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胃癌及区域淋巴结中Fas和FasL的表达与临床生物学行为关系研究
目的 研究Fas、FasL蛋白在胃癌和区域淋巴结组织中的表达情况以及与临床生物学行为的关系;探讨Fas、FasL蛋白对胃癌发展、发生的影响,为胃癌治疗提供理论基础.方法 应用免疫组织化学方法(SP法)检测胃癌组织、正常胃黏膜及淋巴结中Fas、FasL蛋白表达,分析两种蛋白表达情况与胃癌患者年龄、性别,肿瘤大小、部位、分化程度、大体分型、淋巴结转移、临床分期及浸润深度等临床病理因素进行综合分析.结果 Fas在正常组织中表达率(75.9%)显著高于在胃癌组织(48.3%)、有淋巴结转移组织(53.4%)、癌旁组织(56.9%)(P<0.05),且该蛋白与肿瘤分化程度和浸润深度有关(P<0.05).FasL在胃癌组织中表达率(79.3%),显著高于有淋巴结转移组织(67.2%)、癌旁组织(53.4%)、正常组织中(41.4%)(P<0.05),且该蛋白与肿瘤分化程度有关(P<0.05).结论 Fas、FasL蛋白与胃癌分化程度有关,可能在胃癌发生发展过程的免疫逃避中起重要作用,为胃癌的分子靶点治疗提供依据.
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FasL反义RNA在人食管癌TE11细胞中的表达及意义
目的 采用反义RNA技术,构建人FasL反义RNA重组逆转录病毒载体.以FasL表达阳性的人食管癌细胞株TE11为模型,研究反义RNA重组逆转录病毒表达载体对细胞FasL的阻断作用.方法 将人FasL全基因序列的DNA片段反向插入逆转录病毒pLXSN质粒上的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ位点间,建立重组质粒pL(FasL-AS)SN.将pL(FasL-AS)SN导入包装细胞PA317中,经G418筛选后收获培养上清,转染TE11细胞,建立TE11-hFasL-AS细胞系.用PCR技术检测pL(FasL-AS)SN中目的基因FasL的插入及其在TE11细胞中的整合;用RT-PCR法检测TE11细胞经重组病毒感染前后FasL mRAN表达量的变化;采用流式细胞仪检测TE11和TE11-hFasL-AS细胞FasL的表达及其对U937细胞凋亡的诱导.结果 将pL(FasL-AS)SN转染TE11细胞后,FasL反义RNA已整合至TEll细胞(TE11-hFasL-AS)中;TE11-hFasL-AS细胞FasL mRAN及蛋白的表达水平均显著下降(P＜0.01);与TE11-hFasL-AS细胞混合培养后,U937细胞凋亡率明显低于未转染组(P＜0.01).结论 成功构建了人FasL反义RNA重组逆转录病毒表达载体,用该载体转染的TE11细胞中FasL的表达水平明显受抑,为Fas/FasL参与的体内许多病理进程的机制研究及临床应用提供实验基础.
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乳腺浸润性导管癌组织中FasL、Ki-67的表达及其意义
目的 探讨FasL和Ki-67在乳腺浸润性导管癌表达及临床病理意义.方法 收集20例正常乳腺组织和60例乳腺浸润性导管癌组织标本,应用免疫组化技术检测Fas、FasL和Ki-67表达.结果 在正常乳腺组织中和乳腺浸润性导管癌组织中FasL阳性表达率分别为15.0%和78.3%(P<0.01);Ki-67的阳性表达率分别15.0%和65.0%(P<0.01).结论 FasL、Ki-67表达失衡与乳腺浸润性导管癌的发生发展有着密切关系 .
