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阿特拉津对大鼠支持细胞凋亡的影响
目的 探讨阿特拉津对雄性SD大鼠睾丸支持细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 选用18 ～21日龄雄性SD大鼠,建立支持细胞原代培养模型.设溶剂对照组和阿特拉津10、50、100和200 μmol/L 4个染毒剂量组,对支持细胞染毒24 h后,采用MTT法检测细胞活性,免疫荧光法观察波形蛋白的表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,Real time-PCR与ELISA分别检测FasL、caspase-3与caspase-8的mRNA表达及蛋白含量.结果 阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞活力分别为82.47％、75.23％和53.76％,与溶剂对照组比较分别降低17.53％ (P ＜0.05)、24.77％ (P ＜0.05)、46.24％ (P ＜0.01).波形蛋白表达受抑制.阿特拉津50、100和200 μmol/L染毒组细胞凋亡率分别为8.53％、13.07％和14.45％,与溶剂对照组比较分别升高86.86％ (P ＜0.01)、186.13％ (P ＜0.01)、216.06％ (P ＜0.01).FasL、caspase-3、caspase-8的mRNA表达及蛋白含量上调(P＜0.05或P＜0.01).结论 阿特拉津可影响大鼠支持细胞活性,可通过FasL途径诱导支持细胞凋亡.
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米非司酮对大鼠增生型子宫内膜中Fas/FasL表达的影响
目的:观察米非司酮对大鼠增生型子宫内膜中Fas和FasL表达的影响,探讨其治疗功能性子宫增生症的作用机制.方法:45只SD大鼠,随机抽取15只作为正常组,另外30只采取“雌激素负荷法”建立大鼠子宫内膜增生模型.将建模后的大鼠随机分为米非司酮组15只,予米非司酮混悬液灌胃4周;模型组15只,等容量生理盐水灌胃4周.采用免疫组化S-P法检测各组大鼠子宫内膜中Fas和FasL的表达水平.结果:模型组大鼠子宫内膜中Fas蛋白表达的灰度值(146.90±24.12)高于正常组(116.63±16.94)(P＜0.01);米非司酮组与正常组比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠子宫内膜中FasL蛋白表达的灰度值(122.77±28.10)低于正常组(149.75±29.53)(P＜0.01);米非司酮组FasL蛋白表达的灰度值(132.50±27.97)较模型组高,较正常组低,但与两者比较均无统计学意义(P均＞0.05).结论:Fas蛋白表达降低和FasL蛋白表达升高所介导的细胞凋亡异常,可能是子宫内膜增生过长的发病机制之一.米非司酮治疗子宫内膜增生的机理之一可能是通过恢复宫内膜腺上皮细胞凋亡平衡,抑制内膜腺上皮增生,终达到治疗目的.
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Fas/FasL在肺腺癌患者局部与全身免疫反应中的作用
目的:探讨Fas及其配体FasL在肺腺癌患者肿瘤局部与全身免疫反应中的作用及临床意义.方法:用流式细胞仪肺腺癌(FCM)对39例肺腺癌患者外周血淋巴细胞(PBL)及肿瘤浸润细胞(TIL)的Fas表达进行定性定量分析,以38例正常人的PBL作对照.结果:肺腺癌患者TIL上Fas分子的表达率为16.8%,肺腺癌患者PBL上Fas分子的表达率为8.0%,正常人PBL上Fas分子的表达率为12.6%,前者表达率明显高于后两者(P＜0.05);肺腺癌患者PBL的Fas分子表达明显低于对照组正常人PBL(P＜0.05).结论:Fas分子在肺腺癌患者PBL与TIL中的表达不同:Fas不仅在肿瘤微环境的局部浸润区域,而且在全身水平参与了免疫系统与肿瘤之间的相互作用.
