自身免疫性肝炎和原发性胆汁性肝硬化患者肝组织和外周血单个核细胞Fas及FasL的检测

目的 观察自身免疫性肝炎(AIH)和原发性胆汁性肝硬化(PBC)患者肝组织和外周血单个核细胞(PBMC)Fas、FasL的表达,探讨细胞凋亡在自身免疫性肝病(AILD)发病机制中的作用.方法 采用免疫组织化学技术对10例AIH、20例PBC患者肝组织和PBMC中Fas、FasL进行检测,正常对照为10例健康献血者.结果 AIH 患者PBMC中Fas、FasL检出率分别为100%和90%, Fas、FasL平均阳性细胞率分别为78%和65%;PBC患者PBMC中Fas、FasL检出率均为90%,平均阳性细胞率分别为62%和59%.在肝组织中Fas、FasL表达于肝细胞和淋巴细胞:9例AIH Fas阳性颗粒见于肝细胞浆,其中1例胞膜、胞浆同时阳性;8例FasL阳性颗粒表达于肝细胞浆;Fas、FasL阳性肝细胞多聚集于汇管区周围.同时在汇管区周围浸润的淋巴细胞中也可见Fas或FasL的阳性表达.17例PBC患者Fas阳性颗粒表达于肝细胞浆,其中4例胞膜、胞浆同时阳性;16例PBC FasL阳性,见于肝细胞浆,在肝组织中浸润的淋巴细胞浆中Fas、FasL均有表达.AIH和PBC患者Fas、FasL表达显著高于正常对照.结论 AIH和PBC患者的Fas、FasL表达增加,细胞凋亡可能在AIH和PBC的发病机制中起重要作用.

FasL基因表达对结直肠癌细胞肝转移影响的研究

目的探讨FasL基因表达对结直肠癌细胞生物学行为的影响及在肝转移中的作用.方法采用RT-PCR方法检测大肠癌原发灶、癌旁肠黏膜、肝转移灶中FasL基因表达.用细胞转染方法,将FasL cDNA转染人直肠癌细胞HR-8348,采用四唑蓝法观测FasL表达对癌细胞生长抑制率及对5-FU、卡铂杀伤作用的影响. 结果结直肠癌原发灶(58例)、癌旁肠黏膜(58例)、肝转移灶(28例)中FasL基因表达阳性率分别为24%(14/58)、14%(8/58)、100%(28/28).肝转移灶中FasL表达阳性率高于癌原发灶(χ2=43.49, P<0.01)和癌旁肠黏膜组织(χ2=57.66, P<0.01).肝转移组原发灶FasL表达阳性率高于无肝转移组(χ2=3.96,P<0.05).转染HR-8348细胞FasL表达为阳性.用5-FU、卡铂杀伤FasL转染细胞和未转染细胞,2组癌细胞生长抑制率有显著性差异(t=9.02、t=11.93,P<0.01).在相同化疗药物浓度下,FasL阳性HR-8348细胞存活率高于对照组癌细胞. 结论 FasL阳性癌细胞对化疗药物有较强的耐受性.FasL基因表达能使癌细胞逃避免疫监视和杀伤并对化疗药物产生抗性,促进结直肠癌发生肝转移.