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FasL 基因RNA 干扰质粒的构建与鉴定
目的 构建细胞凋亡受体通路相关蛋白FasL表达的RNA干扰(RNAi)质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供稳定转染细胞的RNA干扰质粒.方法 选取FasL基因的19nt特异性序列,设计针对FasL的shRNA序列,应用基因重组技术克隆到pSilencer 1.0-U6表达载体中,EcoR I和Apa I进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆,在脂质体的介导下包含FasL基因RNAi的重组载体转染脐静脉血管内皮细胞,转染48h后,收集细胞裂解液,Western blotting分析对照组与转染组FasL蛋白的表达水平.结果 双酶切证实shRNA正确插入pSilencer 1.0-U6质粒,DNA 测序证实插入的序列正确; FasL基因RNAi的载体转染血管内皮细胞成功; Western blotting结果 显示与空质粒对照组比转染组细胞FasL表达下调.结论 成功构建人FasL基因RNAi质粒,为研究FasL参与的细胞信号通路提供了稳定的转染细胞载体.
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二期梅毒患者外周血淋巴细胞凋亡及其Fas、FasL表达的研究
目的:检测二期梅毒患者外周血淋巴细胞(PBLC)凋亡及其Fas、FasL的表达,探讨二期梅毒患者细胞免疫功能异常与淋巴细胞凋亡的关系.方法:采用流式细胞仪检测33例二期梅毒患者和30例正常人PBLC细胞凋亡及其Fas、FasL的表达.结果:梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞凋亡率显著高于对照组(P＜0.01),CD8+细胞凋亡率两组比较差异无显著性(P＞0.05).梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞Fas与FasL表达均明显高于对照组(P＜0.01),CD8+细胞Fas与FasL表达两组比较差异无显著性(P＞0.05).梅毒患者CD3+、CD4+及CD16,56+细胞凋亡率分别与其Fas、FasL表达呈显著正相关(r=0.685,P＜0.01;r=0.712,P＜0.01;r=0.705,P＜0.01;r=0.694,P＜0.01;r=0.716,P＜0.01;r=0.727,P＜0.01).结论:二期梅毒患者细胞免疫功能异常可能与淋巴细胞凋亡过度有关,而淋巴细胞凋亡过度与Fas、FasL表达异常有关.
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经中心静脉途径注入腺病毒转载的IκB基因对多器官功能障碍综合征大鼠Fas/FasL的调控作用
目的 建立大鼠多器官功能障碍综合征(MODS)模型,将腺病毒转载的IκB基因导入大鼠体内,以了解其对MODS凋亡的调控作用.方法 50只大鼠随机分为5组:A组(正常对照组);B组(MODS损伤1 d组);C组(MODS损伤7 d组);D组(腺病毒转载IκB治疗1 d组);E组(腺病毒转载IκB治疗7 d组).观察5组大鼠从致伤开始后1、7 d的各脏器功能的生化指标,大鼠肺、肝组织Fas/FasL表达.结果 E组大鼠存活率与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05).B、C组血肌酐、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与A组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);B组血肌酐、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与C组相比差异均无统计学意义(P＞0.05).D、E组血肌酐、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与A组比较差异无统计学意义(P＞0.05);D组丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与B组比较差异有统计学意义(P＜0.05),而血肌酐水平差异无统计学意义(P＞0.05);E组血肌酐、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与C组比较差异有统计学意义(P＜0.05);D组血肌酐、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、肌酸磷酸激酶水平与E组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).5组大鼠pH值、PaO2水平比较差异均有统计学意义(P＜0.05).B、C、D、E组PaO2与A组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);E组PaO2与C组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05),D组与B组、B组与C组、D组与E组相比PaO2水平间差异均无统计学意义(P＞0.05).pH值:C组与A、B组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),其余各组相比差异均无统计学意义(P＞0.05);5组大鼠PaCO2水平间差异无统计学意义(P＞0.05,).A组大鼠肺、肝组织中可见Fas蛋白表达,B、C组肺、肝组织中Fas蛋白表达较A组明显升高,以肺组织升高幅度大.D、E组肺、肝组织中Fas表达较B、C组明显下降.A组大鼠肺、肝组织中可见FasL蛋白表达,B、C组肺、肝组织中FasL蛋白表达较A组明显升高,以肺组织升高幅度大.D、E组肺、肝组织中FasL表达较B、C组明显下降.结论 通过中心静脉途径注入腺病毒转载的IκB基因,可明显降低肝、肺组织的Fas和FasL表达,减轻MODS大鼠器官组织过度的细胞凋亡,改善预后.
