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大豆素对尿毒症大鼠肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达的影响
目的：观察大豆素对尿毒症大鼠肾组织细胞外基质的影响，并探讨其作用机制。方法采用随机数字表法将26只大鼠分为假手术组8只、模型组8只、大豆素组10只。除假手术组外，其余各组采用5/6肾切除术制备尿毒症大鼠模型。大豆素组于造模后次日灌胃15 mg/kg大豆素溶液，假手术组、模型组灌胃等体积生理盐水。1次/d，连续给药8周。检测各组造模前、造模后第4、8周尿蛋白及生化指标。第8周观察各组大鼠肾组织病理改变。采用免疫组化法检测肾组织Ⅳ型胶原蛋白、纤连蛋白表达。采用RT-PCR法、Western blot法检测肾组织TGF-β1蛋白及mRNA表达。结果造模后第8周，与模型组比较，大豆素组尿蛋白排泄量[(22.54±3.47)mg/24 h比(31.28±3.78)mg/24 h]减少(P＜0.01)，血清BUN[(12.09±0.59)mmol/L比(14.26±0.71)mmol/L]、SCr[(75.20±3.39)μmol/L比(90.25±2.71)μmol/L]水平降低(P＜0.01)。肾小球Ⅳ型胶原蛋白[(16.33±2.14)%比(24.68±3.97)%]、纤连蛋白[(19.17±2.68)比(29.35±4.15)]表达降低(P＜0.01)，肾小球硬化明显减轻。肾组织TGF-β1 mRNA[(0.37±0.06)比(0.64±0.08)]、TGF-β1蛋白[(0.28±0.09)比(1.40±0.13)]表达降低(P＜0.05)。结论大豆素可减少尿毒症大鼠细胞细胞外基质的蓄积，对肾脏具有保护作用，其机制可能与下调TGF-β1表达有关。
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基质金属蛋白酶9在大鼠糖尿病肾病发病中的作用
目的 探讨糖尿病肾病大鼠肾局部金属蛋白酶9(MMP-9)在糖尿病肾病发生发展的作用.方法 健康雌性清洁级大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组,采用腹腔注射链脲佐菌素制备糖尿病大鼠模型.分别于4、8周处死,应用免疫组化及酶谱分析方法(zymography)观察各组肾组织MMP9的蛋白表达及其活性水平,分析MMP-9与细胞外基质Ⅳ型胶原、层粘连蛋白(LN)的相关性.结果 MMP-9在正常对照组肾小球、肾小管细胞均有阳性表达(4周,26.63%+2.94%;8周,29.86%±0.89%);而糖尿病组随病程延长表达明显减弱(4W,16.11%±2.86%;8周,13.14%±2.68%),MMP-9活性也明显降低(正常组4周110.47±7.12;8周,111.50±6.95;糖尿病组4周82.74±10.92;8周,80.05±12.83),两组间各项指标的差异有统计学意义(均P＜0.01).MMP-9活性与Ⅳ型胶原(r=-0.852,-0.795,P＜0.01)、LN(r=-0.897,-0.832,P＜0.01)呈显著负相关.结论 糖尿病肾病时肾组织中MMP-9表达水平降低,糖尿病肾病的发病机制可能与MMP-9水平降低有关.
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双抗夹心化学发光免疫分析定量检测Ⅳ型胶原方法的建立
目的 建立基于双抗夹心微孔板化学发光酶免疫分析的人血清Ⅳ型胶原定量检测方法.方法 应用Ⅳ型胶原多抗进行包被,辣根过氧化物酶标记Ⅳ型胶原单抗,以鲁米诺化学发光体系检测,调整优化各种反应液的工作浓度和各类反应条件后建立双抗体夹心的检测方法;评价所建立方法的线性范围、特异性、灵敏度、稳定性等性能指标;应用肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验.结果 所建立方法的灵敏度为15.5 ng/ml,线性范围25 ～ 850 ng/ml,批内、批间变异均小于8％.检测Ⅳ型胶原的临床高、中、低值血清回收率分别为98.5％、94.3％和102.6％;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7d的稳定性考察,线性相关系数均＞0.99,标准偏差＜7％;比对实验分析显示与进口试剂相关性具有统计学意义.结论 成功建立了定量Ⅳ型胶原化学发光酶免疫分析方法,该方法有较好的准确性、灵敏度、重复性,与进口试剂检测结果等效.
