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基于Calpain/p35-Cdk5/p25通路探究肾脑复元汤联合hUC-MSCs干预对缺氧缺糖神经元的保护作用
目的:基于Calpain/p35-Cdk5/p25通路探究肾脑复元汤联合人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)干预对缺氧缺糖神经元的保护作用.方法:原代培养神经元,并随机分为正常组、模型组(缺糖缺氧造模,OGD)、中药组(OGD+含中药血清)、干细胞组(OGD+hUC-MSCs共培养)、联合组(OGD+含中药血清+hUC-MSCs共培养)、抑制剂组(OGD+Calpain抑制剂),采用CCK-8法检测神经元活力,AO/EB染色观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率,Werstern blot法检测Cdk5、p25、p35的表达.结果:模型组神经元缺糖缺氧后,突起回缩,轴突网络稀释,细胞核变性、甚至碎裂,与正常组比较,细胞活力明显下降,大量细胞凋亡,Cdk5、p25表达明显上升,p35表达明显下降(P＜0.01);与模型组比较,中药组、干细胞组、联合组及抑制剂组神经元活力升高,凋亡细胞数降低,Cdk5及p25表达下降,p35表达上升(P＜0.05,P＜0.01);与中药组、干细胞组及抑制剂组相比,联合组神经元活力升高、早凋细胞减少(P＜0.05);联合组及抑制剂组CDK5、p25表达较中药组及干细胞组下降,p35表达较中药组及干细胞组上升(P＜0.05).结论:肾脑复元汤联合hUC-MSCs移植能显著改善缺糖缺氧神经元凋亡,其作用机制可能与调控Calpain/p35-Cdk5/p25通路有关.
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七氟醚通过FAS-FASL通路致幼鼠学习记忆损伤的研究
目的 研究七氟醚可致幼鼠神经细胞凋亡增加并导致其学习记忆障碍的具体机制.方法 将60只野生型幼鼠分成四组进行试验,对照组15只(野生型幼鼠+纯氧)、七氟醚组15只(野生型幼鼠+七氟醚)、FAS基因敲除组15只(敲除FAS基因幼鼠+七氟醚)、FASL基因敲除组15只(敲除FASL基因幼鼠+七氟醚),暴露结束后4h,从四组幼鼠中各取5只处死,取海马组织,用原位末端标记法(TUNEL)计算海马处的凋亡细胞数量,用WB方法检测FAS蛋白表达量.剩余的幼鼠在第30～34天进行水迷宫试验检测其学习记忆能力.结果 吸入七氟醚的幼鼠FAS蛋白表达明显升高,与敲除FAS基因的幼鼠、敲除FASL基因的幼鼠相比,吸入七氟醚的野生型幼鼠可以观察到较多的原位末端标记法阳性的海马细胞.水迷宫实验表明,与敲除FAS基因的幼鼠、敲除FASL基因的幼鼠相比,吸入七氟醚的野生型幼鼠在逃避潜伏期及通过目标象限的次数均较长.结论 这些结果表明,七氟醚可通过FAS-FASL信号通路导致幼鼠神经细胞凋亡增加并导致学习记忆损伤.