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习惯性流产胎盘滋养细胞凋亡及Fas、FasL的表达
习惯性流产是指连续发生2次或2次以上的自然流产,发生率约1%[1].近代生殖免疫研究表明,习惯性流产的病因除染色体、解剖和内分泌异常外,约50%～60%与免疫有关.
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化痰散结方对人肺癌细胞Fas和FasL表达的影响
目的观察化痰散结方含药血清,对人肺癌SPC-A1细胞Fas和FasL的表达的影响.方法通过血清药理学方法,选择不同浓度的含化痰散结方的兔血清,与人肺癌细胞SPC-A1共同孵育不同时间后,应用倒置相差显微镜和荧光显微镜对细胞生长和凋亡状况进行形态学观察,应用SABC法检测SPC-A1细胞Fas和FasL的表达.结果人肺癌细胞经含化痰散结方的兔血清作用后,由贴壁生长而逐渐脱落,外形变圆,体积缩小,折光性增加;荧光镜下可见细胞核破碎、裂解为大小不等的凋亡小体;SABC法显示,化痰散结方含药血清可上调SPC-A1细胞Fas(P＜0.01),而且可下调SPC-A1细胞FasL的表达(P＜0.05).结论化痰散结方含药血清可诱导人肺癌细胞凋亡,其机制可能与上调SPC-A1细胞Fas和下调其FasL有关.
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黄芩茎叶总黄酮预处理对脑缺血再灌注大鼠海马Fas,FasL的表达和抗氧化能力的影响
目的:探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalensis stem-leave total flavonoid,SSTF)预处理对局灶性脑缺血再灌注(I/R)大鼠海马的保护作用及其机制.方法:60只SD大鼠随机分为3组,假手术组、缺血再灌注组和SSTF预处理组.SSTF预处理组术前1周给予SSTF 100 mg·kg-1·d-1,其余两组给等量PBS.各组大鼠分别灌胃给药1周后,采用线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2h再灌注24 h后观察海马区病理形态学改变及神经元密度,检测海马Fas,FasL蛋白的表达和海马组织中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性的改变.结果:SSTF预处理可减轻损伤海马组织的病理学改变,使存活的神经元增加(180±13.2).与I/R组比较,SSTF预处理组海马Fas,FasL阳性细胞明显减少(分别为13.26±3.18,19.08±2.76).SSTF预处理可降低缺血再灌注引起的海马组织MDA含量增加(P＜0.05),提高GSH-Px,LDH酶活性(P＜0.01).结论:SSTF预处理对I/R损伤海马具有保护作用.其作用机制可能与下调Fas,FasL表达和提高I/R大鼠海马组织抗氧化能力有关.
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补中益气汤对甲状腺功能减退大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3蛋白表达的影响
目的:研究补中益气汤对甲状腺功能减退(甲减)大鼠心肌细胞凋亡及Fas,FasL和Caspase-3蛋白表达的影响.方法:采用Kolaja法制备大鼠甲状腺功能减退模型.健康Wistar大鼠120只随机分成正常对照组、模型组、补中益气汤组(18.9 g·kg-1)、左旋甲状腺素钠L-T4组(9.45μg·kg-1),各组灌胃给药56 d.光镜和电镜下观察心肌形态学和超微结构变化,TUNEL法检测心肌凋亡细胞,免疫组化检测凋亡相关基因蛋白Fas,FasL,Caspase-3的表达,ELISA法测定血清促甲状腺激素(TSH),放射免疫分析法测定血清总三碘甲状腺原氨酸(Tr3)及总甲状腺素(TT4).结果:与正常组相比,模型组心肌细胞凋亡指数及Fas,FasL,Caspase-3的表达均达高峰,心肌细胞结构损伤严重,经治疗后补中益气汤组(12.10±0.73)和L-T4组(29.26±2.10)的心肌细胞凋亡指数降低,Fas,FasL及Caspase-3的阳性表达均下降,且补中益气汤组的疗效优于L-T4组(P＜0.05).结论:甲减引起心肌细胞凋亡增多,Fas,FasL,Caspase-3表达升高,而补中益气汤可明显降低心肌细胞凋亡指数,下调Fas,FasL及Caspase-3的表达,说明补中益气汤对甲减的心肌损害有干预保护作用.
