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表没食子儿茶素没食子酸酯对肝癌细胞增殖的抑制作用研究
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法 采用不同浓度(0、25、50、100、200、400mg/L)EGCG作用于HepG2细胞,于24、48h后采用MTT方法检测细胞增殖抑制率.以不同浓度(0、50、100、200mg/L)EGCG作用于HepG2细胞,24h后采用流式细胞术检测细胞凋亡率、细胞周期、细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)及Smad3蛋白的表达,RT-PCR检测CDC25A和Smad3 mRNA的表达.结果 MTT检测结果显示,不同浓度EGCG对HepG2细胞均有生长抑制作用,且具有时间和剂量依赖性(P＜0.01).随着EGCG浓度升高,细胞增殖指数(PI)明显降低(P＜0.01),细胞凋亡率明显增高(p＜0.01),CDC25A蛋白和mRNA表达水平下降(p＜0.05),Smad3蛋白和mRNA表达水平上升(p＜0.05).结论 EGCG可能通过下调CDC25A、上调Smad3的表达,抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,从而对肝癌细胞起到生长抑制作用.
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JNK 信号转导通路在黄芩苷诱导肝癌细胞凋亡中的作用
目的：探讨黄芩苷对人肝癌 HepG2细胞生长的抑制作用及其对 c-Jun 氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响。方法50、100、150μg/ ml 的黄芩苷分别与人肝癌 HepG2细胞共同培养24、48和72 h,MTT 测定细胞生长抑制率；采用 Western blotting 方法检测黄芩苷处理72 h 后 HepG2细胞 JNK 和 p-JNK 的表达变化并观察 JNK 抑制剂对细胞凋亡的影响。结果黄芩苷对人肝癌 HepG2细胞增殖抑制作用呈时间依赖性,黄芩苷浓度低于100μg/ ml 其对细胞的抑制作用随浓度升高而增强,超过100μg/ ml 其对细胞的抑制作用不再增强。在黄芩苷处理后 HepG2细胞 p-JNK 蛋白表达上调,使用 JNK 抑制剂后,能阻断 JNK 蛋白的磷酸化,并且降低黄芩苷诱导细胞凋亡的能力。结论黄芩苷通过激活 JNK 信号通路诱导人肝癌 HepG2细胞凋亡。
关键词： 黄芩苷 Hep G2细胞 细胞凋亡 c-Jun 氨基末端激酶 -
食欲素A对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响及机制
目的 研究食欲素A(orexin A)对人肝癌细胞Hep G2增殖和凋亡的影响,及其可能作用机制.方法 以不同浓度的orexin A干预Hep G2细胞24h,MTT法检测细胞的增殖能力,筛选适的orexinA作用浓度.使用食欲素受体1选择性拮抗剂SB408124(10 μM)预处理细胞1h,然后用适浓度的orexinA干预细胞24h,实验设置为:正常对照组、溶剂对照组、orexinA组、SB408124+orexin A组.MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechst染色观察细胞的形态变化,Western blot检测Bax、Bcl-2、Cytochrome c和Cleaved-caspase-3蛋白的表达.结果 OrexinA以剂量依赖性方式明显抑制Hep G2细胞的生长,适宜浓度为0.5μM,细胞G0/G1期百分比(72.50％±1.32％)明显高于S期(19.6％9±1.15％).OrexinA促进Hep G2细胞凋亡,细胞凋亡率显著升高(P＜0.01).OrexinA显著上调Bax和Cleaved-caspase-3表达水平,下调Bcl-2和线粒体Cytochrome c表达水平.SB408124的干预能够减小orexin A对Hep G2细胞的影响.结论 OrexinA通过食欲素受体1抑制Hep G2细胞增殖并诱导其凋亡.