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银杏叶提取物对Ⅳ期糖尿病肾病患者Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白水平的影响
目的：观察银杏叶提取物治疗Ⅳ期糖尿病肾病患者的疗效并探讨其可能的机制。方法50例Ⅳ期糖尿病肾病患者，随机分为舒血宁治疗组及对照组，每组25例。对两组治疗前后肾功能指标包括肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）水平、尿白蛋白排泄率（UAER）、细胞外基质成分包括Ⅳ型胶原（ColⅣ）、纤维连接蛋白（Fn）含量及血小板源性生长因子-B（PDGF-B）含量进行比较。结果两组患者治疗后空腹血糖（FBG）均明显降低（P＜0.01），但两组间比较差异无统计学意义；治疗后两组患者Cr、BUN均较治疗前无明显变化（P＞0.05）；两组患者治疗后UAER、CoⅣ、Fn及PDGF-B含量均明显下降（P＜0.01），但治疗组较对照组下降更为明显，差异具有统计学意义。结论银杏叶提取物可以通过调节PDGF-B的表达，减少Ⅳ期糖尿病肾病患者细胞外基质ColⅣ及Fn的产生，降低尿白蛋白排泄率，且耐受良好，无明显副作用。
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尿激酶型纤溶酶原激活物对糖尿病大鼠肾脏系膜基质的影响
目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)对糖尿病大鼠肾脏系膜基质表达的影响及机制.方法 8周龄健康雄性SD大鼠(体质量150～200 g)20只尾静脉注射链脲佐菌素,成功建立糖尿病大鼠模型后采用数字表法随机分为糖尿病组(n=10)和uPA组(n=10;尾静脉注射2500 U·kg-1·d-1 uPA,共4周).另以10只正常大鼠为对照组.29d后处死大鼠,心脏取血检测血糖、血肌酐水平.过碘酸六胺银染色测定肾小球平均面积、肾小球平均容积和肾小球系膜区面积.免疫组织化学法检测肾脏尿激酶型纤溶酶原激活物受体(uPAR)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和Ⅳ型胶原表达水平.采用方差分析和q检验进行数据统计.结果 与正常对照组比较,糖尿病组大鼠明显出现尿蛋白[(25.4±4.3)mg/24 h vs(5.5±2.1)mg/24 h,q=4.27,P＜0.01],肾小球体积及系膜基质显著增加,肾小球系膜uPAR、PAI-1、Ⅳ型胶原表达显著增加(q值分别为3.63、3.97、4.21,均P＜0.05).糖尿病大鼠注射uPA后,尿蛋白明显减少[(12.6±5.4)mg/24 h,q=3.45,P＜0.05],肾小球体积、系膜基质异常有所改善(q值分别为4.34、4.27,均P＜0.01),肾小球系膜PAI-1、Ⅳ型胶原表达明显减少(q值分别为3.98、4.17,均P＜0.05).结论注射uPA可明显降低糖尿病大鼠肾小球PAI-1蛋白表达,对uPAR表达的影响不大,提示uPA可能通过与uPAR结合、摄取PAI-1并加速其降解,从而调节肾小球系膜细胞及其基质表达,改善糖尿病系膜基质病变.
关键词： 糖尿病肾病 尿纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制剂-1 胶原Ⅳ型 -
纳米量子点标记探针技术对乳腺癌人表皮生长因子受体2及Ⅳ型胶原蛋白的原位标记成像及临床意义
目的 利用量子点双色探针同时标记乳腺癌细胞膜上的人表皮生长因子受体2(HER2)及细胞外基质中的Ⅳ型胶原并进行定量,为乳腺癌细胞侵袭转移研究提供直接的形态学证据及数据支持.方法 应用量子点免疫荧光双标法检测54例乳腺癌组织中HER2与Ⅳ型胶原蛋白的共表达并进行定量分析其与各临床病理参数的相关性.结果 HER2与Ⅳ型胶原蛋白的表达呈负相关(r=-0.980,P＜0.05);HER2和Ⅳ型胶原蛋白的表达与患者年龄、绝经状况及激素受体状态无明显相关性(P＞0.05),而与腋窝淋巴结转移、TNM分期及无病生存期有明显相关性,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 利用量子点免疫荧光双标法同时检测HER2和Ⅳ型胶原蛋白的表达可为乳腺癌的浸润转移倾向和预后提供依据.