金属硫蛋白和FasL在大肠癌组织中表达及临床意义的研究

目的探讨金属硫蛋白(MT)和FasL表达与大肠癌淋巴结及肝转移的关系.方法采用免疫组化和定量RT-PCR方法检测93例大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶MT、FasL表达.结果大肠癌原发灶、正常结肠黏膜、转移淋巴结和肝转移灶中MT表达阳性率分别为:58.1%、32.3%、81.1%、64.3%.FasL表达阳性率分别为:41.9%、19.4%、62.3%、92.9%.癌原发灶、肝转移灶和转移淋巴结中MT、FasL表达阳性率高于正常肠黏膜组织(χ2=35.2421、57.5152, P<0.01).转移淋巴结MT表达阳性率高于癌原发灶(χ2=8.0565,P<0.01).肝转移灶FasL表达阳性率高于转移淋巴结和癌原发灶(χ2=8.6674、22.4455,P<0.01).Dukes′C、D期MT、FasL表达阳性率高于Dukes′A、B期(χ2=18.8871、25.1650,P<0.01).低分化腺癌和黏液腺癌MT、FasL表达阳性率高于高分化和中分化腺癌(χ2=11.1546、9.2239,P<0.05).转移淋巴结中MT mRNA表达高于FasL mRNA表达.肝转移灶中FasL mRNA表达水平高于MT mRNA表达.结论 MT、FasL增强表达与大肠癌淋巴结转移和肝转移有关,检测MT、FasL表达可作为大肠癌预后评价指标.

Fas/FasL在各阶段婴幼儿血管瘤中的表达及意义

目的检测Fas/FasL在各阶段婴幼儿血管瘤组织中的表达,探讨Fas/FasL在婴幼儿血管瘤细胞凋亡中的作用.方法应用EnVision法免疫组化染色和RT-PCR检测Fas/FasL蛋白及mRNA在各阶段血管瘤组织中的表达.结果①增生早期和增生中期,部分血管瘤细胞表达Fas;增生晚期,阳性细胞明显增多,Fas mRNA表达强;消退早期,仍有少量微血管内皮细胞表达Fas,之后Fas表达迅速减弱.②早期细胞团中没有FasL(+)细胞;增生中期,血管瘤组织中出现少量FasL(+)细胞;增生晚期FasL(+)细胞显著增多,FasL mRNA表达强;消退早期之后,FasL(+)细胞迅速减少以至消失.结论Fas/FasL与婴幼儿血管瘤演变过程有密切联系,Fas/FasL介导的血管瘤细胞凋亡可能是婴幼儿血管瘤自行消退的重要原因.

复发性流产患者滋养细胞及蜕膜凋亡因子Fas、FasL表达的研究

目的通过检测凋亡调控因子Fas、FasL在复发性流产(RSA)患者胎盘绒毛滋养细胞以及蜕膜中的表达情况,以探讨RSA的免疫发病机制.方法采用免疫组化SP方法以及流式细胞仪技术测定20例RSA患者、16例正常妊娠妇女胎盘绒毛FasL表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达情况.结果① RSA组患者胎盘绒毛滋养细胞FasL的表达以及蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原的表达情况均低于正常妊娠组,差异有显著性(P<0.05);②胎盘绒毛FasL的表达与蜕膜中CD3(+)T淋巴细胞Fas抗原表达无相关性(P>0.05).结论 RSA的发生可能与绒毛滋养细胞表面FasL表达减少,以及蜕膜中Fas(+)T淋巴细胞凋亡减少有关.

小儿病毒性心肌炎与Fas/Fasl介导的外周血淋巴细胞凋亡的关系

目的 探讨Fas/Fasl介导的外周血淋巴细胞凋亡在病毒性心肌炎发病中的作用.方法 选择临床诊断病毒性心肌炎患儿和正常小儿各25例,采用Annexin V/PI双参数法经流式细胞仪定量检测两组小儿外周血淋巴细胞凋亡百分率,并用双色流式细胞仪检测外周血淋巴细胞Fas、Fasl蛋白表达结果心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡率[(0.697 6±0.110 9)%]较正常对照组[(0.128 8±0.106 9)%]明显升高(t=18.459,P＜0.001),且与肌酸激酶同工酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、羟丁酸脱氢酶升高程度均呈正相关(r=0.817,P＜0.01;r=0.785,P＜0.01;r=0.726,P＜0.01;r=0.712,P＜0.01);心肌炎患儿外周血淋巴细胞Fas、Fasl蛋白表达[(2.8804±0.3020)、(4.4496±0.4836)]较对照组[(2.1300±0.6200)、(0.123 8±0.0384)]明显增加(t=17.321,P＜0.001;t'=44.577,P＜0.001);心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡百分率与 Fas、Fasl蛋白表达均呈正相关(r=0.972,P＜0.01;r=0.958,P＜0.01)结论病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡增加,可能为细胞免疫功能下降的原因之一,且与心肌损害程度相关 Fas、Fasl基因在病毒性心肌炎患儿外周血淋巴细胞凋亡中起着重要作用.

