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18F-FDG PET /CT 显像评价肝癌H22模型及熊果酸抑制肝癌效果的研究
目的 18 F-FDG PET/CT 显像评价肝癌H22 模型及三萜类中药成分熊果酸(UA)对移植性肝 癌(H22)细胞体内生长的抑制作用.方法 昆明小鼠20 只,雌雄各半,体重(20 ±2)g,右前腋皮下接种1 × 107 /0.2 ml 小鼠肝癌H22 细胞,左前腋皮下接种等量生理盐水作为对照.建立实体瘤模型并进行PET/CT 检查评价实体瘤模型后,随机分两组,对照组和熊果酸组(UA 组),每组10 只,UA 组每只按4.536 mg/kg 给 予体积0.2 ml 的UA,每天1 次,连续10 d;对照组给相同容积的生理盐水.给药结束后再次行18 F-FDG PET/ CT 显像.显像后处死小鼠,采用HE 染色法检测形态学改变.结果 (1)20 只小鼠治疗前右前腋皮下肿瘤 接种部位放射性摄取/同侧肺(T右1 /NT右1 )为2.833 ±0.18,左前腋皮下接种等量生理盐水区放射性摄取/同 侧肺(T左1 /NT左1 )为1.078 ±0.27,T右1 /NT右1 与T左1 /NT左1 有统计学差异(t ＝15.55,P ＝0.0000).(2)对照组 与UA 组右前腋皮下接种肿瘤部位放射性摄取/同侧肺(T右2 /NT右2 与T右3 /NT右3 )分别为2.824 ±0.224 及 1.534 ±0.429,二者有统计学差异(t ＝11.85,P ＝0.0001).左前腋皮下同等体积生理盐水接种放射性摄取/ 同侧肺(T左2 /NT左2 与T左3 /NT左3 )分别为1.078 ±0.33 及1.076 ±0.34,二者无统计学差异(t ＝2.121,P ＝ 0.078).结论 18 F-FDG PET/CT 显像是评价肝癌H22 模型及熊果酸抑制肝癌效果的准确方法.
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树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外特异性抗小鼠肝癌研究
目的树突状细胞(DC)是目前已知的功能强的抗原提呈细胞(APC),可以向包括肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)在内的T淋巴细胞提呈抗原,并诱发细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应.本文旨在探讨H22细胞和B16细胞全细胞性抗原致敏的树突状细胞激活的肿瘤浸润性淋巴细胞体外抗小鼠肝癌活性.方法从小鼠四肢长骨骨髓中获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤全细胞性抗原致敏DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对H22细胞、Hepal-6细胞和B16细胞的杀伤活性.结果经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL具有很高的对H22细胞杀伤活性,杀伤率为(71.31±3.11)%,明显高于其对Hepal-6和B16细胞的杀伤活性[杀伤率分别为(50.11±3.03)%,(30.31±2.89)%];也明显高于未经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL、DC激活的脾淋巴细胞和未经DC激活的脾淋巴细胞对H22细胞杀伤活性[杀伤率分别为(49.80±3.21)%,(48.76±3.60)%和(19.23±2.71)%]和对Hepal-6细胞杀伤活性[杀伤率分别为(39.4±3.21)%,(38.62±2.87)%和(18.73±2.40)%]以及对B16细胞杀伤活性[杀伤率分别为(26.38±2.51)%,(25.82±2.70)%和(18.34±3.01)%],同时经B16细胞全细胞性抗原致敏的DC激活的TIL(来源于H22瘤体)也可诱导相对较低的对B16细胞的特异性细胞杀伤活性.结论来源于H22瘤体的TIL经H22细胞全细胞性抗原致敏的DC激活后可产生很强的针对H22细胞的特异性杀伤活性,明显高于其他各组,说明DC能诱导TIL产生高效而特异的体外抗小鼠肝癌免疫.