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胎盘组织波形蛋白、Ⅳ型胶原蛋白、纤连蛋白的表达与妊娠高血压综合征发病的关系
目的探讨胎盘组织波形蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和纤连蛋白的表达与妊娠高血压综合征(妊高征)发病的关系.方法采用免疫组化过氧化物酶- 抗过氧化物酶(PAP)法,检测19例妊高征患者(妊高征组)胎盘组织波形蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和纤连蛋白的表达情况,并与同孕周的正常孕妇15例(对照组)进行比较.结果 (1)中、重度妊高征患者胎盘组织波形蛋白阳性反应平均灰度值为30±7,明显低于对照组的42±6和轻度妊高征患者的42±9,差异有极显著性( P <0.01); (2)中、重度妊高征患者胎盘组织Ⅳ型胶原蛋白阳性反应平均灰度值为70±6,较对照组的29±4和轻度妊高征患者的30±5明显增强,差异也有极显著性( P <0.001);(3)中、重度妊高征患者胎盘组织纤连蛋白阳性反应平均灰度值为37±4,较对照组的31±4和轻度妊高征患者的32±6增强,差异有显著性( P <0.05).结论胎盘组织波形蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和纤连蛋白表达异常,可能与妊高征的发病有密切关系,并且表达异常的程度随着病情加剧而明显.
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含hTERT基因核心启动子和canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其对卵巢上皮性癌的抑制作用
目的 构建含hTERT基因核心启动子和canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can,探讨其对卵巢上皮性癌(卵巢癌)的抑制作用.方法 应用分子克隆技术构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can,并采用酶切、电泳、测序方法进行鉴定.体外实验:卵巢癌细胞株HO8910PM细胞经脂质体介导转染AdhTERT-Can后,荧光显微镜观察HO8910PM细胞的转染情况,RT-PCR技术检测HO8910PM细胞中eanstatin mRNA的表达.体内实验:建立卵巢癌裸鼠异体移植瘤动物模型,随机分为3组,AdhTERT-Can组(尾静脉注射含canstatin基因的重组腺病毒载体AdhTERT-Can上清液)、Ad-Can组(尾静脉注射Ad-Can上清液)和空白对照组(尾静脉注射磷酸盐缓冲液),比较各组裸鼠治疗后的肿瘤体积.结果成功构建重组腺病毒载体AdhTERT-Can,并经相关鉴定证实.体外实验显示,AdhTERT-Can质粒转染HO8910PM细胞后,在荧光显微镜下观察可见约60%卵巢癌细胞发出绿色荧光;RT-PCR技术检测显示,HO8910PM细胞中有canstatin mRNA的表达.体内实验显示,自治疗后8 d开始,各组肿瘤生长出现明显筹异,AdhTERT-Can组肿瘤体积明显小于Ad-Can、空白对照组(P<0.01),且随着治疗时间的延长差异越来越明显;而Ad-Can组与空白对照组比较,差异则无统计学意义(P>0.05).治疗30 d后,各组均可见肿瘤破溃和囊性变,但以AdhTERT-Can组为明显,Ad-Can组次之;病理检查可见,各组肿瘤细胞均可见液化和坏死,尤其以AdhTERT-Can组为明显.结论本研究成功构建了重组腺病毒载体AdhTERT-Can,且其转染卵巢癌细胞的能力较强;AdhTERT-Can质粒通过尾静脉注射能明显抑制裸鼠体内卵巢癌的生长,显示r肿瘤基因治疗的靶向性.