结直肠癌组织FasL与患者血清sFas表达与术后肝转移的相关性分析

34),两组差异有统计学意义,P＝0 003.结论:结直肠癌患者血清sFas和组织FasL表达可能与结直肠癌术后肝转移呈正相关.

正常乳腺及乳腺癌中Fas与FasL的表达及意义

目的:了解凋亡相关基因 Fas、FasL 在正常乳腺组织、原位癌、浸润性癌中的表达,分析其在乳腺癌的发生、发展中的作用.方法:利用免疫组化 S-P 法检测64例乳腺癌及30例正常乳腺组织 Fas、FasL的表达.结果:正常乳腺上皮、原位癌、浸润性癌中 Fas、FasL 蛋白表达阳性率分别为33.33%、57.89%、77.78%和0、100%、100%.结论:(1)Fas 蛋白的表达与乳腺癌的恶性进展相平行,提示 Fas 可能成为一个有意义的预后指标.(2) FasL 蛋白的异常表达可能参与了乳腺癌的发生,并与乳腺癌的浸润和转移有关.

Objective:The Fas and Fas ligand (FasL) play an important role in maintaining immune privilege on malignant tumors. In present study, we investigated the expression of FasL in SW480 and LS174 human colon carcinoma cell lines and twenty primary colon carcinoma specimens. Methods: The expression of FasL in human colon carcinoma cell lines and primary colon carcinomas specimens was detected by immunohistochemistry and Reverse Transcription-PCR (RT-PCR). Results: We found that all of detected human colon carcinoma cell lines and primary colon carcinoma specimens constitutively expressed FasL at the mRNA and protein level. However, the expression of FasL was not found in normal colon epithelial cells. Conclusion: The expression of FasL may occur during malignant transformation from normal colon epithelial cells to colon carcinoma cells. Our results suggest that tumor cells kill cytotoxic T lymphocytes (CTLS) and natural killer (NK) cells by expression of FasL. It may be a new mechanism for tumor cells to escape the host's immune surveillance. The expression of FasL may contribute to the formation of colon carcinomas.

Hsp70、Fas和FasL在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨Hsp70、Fas和FasL在乳腺癌中的表达及其在乳腺癌发生发展中的作用.方法用免疫组织化学和Western blot法检测30例乳腺癌标本中Hsp70、Fas和FasL的表达,流式细胞术检测乳腺癌细胞DNA指数(DNA index,DI)和凋亡指数(apoptosis index,AI).结果 Hsp70、Fas和FasL在乳腺癌、癌旁乳腺组织中阳性率分别为93.3%和60.0%、53.3%和96.7%、93.3%和63.3%,各组差异有显著性.Fas在乳腺癌中呈低表达,在癌旁乳腺组织中呈高表达;而Hsp70和FasL在乳腺癌中呈高表达,在癌旁乳腺组织中呈低表达.乳腺癌、癌旁乳腺组织DI分别为1.29±0.16和0.99±0.44(t＝9.974,P=0.000);AI分别为7.23±0.55和9.99±0.52(t=11.56,P=0.000),差异有显著性.结论在乳腺癌中Fas呈低表达,Hsp70和FasL呈高表达;乳腺癌凋亡程度显著低于癌旁组织;Fas下调、Hsp70及FasL上调可能促进乳腺癌的发生发展.