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丙泊酚诱导大鼠原代培养皮层神经元凋亡
目的：探讨丙泊酚对原代培养皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7 d 的大鼠皮层神经元,随机分为两组：对照组(给予相同容积的20%脂肪乳剂)和丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),上述药物处理12 h 后,采用 MTT 法检测两组神经元存活率,Hoechst33258核染色法检测神经元的凋亡,罗丹明染色检测线粒体膜电位,Western blot 法检测神经元 cyt-c 和cleaved-caspase-3蛋白含量。结果丙泊酚组皮层神经元存活率(54.4%±6.4%),明显低于对照组(99.8%±4.1%)(P <0.05)；神经元凋亡率(46.5%±5.3%),明显高于对照组(7.2%±0.9%)(P<0.05),线粒体膜电位(59.6%±4.3%)明显低于对照组(99.9%±5.7%)(P <0.05)；cyt-c 蛋白含量(0.38±0.03),明显高于对照组(0.15±0.02)(P <0.05),cleaved-caspase-3蛋白含量(0.46±0.04)明显高于对照组(0.13±0.02)(P <0.05)。结论丙泊酚可诱导发育期原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与抑制线粒体膜电位,增加 cyt-c 和 cleaved-caspase-3蛋白含量有关。
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17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响
目的：17β雌二醇的神经保护作用受到广泛关注，文中旨在探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法原代培养7 d的大鼠皮层神经元，随机分为3组：对照组（给予等体积20％脂肪乳），丙泊酚组（500μmol／L丙泊酚），丙泊酚＋17β雌二醇组（500μmol／L丙泊酚，0．1μmol／L 17β雌二醇）。药物处理12 h后，在光镜下观察各组神经元的形态变化，MTT法检测神经元存活率的变化，流式细胞仪检测神经元的调亡，罗丹明染色检测线粒体膜电位的变化。结果与对照组比较，丙泊酚组光镜下神经元数量明显减少，胞体立体感消失，细胞轮廓不清，神经元轴突断裂。与丙泊酚组神经元形态变化比较，丙泊酚＋17β雌二醇组明显改善。丙泊酚组神经元存活率、线粒体膜电位[（52．3±5．2）％、（59．1±5．3）％]较对照组[（99．9±3．6）％、（99．6±5．8）％]、丙泊酚＋17β雌二醇组[（90．1±7．2）％、（89．2±7．1）％]均显著下降（P＜0．01）。丙泊酚组神经元凋亡率[（43．4±4．6）％]较对照组[（3．1±0．2）％]、丙泊酚＋17β雌二醇组[（22．3±3．2）％]均显著增加（P＜0．01）。结论17β雌二醇可能通过抑制神经元线粒体膜电位的下降对丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡产生保护作用。
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丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元BDNF 和 p75 NTR水平的影响
目的：探讨丙泊酚对原代培养大鼠皮层神经元凋亡的影响及可能机制。方法原代培养7d的大鼠皮层神经元，随机分为两组：溶剂对照组（给予相同容积的20％脂肪乳剂），丙泊酚组（丙泊酚终浓度为500μmol／L），上述药物处理皮层神经元12 h后，用光学显微镜观察两组皮层神经元的形态学变化，MTT法检测神经元存活率的变化，Western blot法检测神经元脑源性神经营养因子（ BDNF）、p75神经营养因子受体（p75NTR）以及B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）蛋白水平的变化。结果与溶剂对照组比较，丙泊酚组光镜下观察显示皮层神经元数量明显减少，胞体立体感消失，细胞轮廓不清，神经元轴突断裂。神经元存活率显著性下降（P＜0.01），BDNF和Bcl-2蛋白水平显著性下降（P＜0.01）， p75NTR蛋白水平显著性增加（ P＜0.01）。结论丙泊酚可引起发育期原代培养皮层神经元损伤，其机制可能与下调BDNF、Bcl-2和上调p75 NTR蛋白水平有关。
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氯化锂抑制丙泊酚诱导原代培养神经元凋亡