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妊娠期糖尿病胎盘组织血管内皮生长因子、基质金属蛋白酶-9和Ⅳ型胶原的表达及意义
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)在妊娠期糖尿病(GDM)胎盘中的表达及其与GDM治疗的关系. 方法 选择2007年6月至12月在太原市妇幼保健医院住院分娩的GDM孕妇48例为GDM组,取同期分娩的正常晚期妊娠妇女36例为对照组,用免疫组织化学法测定VEGF、MMP-9及Ⅳ-C在胎盘中的表达并比较其表达情况. 结果 (1)GDM组胎盘VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的阳性表达率明显高于对照组(70.8%和30.6%,64.6%和30.6%,62.5%和27.8%,P值均<0.05);(2)GDM组内血糖控制不满意者胎盘VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的阳性表达率分别为95.2%、80.9%和85.7%,明显高于对照组(P<0.05);血糖控制满意组分别为51.9%、51.9%和44.4%,与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);(3)GDM组胎盘MMP-9的表达与VEGF和Ⅳ-C的表达均呈正相关(r=0.579,P<0.01;r=0.596,P<0.01). 结论 GDM胎盘组织中VEGF、MMP-9及Ⅳ-C的高表达与孕妇血糖控制水平有关.
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围产期大鼠肺MMP2和Ⅳ型胶原表达及地塞米松对其的影响
目的观察大鼠围产期不同时间点(孕20 d胎鼠,1、4、10、14日龄鼠)的肺组织MMP2、Ⅳ型胶原表达的变化,并通过对孕鼠注射地塞米松(dexamethasone, DXM),观察其影响. 方法 24只SD孕大鼠随机分为两组,每组12只.于孕18,19,20 d,对照组各肌注0.5 ml生理盐水;DXM组肌注DXM 0.8 mg/(kg·d),取孕20 d胎鼠和生后4、10 d鼠肺组织,行病理切片,免疫组化染色,计算机图像分析胎鼠和4、10日龄鼠MMP2以及4、10日龄鼠Ⅳ型胶原的分布与表达强度.逆转录聚合酶链反应技术检测肺组织匀浆MMP2 mRNA的表达. 结果正常4日龄鼠肺囊泡MMP2的表达(20.14±3.39)较胎鼠增强(16.35±2.36),10日龄鼠略下降(15.93±1.94);各日龄DXM组鼠肺MMP2的表达较对照组减少,两者差异有统计学意义(P均<0.01).DXM组胎鼠、1、4、10日龄鼠肺MMP2 mRNA表达均较对照组下调,以4日龄鼠下调明显(0.376±0.132),胎鼠、1、4日龄鼠比较差异有统计学意义(P均<0.01).正常4、10日龄鼠肺基底膜的Ⅳ型胶原表达呈不连续线状,间有缺损,量较少,色较浅;DXM组鼠肺基底膜的Ⅳ型胶原表达较多、色较深、呈连续的线状,表达量、阳性强度明显上调. 结论孕后期使用地塞米松会抑制新生鼠肺组织的MMP2的表达,使Ⅳ型胶原的降解减少,阻碍基底膜的发育,从而影响肺泡发育.
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血清透明质酸等四项指标在重型β地中海贫血肝纤维化诊断中的价值
目的探讨血清肝纤维化指标透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、Ⅳ型胶原(CⅣ)和层粘蛋白(LN)在重型β地中海贫血(简称β地贫)肝纤维化诊断中的价值.方法检测49例重型β地贫患儿和41例正常小儿血清HA、PCⅢ、CⅣ、LN水平,其中45例地贫患儿行肝组织学检查,进行肝纤维化的对比研究.结果β地贫组血清HA、PCⅢ、CⅣ、LN四项指标水平均显著高于正常小儿组(P＜0.01),HA、PCⅢ水平与纤维化分期呈低度正相关(r＝0.379、0.455,P均＜0.05),CⅣ及LN水平与纤维化分期无显著性相关(r＝0.312、0.310,P均＞0.05).四项指标联合诊断肝纤维化的判别函数为:0.002 HA+0.003 PCⅢ+0.002 CⅣ+0.006 LN-1.859.判断的准确率为82.16%, 诊断的灵敏度、特异度、阳性预测价值和阴性预测价值分别为93.88%、68.29%、77.97%和90.32%.HA、PCⅢ水平的升高与肝脏铁含量有一定的相关性(r＝0.342、0.305,P均＜0.05).结论血清HA 、PCⅢ在重型β地贫肝纤维化诊断中的价值高于CⅣ及LN,四项指标联合检测可提高临床诊断的准确性和可靠性.
