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三丁基锡对人羊膜细胞ERK通路和G2/M期调控蛋白的影响
目的 研究三丁基锡(Tributyltin,TBT)对正常人羊膜FL细胞ERK通路及周期相关蛋白的影响.方法 FL细胞分别以剂量1、2、3、4和6μmol/L TBT染毒,免疫印迹法检测ERK通路和周期蛋白表达及磷酸化水平的变化.结果 TBT下调Raf表达,促使下游激酶MEK1/2,ERK1/2以及转录因子c-Myc脱磷酸后失活,抑制ERK通路;同时细胞周期磷酸酶Cdc25C表达下调,激酶Cdc2 Tyr-15位点磷酸化水平升高.结论 ERK通路的抑制可能是TBT发挥细胞毒性作用的重要因素,其机制主要是通过调控Cdc25C,致使G2/M关键激酶Cdc2活性下调,细胞发生G2/M期阻滞,终诱导凋亡.
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DBDCT致HL02细胞毒性的初步作用机制研究
目的 研究新型有机锡化合物DBDCT对肝细胞HL02的毒性作用及其机制.方法 MTT法测定DBDCT对HL02细胞活力的影响,计算IC50,并于光学显微镜下观察细胞形态的改变;紫外分光光度法测定LDH的释放置;流式细胞术测定细胞凋亡与细胞周期;Western blot测定周期蛋白Cdc2的表达.结果 DBDCT可抑制HL02细胞的增殖,且随着药物浓度的增加,细胞形态逐渐模糊、细胞固缩变圆,表现出明显的细胞毒性;24 h IC50为5.77μmol/L;DBDCT可引起LDH的大量释放,并将细胞阻滞于G2/M期,细胞凋亡率增加,且呈现明显的量效关系;细胞周期蛋白依赖性激酶Cdc2的表达则随着给药浓度的增加而降低.结论 DBDCT可通过改变细胞膜的通透性,降低Cdc2的表达,引起G2/M期细胞阻滞与细胞凋亡,进而产生明显的肝细胞毒性.
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大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期的阻滞调节机制
目的:研究大蒜素对人胃癌细胞SGC-7901及BGC-823 G2/M期阻滞作用及其调节机制.方法:应用MTT法测定大蒜素对人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823细胞增殖抑制率及72 h的IC50.通过流式细胞仪检测IC50浓度的大蒜素对SGC-7901和BGC-823细胞周期的影响.应用免疫组化染色检测大蒜素作用前后SGC-7901和BGC-823细胞CDC2和CyclinB蛋白表达.结果:不同浓度的大蒜素可以抑制人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823的增殖,且随着大蒜素浓度的增大,抑制率逐渐增高.大蒜素抑制SGC-7901细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为23 mg/L;大蒜素抑制BGC-823细胞增殖50%的药物浓度(IC50):72 h为35 mg/L大蒜素作用于两种细胞,其细胞周期均发生了明显的变化,主要表现为G0/G1期细胞减少,G2/M期细胞增多(SGC-7901细胞24,48 h vs对照:26.47±2.54%,28.88±2.75% vs 24.30±2.74%,P＜0.01;BGC-823细胞24,48 h vs对照:22.78±1.45%,24.87±1.61% vs 20.32±1.34%,P＜0.01),S期细胞无明显变化.未经大蒜素处理的两种细胞,CDC2和CyclinB蛋白表达均为阳性,大蒜素处理后,CDC2和CyclinB蛋白表达下降.SGC-7901细胞经23 mg/L大蒜素处理后,CDC2蛋白相对阳性表达率为87.2%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为59.3%.BGC-823细胞CDC2蛋白在35 mg/L大蒜素作用后,相对阳性表达率为84.4%;CyclinB蛋白相对阳性表达率为62.8%,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论:大蒜素使人胃癌细胞株SGC-7901和BGC-823停滞于G2/M期,其机制是通过CDC2和CyclinB蛋白表达下降实现的.