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Fas/FasL 在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与凋亡的关系
目的：检测凋亡调控基因 Fas，FasL 在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与周围浸润淋巴细胞凋亡的关系。方法：应用 RT - PCR 及免疫组化法分别检测妊娠滋养细胞疾病中 Fas，FasL mRNA 及蛋白的表达，原位末端标记法检测各组周围浸润淋巴细胞的凋亡情况。结果：随着妊娠滋养细胞疾病的进展，Fas 的表达逐渐减弱，FasL 的表达逐渐升高，且 Fas 表达水平在各组间的变化趋势与 FasL 的变化趋势相反。随着妊娠滋养细胞疾病的进展，周围浸润淋巴细胞的凋亡指数逐渐上升，且 FasL（＋）的绒癌组织中高于 FasL（-）者。结论：Fas 蛋白的低表达及 FasL 的高表达诱导的免疫逃逸可能是妊娠滋养细胞疾病的发病机制之一。
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FasL基因转染诱导类风湿关节炎患者滑膜细胞凋亡的实验研究
目的通过构建FasL重组质粒并转染原代培养的类风湿关节炎(RA)患者滑膜细胞,研究FasL基因对体外培养的RA滑膜细胞的凋亡诱导作用,寻找针对RA关节腔内基因治疗的有效靶基因.方法采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法扩增FasL cDNA全长片段,经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切,将FasL基因导入真核表达载体pcDNA3.1-neo;体外原代培养RA患者及正常人的滑膜细胞:脂质体包裹真核表达质粒pcDNA3.1-FasL及空质粒pcDNA3.1-neo,分别转染处于指数生长期的RA患者及正常人的滑膜细胞;经G418筛选,采用形态学、TUNEL法及Annexin Ⅴ/碘化丙啶(PI)染色等方法检测各组滑膜细胞的凋亡情况.结果FasL基因原核及真核重组质粒载体顺利构建,基因序列检测结果与国外报道完全一致;RA患者及正常人的滑膜细胞原代培养、传代顺利完成;RA患者滑膜细胞转染FasL重组质粒(rhFasL)15 h后,光镜下可见大量细胞体积缩小、扭曲、变形,胞核中出现颗粒样物质,少数细胞脱落底壁,G418筛选2周后仅有1～2个/低倍视野细胞存活,且生长相对静止;RA患者滑膜细胞在转染空质粒及正常人滑膜细胞在转染pcDNA3.1-FasL及空质粒后仅有少数细胞变形、反光度下降,很少脱离底壁,G41 8筛选2～4周后细胞再次生长并形成克隆;经TUNEL方法检测可见大量转染rhFasL的RA滑膜细胞的细胞核呈棕黄或棕褐色,胞核浓缩,呈环行、小圆形或颗粒状,而其他3组对照组滑膜细胞的细胞核呈蓝色或浅黄色,未见明显凋亡标记阳性细胞;基因转染后的各组滑膜细胞予Annexin Ⅴ/PI染色、流式细胞仪检测后均查到少量早期的凋亡细胞,但各组间差异无统计学意义.结论pcDNA3.1-FasL基因可诱导体外培养的RA滑膜细胞间的凋亡增加.