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X连锁显性遗传Alport综合征的产前基因诊断
目的 Alport综合征(AS)是常见的遗传性肾脏疾病,预后较差,无特异有效的治疗.X连锁显性(XLAS)是其主要遗传方式,因COL4A5基因突变或COL4A5和COL4A6两个基因突变所致.通过对两个XLAS家系进行遗传咨询和基因诊断,并对其中一个家系实施产前基因诊断,探讨AS产前基因诊断的方法及临床应用价值.方法 对两个XLAS家系进行详细的遗传咨询后,采用巢式PCR扩增外周血淋巴细胞COL4A5 mRNA的整个编码区序列筛查两个家系的基因突变,然后扩增COL4A5相应的外显子从基因组DNA水平进一步证实突变.产前基因诊断通过羊水细胞cDNA和DNA两个水平来检测胎儿突变情况,通过PCR扩增Y染色体性别决定基因SRY联合核型分析检测胎儿性别,通过三个X染色体微卫星标记(AR、DXS6797和DXS6807)连锁分析除外羊水中母体细胞污染的可能.结果 突变筛查显示家系一为新发突变,先证者COL4A5第2696～2705位缺失GTATGATGGG共10个碱基,但母亲外周血基因组DNA不携带该缺失突变,通过遗传咨询,该家系未进行羊水穿刺和产前基因诊断.家系二COL4A5基因第4271位G被A取代,1424位G＞E,家系其他患者包括孕母均携带该突变.对家系二孕母进行了羊水穿刺和产前基因诊断.羊水细胞cDNA和DNA水平检测均显示胎儿无突变,PCR扩增SRY基因和羊水细胞核型分析均显示胎儿为男性.连锁分析显示羊水细胞中无母体细胞污染,且间接提示胎儿从母体遗传了携带正常COL4A5等位基因的X染色体.结论 基于外周血淋巴细胞cDNA水平的COL4A5基因突变检测技术可快速用于XLAS产前基因诊断时家系基因突变筛查,有利于客观进行遗传咨询;产前基因诊断时联合cDNA和DNA两个水平检测胎儿基因突变情况更准确可信,PCR扩增SRY基因可以快速鉴定胎儿性别,X染色体微卫星标记连锁分析不但可以排除羊水中母体细胞污染,而且可以间接证明胎儿是否携带致病等位基因.
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卵巢上皮性肿瘤患者血清Ⅳ型胶原及层粘连蛋白的检测及临床意义
目的:探讨卵巢上皮性肿瘤患者血清Ⅳ型胶原、层粘连蛋白含量及临床意义.方法:应用放射免疫技术测定了48例卵巢恶性上皮性肿瘤患者术前血清Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)及层粘连蛋白(LN)含量,并测定了其中43例患者术后血清Col Ⅳ和LN含量.结果:卵巢恶性上皮性肿瘤组术前血清Col Ⅳ和LN含量显著高于对照组(P＜0.01)及良性肿瘤组(P＜0.01),术后明显下降,手术前后血清Col Ⅳ和LN含量差异有统计学意义,P＜0.05;卵巢恶性上皮性肿瘤患者低度分化组血清Col Ⅳ和LN含量显著高于中度(P＜0.05)及高度分化组(P＜0.05);腹水阳性组Col Ⅳ和LN含量显著高于腹水阴性组,P＜0.05;晚期患者血清Col Ⅳ和LN含量明显高于早期患者,P=0.05.卵巢恶性上皮性肿瘤患者血清Col Ⅳ和LN含量与组织学类型无关.结论:卵巢恶性上皮性肿瘤患者血清Col Ⅳ和LN含量与肿瘤的侵袭转移过程密切相关;观察血清Col Ⅳ和LN含量及其变化,对卵巢恶性上皮性肿瘤患者的病情及预后判断有重要的参考价值.
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双向分化肿瘤血管生成拟态的分子机制初步观察
目的研究肿瘤细胞分泌Ⅳ型胶原和过碘酸雪夫氏反应(PAS)阳性物质在血管生成拟态(VM)中的作用,以及VM对肿瘤细胞表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法收集双向分化恶性肿瘤石蜡包埋样本158例,制作成组织芯片,进行CD31和VEGF双重染色及Ⅳ型胶原染色.通过网格计数法,比较CD31与PAS阳性图案围成的管道面积差别及分布特点,以及有VM的点阵和无VM的点阵VEGF表达的差别.结果 VM的基底膜样结构表现为PAS及Ⅳ型胶原阳性;无VM的双向分化肿瘤VEGF表达高于有VM者,其中在恶性黑色素瘤及腺泡型横纹肌肉瘤中,二者VEGF的表达差异有显著性(P＜0.05).结论 PAS阳性物质和Ⅳ型胶原参与构建了VM的管壁,VEGF表达的差别表明VM的存在可以提供肿瘤细胞氧气和营养物质.
