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Hiwi基因靶向沉默对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗敏感性的影响
目的:探讨耐阿霉素乳腺癌MCF-7/ADM细胞应用Hiwi基因靶向沉默技术后对阿霉素敏感性的变化,阐明Hiwi基因在乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药机制中的作用.方法:MCF-7/ADM 细胞分为对照组、Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组,分别转染Hiwi control、Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2 3种不同载体,应用实时定量PCR和Western blotting法检测Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平,判断转染效率.转染后各组乳腺癌MCF-7/ADM细胞加入不同浓度阿霉素(0、0.1、0.5和1.0 mg·L-1),0 mg·L-1 阿霉素组为对照组,采用MTT法检测各组MCF-7/ADM细胞的存活率,即耐药敏感性.结果:与对照组比较,转染后Hiwi siRNA1和Hiwi siRNA2组细胞中Hiwi基因mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01).与对照组比较,经不同浓度阿霉素作用后,Hiwi siRNA1组和Hiwi siRNA2组细胞存活率明显降低(P<0.01),阿霉素浓度为1.0 mg·L-1时,2组细胞存活率分别为(48.15±6.28)%和(41.73±6.17)%,对阿霉素的敏感性明显增强.结论:Hiwi基因在MCF-7/ADM细胞中具有高效的靶向沉默,Hiwi基因沉默后的MCF-7/ADM细胞对阿霉素恢复敏感性.
关键词： 乳腺肿瘤 Hiwi基因 靶向沉默 MCF-7/ADM细胞 敏感性 -
白藜芦醇抑制耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖的研究
目的 观察白藜芦醇对耐阿霉素人乳腺癌细胞系MCF-7/ADM增殖和细胞周期的影响及探讨其靶点蛋白质.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法、光学显微镜观察观察白藜芦醇对MCF-7/ADM细胞增殖的影响,流式细胞仪检测观察白藜芦醇对细胞周期的影响,Western blot法、亲和甄别磁珠法鉴定白藜芦醇的靶点蛋白质.结果 白藜芦醇作用MCF-7/ADM 72 h之后,细胞增殖大量下降并且呈剂量依赖关系,而对正常肝细胞毒性很小.白藜芦醇可导致MCF-7/ADM细胞阻滞于G0/G1期.Cdk2、myosin和actin蛋白可能是白藜芦醇的靶点蛋白质之一.结论 白藜芦醇可能是1种新发现的Cdk2的抑制剂,同时通过作用于细胞的骨架结构蛋白质来干扰细胞的有丝分裂过程,使细胞周期延长从而导致MCF-7/ADM的增殖受到抑制.提示白藜芦醇是1种活性强、低毒的抗癌化学前体分子.
关键词： 白藜芦醇 MCF-7/ADM细胞 Cdk2 -
三羟异黄酮对MCF-7/ADM细胞阿霉素耐药性的逆转作用
目的：探讨三羟异黄酮(GEN)单用及联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌MCFF-7/ADM细胞耐药性的影响。方法：分别将不同浓度GEN(8、15、30、60μg/mL)和阿霉素单独及联合与人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外共培养48、72 h，MTT法检测细胞抑制率(IR)，计算耐药倍数和逆转倍数。结果：MCF-7/ADM细胞相对敏感株MCF-7/S的耐药倍数48h为117.15倍、72 h为54.42倍。当GEN单独作用后可抑制MCF-7/ADM细胞生长，抑制作用与时间、浓度呈正相关。25μg/mL GEN联合阿霉素对MCF-7/ADM细胞生长抑制率明显高于单用阿霉素(P＜0.01)，其逆转倍数为7.53倍。结论：GEN可抑制人乳腺癌MCF-7/ADM细胞生长，联合阿霉素对肿瘤细胞生长抑制具有协同作用，GEN能够逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。
关键词： 三羟异黄酮 阿霉素 MCF-7/ADM细胞 耐药性 -
咯萘啶逆转人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性及机制探讨
目的 在明确咯萘啶(PND)逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性的药效基础上,初步探索作用机制. 方法 采用MTT法检测单用阿霉素(ADM)和联用咯萘啶(PND)对人乳腺癌敏感细胞MCF-7和耐药细胞MCF-7/ADM的抑制作用,得出半数抑制浓度(IC50),并计算耐药倍数和逆转倍数.Western blot检测细胞中Fas和Caspases-3蛋白表达. 结果 ADM对MCF-7和MCF-7/ADM的IC50分别为1.399 μg/mL和43.885 μg/mL,耐药倍数为31.4倍.PND(0.5 μg/mL)联合ADM作用MCF-7/ADM的IC50为3.246 μg/mL,逆转倍数为13.5倍,并能提高耐药MCF-7/ADM中Fas和Caspases-3蛋白表达. 结论 PND能够逆转人乳腺癌细胞MCF-7/ADM耐药性,通过上调膜蛋白Fas表达,增加MCF-7/ADM对ADM的敏感性,从而促进细胞凋亡.
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中药虎杖中抗癌活性物质研究
目的:为虎杖药用价值的开发利用提供科学据依.方法:在生物活性测定指导下,从虎杖中分离得到一种较高抗癌活性的物质,并且用液质联用、红外光谱、紫外全扫描等方法鉴定其结构.MTT法测定它对L-02、HepG2、SHZ-888、MCF-7、MCF-7/ADM等细胞的抑制作用并用HE染色法观察其作用MCF-7/ADM细胞48 h、72 h后的肿瘤细胞形态学变化.结果:分离得到的物质为顺、反式-白藜芦醇,它能特异性抑制多种肿瘤细胞的生长,而对正常肝细胞毒性很小.同时,首次发现其对耐阿霉素的MCF-7乳腺癌细胞有直接的细胞毒性.结论:白藜芦醇是虎杖中一种活性强、低毒的抗癌物质.
关键词： 虎杖 白藜芦醇 MCF-7/ADM细胞 MTT法