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Fas及FasL在葡萄胎、侵蚀性葡萄胎中的表达及意义
目的 探讨Fas及FasL蛋白在妊娠滋养细胞疾病中的表达及意义. 方法 应用免疫组化方法分别检测Fas及FasL蛋白在40例正常滋养细胞、36例完全性葡萄胎和15例侵蚀性葡萄胎中的表达. 结果 Fas在侵蚀性葡萄胎组、完全性葡萄胎组和正常滋养细胞组的阳性表达率分别为46.7%,88.9%和95.0%.在侵蚀性葡萄胎组的Fas阳性表达率与完全性葡萄胎组、正常滋养细胞组差异有统计学意义(P<0.05),FasL在侵蚀性葡萄胎组、完全性葡萄胎组和正常滋养细胞组的阳性表达率分别为53.3%,44.4%和17.5%.在完全性葡萄胎组、侵蚀性葡萄胎组的FasL阳性表达率与正常滋养细胞组差异有统计学意义(P<0.05).Fas与FasL表达在各组之间均呈负相关. 结论 Fas蛋白的低表达及FasL的高表达降低了妊娠滋养细胞疾病的凋亡,可能是妊娠滋养细胞疾病的发病机制之一.两者在妊娠滋养细胞疾病进展中可能相互影响,起协同作用.
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细胞凋亡与糖尿病肾病
细胞凋亡是生命科学探讨的热点之一,了解细胞凋亡的类型、机制和意义,将有助于进一步认识和审视机体的免疫调节、病理性自身免疫、肿瘤免疫、胞内感染免疫和肾病发生机制等.经过查阅有关资料,认为细胞凋亡就是细胞死亡.广义的讲,细胞凋亡可包括细胞坏死、溶解和程序性死亡等.狭义地讲,是指细胞程序性死亡[1].为此,将指出此问题与众学者商榷.
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SLE患者血清Fas和FasL蛋白与疾病活动的关系
目的:探讨血清凋亡调节蛋白及其配体的水平,与系统性红斑狼疮(SLE)疾病活动的关系及其在SLE肾损伤中的可能作用.方法:收集了96例SLE患者及45名正常健康人的血清.应用ELISA测定血清凋亡调节蛋白Fas及其配体FasL的变化水平.结果:SLE活动组血清Fas、FasL水平较非活动组和对照组明显升高(P＜0.01).活动性狼疮肾炎(LN)组Fas、FasL水平与活动性无肾损伤组及对照组比较其差异均具有统计学意义(P＜0.01).结论:Fas、FasL可能在SLE肾损伤中起着十分重要的作用,血清Fas、FasL水平与SLE疾病活动密切相关,可作为SLE疾病活动、尤其是监测狼疮肾损伤的重要指标.
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补肾通络方对骨性关节炎Fas、FasLmRNA的调节作用
探讨补肾通络方对骨性关节炎大鼠模型膝关节软骨的Fas、FasL表达的调节作用.将30只雄性SD大鼠造模后,随机分为正常组,OA模型组,假手术组,补肾通络方干预组.给药4w后,免疫组化法(SP)检测关节软骨Fas、FasL表达,RT-PCR法检测Fas、FasLmRNA的表达强度.结果:两种方法均显示正常组的Fas、FasL弱表达,模型组的Fas、FasL强表达.补肾通络方可以下调Fas、FasL表达,各组相比均有非常显著差异(P＜0.01).结论:补肾通络方能够下调膝骨性关节炎Fas、FasL的表达.
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Fas/FasL及Bcl-2在胃癌组织表达相关性及临床意义
目的:探讨Fas、FasL、Bcl-2在胃癌组织中的表达及其相关性.方法:应用免疫组化技术S-P染色法对20例正常胃组织和72例胃癌组织进行Fas、FasL、Bcl-2蛋白表达,光密度测定进行统计检测.结果:高、中分化胃腺癌中Fas蛋白表达显著高于低分化腺癌(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达在高分化腺癌中显著低于低分化腺癌(P＜0.05).本组Fas与Bcl-2呈负相关(r=-0.391).结论:Fas、FasL、Bcl-2蛋白表达失衡与胃癌的进展及预后密切相关.对于胃癌的诊疗具有一定的实用价值.