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新型聚乙烯亚胺衍生物在Hep G2细胞中转染和毒性的研究
目的:研究以对苯二甲醛( Terephthalaldehyde)为连接剂的聚乙烯亚胺(Polyethyleneimine,PEI)衍生物PEI-Tp对肝癌细胞Hep G2的转染活性和细胞毒性的影响.方法:以荧光素酶质粒作为报告基因,研究高分子和DNA的复合物在Hep G2细胞中的转染活性,用MTT的方法研究高分子对Hep G2细胞的毒性.结果:Hep G2细胞转染结果显示构建的聚乙烯亚胺衍生物PEI-Tp具有高效输送质粒的能力；细胞毒性结果显示PEI-Tp随着浓度的增加,其毒性显著低于PEI25 kDa.结论:Hep G2细胞实验数据显示PEI-Tp是一种高效、低毒,在基因治疗领域有相当前景的非病毒载体.
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RNA干扰对过表达Hlrg的Hep G2细胞的影响
为观察RNA干扰对过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的影响,构建了封闭Hlrg基因表达的shRNA表达载体pAVU6+27-Hlrg,将pAVU6+27-Hlrg稳定转染到过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞中;分别用相差倒置显微镜、FCM、SABC-FITC、RT-PCR、Western blot等观察细胞改变.测序结果表明pAVU6+27-Hlrg构建成功;针对Hlrg的RNA干扰已完成;相差倒置显微镜发现细胞突起增加;FCM显示干扰组G1期明显缩短.针对Hlrg的RNA干扰能促进过表达Hlrg蛋白的Hep G2细胞的生长.
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反义RNA阻断Hep G2细胞FasL的表达及功能研究
应用分子克隆技术将人FasL cDNA片段反向插入逆转录病毒载体pLXSN,构建重组质粒pL(hFasL-AS)SN,转染包装细胞PA317后获得FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体假病毒上清,经NIH3T3细胞检测其感染滴度后转染肝癌细胞株Hep G2细胞并筛选建系,命名为Hep G2-hFasL-AS.半定量RT-PCR检测显示Hep G2-FasL-AS细胞FasL的mRNA明显少于正常Hep G2细胞;FACS检测显示Hep G2-FasL-AS细胞FasL的表达与Hep G2细胞相比显著下降;同时,Hep G2-FasL-AS细胞导致HL-60细胞凋亡能力有所下降.表明人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体能抑制转染细胞FasL的表达并下调其致凋亡功能.
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5-氨基乙酰丙酸介导声动力诱导Hep G2细胞体外凋亡的机制研究
目的 研究5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)介导的声动力疗法(SDT)对人肝癌Hep G2细胞的促凋亡作用及机制.方法 取对数期生长Hep G2细胞,通过CCK-8法检测5-ALA和超声干预对细胞存活率的影响,优化出声动力治疗佳5-ALA药物浓度及超声辐照强度.取对照组(未处理细胞)、5-ALA组、超声组和SDT组Hep G2细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率、坏死率及线粒体膜电位(MMP)的改变,荧光探针DCFH-DA检测活性氧类(ROS)的产生,Western blotting检测凋亡蛋白caspase-3、caspase-9和细胞色素C(Cyt-C)的表达,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果 与对照组、5-ALA组和超声组比较,SDT组Hep G2细胞存活率较低,细胞凋亡率升高,ROS的产生增加,MMP降低,caspase-3、caspase-9和Cyt-C高表达.透射电镜观察发现SDT组Hep G2细胞表面微绒毛减少、内质网和线粒体肿胀、凋亡小体产生.结论 5-ALA介导的SDT诱导Hep G2细胞凋亡以内源性线粒体凋亡为主要途径.