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刺参酸性黏多糖对5-FU治疗小鼠肝癌的减毒增效作用
目的 探讨刺参酸性黏多糖(stichopus japonicus acid mucopolysaccharide,SJAMP)联合5-FU对肝癌小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响,了解其对化疗药的减毒增效作用.方法 将60只小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、空白对照组(生理盐水)、5-FU组[5-FU 20 mg/(kg·d)]、SJAMP组[SLAMP 25 mg/(kg·d)]、SJAMP+低5-FU组[SLAMP 25 mg/(kg· d)和5-FU 10 mg/(kg·d)]和SJAMP+高5-FU组[SLAMP 25 mg/(kg·d)和5-FU20mg/(kg· d)].除正常对照组外其他各组均于右腋皮下接种H22 (Hepatocarcinoma22)细胞.接种后第2天开始给药,连续给药12 d后处死小鼠,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数,ELISA检测血清TNF-α和IL-2含量,中性红法检测腹腔巨嗜细胞吞噬功能,CCK-8法测定脾脏淋巴细胞增殖能力,MTT法测NK细胞杀伤功能,流式细胞术检测小鼠外周血T细胞亚群.结果 各干预组小鼠肿瘤生长明显受到抑制,SJAMP+高5-FU组抑瘤率(62.73％)高于5-FU组(55.53％),P=1.000.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠脾脏指数显著高于其他组,P值均＜0.05.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠胸腺指数分别为(2.19±1.18)和(2.13±1.00) mg/g,高于5-FU组的(1.14±0.53)mg/g,P值分别为0.026和0.048;也高于SJAMP+高5-FU组的(1.07±0.49)mg/g,P值分别为0.011和0.020.各药物干预组TNF-α较空白对照组均降低,P值均＜0.001.和空白对照组(33.27±6.13)相比,5-FU组(23.52±3.31)血清IL-2水平明显降低,P＜0.001;SJAMP组(39.56±2.39)血清IL-2水平显著提高,P=0.001.与5-FU组相比,SJAMP组和联合用药组IL-2明显提高,P值均＜0.001.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组腹腔巨嗜细胞吞噬中性红能力显著高于正常对照组、空白对照组、5-FU组和SJAMP+高5-FU组,P值均＜0.001;SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.012.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组脾脏淋巴细胞增殖能力显著高于正常对照组(P值均＜0.001)、空白对照组(P值均＜0.001)、5-FU组(P值均＜0.001)和SJAMP+高5-FU组(P值分别为0.005和0.011);SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.005.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组NK细胞杀伤能力高于5-FU组,P值分别为0.002和0.030.空白对照组和5-FU组CD3+ CD4+与CD3+ CD8+细胞比值低于正常对照组(P值均＜0.001)、SJAMP组(P值分别为0.001和＜0.001)和SJAMP+低5-FU组(P值分别为0.003和0.024),SJAMP+高5-FU组高于5-FU组(P=0.329).结论 SJAMP能够增强5-FU对肿瘤的抑制作用,减少5-FU对小鼠免疫功能的损伤.
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角果木提取物tagalsin对H22细胞原位移植肝癌p53和Bcl-2表达的影响
目的 探讨角果木提取物tagalsin对小鼠原位移植肝癌的干预作用.方法 建立小鼠原位移植性肝癌模型,建模第10天将小鼠随机分为低、中、高tagalsin组和卡莫氟阳性对照组、食用油对照组,分别灌胃给药,给药2个疗程.期间观察各组荷瘤小鼠的生存时间、有无腹水、肝内外转移情况以及体重变化.末次给药24 h后处死小鼠,计算各组小鼠的肿瘤体积、抑瘤率和脾脏指数,观察肿瘤病理组织学变化.利用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别从蛋白和mRNA水平检测各组p53和Bcl-2的表达水平.结果 tagalsin可有效抑制原位移植肝癌生长,低、中、高剂量tagalsin组的抑瘤率分别为17.9%、63.1%和71.8%,低、中剂量tagalsin对荷瘤小鼠的脾脏指数无明显影响.病理组织学检查,各tagalsin组以及卡莫氟阳性对照组均可见细胞凋亡形态变化.免疫组化检测结果显示,卡莫氟阳性对照组及各tagalsin组突变型p53、Bcl-2细胞阳性表达率明显低于食用油对照组(P＜0.05).RT-PCR检测结果显示,与食用油对照组相比,卡莫氟阳性对照组及各tagalsin组野生型p53基因的表达水平均升高,而Bcl-2 mRNA的表达表达水平下降(P＜0.05),而以高剂量tagalsin组为显著.结论 tagalsin可能通过上调野生型p53而降低Bcl-2的表达,抑制小鼠H22细胞原位移植肝癌.