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胃癌组织中Fas、FasL表达的Meta分析
胃癌是常见恶性肿瘤之一,目前其发病机制尚未完全阐明.Fas(CD95/APO-1)是肿瘤坏死因子/神经生长因子受体家族中的一员.近年来的研究表明:Fas及其配体(Fas ligand,FasL)系统的异常表达可能参与肿瘤发生过程中细胞凋亡异常的调节,但研究结果并不一致.本研究运用Meta分析方法,对以往多个关于用免疫组化法检测胃癌组织中Fas、FasL表达的文献进行合并分析,以得出综合可靠的结论.
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米非司酮终止早孕机制研究现状
米非司酮又称RU486,广泛应用于药物流产,其作用机理成为当今的研究热点.米非司酮与孕酮受体结合而竞争性抑制孕激素作用被普遍接受,并认为米非司酮不仅作用蜕膜组织还作用绒毛组织,凋亡基因fas、fasl及bcl、bax的表达促进细胞凋亡从而终止妊娠.
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硒协同中药多糖对白血病细胞株P388体外作用的实验研究
目的:研究香菇多糖协同硒酸酯多糖对白血病细胞的抑制作用,探讨其相关机理.方法:MTT法检测香菇多糖协同硒酸酯多糖对白血病细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫细胞化学检测相关基因Fas和FasL表达水平的改变.结果:香菇多糖和硒酸酯多糖可抑制白血病细胞增殖,硒酸酯多糖主要通过上调Fas和FasL促进凋亡发挥肿瘤抑制作用,香菇多糖主要通过上调Fas促进细胞凋亡,FasL表达没有变化.结论:二者存在不同抑癌机理.香菇多糖协同硒酸酯多糖可显著提高白血病抑制效应.
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肢体移植排斥反应中细胞凋亡及致死基因表达
目的探讨同种异体肢体移植急性排斥反应时细胞凋亡及致死基因Fas、Fas配体(FasL)表达的作用及其意义.方法建立近交系SD大鼠与Wistar大鼠间原位异体肢体移植模型.实验观察组为异基因组,SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体;对照组为同基因移植组,在Wistar大鼠之间移植.分别进行左腿原位移植术.术后第1,3,5,7 d分别取移植肢体组织进行病理学检查及电镜扫描,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植肢体中的凋亡细胞,免疫组化方法检测移植肢体中Fas、FasL表达的变化.结果实验组大鼠在术后发生由轻到重的急性排斥反应,对照组无明显排斥现象.实验组的移植物细胞凋亡数均明显高于对照组,凋亡细胞主要分布在血管内皮细胞及皮肤基底层细胞;术后第7 d因严重排斥使小血管广泛栓塞.异基因肢体移植组的移植物中Fas/FasL表达增高,并与病理学检查及细胞凋亡程度一致.结论 Fas、FasL介导的血管内皮细胞凋亡在大鼠异基因肢体移植急性排斥反应中发挥重要作用,可作为判断移植肢体预后及监测排斥反应的重要指标.
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骨髓增生异常综合征骨髓细胞凋亡与TNF-α和Fas/FasL系统关系的研究
目的:探讨TNF-α和Fas/FasL的表达及骨髓细胞凋亡与骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)发生发展的关系.方法:采用ELISA法检测MDS患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度,采用流式细胞术测定骨髓CD 34+细胞Fas、FasL的表达率和细胞凋亡率.结果:各型MDS患者骨髓单个核细胞培养上清液中TNF-α浓度和CD 34+细胞Fas、FasL的表达率均明显高于正常对照组(P＜0.01).其中RA/RAS组的TNF-α浓度和CD 34+细胞Fas+表达率均明显高于RAEB和RAEB-t组(P＜0.001),而RAEB与RAEB-t组组间无明显差异(P值分别为0.115和0.239);RAEB和RAEB-t组细胞的CD 34+FasL+表达率明显高于RA/RAS组(P值分别为0.001和0.010).RA/RAS和RAEB组的细胞凋亡率均高于对照组(P值均为0.000),而RAEB-t组的细胞凋亡率与对照组相近(P=0.216).各型MDS患者TNF-α浓度与CD34+Fas+表达率呈正相关(r=0.570,P=0.012).而CD 34+细胞凋亡率与TNF-α浓度或CD 34+Fas+表达率之间均无直线相关关系(P值分别为0.103和0.091).结论:MDS患者骨髓细胞的凋亡受多因素的调节,TNF-α与Fas/FasL系统介导的凋亡以及机体对其调控的失常参与了MDS骨髓无效造血的病理生理过程.