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清肺口服液对3I、7b型腺病毒感染人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达的影响
目的:探讨清肺口服液含药血清对腺病毒3I、7b感染的人胚肺成纤维细胞Fas、FasL表达的影响.方法:细胞分为正常细胞组、病毒对照组、空白血清组、利巴韦林组和含药血清组,除正常细胞组外,其余4组均以3I、7b型腺病毒分别攻击,并分别加入相应药物至各组细胞中;用流式细胞仪检测比较各组细胞Fas、FasL蛋白的表达.结果:病毒对照组较正常细胞组细胞中Fas、FasL表达升高,含药血清组比病毒对照组细胞Fas、FasL表达降低.结论:腺病毒感染可使人胚肺成纤维细胞Fas、FasL蛋白表达增高;清肺口服液可降低Fas、FasL蛋白表达,从而抑制由腺病毒引发的细胞凋亡,这可能是其抗病毒作用的机制之一.
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参附注射液对实验性心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡干预作用的研究
目的:研究参附注射液对心力衰竭大鼠心肌凋亡和凋亡相关蛋白的影响.方法:45只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和治疗组,采用左冠状动脉结扎法建立心力衰竭模型.对照组和模型组给予0.9％氯化钠溶液、参附组给予腹腔注射参附注射液(6.2mL·kg1 ·d-1,4周).采用TUNEL和免疫组化检测心肌凋亡和相关蛋白.结果:共有38只大鼠存活.对照组(n=14)未见心肌凋亡,模型组(n=13)凋亡数量增加,而参附组(n=11)凋亡数量明显减少,与模型组比较差异具有显著性(P＜0.01).与对照组相比,模型组Bax、Bcl-2、Fas和FasL蛋白表达增加(P＜0.05)；与模型组相比,治疗组Bax、Fas和FasL蛋白表达显著下降(P＜0.01).结论:参附注射液能够抑制实验性心力衰竭大鼠心肌凋亡,其作用机制与下调促凋亡基因Bax、Fas和FasL表达的作用相关.
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补肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病大鼠骨骼肌Fas/FasL/Caspase-3的影响
目的:观察补肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌Fas/FasL/Caspase-3的影响.方法:SD大鼠48只随机分为对照组、模型组、补肺健脾组和氨茶碱组,每组12只.采用香烟熏吸联合细菌反复感染法制备COPD稳定期大鼠模型.自第9周起,对照组和模型组均给予0.9％氯化钠溶液灌胃,其余2组分别给予补肺健脾方及氨茶碱治疗,第20周结束时取材.采用TUNEL技术检测股四头肌、肋间肌、肱二头肌和比目鱼肌4种骨骼肌的细胞凋亡率;采用荧光定量PCR技术和Western blot技术观察4种骨骼肌Fas、FasL和Caspase-3 mRNA和蛋白表达.结果:模型组4种肌肉细胞凋亡率和Fas、FasL、Caspase-3表达均较对照组显著升高(P＜0.01),补肺健脾方和氨茶碱均可显著改善上述指标(P＜0.05,P＜0.01).结论:补肺健脾方可以显著改善COPD大鼠骨骼肌凋亡,降低Fas、FasL和Caspase-3 mRNA和蛋白表达.