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二十二碳六烯酸复合物的体内外抑瘤作用及其机制
目的 探讨二十二碳六烯酸(DHA)复合物的抗癌作用及其作用机制.方法 建立H22小鼠肝癌细胞的移植瘤动物模型,观察DHA复合物的体内抑瘤作用,采用体外细胞培养的方法 ,观察DHA复合物对宫颈癌HeLa细胞和胶质瘤U251细胞的体外抑瘤作用.采用电镜和荧光显微镜观察细胞形态的变化.Western blot法测定移植瘤组织中caspase-3蛋白的表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HeLa细胞和U251细胞中Bel-2和Bax mRNA的表达.结果 DHA复合物对小鼠H22细胞移植瘤有明显的抑瘤作用,其低、中、高剂量组的抑瘤率分别为37.62%、48.55%和58.63%.在体外,随着剂量的增加,DHA复合物对HeLa细胞和U251的生长抑制率逐渐增高,Hela细胞的IC50为0.9814 μg/ml,U251细胞的IC50为0.3746 μg/ml.DHA复合物处理后,移植瘤细胞的细胞核呈分叶状,可见大小不等、致密的凋亡小体;HeLa细胞的细胞核内可见致密浓染的黄绿色荧光和碎片,分布在核周边,呈肾形或者半月形,核固缩,趋于碎裂.与CMC组比较,DHA复合物能明显促进caspase-3蛋白的表达,且DHA复合物剂越高,caspase-3蛋白的表达升高越明显.DHA复合物能下调U251细胞中Bcl-2 mRNA的表达,上调Bax mRNA的表达,与CMC组比较,差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 DHA复合物在体内外对多种肿瘤细胞有抑制作用,其抑瘤作用可能是通过抑制Bcl-2的表达、促进Bax和caspase-3的表达实现的.
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Egr-IFNγ基因治疗联合125I-脱氧尿嘧啶核苷治疗抑瘤效应的实验研究
目的 探讨Egr-IFNγ基因治疗联合放射性核素125I-脱氧尿嘧啶核苷治疗方案在荷1422肝癌细胞小鼠体内抑瘤效应及机制.方法 小鼠肿瘤局部注射脂质体包裹的质粒,注射后48 h,肿瘤局部注射370 kBq 125I-UdR.观察各组小鼠治疗后不同时间肿瘤生长率;治疗后第3天,检测肿瘤胞浆蛋白中IFNγ的表达和脾脏CTL细胞毒活性.结果 基因-放射核素治疗后第6～15天,pcDNAEgr-IFNγ+125I-UdR组肿瘤生长率明显低于对照组、125I-UdR组及pcDNAEgr-1+125I-UdR组;基因.放射性核素治疗后第3天,pcDNAEgr-IFNγ+125I-UdR组肿瘤胞浆蛋白中可检测到IFNγ的表达,其余组肿瘤胞浆蛋白中未检测到IFNγ的表达;PcDNAEgr-IFNγ+125I-UdR组小鼠脾脏CTL细胞毒活性明显高于其余组(P<0.01).结论 pcDNAEgr-IFNγ基因治疗联合放射性核素125I-UdR治疗抑瘤效应明显优于单纯125I-UdR放射性核素治疗.
关键词： γ干扰素 H22细胞 基因.放射性核紊治疗 脱氧尿苷 碘放射性同位素 -
亚硝酸钠对H22荷瘤小鼠移植瘤上皮-间质转化的促进作用
研究亚硝酸钠诱导活性氧对H22荷瘤小鼠肝癌细胞上皮-间质转化和缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的影响,并探讨HIF-1α在这一过程中的作用.制备H22肝癌细胞荷瘤小鼠模型,亚硝酸钠处理组每天分别灌胃给予10、20和30 mg·kg-1亚硝酸钠,对照组给予等体积生理盐水,连续给药21天.与对照组相比,亚硝酸钠处理组的移植瘤体积和重量没有明显变化,但是肿瘤组织内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性下降,亚硝酸盐和丙二醛(MDA)含量升高；癌细胞浸润周围的肌肉和筋膜；免疫组化和Western blotting结果显示,细胞波形蛋白和HIF-1α表达增强,E-钙粘素表达下降；肿瘤细胞呈现出上皮-间质转化(EMT).结果提示,亚硝酸钠在体内能够促进鼠肝癌细胞EMT发生,其机制与亚硝酸盐诱导活性氧(ROS)促进HIF-1α表达增加有关.
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湖北五峰绿茶体内外抗肿瘤作用研究
目的 研究从湖北五峰绿茶提取的茶氨酸(theanine)在体内外抗小鼠H22肝癌细胞的作用及其免衰学机制.方法 荼氨酸按不同时间(24-96h)及不同浓度(1～16mg/mL)分别处理H22细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期.建立H22荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率;ELISA法检测茶氨酸处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性.结果 8mg/mL茶氨酸处理H22细胞72h可显著地抑制H22细胞增殖,2mg/mL茶氨酸处理H22细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,茶氨酸对小鼠体内肿瘤生长也具有抑制作用,而且显著提高荷瘤小鼠血清中IL-2和IL-12的水平.结论 茶氨酸可抑制H22细胞增殖并激发细胞凋亡,并能提高机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用.