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喉癌与手术切缘组织PCNA和Cdc2表达与局部复发相关性研究
目的 研究早期喉癌手术切缘组织学检测癌阴性组织PCNA和Cdc2表达与肿瘤局部复发的关系.方法 选取2004-01-01-2010-12-31唐山市协和医院85例早期喉癌患者作为研究对象,采用CO2激光手术治疗并进行回顾性研究.采用免疫组织化学方法(SP)对肿瘤及其切缘组织中PCNA和Cdc2的表达进行检测.所有患者均随访＞2年,对其生存及肿瘤局部复发情况进行观察.结果 85例喉癌患者中有14例局部复发(复发组),71例未复发(未复发组).85例患者肿瘤组织中PCNA阳性表达率为72.94％(62/85),Cdc2阳性表达率为70.59％(60/85).肿瘤组织PCNA的表达与喉癌的分化程度(x2 =0.001,P=0.979)及分期(x2=0.132,P=0.716)差异无统计学意义;Cdc2的表达与喉癌的分化程度(x2=1.803,P=0.179)及分期(x2 =0.232,P=0.630)差异无统计学意义.切缘组织中PCNA和Cdc2阳性率分别为32.94％(28/85)和29.41％(25/85).局部复发率为16.47％(14/85),喉癌复发组切缘组织中PCNA和Cdc2蛋白表达阳性率分别为64.28％(9/14)和26.76％(19/71);未复发组分别为57.14％(8/14)和23.94％(17/71).经统计学处理,喉癌复发组织PCNA和Cdc2蛋白阳性表达率差异有统计学意义,x2=7.454,P＜0.01;未复发组阴性切缘组织中阳性表达率差异有统计学意义,x2=6.208,P＜0.05.结论 早期喉癌阴性手术切缘组织中PCNA和Cdc2的表达是预测术后复发的重要生物学标志,癌切缘组织PCNA和Cdc2蛋白联合检测癌阴性组织对判断早期喉癌术后是否发生局部复发具有一定价值.
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HPV感染及p53与Cdc2蛋白表达对喉癌术后复发的预测价值
目的 检测人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)及p53和Cdc2蛋白表达与喉鳞状细胞癌发生及复发的关系.方法 选取2003-01-01-2011-12-31唐山市协和医院92例喉鳞状细胞癌手术切除标本,采用PCR反向点杂交方法检测喉癌组织中HPV感染情况,SP免疫组化方法检测p53和Cdc2蛋白表达,收集临床病理资料并进行随访.结果 随访＞2年的喉癌患者中有18例出现复发(复发组),74例无复发(未复发组).92例喉癌组织中HPV的感染率为19.57％(18/92);喉癌组织中p53和Cdc2蛋白的阳性表达率分别为60.87％(56/92)和65.22％(60/92).HPV感染、p53及Cdc2蛋白表达与喉癌的分化程度、分期均无明显相关性,P值均＞0.05; HPV阳性和阴性喉癌患者术后复发率分别为0(0/18)和24.32％(18/74),差异有统计学意义,x2=4.007,P=0.045;喉癌复发组和未复发组中的p53蛋白表达率分别为72.22％(13/18)和58.11％(43/74),差异无统计学意义,x2 =0.691,P=0.406;喉癌复发组和未复发组中Cdc2蛋白表达率分别为88.89％(16/18)和59.46％(44/74),差异有统计学意义,x2=4.307,P=0.038.喉癌组织中HPV的感染与p53(x2 =0.316,P=0.574)及Cdc2(x2=0.574,P=0.487)蛋白表达均无相关性.结论 喉癌组织中存在着一定程度的HPV感染及p53、Cdc2蛋白质的表达,但三者与喉癌的分期及分化程度无关;HPV阳性患者术后复发率低于HPV阴性患者;Cdc2蛋白表达阳性者术后复发率高于阴性患者.HPV感染、p53及Cdc2 3种因素可能参与了喉癌的发生、发展及复发过程.