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单纯疱疹病毒Ⅱ型感染对细胞增殖、凋亡的影响及与宫颈癌发生关系的研究
目的:通过检测HSV-2在子宫颈癌细胞和非癌变细胞的感染情况及HSV-2感染的子宫颈癌组中增殖细胞核抗原(PCNA)和Fas、FasL蛋白的表迭,探讨HSV-2对子宫颈细胞增殖与凋亡的影响,为研究子宫颈癌的病毒致癌机理提供参考.方法:用免疫组织化学染色方法(SP法)检测80例子宫颈癌、30例慢性宫颈炎的子宫颈上皮细胞HSV-2的表达及HSV-2阳性子宫颈癌组中PCNA、Fas、FasL的表达,采用医学统计学方法分析各种产物表达的关系.结果:子宫颈癌组HSV-2的阳性表达率为63.75%(51/80),明显高于慢性宫颈炎组的40%(12/30)(P<0.05).HSV-2阳性子宫颈癌组PCNA的阳性表达率为94.11%,明显高于HSV-2阴性组的79.31%,二者正相关(r1=0.225,P1=0.045<0.05);HSV-2阳性子宫颈癌组Fas蛋白的阳性表达率为41.18%,明显低于HSV-2阴性组的75.86%,二者负相关(r1=-0.334,P1=0.002<0.05);HSV-2阳性子宫颈癌组FasL蛋白的阳性表达率为84.31%,明显高于HSV-2阴性组的58.62%,二者正相关(r1=0.285,P1=0.01<0.05).结论:子宫颈癌的发生与HSV-2感染相关.HSV-2感染可能通过使子宫颈上皮细胞PCNA表达上调,并抑制子宫颈癌变细胞Fas的表达,促进细胞过度增殖并使凋亡减弱而致癌.HSV-2可能会使子宫颈癌变细胞FasL表达上调,干扰机体免疫细胞活性及免疫监控,使子宫颈癌细胞遮选来自机体的免疫杀伤.
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解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织的形态学、fasl、fas和caspase3的影响
目的:探究解毒胶囊对乳腺增生大鼠乳腺组织的形态、fasl和fas蛋白表达、caapase3mRNA表达的影响.方法:选取40只12周龄SD雌性未孕大鼠随机分为4组(正常组、模型组、方药组、三苯氧胺组),每组10只,造模成功后,经药物治疗4周,用HE染色观察各组乳腺组织形态,用免疫组化技术检测各组大鼠乳腺组织fas和fasl蛋白表达情况,用QPCR技术检测各组大鼠caspase3mRNA表达情况.结果:HE染色结果显示:模型组与正常组相比,乳腺腺泡腔面积变大;方药组和三本氧胺组与模型组相比,乳腺腺泡腔面积有明显减小.免疫组化结果显示正常组fas呈强阳性表达,模型组呈阴性或弱阳性表达,方药组和三苯氧胺组呈强阳性表达.而fasl表达情况与fas表达情况相反,正常组fasl弱阳性表达,模型组呈强阳性表达,方药组和三苯氧氨胺组呈弱阳性表达.QPCR结果显示模型组caspase3与正常组相比呈低表达(P＜0.1),治疗组、三本氧胺组与模型组相比呈高表达(P＜0.01),方药组和三苯氧胺组比起来没有统计学意义(P＞0.05).结论:解毒胶囊能够干预乳腺增生大鼠的乳腺组织形态、乳腺组织的fasl fas蛋白表达、乳腺组织caspase3mRNA表达,对乳腺增生病有治疗作用.