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白附子混悬液对H22荷瘤小鼠抗肿瘤作用的免疫调节机制研究
[目的]研究白附子混悬液对荷瘤小鼠免疫功能的调节作用,探讨其抗肿瘤作用的免疫学机制.[方法]采用H22荷瘤小鼠模型为研究对象,用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中白介素-2(IL-2)和白介素-(IL-4)水平;用流式细胞术(FACS)法分析对CD4+,CD8+T细胞的调节作用.[结果]白附子混悬液能够上调荷瘤小鼠血清IL-2细胞因子的表达,降低IL-4水平,可以使CD4+T细胞表达升高,CD8+T细胞表达降低.[结论]白附子混悬液能够通过调节荷瘤机体异常免疫功能状态而发挥抗肿瘤作用.
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香菇多糖LNT2的提取分离纯化、结构及体外抗肿瘤活性研究
目的 从香菇子实体中分离纯化得到精制香菇多糖,并对其结构和体外抗肿瘤活性进行研究.方法 采用碱提-醇沉法提取香菇粗多糖,并通过脱色、超滤分离纯化得到精制香菇多糖,命名为LNT2.苯酚-硫酸法测定总糖量,高效凝胶色谱法测定相对分子质量,紫外光谱检测蛋白质和核酸,旋光度实验测定比旋光度.综合运用酸水解、高碘酸氧化、甲基化等化学分析法和傅里叶红外光谱、核磁共振光谱等光谱分析法对LNT2的化学结构进行分析;通过刚果红实验对LNT2的糖链构象进行考察;采用四甲偶氮唑盐(MTT)比色法测定LNT2对小鼠肝腹水瘤H22细胞增殖的抑制率.结果 经测定香菇多糖LNT2为均一组分多糖,其相对分子质量(MW)为1.852×105、含糖量为94.99％,比旋光度为+8.03°;紫外光谱显示LNT2在280和260 nrn处无吸收峰.综合化学分析和光谱分析推出LNT2为β构型的葡聚糖,其主链由1-3连接的葡聚糖组成,分支点位于糖的6位,侧链由末端葡萄糖残基组成;刚果红实验表明LNT2分子在较低浓度NaOH溶液中呈三螺旋构象.体外抗肿瘤实验表明LNT2能显著抑制小鼠肝腹水瘤H22细胞的增殖,且呈量效依赖性.结论 精制香菇多糖LNT2为均一相对分子质量的多糖组分,其结构为β构型1-3连接葡聚糖;初步表明LNT2为三股螺旋结构,且具有一定的抗肿瘤活性,为其进一步的开发利用奠定了一定的基础.
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胡桃楸茎枝含药鸡蛋对小鼠H22肝癌实体瘤的抑制作用
目的 研究胡桃楸Juglans mandshurica Maxim.茎枝含药鸡蛋(与胡桃楸茎枝同煮的鸡蛋)对小鼠体内H22肝癌实体瘤的抗肿瘤活性.方法 采用荷H22肝癌实体瘤小鼠模型,以肿瘤质量、抑瘤率为指标研究胡桃楸茎枝含药鸡蛋对肿瘤生长的抑制作用,以免疫器官指数、外周血象为指标考察对荷瘤机体生存质量的影响.结果 胡桃楸茎枝含药鸡蛋在0.64、1.28、2.56 g/kg剂量下对小鼠肝癌H22实体瘤的生长均有较好的抑制作用,呈一定的量效关系.实验结束时,对照组、模型组和各含药鸡蛋组小鼠的体质量均增加.胡桃楸含药鸡蛋组胸腺指数、脾脏指数明显升高,外周红细胞数、血红蛋白含量提高,总白细胞数降低.结论 胡桃楸茎枝含药鸡蛋对H22细胞具有较好的抗肿瘤作用.
