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一种基于仿真的预测癌细胞致死基因的方法
目的 癌细胞致死基因的研究是治疗癌症的重要尝试,其发现依赖于生物学上的基因敲除实验.鉴于此类实验的高代价、长周期等不足,本文给出一种基于计算机仿真的预测癌细胞致死基因的方法,旨在运用计算机仿真技术预测对癌细胞研究有价值的信息,为基因敲除的生物实验提供线索,帮助降低实验成本.方法 计算机仿真实验基于人类全基因组代谢网络,融合癌细胞的基因表达数据,用一种基于约束建模的方法,以预测癌细胞代谢网络中有活性的反应,并将这些反应命名为"core reactions",将"core reactions"作为输入,重构出一致的癌症工作网络.在该网络上,使用基于约束的流量平衡基因敲除算法,获取使得工作网络biomass产量为0的基因,即致死基因.结果 以肾透明细胞癌为例,根据上述算法,计算结果给出了肾透明细胞癌潜在的7个致死基因.结论 本文给出一种高通量数据结合代谢网络,构造癌症特异网络,并通过计算机仿真基因敲除以获取癌细胞致死基因的方法.此方法通用、高效,有助于更好地开展生物学实验.
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肢体移植排斥反应中细胞凋亡及致死基因表达
目的探讨同种异体肢体移植急性排斥反应时细胞凋亡及致死基因Fas、Fas配体(FasL)表达的作用及其意义.方法建立近交系SD大鼠与Wistar大鼠间原位异体肢体移植模型.实验观察组为异基因组,SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体;对照组为同基因移植组,在Wistar大鼠之间移植.分别进行左腿原位移植术.术后第1,3,5,7 d分别取移植肢体组织进行病理学检查及电镜扫描,采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植肢体中的凋亡细胞,免疫组化方法检测移植肢体中Fas、FasL表达的变化.结果实验组大鼠在术后发生由轻到重的急性排斥反应,对照组无明显排斥现象.实验组的移植物细胞凋亡数均明显高于对照组,凋亡细胞主要分布在血管内皮细胞及皮肤基底层细胞;术后第7 d因严重排斥使小血管广泛栓塞.异基因肢体移植组的移植物中Fas/FasL表达增高,并与病理学检查及细胞凋亡程度一致.结论 Fas、FasL介导的血管内皮细胞凋亡在大鼠异基因肢体移植急性排斥反应中发挥重要作用,可作为判断移植肢体预后及监测排斥反应的重要指标.
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鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的作用
目的 探索鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在小鼠发育过程中的功能.方法 用特殊的基因诱捕载体(gene trapping vector)制作了鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因敲除小鼠.用Western印迹、RT-PCR、X-gal染色方法分析该基因在突变小鼠体内的表达.PCR法鉴定小鼠不同发育时期的基因型.结果 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因在纯合型突变小鼠体内被抑制后,纯合型突变小鼠在出生后死亡.结论 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子基因是致死基因,对小鼠生存有不可缺少的作用.
关键词： 鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制子 基因诱捕载体 致死基因 -
稀疏链霉菌基因文库柯斯质粒对异源宿主致死现象的研究
目的 对稀疏链霉菌基因文库中编号为13F2:pJTU2463的柯斯质粒对异源宿主的致死现象进行探索性研究.方法 通过构建若干克隆及相应的接合转移实验,限制性内切酶酶切图谱分析,质粒测序及序列分析,从若干角度探讨这一质粒发挥致死作用的可能性及途径.结果 编号为13F2:pJTU2463的柯斯质粒中包含致死基因的核酸片段被缩小至亚克隆lth24;将lth24测序并分析其可能编码的蛋白,检索相关文献并进行生物信息学分析,推测三组基因可能与致死现象具有关联.这三组基因可能分别负责编码蛋白酶,双组分激酶系统中的双组分感应激酶和双组分调节因子,ABC转运系统中的ABC转运蛋白和ATP结合蛋白.结论 虽然没有完全阐明致死现象的具体机制,但目前的研究已经可以推断该致死现象是由一种新颖且仍未充分阐明的机制造成,并为后续研究奠定了信息学和遗传学操作的基础.
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复发性自然流产患者绒毛RXRα的表达
目的:探讨复发性自然流产患者绒毛RXRα表达水平及其对胚胎生长的调控作用.方法:用RT-PCR方法检测23例自然复发性流产患者和33例正常早孕者离体绒毛RXRα mRNA表达水平.结果:1)复发性自然流产组及正常妊娠组离体绒毛中均表达RXRα mRNA,其水平分别为0.306±0.358和0.578±0.300,两组相比有统计学差异(P＜0.05).2)自然流产组绒毛中RXRα mRNA表达水平与胚胎死亡时大小呈正相关(r=0.405,P＜0.05).3)自然流产患者血清中狼疮样抗凝因子(ACL)增高组与ACL正常组RXRα mRNA表达水平分别为0.37±0.35和0.39±0.37,两组相比无统计学差异(P＞0.05).4)复发性自然流产患者血清中血小板聚集度(PagT)增高组与PagT正常组RXR α mRNA表达水平分别为0.38±0.36和0.40±0.35,两组相比无统计学差异(P＞0.05).结论:RXRα基因表达水平降低可能是复发性自然流产的发病机理之一.