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CDC2敲低治疗人脑胶质瘤的实验研究
目的 提供CDC2作为胶质瘤发生发展相关新分子的实验依据.方法 构建针对目的 基因的shRNA逆转录病毒表达载体;对体外培养的人脑胶质瘤细胞及其裸小鼠移植瘤进行转染,观察与目标基因相关的表型变化;荧光实时定量PCR检测mRNA表达,Western印迹检测蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化.结果 shRNA表达载体使人脑胶质瘤细胞株SHG44 CDC2的mRNA、蛋白表达显著下调,同时出现了明显的细胞G2/M期阻滞,细胞生长抑制,凋亡增加.裸小鼠皮下移植瘤明显缩小;肿瘤颅内移植裸小鼠生存期明显延长.结论 CDC2基因过表达是胶质瘤发生发展病因分子之一,敲低其表达可使肿瘤的恶性增殖得到控制.
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电离辐射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响
目的研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞cyclinB1、cdc2基因转录的影响,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G2期阻滞的分子机理.方法采用流式细胞仪检测了X射线全身照射后小鼠骨髓细胞周期进程的变化.采用半定量RT-PCR方法分别检测cyclinB1、cdc2基因转录水平变化.结果2Gy X射线全身照射后4及12 h G2+M期细胞百分率升高(P＜0.05);0.5～6 Gy照射后12 h G2+M细胞百分率呈剂量依赖性增加(P＜0.05～P＜0.01).2 Gy X射线照射后2～48 h小鼠骨髓细胞cyclinB1转录水平在各个时间点未见明显变化,0.5～6 Gy X射线照射后12 h,骨髓细胞cyclinB1基因转录在各剂量点均未见明显改变;2 Gy X射线照射后小鼠骨髓细胞cdc2转录水平从照后4 h即开始不同程度下降,12 h达低值(为假照射组的46%),照射后48 h开始恢复,0.5～6 GyX射线照射后12 h,骨髓细胞cdc2基因转录水平在各剂量点均明显降低,分别达到假照射组的40%～70%.结论电离辐射可诱导小鼠骨髓细胞发生G2期阻滞,cdc2激酶活性下降在G2期阻滞中起重要作用.
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抗癌生物活性肽对人胃癌BGC-823细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4表达的影响
目的:探讨抗癌生物活性肽对人胃癌细胞周期相关蛋白CDC2、CDK4的影响及其作用机制.方法:实验分为活性肽组及对照组,将不同浓度的抗癌生物活性肽按不同时间作用于培养的人胃癌细胞株(BGC-823),应用MTT法检测增殖抑制率.建立荷胃癌裸鼠模型,给予生理盐水作为阴性对照组,应用免疫组化技术对抗癌生物活性肽作用前后的胃癌裸鼠肿瘤中CDK4、CDC2的表达进行检测.结果:不同浓度的抗癌生物活性肽对胃癌细胞均有增殖抑制作用;抗癌活性肽S-2作用后人胃癌组织中的CDK4表达明显低于对照组(P＜0.01),而CDC2表达高于对照组(P＜0.01).结论:抗癌生物活性肽具有抗胃癌细胞增殖作用,其抗肿瘤作用机制可能是通过下调CDK4和上调CDC2的表达实现.
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小鼠未受精卵和早1-细胞期受精卵中MPF蛋白水平的检测
目的::检测小鼠未受精卵和早1-细胞期受精卵中M期促进因子(MPF)蛋白水平,探讨MPF在早1-细胞期受精卵中的变化.方法:利用超排卵及反复冻融裂解细胞的方法,对卵母细胞和受精卵细胞中MPF的催化亚基Cdc2、调节亚基周期素B进行Western印迹分析.结果:在500个MⅡ卵母细胞和受精卵细胞样品中,可以清楚看到各有一条粉紫色的特异免疫印迹带显示Cdc2,根据凝胶成像及分析系统的Gelworks应用软件分析,得到的强度的相对值分别是100%和约80%.用700个卵细胞进行观察时可以看到MⅡ卵母细胞显示有2条免疫印迹带显示细胞周期素B,其中一条为60～63 kDa,是周期素B;另一条则位于周期素B的下方,约40～45 kDa,且色调偏淡.而受精卵细胞样品在相应的部位则未能见到特异的免疫印迹带.结论:小鼠早1-细胞期受精卵(G1期)中的Cdc2蛋白水平仍保持在相对的较高水平;而细胞周期素B的量显著减少,难以检测.