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眼睑恶性肿瘤组织中基底膜蛋白的分布和表达及临床意义
目的研究眼睑恶性肿瘤组织中基底膜胶原蛋白Ⅳ(typeⅣ collagen,Col Ⅳ)、层粘连蛋白(laminin,LN)及纤连蛋白(fibronectin,FN)的分布和表达,以探讨基底膜蛋白与恶性肿瘤组织分化、转移及预后的关系.方法应用免疫组化链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物(strept avidin biotin complex,SABC)法,对85例常见眼睑恶性肿瘤石蜡标本切片的基底膜进行Col Ⅳ、LN及FN染色,并检测其蛋白的表达阳性率.其中基底细胞癌40例,鳞状细胞癌25例,睑板腺癌20例.结果正常组织及良性病变组织中基底膜比较完整,Col Ⅳ、LN及FN多分布于上皮与间质交界处及动脉内膜.而肿瘤组织中基底膜则不完整或严重缺失,基底细胞癌、鳞状细胞癌及睑板腺癌中Col Ⅳ表达阳性率分别为60%(24/40)、64%(16/25)、40%(8/20);LN表达阳性率依次为58%(23/40)、40%(10/25)、35%(7/20);FN表达阳性率则分别为33%(13/40)、36%(9/25)、30%(6/20).随肿瘤分化程度的降低,表达阳性率下降,高分化癌与低分化癌间差异有显著意义(χ2=8.218 5,P＜0.05).随访观察6～18个月,肿瘤复发患者24例,其基底膜Col Ⅳ、LN及FN表达阳性率均明显下降,与无复发肿瘤患者相比,差异有显著意义(χ2=13.816,P＜0.05).结论基底膜中Col Ⅳ、LN及FN缺失程度与癌的侵袭力及肿瘤的复发有关,可作为临床判断预后的有效指标之一.
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Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1基因表达在早期放射性肺纤维化启动中的作用
目的 观察早期放射性肺纤维化启动过程中Ⅳ型胶原、明胶酶B(MMP-9)、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)的基因表达特点,探讨其在放射性肺损伤中的作用.方法 C57小鼠于20Gy 60Co γ射线全肺照射后照射后1、2、4周活杀,每个时间点分别配有相应的正常对照组.RT-PCR检测Ⅳ型胶原、MMP-9、TIMP-1 mRNA水平的变化,并应用图像分析仪测定电泳条带的平均光密度值.结果 Ⅳ型胶原mRNA于照射后1周开始增高(0.202),4周达高峰(0.340);MMP-9 mRNA于照射后1周即有明显增高并且达到高峰(0.730),于第2周开始降低(0.592);TIMP-1 mRNA于照射后1周开始轻度增加(0.987),4周时达高峰(2.027).结论 60Co γ射线可刺激Ⅳ型胶原、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达,但随照射后时间的延长呈现不同的变化趋势,它们之间的相互制约导致了放射性肺损伤早期的组织重建,与后来形成的肺纤维化有必然的内在联系.
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PTEN编码蛋白对TGF-β1刺激大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN的抑制作用
目的 观察PTEN基因编码蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾成纤维细胞分泌Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤维连接蛋白(FN)的影响.方法 用重组PTEN腺病毒转染体外培养大鼠肾成纤维细胞,实验分为4组,对照组,TGF-β1组(给予TGF-β1刺激),PTEN+TGF-β1组(Ad-PTEN转染后给予TGF-β1刺激)和GFP+TGF-β1组(Ad-GFP转染后给予TGF-β1刺激).倒置荧光显微镜检测绿色荧光蛋白表达,RT-PCR检测PTEN mRNA表达.转染36h后TGF-β1体外刺激,TGF-β1刺激24h后ELISA法检测细胞上清中ColⅣ、FN水平.结果 PTEN腺病毒转染后可见明显绿色荧光蛋白表达,PTEN mRNA表达增多.TGF-β1组及GFP+TGF-β1组较对照组ColⅣ、FN分泌量明显增多,PTEN+TGF-β1组较TGF-β1组及GFP+TGF-β1组ColⅣ、FN分泌量明显降低(P＜0.05).结论 PTEN基因编码蛋白能抑制TGF-β1刺激所致大鼠肾成纤维细胞分泌ColⅣ、FN,故可能具有抑制残肾纤维化、延缓残肾毁损速度的作用.