局部中晚期宫颈癌新辅助化疗对凋亡细胞因子Fas/FasL表达水平影响分析

目的:考察局部中晚期宫颈癌新辅助化疗对凋亡细胞因子Fas/FasL表达水平影响.方法:将50例宫颈癌患者随机分为观察组和对照组,每组25例.比较两组患者手术病理情况、治疗前后Fas/FasL表达水平和生存期.结果:观察组患者淋巴结转移、脉管受累和宫颈深层间质浸润发生率显著低于对照组(x2=3.947,x2 =5.094,x2 =7.219,P＜0.05,P＜0.01).两组患者治疗前Fas/FasL表达水平差异无统计学意义(P＞0.05).治疗后观察组患者Fas表达水平显著升高、FasL表达水平显著降低(P＜0.05).观察组患者5年生存率显著高于对照组(x2=3.947,P＜0.05).结论:局部中晚期宫颈癌新辅助化疗对凋亡细胞因子Fas/FasL表达水平具有显著影响可能是影响患者预后的原因之一.

银屑病皮损中基质金属蛋白酶2、Fas和FasL表达

目的通过检测银屑病患者皮损中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、Fas、FasL的表达,探讨MMP-2对银屑病细胞凋亡的影响.方法采用免疫组化ABC法对银屑病患者皮损中MMP-2、Fas、FasL表达进行检测.结果银屑病皮损中既可表达MMP-2,又可表达Fas、FasL,而在正常皮肤不表达.结论 MMP-2、Fas、FasL参与了银屑病的发病过程.

祛风活血丸对EAU大鼠模型Fas/FasL表达的影响

目的 探讨祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠血清Fas、FasL水平的影响.方法 将70只Lewis大鼠随机分为空白组(A组),模型对照组(B组),阳性对照组(C组),以及祛风活血丸低、中、高剂量组(D、E、F组).采用大鼠右后足垫注射含IRBP(光感受器间维生素A类结合蛋白)的PBS溶液+完全弗氏佐剂制作EAU模型,A组大鼠注射无菌生理盐水.造模后各组大鼠灌胃给药,A、B组予生理盐水,C组予熊胆开明片,D、E、F组分别予低、中、高剂量的祛风活血丸.观察大鼠眼部情况变化,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测给药后第7天、14天、21天、28天时各组大鼠的Fas、FasL血清浓度.结果 1.成功诱发Lewis大鼠的EAU模型,在免疫后不同时间发生临床可见的炎症,造模成功率91.7％(55/60),空白组大鼠无临床可见葡萄膜炎表现.2.空白组各时间点的Fas、FasL血清浓度始终位于较低水平,模型对照组各时间点的Fas、FasL水平均为高,明显高于空白组(P＜0.01),并有随时间延长逐渐下降的趋势.中、高剂量组各时间点的Fas、FasL水平较为接近,低于同期低剂量组及阳性对照组,与模型组比较下降更为明显(P＜0.05).结论 Fas/FasL介导的细胞凋亡对EAU发病具有重要意义,祛风活血丸能使大鼠血清中Fas、FasL含量明显降低.

Fas及其配体FasL等与凋亡相关的基因参与葡萄膜炎发病机制的研究进展

葡萄膜炎是一种种类繁多、病因复杂的疾病，可由感染、外伤、遗传、自身免疫反应等因素引发。其中，以自身免疫反应为常见。对免疫学发展机制的深入研究是目前葡萄膜炎的主要研究方向。其中，细胞因子在葡萄膜炎发病过程中的作用及其与疾病活动之间的关系正受到越来越多的关注，并逐渐形成了一个免疫应答体系。而近期的研究发现，Fas及其配体FasL等相关基因在葡萄膜炎的发生发展中起到了一定的作用，这可能是葡萄膜炎反复发作的原因。