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参麦注射液的抗肿瘤作用研究
目的 研究参麦注射液体内外抗肿瘤作用.方法 以小鼠肉瘤S180、肝癌H22、Lewis肺癌实体瘤模型考察参麦注射液的体内抑瘤作用；通过MTT法考察参麦注射液体外对人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌HepG 2细胞的增殖抑制作用.结果 参麦注射液在体内对小鼠肉瘤S180、肝癌H22、Lewis肺癌均有显著的抑制作用,且呈剂量相关性,中、高剂量抑瘤率可达35％以上；体外对人宫颈癌HeLa细胞和人肝癌HepG 2细胞亦有增殖抑制作用,且呈浓度-时间相关性,48 h的IC50值分别为0.36、0.72 g/mL,72h的IC50值分别为0.21、0.29 g/mL.结论 参麦注射液体内外均有显著的抗肿瘤活性.
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中药复肝春6号体外诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡实验研究
目的:探讨中药复肝春6号(Fuganchun 6,FGC-6)诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的机理.方法:将FGC-6制成水煎剂,过滤,后用微孔滤膜过滤除菌.药物浓度以生药计.采用MTT法计算FGC-6对H22细胞的半数致死量浓度和琼脂糖凝胶电泳对药物诱导的凋亡细胞进行DNA ladder分析,流式细胞术检测药物作用下的细胞凋亡率和细胞周期时相变化,透射电镜检测凋亡细胞超微结构的变化.结果:FGC-6对H22细胞的半数致死量浓度为240mg/mL.DNA ladder分析药物组可见明显的凋亡梯状条带.FGC-6作用下的小鼠H22肝癌细胞周期时相发生变化,随药物浓度的增加细胞凋亡率明显上升.透射电镜下FGC-Ⅰ组细胞具有明显的坏死特征.FGC-Ⅱ组肿瘤细胞可见明显的凋亡特征.结论:复肝春6号可以使体外培养的H22细胞染色体DNA断裂,阻滞在细胞周期的G1/G0 期,使H22细胞的超微结构改变等途径诱导细胞凋亡.
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H22细胞全细胞抗原致敏树突状细胞的表型分析
目的 研究H22小鼠肝癌细胞(H22细胞)全细胞抗原致敏树突状细胞(dendritic cell,DC)前后表面抗原CD11c、CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的变化,探讨H22全细胞抗原致敏DC的机制.方法 以粘附贴壁法由小鼠骨髓细胞获得单核细胞,加入GM-CSF和IL-4诱导单核细胞5天成未成熟DC,用冻融法制备的H22细胞全细胞抗原继续培养2天以致敏.测定未致敏DC和致敏后DC的纯度(即CD11c的阳性细胞率),以及其中CD80、CD86、CD40、MHCⅡ表达率.结果 致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达率分别为(57.55±7.32) %、(54.49±14.20) %、(46.79±8.25) %和(53.94±13.94) %],未致敏DC表面抗原CD80、CD86、CD40和MHCⅡ的表达率分别为(20.01±5.22) %、(24.56±9.08) %、(18.06±5.13) %和(30.24±8.39) %].DC致敏后其表面抗原CD80、CD86、CD40、MHCⅡ表达率均明显升高,且差异有统计学意义(P<0.01).结论 贴壁法可培养出较高纯度的DC.反复冻融法制备的H22细胞全抗原可成功致敏DC,且致敏后DC表面抗原CD80、CD86、CD40、MHCⅡ的表达率均明显升高.DC摄取H22抗原后细胞表面MHC-抗原肽复合物表达增多,并引发共刺激分子表达改变是DC致敏的可能机制.
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湖北土家族绿茶抗肿瘤作用实验研究
目的:研究从湖北土家族绿茶提取的茶多酚在体内外抗小鼠H22肝癌细胞的作用及其免疫学机制.方法:荼多酚按不同时间(24h,48h,72h,96h)及不同浓度(1～16mg/ml)分别处理H22细胞,MTS法分析细胞的增殖速度,用流式细胞仪测定细胞凋亡及细胞周期.建立H22荷瘤小鼠模型,观察小鼠肿瘤的生长情况,计算肿瘤生长抑制率;ELISA法检测荼多酚处理后小鼠血清中IL-2和IL-12的活性.结果:8mg/ml茶多酚处理H22细胞72h可显著地抑制H22细胞增殖,2mg/ml茶多酚处理H22细胞72h即可导致亚凋亡峰的出现,且G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,茶多酚时小鼠体内肿瘤生长也具有抑制作用,而且显著提高荷瘤小鼠血清中IL-2和IL-12的水平.结论:湖北土家族绿茶可抑制H22细胞增殖并激发细胞凋亡,并能提高机体的免疫功能发挥抗肿瘤作用.