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斑蝥素酸镁对人肝癌细胞SMMC-7721 ERK1/2通路和G2/M期调控蛋白的影响
目的 探讨斑蝥素酸镁对人肝癌细胞系SMMC-7721细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)通路和周期相关蛋白的影响.方法 将不同浓度的斑蝥素酸镁作用于人肝癌细胞SMMC-7721,免疫印迹法检测ERK1/2通路和周期相关蛋白表达的变化.结果 与对照组比较,0.895、1.79 μmol/L浓度组的ERK1/2蛋白磷酸化水平明显下降,同时周期相关蛋白Cdc25C、Cdc2表达显著下调.结论 推测斑蝥素酸镁可能是通过抑制ERK1/2通路,进而调控Cdc25C、Cdc2的表达下调,使细胞发生G2/M期阻滞,终诱导细胞凋亡.
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周期素依赖性蛋白激酶5及其激动剂在神经系统发育中的作用
周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin dependent kinase 5, CDK5)是CDKs家族的成员之一,属于丝氨酸/苏氨酸激酶家族,具有与其他的CDKs成员同源的序列~[1].CDK5早是从Hela细胞中分离并克隆,并且发现是一种PSSALRE激酶与cdc2和CDK2的基因序列有57%的同源性~[2],故又称为cdc2相关的蛋白激酶.
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高血脂兔髂-股动脉成形术后平滑肌细胞中c-myc和cdc2基因的表达
目的:探讨c-myc和cdc2基因在高血脂兔髂-股动脉成形术后平滑肌细胞中的表达.方法:24只新西兰白兔均饲以高脂饲料,于高脂饲喂2周时用球囊导管扩张髂-股动脉,造成动脉内膜损伤,6～8周行血管造影检查,对狭窄>50%的动脉段行球囊扩张术,术后24 h和2周分别用RT-PCR和免疫金银法检测c-myc、cdc2 mRNA和相应蛋白质的表达. 结果: c-myc和cdc2 mRNA在球囊扩张术后24 h表达增加,其相应蛋白质在扩张术后2周时表达增加,阳性颗粒主要位于新内膜层平滑肌细胞的胞核,少量位于胞质.结论: 动脉损伤后可致c-myc、cdc2 mRNA和相应蛋白质表达增加,提示c-myc和cdc2表达增加在动脉损伤后平滑肌细胞增殖中起一定作用.
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涎腺腺样囊性癌组织中HPV感染及p53、 p16、 EGFR、Cdc2蛋白表达与预后的关系
目的 初步探讨HPV感染及p53、p16、EGFR及Cdc2表达与涎腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)预后的关系.方法 收集76例涎腺ACC手术标本,分别采用PCR-DNA反向点杂交及免疫组化SP法检测肿瘤组织中HPV-DNA及p53、p16、EGFR及Cdc2表达,收集临床资料并随访.Kaplan-Meier模型分析患者生存情况,Log-rank检验比较生存曲线,多因素Cox回归模型进行预后分析.结果 涎腺ACC组织中HPV感染率为0(0/76).p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在肿瘤组织中的阳性率分别为76.3％ (58/76)、57.9％ (44/76)、60.5％ (46/76)及64.5％ (49/76).p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白表达与患者性别、年龄、肿瘤部位、TNM分期及病理类型无关(P均＞0.05).EGFR阳性患者中位总生存期(overall survival,OS)低于阴性患者(x2 =19.111,P＜0.01).EGFR阳性患者中位无进展生存期(progression-free survival,PFS)低于阴性患者(x2=6.621,P＜0.01).Cdc2阳性患者中位OS短于阴性患者(x2=3.870,P＜0.05).Cdc2阳性患者中位PFS低于阴性患者(x2=6.755,P＜O.01).多因素Cox回归模型分析显示EGFR、Cdc2蛋白表达(RR=13.417、13.075,P均＜0.001)是涎腺ACC患者预后的独立危险因素.结论 涎腺ACC组织中未检测出HPV感染.p53、p16、EGFR及Cdc2蛋白在涎腺ACC组织中呈不同程度表达,p16不能作为涎腺ACC患者HPV感染状态的替代指标.EGFR及Cdc2阳性表达是涎腺ACC患者预后的独立危险因素,临床对EGFR及Cdc2蛋白表达患者应密切随访.