米非司酮对人早孕期蜕膜细胞凋亡及Fas/FasL的影响

为探讨米非司酮对人早孕期蜕膜组织细胞凋亡及相关基因Fas、FasL的影响,应用TUNEL法检测凋亡的发生,原位杂交和免疫组化法检测Fas、FasL的表达和相互关系.结果发现:①正常早孕40+天蜕膜组织细胞大量凋亡,Fas、FasL mRNA及蛋白有较强表达.②正常早孕50+天,凋亡细胞明显减少,Fas、FasL的表达明显减弱.③早孕50+天服用米非司酮,蜕膜组织大量凋亡,且Fas、FasL的表达较正常早孕50+天增强.提示,米非司酮抗早孕的机制之一可能是通过促进蜕膜组织的异常凋亡实现的,Fas途径参与了这一过程.

FasL诱导HIF-1α表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响

目的 探讨FasL诱导缺氧诱导因子1-α(HIF-1α)表达对直肠癌细胞侵袭行为的影响.方法 将含FasL全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1FasL转染人直肠癌细胞系HR-8348,通过Transwell侵袭小室实验检测癌细胞的侵袭能力,Western blot法检测细胞不同缺氧时点HIF-1α表达水平.结果 细胞侵袭实验表明,FasL转染组HR-8348细胞穿透Transwell滤膜细胞数为12.9±2.4,明显多于空载体转染组和对照组(分别为7.7±2.1和8.1±2.0,P<0.05).各组细胞在缺氧0h时点无HIF-1α表达,6h时点HIF-1α仅有微量表达,缺氧12h与24h时点FasL阳性细胞组(FasL转染组)HIF-1α表达水平明显提高(P<0.05),FasL阴性细胞组(对照组和空载体转染组)HIF-1α表达水平无显著变化(P>0.05).同一缺氧时相HIF-1α表达水平组间比较,缺氧0h与6h各组间均无显著性差异(P>0.05),缺氧12h与24h转染FasL组显著高于空载体转染组和对照组(P<0.01).结论 直肠癌细胞中FasL诱导HIF-1α表达的因素,可促进直肠癌细胞对缺氧的适应及提高癌细胞的侵袭能力.

七氟醚通过FAS-FASL通路致幼鼠学习记忆损伤的研究

目的 研究七氟醚可致幼鼠神经细胞凋亡增加并导致其学习记忆障碍的具体机制.方法 将60只野生型幼鼠分成四组进行试验,对照组15只(野生型幼鼠+纯氧)、七氟醚组15只(野生型幼鼠+七氟醚)、FAS基因敲除组15只(敲除FAS基因幼鼠+七氟醚)、FASL基因敲除组15只(敲除FASL基因幼鼠+七氟醚),暴露结束后4h,从四组幼鼠中各取5只处死,取海马组织,用原位末端标记法(TUNEL)计算海马处的凋亡细胞数量,用WB方法检测FAS蛋白表达量.剩余的幼鼠在第30～34天进行水迷宫试验检测其学习记忆能力.结果 吸入七氟醚的幼鼠FAS蛋白表达明显升高,与敲除FAS基因的幼鼠、敲除FASL基因的幼鼠相比,吸入七氟醚的野生型幼鼠可以观察到较多的原位末端标记法阳性的海马细胞.水迷宫实验表明,与敲除FAS基因的幼鼠、敲除FASL基因的幼鼠相比,吸入七氟醚的野生型幼鼠在逃避潜伏期及通过目标象限的次数均较长.结论 这些结果表明,七氟醚可通过FAS-FASL信号通路导致幼鼠神经细胞凋亡增加并导致学习记忆损伤.