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电针“委中”对腰椎间盘退变模型大鼠椎间盘组织 Fas和FasL表达的影响
目的：观察电针“委中”对腰椎间盘退变模型大鼠椎间盘组织Fas、FasL表达的影响，探讨其作用机制。方法30只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组，每组10只。假手术组仅手术切开皮肤，模型组和电针组通过纤维环穿刺法建立大鼠腰椎间盘退变模型。成模4周后，假手术组和模型组行等条件固定处理，电针组电针“委中”治疗，20 min/次，每日1次，连续4周。治疗结束后，Western blot、RT-PCR检测Fas、FasL的蛋白和mRNA表达。结果模型组Fas、FasL蛋白和mRNA表达较假手术组明显升高（P＜0.05），电针组 Fas、FasL 蛋白和 mRNA 表达较模型组明显降低（P＜0.05）。结论电针“委中”可降低 Fas、FasL的表达，起到抑制腰椎间盘退变的作用。
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四神丸对实验性结肠炎结肠组织Bax/Bcl-2mRNA,Fas/FasL的调控作用
目的:评价四神丸灌肠给药治疗实验性结肠炎疗效的同时,探讨其对结肠炎结肠黏膜Fas/FasL,Bax/Bcl-2 mRNA的调控作用.方法:三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid,TNBS)/乙醇法复制实验性结肠炎,实验动物随机分成正常组、模型组、四神丸高、中、低剂量组(10,5,2.5 g· kg-1)及柳氮磺吡啶(salicylazosulfapyridine,SASP,30 mg·kg-1)组,灌肠给药10d后,通过体重、结肠湿重、结肠质量指数、病理损伤评分及形态学分析评价其疗效,同时分别采用流式细胞术和RT-PCT技术检测大鼠结肠组织Fas/FasL水平和Bax/Bcl-2 mRNA表达.结果:与模型组比较,四神丸中剂量组可明显降低结肠湿重及结肠指数(P＜0.05),且3个剂量组均可明显降低病理损伤评分(P＜0.05),同时典型治疗组病理切片分析可见上皮修复,黏膜下纤维结缔组织增生,溃疡浅而小,少量淋巴滤泡增生和炎细胞浸润,而且3个剂量组均可显著降低Fas在结肠黏膜表达(P＜0.05),升高Bcl-2/Bax(P ＜0.05).结论:四神丸灌肠给药有效治疗溃疡性结肠炎的作用机制之一可能是通过调控结肠组织Fas/FasL,Bax/Bcl-2 mRNA表达,延缓结肠上皮细胞凋亡或促进炎细胞凋亡实现的.
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豆根管食通口服液对食管癌模型大鼠细胞凋亡及免疫逃逸的影响
目的 观察豆根管食通口服液对食管癌模型大鼠细胞凋亡及免疫逃逸的影响,从分子生物学角度分析其作用机制.方法 健康Wistar大鼠随机选择15只为空白组,其余大鼠均腹部皮下注射甲基戊基亚硝胺5mg/kg建立食管癌模型大鼠,将造模成功的75只大鼠随机分为模型组、高剂量组、中剂量组、低剂量组、替加氟组各15只,低、中、高剂量组分别按5g/kg、10g/kg、15g/kg给予豆根管食通口服液,空白组、模型组给等予容积生理盐水,替加氟组给予替加氟片20mg/kg,各组均于造模成功24h后灌胃给药,每日1次,连续4周.末次给药24h后取瘤检测,原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组织化学法检测Fas、FasL蛋白表达.结果 高、中、低剂量组及替加氟组食管癌细胞的凋亡指数与空白组、模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),并且高剂量组明显优于替加氟组、低剂量组(P＜0.05).模型组Fas蛋白表达阳性率低于空白组、FasL蛋白表达高于空白组(P＜0.05或P＜0.01)；各治疗组Fas蛋白表达阳性率均高于模型组(P＜0.05),高剂量组Fas蛋白表达阳性率高于替加氟组和低剂量组(P＜0.05)；高、中、低剂量组FasL蛋白表达阳性率明显低于模型组(P＜0.05或P＜0.01).结论 豆根管食通口服液能促进模型大鼠食管癌细胞凋亡,其作用机制可能与其提高Fas表达、降低FasL表达有关,并且存在一定的量效关系,高剂量的豆根管食通口服液作用优于替加氟片.