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乙肝疫苗接种者和隐性HBV感染者血清中和效应的初步研究
目的:探讨乙肝疫苗接种者和隐性感染康复者血清体外阻断HBV感染作用的差异.方法:雅培ELISA定量测定乙肝疫苗接种应答者和稳性HBV感染康复者血清乙肝表面抗体.再调整到相同含量,分别和HBV预孵育1 h后感染Hep G2细胞,24 h后巢式PCR检测Hep G2细胞中HBV-DNA,评估其阻断效应.结果:同等浓度下,隐性感染康复者和乙肝疫苗接种者血清对野生株HBV感染阻断作用无差异,但乙肝疫苗接种者血清对变异株无阻断效应,隐性感染康复者对变异株仍有阻断作用,其作用明显弱于野生株.结论:隐性感染康复者血清对野生株和变异株HBV均有阻断作用,而乙肝疫苗接种者血清对变异株无阻断效应,提示新型乙肝疫苗应包含更多抗原成分如前S1/S2抗原,以对HBV变异株产生中和效应,应用多种成分的抗乙肝免疫球蛋白阻断肝移植后变异株HBV再感染十分重要.
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17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响
目的 观察17-丙烯胺-17-去甲氧格尔德霉素(17-AAG)对肝癌HepG2细胞增凋亡的影响,并探讨其机制.方法 采用吖啶橙/澳乙锭(AO/EB)荧光染色,通过荧光显微镜观察HepG2细胞凋亡情况;采用流式细胞仪分析细胞凋亡率的变化;逆转录聚合酶链反应检测17-AAG处理肝癌HepG2细胞前后bax和bcl-2的mRNA蛋白表达.结果 AO/EB荧光染色结果显示对照组呈均匀绿色荧光,实验组随着药物浓度的增加,呈红色荧光凋亡细胞逐渐增多;流式细胞仪结果显示17-AAG促进肝癌HepG2细胞凋亡;RT-PCR结果显示17-AAG能使bax的mRNA蛋白表达水平升高、bcl-2的mRNA蛋白表达水平下降,其作用呈剂量效应关系.结论 17-AAG具有促进肝癌HepG2凋亡作用,其机制可能与其上调bax、下调bcl-2蛋白表达有关.
关键词： 肝肿瘤 Hep G2细胞 细胞凋亡 bcl-2相关X蛋白质 Bcl-X蛋白质 -
Hep G2培养条件的摸索及其与CHL、3T3细胞代谢能力的比较
目的:以MTT试验方法计算环磷酰胺(cyclophosphamide,CP)对Hep G2细胞和体外安全性评价常用细胞系CHL、3T3细胞的LC50,间接比较几种细胞系的代谢能力并确定Hep G2细胞适宜的培养试验条件.方法:用需代谢活化的阳性物CP以含血清和不含血清的培养液配制染毒液,按10.0、7.21、5.19、3.73、2.69、1.93、1.39、1.00 mg/ml浓度对CHL、3T3细胞和以不同培养液培养的Hep G2细胞染毒,在24 h时间点以MTT方法对细胞存活情况进行分析,计算LC50,比较各种细胞和不同培养条件下Hep G2细胞对CP的代谢活化水平,并观察不同培养条件下Hep G2细胞的生长状态.结果:MTT试验结果表明Hep G2细胞对CP的代谢能力强,CHL细胞次之,而3T3细胞对CP的代谢能力弱;3种不同培养液培养的Hep G2细胞无论染毒液是含血清的还是不含血清的均观察到CP对细胞的LC50:MEM＞DMEM＞RPMI 1640,Hep G2细胞在DMEM、RPMI 1640两种培养液中生长状态均良好,尤其是RPMI 1640培养的Hep G2细胞,在无血清的染毒液培养下既能获得较多的细胞又能表现出较强的代谢CP的能力.结论:Hep G2细胞对CP的代谢活化能力较CHL和3T3细胞强,以RPMI 1640培养的Hep G2细胞生长状态良好且较DMEM和MEM培养的细胞表现出更强的代谢活化CP的能力,能获得较理想的培养和试验结果.