贲门癌及癌前病变中细胞凋亡与FasL表达的关系

目的研究贲门癌前病变及贲门癌中细胞凋亡与FasL表达的关系,探讨细胞凋亡在贲门癌发生中的作用.方法采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术及免疫组化染色对正常胃黏膜10例,慢性胃炎72例和贲门癌50例中凋亡细胞及FasL表达状态进行原位观察和比较.结果萎缩性胃炎、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型肠化生及异型增生的凋亡细胞指数(12.8%,17.0%,14.6%,9.6%,8.0%)显著高于正常黏膜(3.4%)和癌(5.8%)(P＜0.01及P＜0.05);异型增生组织凋亡细胞指数(8.0%)显著低于萎缩性胃炎和Ⅰ型、Ⅱ型肠化生(12.8%,17.0%,14.6%;P＜0.05及P＜0.01);Ⅲ型肠化生的凋亡细胞指数(9.6%)显著低于Ⅰ型、Ⅱ型肠化生(17.0%,14.6%;P＜0.01及P＜0.05).正常胃黏膜无FasL表达,贲门癌前病变及贲门癌中均有不同程度的FasL表达.FasL表达阳性肠化生、异型增生和贲门癌中的凋亡细胞指数(19.8%,10.0%,8.3%)显著高于其阴性组(12.6%,6.1%,3.4%;P＜0.05及P＜0.01).结论FasL对贲门癌前病变及贲门癌组织细胞凋亡具有促进性调控作用,细胞凋亡调控异常在贲门癌发病中可能起重要作用.

miR-199a在2,4,6-三硝基苯磺酸/乙醇溃疡性结肠炎大鼠中的表达及雷公藤多苷的作用研究

目的 探讨miR-199a在2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠中的表达情况及雷公藤多苷(TWP)对其的作用.方法 采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇灌肠法建立溃疡性结肠炎动物模型.对大鼠结肠组织进行大体形态损伤评分和镜下结肠损伤评分;采用芯片分析、Real-time PCR技术评估各组结肠黏膜组织中miR-199a的表达水平;针对milwalk数据库中预测的下游靶基因mRNA用表达谱进一步筛选分析靶基因mRNA,并用Real-time PCR技术验证靶基因mRNA在各组中的表达,后在DAVID数据库进行pathway分析,以分析miR-199a参与UC炎症活动时所调节的靶基因mRNA.结果 TWP高剂量组结肠黏膜大体形态损伤评分、组织病理损伤评分与模型对照组间差异有统计学意义(P＜0.01).芯片分析显示,模型对照组中miR-199a较正常对照组上调(P＜0.01),在AZA组表达较模型对照组下调(P＜0.01,P＜0.05).miR-199a-3p在TWP中剂量组,miR-199a-5p在TWP高剂量组中较模型对照组均下调(P＜0.05).miR-199a的Real-time PCR结果显示,模型对照组miR-199a的表达水平较正常对照组明显上调(P＜0.01);TWP的中、高剂量组和AZA组中miR-199a-3p的表达水平较模型对照组均下调(P＜0.05);TWP中剂量组miR-199a-5p的表达水平较模型对照组下调(P＜0.05).表达谱分析显示,FASL为miR-199a的靶基因.模型对照组中靶基因FASL表达水平较正常对照组上调(P＜0.05),TWP组、AZA组中靶基因FASL表达水平较模型对照组下调,其中以AZA组的下调为显著(P＜0.01).靶基因FASL的Real-time PCR结果显示,模型对照组中靶基因FASL表达水平较正常对照组明显上调(P＜0.01);TWP中剂量组、高剂量组和AZA组中靶基因FASL表达水平较模型对照组下调(P＜0.01).结论 miR-199a在TNBS/乙醇UC大鼠中有上调表达,FASL是miR-199a的下游靶基因.TWP能改善UC的炎症活动,对UC活动时上调的miR-199a具有下调作用;FASL在UC活动时呈上调表达,TWP对miR-199a下游靶基因FASL具有下调作用.

补肾生精丸对生精细胞损伤模型大鼠生精细胞凋亡与Bcl-2、Bax、Fas、FasL表达的影响

统计学意义(P<0.01).结论 补肾生精丸对腺嘌呤致生精细胞损伤模型大鼠生精细胞的凋亡有一定的抑制作用,其作用可能与该药调控Bcl-2、Bax、Fas、FasL的表达有关.