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尿Ⅳ型胶原测定的方法学评价及分析前因素对于测定的影响
目的 对一步法酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行功能评价,建立参考范围并对分析前和可能影响测定的一些因素进行研究.方法 采用ELISA对尿液中的Ⅳ型胶原进行测定.对试剂盒的敏感性,测量线性,精密度,特异性,回收率进行了测定和评价,并进行干扰试验和初步建立参考范围.同时评价分析前因素,包括采样、离心、保存条件和时间,以及冻融和昼夜节律对于测定的影响.结果 该方法具有令人满意的敏感性(0.2ng/ml),测量线性(0.8～50ng/ml),精密度(CV＜7%),特异性和回收率(82.84%～97.45%).精液的污染对于Ⅳ型胶原的测定没有显著影响.尿内Ⅳ型胶原的量呈明显的昼夜节律,晨尿内含量低,白天含量达到高,睡前再次下降.Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定,但长时间室温保存也可被各种蛋白酶的降解.冻融对于Ⅳ型胶原的影响不大,但离心可以造成测量值下降.将尿液与一定量的缓冲液(pH7.5的TRIS-HCl)混合(10:1)可以得到一个满意的回收率,避免Ⅳ型胶原被降解.结论 该试剂盒具有良好的性能;Ⅳ型胶原在尿液内比较稳定,但如需长期保存,应加入缓冲液并在-80℃保存.
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BMP-7对高糖诱导近端肾小管上皮细胞外基质及NF-κB表达的影响
目的 探讨骨形态发生蛋白7(BMP-7)对高糖诱导近端肾小管上皮细胞(HKc)表达细胞外基质及核转录因子-κB(NF-κB)的干预作用.方法 采用人近端肾小管HKc细胞株,将细胞分为正常对照组(NG,5.5mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG,25mmol/L葡萄糖)、HG+100ng/ml BMP-7组、NG+100ng/ml BMP-7组、高渗组(HM,25mmol/L甘露醇).应用免疫细胞化学和ELISA技术检测细胞Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(FN)表达,用凝胶电泳迁移率竞争试验(EMSA)检测NF-κB的表达.结果 高糖作用下NF-κB活性和Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白表达显著增高,加入100ng/ml BMP-7后可显著抑制NF-κB活性及Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白的表达.结论 BMP-7可能通过抑制NF-κB活性而从转录水平抑制高糖诱导的近端小管细胞细胞外基质的过度表达.
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糖肾通络方对早期糖尿病肾病患者血清Ⅳ型胶原及尿微量白蛋白排泄率的影响
目的 观察糖肾通络方治疗早期糖尿病肾病的临床疗效及作用机制.方法 将45例早期DN随机分为糖肾通络方组25例,洛丁新组20例,观察治疗前后中医证侯积分,检测治疗前后血中HbA1c、Ccr、FBG、TG、TC、HDL-C、LDL-C、Ⅳ-C及尿中UAER含量变化.结果 两组治疗后中医证侯积分糖肾通络方组较洛丁新组明显降低(P＜0.01);临床总有效率糖肾通络方组为84.00%,洛丁新组为55.00%,两组比较P＜0.05;治疗后糖肾通络方组血中HbA1c、FBG、TG、TC、LDL-C、Ⅳ-C,尿中UAER含量均较洛丁新组明显降低(P＜0.01),血中HDL-C含量较洛丁新组明显升高(P＜0.01).结论 糖肾通络方具有改善临床症状,调节血糖、血脂,改善肾功能的作用,其机制与阻止或抑制Ⅳ-C分泌,并有促进Ⅳ-C降解,改善肾小球基底膜及系膜细胞基质有关.
关键词： 糖肾通络方 糖尿病肾病/中药疗法 胶原Ⅳ型 白蛋白尿/中药疗法