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麦冬皂苷B通过Myt/Cdc2信号通路抑制H460细胞有丝分裂
目的 探究麦冬皂苷B(ophiopogonin-B,OP-B)对非小细胞肺癌细胞株H460有丝分裂及细胞周期调控的相关分子机制.方法 TUNEL免疫组化法观察细胞核物质的变化;DAPI染色法观察细胞核形态的改变及有丝分裂的状态;Western blot法检测细胞周期调控相关的蛋白信号通路.结果 形态学结果表明,10μmol·L-1浓度的OP-B能明显抑制H460细胞的有丝分裂,蛋白水平的检测结果表明,OP-B能抑制cyclinD1、cyclinB1的表达,促进Myt的表达及Cdc2的磷酸化,抑制histone H3(Ser10)的磷酸化,同时能上调周期抑制性蛋白p21的表达.结论 OP-B通过Myt/Cdc2信号通路导致细胞周期停滞在G 0/G1期,从而抑制细胞的有丝分裂.
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黄连素对人肝癌Hep G2细胞周期及凋亡的影响
目的:观察黄连素对人肝癌细胞Hep G2生长的影响及其可能机制.方法:将浓度分别为0,25,50,100,200μmol/L的黄连素与人肝癌细胞Hep G2共间培养24,48,72 h,用RSB法检测黄连素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制率;用流式细胞分析仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率及Caspase-3、CyclinBl、CDC2、CDK4蛋白的表达.结果:黄连素对人肝癌细胞Hep Gz生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大;流式细胞仪分析显示黄连素将人肝癌细胞Hep Gz阻滞于S、G2/M期.黄连素作用48 h后人肝癌细胞Hep G2凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而加大.黄连素作用48 h后Hep G2细胞的Caspase-3、CDC2蛋白表达增加;而CDK4、CyclinBl蛋白表达降低.结论:黄连素可能通过增加Hep G2细胞CDC2蛋白表达,降低CDK4、CyclinBl蛋白表达使其阻滞于S、G2/M期;可能通过增加Caspase-3蛋白表达增加Hep G2细胞凋亡.
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eIF3 P170对发育心肌细胞周期的调控及其机制
目的：探讨eIF3 P170，cdc2，cyclinD1，cyclinB1在小鼠发育心肌细胞细胞周期中的表达及eIF3 P170与cdc2， cyclinD1，cyclinB1之间的相关关系。方法：取不同时间点小鼠心肌细胞，RT-PCR检测eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达。结果：eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎第13，15，18天(G13，G15， G18)及小鼠出生后第1，2，3，5天(P1，P2，P3，P5)的表达均较强，在小鼠出生后第5天表达达到强(P5与其他各时间点比较，P<0.05)，而后表达逐渐减弱，在出生后第30天(P30)的表达降至弱(P30与其他各时间点比较， P<0.05)。eIF3 P170与cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA表达之间具有正相关关系。结论：eIF3 P170，cdc2，cyclinD1和cyclinB1 mRNA的表达在胚胎期及出生早期均较强，在小鼠出生后第5天达到强，之后逐渐下降。
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人参皂苷Compound K对慢性粒细胞白血病K562细胞周期影响的研究
目的 探讨人参皂苷Compound K(CK)对慢性粒细胞白血病K562细胞周期的影响及机制.方法 应用MTT法检测CK对K562细胞增殖的影响,用流式细胞仪分析细胞周期,用RT-PCR分析CyclinB1、cdc2、Survivin基因mRNA变化,用Western-blot法分析CyclinB1、p34cdc2、Survivin蛋白变化.结果 人参皂苷CK能显著抑制K562细胞的增殖,呈浓度依赖性,细胞阻滞于G2/M期,cdc2基因mRNA表达下调,CyclinB1、p34cdc2、Survivin蛋白质表达均下调.结论 人参皂苷CK能使K562细胞阻滞于G2/M期,该效应可能与CK抑制CyclinB1、cdc2基因表达有关,Survivin蛋白表达下调可能是CK抑制K562细胞周期的关键性分子.
