首页 > 文献资料
-
携带TRAIL基因的条件复制型腺病毒载体的构建及其辐射诱导表达
目的：构建携带早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）基因的条件复制型腺病毒载体 pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K，观察其联合2.0 Gy X射线照射对人乳腺癌 MDA-MB-231细胞 TRAIL 表达的影响。方法：以 pMD18T-Egr1为模板，成功克隆Egr-1序列，将TRAIL基因置于下游，构建条件复制型腺病毒载体 pShuttle-Egr1-TRAIL-hTERT-E1 A-E1 Bp-E1B55K （CRAd.pEgr1-TRAIL），病毒包装后感染细胞，给予 X 线照射，利用 Real time PCR 法检测TRAIL mRNA 表达水平，ELISA法检测 TRAIL蛋白表达水平。实验设对照（control）组、2 Gy组、空病毒（CRAd.p）组、CRAd.p ＋2 Gy组、CRAd.p-Egr1-TRAIL组和CRAd.p-Egr1-TRAIL ＋2 Gy组。结果：成功构建 pAd-Egr1-TRAIL-hTERT-E1A-E1Bp-E1B55K，并进行了病毒包装。以病毒滴度5感染复数（MOI）感染MDA-MB-231细胞24 h后给予2.0 Gy X射线照射，4 h后MDA-MB-231各组细胞中TRAIL mRNA表达水平开始升高，8 h后各组表达达峰值；CRAd.pEgr1-TRAIL＋2.0 Gy组mRNA表达水平升高为明显，约为对照组的160倍（P＜0.01），随后表达水平逐渐下降；6 h后各组 MDA-MB-231细胞中 TRAIL蛋白表达水平开始升高，24 h后各组TRAIL蛋白表达水平达峰值，48 h后TRAIL蛋白表达水平下降，但仍未降至正常水平；与其他各组比较，CRAd.pEgr1-TRAIL ＋2.0 Gy组TRAIL蛋白表达水平升高明显（P＜0.01）。结论：成功获得条件复制型腺病毒载体，联合2.0 Gy X射线照射可使 MDA-MB-231细胞中 TRAIL mRNA和蛋白表达水平升高。