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益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜Fas、FasL蛋白表达的影响
目的 探讨益气明目丸治疗视网膜色素变性的可能作用机制.方法 24只RCS大鼠随机分为空白组、模型组、益气明目丸组,每组8只.空白组RCS(rdy+/+,p+/+)大鼠(无视网膜色素变性)和模型组RCS(rdy-/,p-/-)大鼠(视网膜色素变性模型)均灌胃生理盐水12ml/(kg·d),益气明目丸组RCS(rdy-/,p-/-)大鼠灌胃益气明目丸悬浊溶液7.8g/(kg·d).灌胃30天后,HE染色观察各组大鼠视网膜各层结构,采用免疫组化法和Western blot法检测各组大鼠视网膜中Fas、FasL蛋白表达.结果 HE染色显示,益气明目丸组大鼠视网膜厚度明显较模型组大鼠视网膜增厚,视网膜色素上皮条带部分可见,部分外核层光感受器感觉纤毛层部分可见,光感受器细胞核数目较模型组多,外从状层、外核层、视杆视锥层较模型组结构清晰且增厚.免疫组化法结果显示,与空白组比较,模型组Fas、FasL蛋白表达均明显升高(P＜0.01);与模型组比较,益气明目丸组Fas、FasL蛋白表达均明显下降(P＜0.05或P＜0.01),且与空白组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).Western blot法结果显示,与空白组比较,模型组Fas、FasL蛋白表达均明显升高(P＜0.01);与模型组比较,益气明目丸组Fas蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05),FasL蛋白表达明显降低,但仍高于空白组(P＜0.01).结论 益气明目丸对视网膜色素变性大鼠视网膜的超微结构具有保护作用,其机制可能是通过抑制视网膜Fas、FasL蛋白表达,从而减轻视网膜感光细胞的凋亡,达到保护视细胞的目的.
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超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体表达的影响
为了探讨超抗原SEB对CD8+T细胞凋亡诱导配体在细胞胞内和膜表面表达的影响,以SEB及PHA刺激PBMC,用免疫荧光染色结合三色流式细胞术,分析比较刺激前后PBMC中CD8+T细胞三种主要的凋亡诱导配体TRAIL、FasL和TNF-α在细胞胞内和膜表面表达的变化.结果表明,SEB上调FasL在CD8+T细胞胞内(34.8%至42.5%)和TRAIL在CD8+T细胞膜表面(7%至20.7%)的表达,SEB还可同时上调TNF-α在CD8+T细胞膜表面(7%至45.7%)及胞内(23.9%至88.7%)的表达.说明SEB能上调不同凋亡诱导配体在CD8+T细胞膜表面或胞内的表达,这可能是SEB影响CD8+T细胞效应功能的方式之一.
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自发1型糖尿病小鼠细胞因子变化及β细胞凋亡
研究自发的1型糖尿病雌鼠模型(NOD)在自然状态下发生糖尿病过程中β细胞凋亡及细胞因子TNF-α、IFN-γ,诱生型NO合酶(iNOS)和Fas、FasL在不同周龄的表达.HE法检测胰岛炎,免疫组化法检测各种抗体的表达,TUNEL法检测凋亡细胞,半定量法对胰岛炎评分并计数凋亡的β细胞和各种抗体阳性细胞率,分析其相关性.凋亡细胞两个峰值出现在3周和32周,与周龄无关,与胰岛炎及血糖均相关.Fas+细胞97.3%为胰岛细胞.FasL表达于胰岛细胞和浸润的单核细胞,在发病小鼠单核细胞上阳性率增高,FasL与血糖相关.IFN-γ、TNF-α的表达与周龄相关.IFN-γ在晚期而TNF-α持续起作用,但在幼鼠与成鼠不同.两种细胞因子相关.iNOS与周龄、胰岛炎及血糖均相关.β细胞主要以凋亡方式死亡,凋亡是多因素作用的结果.Fas-FasL、NO和IFN-γ、TNF-α可能独自起作用;后两者作用于不同阶段.