目的：探讨氯化锂对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法体外原代培养7d的大鼠皮层神经元,用 MTT 法检测不同浓度氯化锂(0．1、1、5、10μmol/L)单独作用皮层神经元12 h后神经元存活率的变化。神经元随机分为6组：溶剂对照组(给予等容积的20%脂肪乳),丙泊酚组(终浓度为500μmol/L),氯化锂+丙泊酚组(氯化锂终浓度分别为0．1、1、5、10μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L),药物处理12 h后,MTT法检测神经元存活率的变化,Hoechst33258核染色法和流式细胞仪检测神经元调亡,Western blot 法测定神经元磷酸化糖原合成酶激酶-3β( pGSK-3β)和裂解半胱天冬酶-3( cleaved-Caspase-3)蛋白水平。结果与溶剂对照组比较,不同浓度氯化锂单独作用神经元12 h后,神经元存活率未见显著变化。与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元存活率显著下降(P<0．01),神经元凋亡率显著增加(P<0．01),pGSK-3β蛋白水平显著下降(P<0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著增加(P<0．01)。与丙泊酚组比较,氯化锂可剂量依赖性增加神经元存活率(P <0．01),神经元凋亡率显著下降(P <0．01),pGSK-3β蛋白水平显著增加(P <0．01), cleaved-Caspase-3蛋白水平显著下降(P <0．01)。结论氯化锂可抑制丙泊酚诱导的原代培养皮层神经元凋亡,其机制可能与提高神经元pGSK-3β蛋白水平和降低cleaved-Caspase-3蛋白水平有关。
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定量脑电图对新生儿缺氧缺血性脑病预后情况的评估价值及其与血清学指标的关系
目的:探讨定量脑电图(qEEG)对新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)预后情况的评估价值及其与血清学指标的关系.方法:收集在本院出生并接受治疗的HIE患儿76例作为观察组、同期在本院分娩的健康新生儿50例作为正常对照组.测定两组新生儿的qEEG参数值,对比两者血清中神经损伤指标、神经凋亡指标、氧化应激指标含量的差异,采用Pearson检验评估HIE患儿qEEG参数值与其病情严重程度的内在联系.结果:观察组的qEEG Fp1、Fp2、C3、C4、T3、T4、O1、O2位点功率谱值均显著低于正常对照组新生儿(P<0.05).观察组血清中NSE、NPY、S-100B、MBP的含量高于正常对照组新生儿;神经凋亡指标sFas、sFasL、Caspase-3的含量高于正常对照组新生儿,Bcl-2的含量低于正常对照组新生儿;血清中氧化应激指标AOPP、MDA的含量高于正常对照组新生儿,SOD的含量低于正常对照组新生儿(P<0.05).经Pearson检验发现,HIE患儿的qEEG Fp1、Fp2、C3、C4、T3、T4、O1、O2位点功率谱值与神经损伤指标、神经凋亡指标、氧化应激指标含量直接相关.结论:HIE患儿qEEG参数值较正常新生儿低,且其具体值与患儿病情严重程度密切相关.
关键词： 新生儿缺氧缺血性脑病 定量脑电图 神经损伤 神经凋亡 氧化应激 -
大株红景天联合氧自由基清除剂对急性脑梗死患者神经功能及神经凋亡的影响
目的:探讨大株红景天联合氧自由基清除剂对急性脑梗死患者神经功能及神经凋亡的影响.方法:选取本院收治的急性脑梗死患者,经随机数表法分为对照组、大株红景天组.对照组在常规治疗同时加入氧自由基清除剂治疗,大株红景天组患者在常规治疗同时接受大株红景天联合氧自由基清除剂治疗.对比两组治疗前(T0)、治疗1周后(T1)、治疗2周后(T2)血清中神经营养指标、神经损伤指标、神经凋亡指标含量的差异.结果:T0时,两组血清中神经营养指标、神经损伤指标、神经凋亡指标含量的差异不显著.T1、T2时,大株红景天组血清中神经营养指标IGF-1、bFGF、BDNF、GDNF的含量高于对照组;血清中神经损伤指标RBP4、H-FABP、SAA、NPY的含量低于对照组;血清中神经凋亡指标Bcl-2的含量高于对照组,Bax、caspase-3的含量低于对照组.结论:急性脑梗死患者接受大株红景天联合氧自由基清除剂治疗,可有效优化患者的神经功能并抑制神经凋亡.
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经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠脑神经细胞凋亡、NO的影响
目的 观察经颅磁刺激对局灶性脑缺血大鼠脑组织的神经细胞凋亡数、NO的影响.方法 制备一侧大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,造成大鼠左脑缺血24h,以改良的神经系统损害严重程度评分表(modified neurological severity score,NSS)评定神经功能缺损程度并筛选大鼠.随机分为对照组和磁刺激组(TMS).两组大鼠神经功能缺损无统计学差异.对照组给予5d假TMS刺激,TMS组给予5dTMS刺激.5d后采用干重湿重法测定脑含水量,采用流式细胞仪及硝酸还原酶法分别检测脑组织神经细胞凋亡率及一氧化氮含量变化.结果 TMS组大鼠的脑水肿程度明显减轻(P＜0.05)；TMS组神经细胞凋亡率及一氧化氮含量明显减少(P＜0.05).结论 TMS对脑缺血损伤具有神经保护作用.