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黄连素对人肝癌Hep G2细胞周期及凋亡的影响
目的:观察黄连素对人肝癌细胞Hep G2生长的影响及其可能机制.方法:将浓度分别为0,25,50,100,200μmol/L的黄连素与人肝癌细胞Hep G2共间培养24,48,72 h,用RSB法检测黄连素对人肝癌细胞HepG2生长的抑制率;用流式细胞分析仪分析细胞周期的变化、检测细胞凋亡率及Caspase-3、CyclinBl、CDC2、CDK4蛋白的表达.结果:黄连素对人肝癌细胞Hep Gz生长抑制率随药物浓度和作用时间的增加而增大;流式细胞仪分析显示黄连素将人肝癌细胞Hep Gz阻滞于S、G2/M期.黄连素作用48 h后人肝癌细胞Hep G2凋亡率明显增加,且随药物浓度的增加而加大.黄连素作用48 h后Hep G2细胞的Caspase-3、CDC2蛋白表达增加;而CDK4、CyclinBl蛋白表达降低.结论:黄连素可能通过增加Hep G2细胞CDC2蛋白表达,降低CDK4、CyclinBl蛋白表达使其阻滞于S、G2/M期;可能通过增加Caspase-3蛋白表达增加Hep G2细胞凋亡.
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3种中药制剂对Hep G2细胞增殖的抑制作用的实验研究
目的:探讨3种中药制剂肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯对Hep G2细胞增殖的抑制作用.方法:长满单层的对数生长期HepG2细胞,分别加入用DMEM完全培养基进行连续二倍稀释的中药复方肝复乐,以及黄芪注射液、β-榄香烯注射液,并设环磷酰胺药物对照与细胞空白对照,于37℃5％CO2分别培养48 h,采用MTr法测药物对Hep G2细胞的增殖、生长的抑制作用.结果:肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯对Hep G2细胞有明显的抑制作用,与空白对照组及环磷酰胺比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);3种中药对Hep G2细胞增殖的半数抑制率(IC50)分别为27.0 mg/mL、1.30 mg/mL、4.03 mg/mL.结论:肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯具有抑制Hep G2细胞增殖的作用,可为临床应用继续进行机理探讨.
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体外遗传毒性评价方法的新动向
环境化学物遗传毒性评价的总体策略仍是以体外试验为主,以有限的体内试验为补充.体外试验方法在未来的评价体系中仍占有相当重要的地位.目前欧洲为主的各国学者研究开发以有代谢能力的人肝肿瘤细胞系Hep G2为指示细胞的体微核和单细胞凝胶电泳等体外试验,在实际应用中已证明对提高短期体外评价的速度和有效性很有成效;毒理基因组的研究更为环境化学物遗传毒性体外评价体系提供了发展的方向,虽不能很快应用到实践中去,但已引起了广泛的关注.
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鲜壁虎醇提物与水提物体内、外对肿瘤活性的影响
目的:研究鲜壁虎水提物与醇提物体内、外的抗肿瘤活性.方法:体外采取MTT法测定鲜壁虎水提物、醇提物对BEL-7402细胞和Hep G2细胞生长的抑制作用.体内复制移植瘤小鼠H22模型,给药后计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数.结果:0.062 5 mg·mL-1壁虎水提物对Hep G2细胞生长有显著抑制作用(P＜0.05),1.000 0、0.250 0、0.062 5 mg·mL-1壁虎水提物对BEL-7402细胞的生长均有显著抑制作用(P＜0.05).1.000 0、0.250 0、0.062 5 mg·mL-1壁虎醇提物对2种细胞有促进增殖的趋势.1.000 0、0.250 0、0.062 5 mg·mL-1壁虎水提物与1.000 0、0.062 5 mg·mL-1壁虎醇提物均可显著抑制H22荷瘤小鼠肿瘤生长活性(P＜0.05).结论:鲜壁虎水提物体外有抑制肿瘤细胞生长的作用,醇提物有促进细胞增殖的趋势.鲜壁虎水提物、醇提物体内均有抗肿瘤活性,水提物抑瘤率高于醇提物.
关键词： 壁虎 抗肿瘤 Hep G2细胞 Bel-7402细胞 H22细胞