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FasL N-端编码序列对其表达的影响
目的探讨Fas配体(Fas ligand, FasL)胞内区氨基酸组成对膜型FasL蛋白表达的影响.方法 PCR技术扩增FasL胞内区产生不同缺失的cDNA,构建重组表达质粒;使用脂质体转染法将表达质粒导入靶细胞;RT-PCR分析FasL mRNA水平;荧光抗体染色、流式细胞仪和Western免疫印迹技术检测细胞中FasL蛋白的表达.结果 FasL N-端缺失第2～16氨基酸残基后,FasL蛋白在细胞中的表达水平显著增加,但mRNA水平不变.结论 FasL N-端第2～16氨基酸残基对FasL蛋白表达水平具有自我调节作用.
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转染反义Fas阻断T细胞凋亡及对肿瘤的治疗意义
目的通过阻断T细胞的Fas信号传递途径,探讨消除肿瘤对T细胞的攻击及其对肿瘤的治疗意义.方法流式细胞术、RT-PCR方法检测卵巢癌细胞表达Fas和FasL.构建pcDNA3-反义Fas真核表达载体,经脂质体转染Jurkat细胞,流式细胞仪检测Fas表达变化.以Annexin-V和MTT法检测转染反义Fas基因对Jurkat细胞凋亡的影响.采用MTT体外杀伤实验观察3AO对Jurkat细胞杀伤变化.结果6种卵巢癌细胞均表达Fas和FasL.pcDNA3-反义Fas基因可以使Jurkat细胞表达Fas量下降并部分阻断Fas单抗诱导的Jurkat细胞凋亡,3AO对其杀伤减弱.结论卵巢癌细胞表达FasL可能是其逃逸免疫监视并产生对淋巴细胞攻击的原因之一;应用反义技术阻断Fas表达,可部分阻断Fas单抗诱导Jurkat细胞凋亡,可削弱肿瘤细胞对淋巴细胞的攻击.
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Fas、FasL蛋白在肺癌组织中的表达及临床意义
目的 探讨Fas、FasL蛋白在肺癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测89例原发性肺癌组织、12例淋巴结转移性肺癌组织、12例肺癌癌前病变组织和10例正常肺组织中Fas、FasL蛋白表达情况.分析各指标间相关性及其与肺癌临床病理参数的关系.结果 与对照组比较,Fas和FasL在其他3组中表达差异显著(P＜0.05).Fas在肺癌细胞中主要分布于细胞质,而正常肺组织主要表达于细胞膜,Fas在非小细胞肺癌(NSCLC)中的阳性率高于小细胞肺癌(SCLC)(P＜0.05),FasL与肺癌的临床分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),Fas与FasL呈负相关(P＜0.05).结论 Fas、FasL蛋白的异常表达在肺癌的恶性发展中起重要作用,二者在肺癌的发生、发展、侵袭转移中起协同作用.
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感染日本血吸虫小鼠CD4+和CD8+T细胞中Fas及FasL的表达研究
目的 探讨在日本血吸虫感染过程中，宿主CD4+和CD8+T细胞 中死亡受体（Fas）及死亡配体（Fas ligand， Fas L）的表达情况。 方法 利用免疫组化的方法检测在日本血吸虫感染过程中，Fas和FasL在CD4+和CD8+T 细胞中的表达。 结果 在日本血吸虫感染过程中，Fas和FasL在CD4+ 和CD8+T细胞的表达随感染时间的延长而升高，但感染10 wk后，FasL在CD4+T细胞 的表达接近并超过Fas的表达。 结论 在日本血吸虫感染过程中，CD4 +T细胞凋亡比率超过CD8+ T细胞和CD4+/CD8+ T细胞比值下降与相关蛋 白Fas、FasL的表达有关。
