%乙酸=52:48;16～36 min,甲醇-1%乙酸=62:38.检测波长梯度:0～16 min,286 nm;16～36min,346 nm.佳提取工艺为20倍量的100%乙醇回流,每次2 h,提取3次.结论:测定方法灵敏、可靠,提取工艺稳定,为草豆蔻的药物综合利用提供了依据.
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UHPLC-ESI-MS/MS法测定大鼠血浆中的山姜素和小豆蔻明
目的 建立测定大鼠血浆中山姜素和小豆蔻明含有量的UHPLC-ESI-MS/MS法,并计算两者的药动学参数.方法 血浆分析采用Phenomenex(R)Luna C18色谱柱(150 mm ×2.0 mm,3μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液(20:80);体积流量为0.4 mL/min;山姜素和小豆蔻明均采用正离子模式检测.结果 标准品在1～1 000 ng/mL范围内线性关系良好,相关系数大于0.995,山姜素和小豆蔻明的低检出限均为0.05 ng/mL,低定量限均为0.2ng/mL,样品回收率在88.2％ ～99.3％之间.大鼠灌胃草豆蔻提取物后,两者的主要药动学参数Cmax分别为(385.633±91.192)和(186.683 ±69.893) ng/mL,t1/2z分别为(1.578 ±0.239)和(1.137±0.385)h,AUC(0-t)分别为(911.723±59.208)和(456.043±23.99) ng/mL/h,V2/F分别为(24.295±6.858)和(35.606±12.887) L/kg.结论 山姜素和小豆蔻明在大鼠体内的吸收和消除均比较迅速.
关键词： 山姜素 小豆蔻明 大鼠血浆 药动学参数 UHPLC-ESI-MS/MS -
山姜素激活孕烷X受体和上调CYP3A4mRNA转录的研究
目的 探讨山姜素能否通过活化孕烷X受体(PXR)诱导CYP3A4的转录表达及对CYP3A4 mRNA的实际诱导作用.方法 在人结肠癌LS174T细胞中,用瞬时共转染报告基因实验研究山姜素(1～50 μmol·L-1)对PXR介导的CYP3A4基因的转录激活;用荧光定量RT-PCR方法检测其对CYP3A4 mRNA的实际诱导.结果 10 μmol·L-1浓度山姜素能够通过活化PXR诱导CYP3A4的转录(1.63倍);10和20 μmol·L-1山姜素能够明显上调CYP3A4 mRNA(2.28倍和1.65倍)的表达.结论 PXR途径也许是山姜素诱导CYP3A4基因表达的调控因素之一.
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基于HPLC波长切换法对养胃宁胶囊中6种成分的质量控制研究
目的 建立同时测定养胃宁胶囊中花旗松素、山姜素、乔松素、小豆蔻明、桤木酮和 α-香附酮含量的方法.方法 采用Agilent Eclipse XDB C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.1％磷酸溶液,梯度洗脱;流速:0.9 mL/min;柱温25℃.结果 花旗松素、山姜素、乔松素、小豆蔻明、桤木酮和 α-香附酮分别在2.18～54.50μg/mL(r=0.9999)、7.89～197.25μg/mL(r=0.9996)、6.57～164.25μg/mL(r=0.9998)、4.89～122.25μg/mL(r=0.9997)、5.76～144.00μg/mL(r=0.9999)、1.79～44.75μg/mL(r=0.9991)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.33％、100.18％、98.47％、97.42％、99.04％和96.99％,RSD分别为1.13％、0.59％、1.49％、1.36％、0.80％和0.95％.结论 该方法简便、准确、重复性好,可为养胃宁胶囊多指标质量评价提供依据.
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HPLC法测定不同产地草豆蔻中山姜素与小豆蔻明的含量
目的 测定不同产地草豆蔻中主要有效成分山姜素与小豆蔻明的含量. 方法 采用HPLC测定山姜素与小豆蔻明的含量.色谱条件:Kromasil C18(5μm,250mm×4.60mm)色谱柱;以甲醇-水为流动相(70∶30),流速为1mL·min-1,检测波长为300nm. 结果 山姜素与小豆蔻明的线性范围分别为0.058～0.406μg(r=1),0.064～0.448μg(r=0.9999);平均加样回收率(n=6)分别为96.41%,99.18%,RSD分别为0.81%,0.64%. 结论 不同产地草豆蔻中山姜素与小豆蔻明的含量存在显著性差异.
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草豆蔻的质量标准研究
目的 建立中草药草豆蔻的质量控制标准.方法 测定不同厂家10个批次草豆蔻的水分、总灰分、热浸法水溶出物、70%乙醇浸出物及有效成分山姜素和挥发油的含量,在此基础上建立各指标的质量控制标准.结果 测得了草豆蔻各指标含量平均值,其中水分为12.43%,总灰分为4.10%,热浸法水溶出物为2.60%,70%乙醇浸出物为2.47%,山姜素为0.23%,挥发油为1.38%.结论 建议草豆蔻的质量标准暂定为:水分含量10.00%～15.00%,总灰分含量不得＞4.90%,热浸法水溶出物含量不得＜2.10%,70%乙醇浸出物含量不得＜2.20%,山姜素含量不得＜0.19%,挥发油含量不得＜1.25%.
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草豆蔻主要活性成分与人血浆作用的差异蛋白鉴定
目的:山姜素或豆蔻明为药食同源植物草豆蔻中的两种主要活性组分,鉴定分析这两种活性组分与人血浆相互作用后的差异显示蛋白.方法:在模拟生理条件下,应用双向电泳技术进行蛋白分离,通过基质辅助激光解析-电离飞行时间质谱分析及Mascot Distiller软件进行蛋白搜库.结果:获得山姜素或豆蔻明与人血样相互作用后的10个差异显示蛋白,经质谱鉴定为8种蛋白,分别是补体B因子、1-抗胰蛋白酶、载脂蛋白E、间α胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白、人类补体成分补体3(C3c)、阿尔法1-抗蛋白酶、类型Ⅱ角质亚单位蛋白、游离型人类载脂蛋白A-Ⅰ.结论:这些差异蛋白与机体防御、增强免疫效应、蛋白代谢、抑制吞噬细胞活性、增加白细胞数目、保持载脂蛋白游离构象等生理过程密切相关,也从一定程度上说明了山姜素或豆蔻明的抗菌抗炎机理及可能的靶蛋白.
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HPLC法测定草豆蔻中山姜素、小豆蔻明的含量
目的:建立同时测定草豆蔻中山姜素、小豆蔻明含量的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Diamonsil C18柱(250 ×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-4.5%四氢呋喃溶液(用冰醋酸调节pH至3.0),采用线性梯度洗脱[0→80 min,甲醇57%→67%,4.5%四氢呋喃溶液(用冰醋酸调节pH至3.0)43%→33%],流速1 ml/min;检测波长为300 nm.结果:山姜素、小豆蔻明平均回收率分别为100.3%、99.20%,RSD分别为1.25%、2.14%.结论:本法为评价草豆蔻的质量提供了依据.
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草豆蔻中山姜素和小豆蔻明提取工艺的优选
目的:研究草豆蔻佳提取工艺.方法:以山姜素和小豆蔻明含量为指标,采用正交实验设计,考察乙醇浓度(A)、溶剂用量(B)、提取时间(C)、提取次数(D)四个因素对提取的影响.结果:乙醇浓度对山姜素含量有显著影响,其它因素对山姜素和小豆蔻明含量无显著影响.结论:草豆蔻的佳提取工艺为:用药材8倍量95%乙醇回流提取两次,每次2 h.
