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补骨脂异黄酮对β-淀粉样蛋白损伤PC12细胞的影响
目的 研究补骨脂异黄酮对β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,Aβ)损伤PC12细胞相关蛋白表达的影响,探讨其作用机制.方法 将PC12细胞按随机数字表法分为空白组、模型组、E2组、补骨脂异黄酮组,除空白组其余各组培养液中均加入20μmol/L的Aβ25-35进行造模,E2组加入10-3μmol/L的雌激素及补骨脂异黄酮组加入10～10-1μmol/L的补骨脂异黄酮干预.采用MTT法检测PC12细胞增殖率,并利用Western Blot法检测β淀粉样前体蛋白(β-amyloid precursor protein,APP)、β位淀粉样裂解酶-1(β-site amyloid cleavage enzyme 1,BACE1)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(phosphorylated extracelluar signal-regulated kinase,p-ERK)及Aβ的表达量.结果 10-1μmol/L的补骨脂异黄酮对PC12细胞增殖率(101％比52％)水平升高(P<0.01);p-ERK[(0.751±0.066)比(0.364±0.015)]、ERβ[(0.756±0.105)比(0.337±0.045)]表达量均明显升高(P<0.01);APP[(0.382±0.039)比(0.479±0.015)]、BACE1[(0.517±0.024)比(0.622±0.029)]、Aβ[(0.430±0.032)比(0.581±0.030)]表达量均明显降低(P<0.05).结论 补骨脂异黄酮对Aβ损伤PC12细胞有一定的保护作用.
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补骨脂中两个黄酮类成分的高效液相色谱测定
目的:同时测定补骨脂中的两个黄酮类成分.方法:以实验室制备的补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮为对照品,采用反相高效液相色谱法测定含量.Techsphere ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相为甲醇-20 mmol*L-1 醋酸铵缓冲液(pH 4.0) (67∶33);检测波长240 nm.结果:补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮浓度为1.25～20 μg*mL-1,线性关系良好;补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮的平均回收率分别为94.9%和96.2%;RSD分别为3.1%和3.6%.结论:首次建立了同时测定补骨脂中补骨脂二氢黄酮和补骨脂异黄酮的HPLC分析方法,本方法结果准确,重现性好,适用于补骨脂黄酮类成分的分析测定.
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补骨脂异黄酮对β－淀粉样肽25－35损伤的神经干细胞存活及调亡的影响Δ
目的：探讨补骨脂异黄酮对β－淀粉样肽（β－amyloid，Aβ）25－35损伤的神经干细胞增殖及凋亡的影响。方法：取第3代神经干细胞细胞悬液，平均分为阿尔茨海默病（alzheimer disease，AD）模型组、实验组、拮抗剂组、空白对照组。 AD模型组细胞加入Aβ25－355μmol／L制成阿尔茨海默病神经干细胞模型；实验组细胞加入Aβ25－355μmol／L和补骨脂异黄酮；拮抗剂组细胞加入Aβ25－355μmol／L的同时加入补骨脂异黄酮及雌激素受体拮抗剂；空白对照组细胞加入培养液；分别接种于96孔板。采用四甲基偶氮唑蓝（ methyl thiazolyl tetrazolium ，MTT）法检测补骨脂异黄酮对Aβ25－35损伤神经干细胞增殖的影响，Western blot法检测补骨脂异黄酮干预后Aβ25－35损伤的神经干细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3（Caspase－3）活性的变化，观察补骨脂异黄酮对Aβ25－35损伤神经干细胞凋亡的影响。结果：MTT法显示，实验组细胞的吸光度在12、24、48、72 h及7 d均明显高于AD模型组，差异均有统计学意义（P＜0．05）。实验组细胞Caspase－3的表达在1、2、3、7、14、21 d均明显低于AD模型组，差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论：补骨脂异黄酮经抗凋亡机制对Aβ25－35损伤大鼠海马神经干细胞发挥保护作用，该作用是通过雌激素受体介导的。
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高效液相色谱法测定补骨脂中三种黄酮类成分的含量
目的:建立补骨脂中三种黄酮类成分含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法分析补骨脂中补骨脂甲素和补骨脂异黄酮的含量.色谱柱 :汉邦Lichrosphore C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈-水(4∶6);流速1.0 ml/ min;检测波长:279 nm(0～30 min),247 nm(30～45 min);进样量20 μl.补骨脂查耳酮:色谱柱:汉邦 Lichrosphore C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(85∶15);流速1.0 ml/min;检测波长387 nm;进样量20 μl.结果:平均加样回收率为98.2%,RSD为1.3%,0.0489～0.391 μg,r=0.9999 (n=7).结论:该方法适合于测定补骨脂中黄酮类成分的含量,应用该方法对不同产地的补骨脂中3种成分含量进行了测定.不同产地中黄酮类成分的含量存在很大差异,对补骨脂黄酮类成分进行含量测定应成为补骨脂质量控制的重要环节.
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补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及机制初探
目的 基于小鼠骨髓巨噬细胞系,建立NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活化模型,探索补骨脂异黄酮对炎症小体的调控作用及初步机制.方法 采用LPS联合ATP、Nigeri-cin、Salmonella和Poly(dA:dT)等刺激因子,分别构建NL-RP3、NLRC4和AIM2炎症小体活化模型;Caspase-Glo?1 In-flammasome Assay检测caspase-1活性;免疫印迹法检测细胞培养上清中mature IL-1βp17、caspase-1 p20的蛋白水平,以及细胞裂解液中pro-caspase-1、pro-IL-1β、ASC、NLRP3等蛋白表达.结果 补骨脂异黄酮可抑制LPS联合ATP、Nigeri-cin、Salmonella和Poly(dA:dT)诱导的pro-caspase-1自我剪切,抑制caspase-1介导的IL-1β产生,表明补骨脂异黄酮可抑制NLRP3、NLRC4及AIM2炎症小体活性.此外,研究发现补骨脂异黄酮对NLRP3炎症小体活性的抑制作用具有不可逆性,且不依赖于NF-κB通路.结论 补骨脂异黄酮可通过抑制pro-caspase-1自我剪切活化,从而抑制NLRP3、NL-RC4、AIM2炎症小体的激活,进一步抑制其介导的免疫炎症反应,本研究也在一定程度上为补骨脂异黄酮相关制剂治疗免疫炎症疾病提供依据.