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芒果苷对白血病HL-60细胞周期及 CDC2/CyclinB 1表达的影响
目的:观察芒果苷对白血病HL-60细胞周期分布及细胞周期素B1(CyclinB1)、细胞周期分裂基因2(CDC2)表达的影响,以进一步探讨芒果苷抗白血病的分子作用机制.方法:应用MTT比色法测定芒果苷对白血病HL-60细胞增殖的抑制作用;用流式细胞术(FCM)检测芒果苷对细胞周期的影响;用RT-PCR技术检测CyclinB1及CDC2 mRNA表达水平.结果:芒果苷呈剂量及时间依赖性抑制HL-60细胞的生长,作用24 h后,G_2/M期细胞增多,出现G_2/M期阻滞;CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达随药物质量浓度的增加而逐渐增强,在芒果苷质量浓度80 μmol/L时表达达到峰值.结论:芒果苷可抑制HL-60细胞增殖,阻滞细胞周期于G_2/M期,显著上调HL-60细胞CyclinB1 mRNA和CDC2 mRNA的表达水平.芒果苷诱导HL-60细胞G_2/M期阻滞可能是其抗白血病作用的分子机制之一.
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去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨
背景与目的:去甲斑蝥素(norcanthridin,NCTD)是斑蝥素(canthridin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小.本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制.方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变.Western blot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、Cyclin B1、Bax和Bcl-2表达的影响.结果:2.5、5、10、20、30和40 μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48 h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P＜0.001).Nd3作用24 h、36 h和48 h的IC50分别为(25.1±2.3)μmol/L、(21.8±2.8)μmol/L和(20.4±3.3)μmol/L.细胞周期分析证实,10、20、30、40 μmol/L Nd3作用48 h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%:同时30 μmol/L的Nd3作用12、24、36、48 h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞.此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40 μmol/L的Nd3作用48 h后细胞凋亡率高于对照组30%以上.Western blot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、Cyclin B1和Bcl-2的表达则相应减少.结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、Cyclin B1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关.
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胶质瘤治疗的靶分子CDC2 RNA干扰的体外实验研究
目的 探讨抑制细胞周期依赖性激酶CDC2基因对人脑胶质瘤细胞生长的影响,并为其作为胶质瘤发生发展相关基因在胶质瘤治疗方面的应用价值提供实验依据.方法 利用本实验室基因重组构建的CDC2 shRNA逆转录病毒表达质粒对体外培养的人脑胶质瘤细胞进行转染.倒置显微镜观察细胞形态和数量变化;RT-PCR及荧光实时定量PCR检测CDC2 mRNA表达;Western blot检测CDC2蛋白表达;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡的变化;透射电子显微镜观察细胞超微结构.结果 人脑胶质瘤细胞系U251在转染针对CDC2的shRNA逆转录病毒表达质粒48h后,贴壁生长的细胞逐渐漂浮,细胞生长受到抑制,CDC2 mRNA下调均达98%以上,蛋白表达下调达92%以上,同时出现了明显的细胞G2/M期阻滞,细胞凋亡由0.57%上升到13.01%,并且超微结构受损明显.结论 CDC2 shRNA逆转录病毒表达质粒介导的RNA干扰能有效的抑制U251细胞的增殖,CDC2可作为胶质瘤基因治疗靶分子作进一步研究.