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大豆甙元对小鼠肝癌H22瘤细胞生长抑制作用
目的 探讨大豆甙元( daidzein)诱导H22肿瘤细胞凋亡的作用及机制.方法 用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测不同剂量大豆甙元(0.1～ 150.0 μmol/L)对H22细胞增殖的影响；昆明雄性小鼠60只,随机分为6组,每组10只,腹腔注射给药,分别为模型组、对照组(不含血清的RPMI 1640培养液),低、中、高剂量大豆甙元组(大豆甙元分别为50、100、200 mg/kg),阳性对照组(环磷酰胺30 mg/kg)；给药14 d后比较各组小鼠体重、脾脏指数、胸腺指数及瘤重；采用western blot检测bax、bcl-2的蛋白表达.结果 MTT检测结果显示大豆甙元对H22细胞有抑制作用,150 μmol/L大豆甙元作用72 h,抑制率达30.3％,与低剂量组比较有明显抑制作用(P＜0.05)；大豆甙元能使Bax表达上调,Bcl-2表达下调,与对照组比较,10.0 μmol/L大豆甙元组bax表达灰度值增加50.05％,凋亡抑制基因bcl-2表达减少52.62％;中、高剂量大豆甙元组小鼠胸腺指数和脾脏指数均明显升高(P＜0.01),与模型组比较,大豆甙元各组瘤重指数下降明显(P＜0.01).结论 大豆甙元对小鼠肝癌H22细胞的生长具有明显抑制作用,可诱导H22细胞凋亡,并在一定程度上抑制小鼠移植性肿瘤的生长,增强宿主免疫功能.
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蛇毒神经生长因子抑瘤作用的实验研究
目的:探讨神经生长因子(NGF)对小鼠荷腹水瘤H22细胞的抑制作用.方法:用不同剂量(5,10,20 μg/kg)的NGF对荷腹水瘤H22小鼠进行治疗,观察其对小鼠腹水瘤H22的影响.利用放射免疫测定法(RIA)测定荷瘤小鼠血浆内皮素(ET)含量.结果:NGF大剂量组对小鼠腹水瘤H22有明显的抑制作用(抑瘤率46.36%).荷腹水瘤H22小鼠ET水平明显高于对照组(P＜0.05),大剂量组小鼠ET含量明显降低(P＜0.05).结论:NGF对小鼠腹水瘤H22细胞的生长具有抑制作用,可能与其降低荷瘤鼠ET水平有关.
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益气解毒方对体外培养小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用
目的 MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长的抑制作用.方法 大鼠灌胃制备益气解毒复方中药含药血清,作用于体外培养的小鼠肝癌H22细胞,采用MTT法观察益气解毒中药复方含药血清对细胞生长的抑制作用.结果 高剂量血清组与对照血清组之间的吸光度差异有显著统计学意义(P＜0.001),随着作用时间的延长,其吸光度逐渐降低,抑制率逐渐增高.结论 益气解毒中药复方含药血清对小鼠肝癌H22细胞生长具有较好的抑制作用.
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肿瘤源性热休克蛋白gp96诱导淋巴细胞反应及其抗肿瘤效应
目的:研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应.方法:利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8法等检测经gp96多肽诱导的CD8+T细胞及其抗肿瘤效应.结果:经鉴定获得纯化的热休克蛋白;流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%;该活化的CTL细胞在效靶比为50:1时的肿瘤杀伤率达72%,与对照组相比具有统计学意义;激光共聚焦显微镜观察证实实验诱导组的培养上清能诱导H22肿瘤细胞凋亡的形态学改变.结论:肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫作用,并能分泌免疫活性物质诱导H22肿瘤细胞凋亡.
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抗IL-9抗体治疗肝癌恶性腹水的疗效及其机制研究
目的:探索抗IL-9抗体治疗小鼠肝癌恶性腹水(MA)的疗效及作用机制.方法:应用小鼠H22细胞系建立小鼠MA模型,造模24 h后将45只小鼠随机分成实验组、阴性对照组和空白对照组,每组15只.实验组给予腹腔注射抗IL-9抗体,阴性对照组给予注射同型IgG抗体,空白对照组给予注射生理盐水,隔天1次,共注射5次.每次注射前均称量各组小鼠体重,并观察小鼠日常活动状态.末次用药结束24 h后每组随机处死5只小鼠,测量MA体积,收集MA上清,采用ELISA法检测MA中VEGF、MMP-2、IL-9、IFN-γ表达水平.其余小鼠观察其生存时间.结果:干预后实验组、阴性对照组和空白对照组小鼠的MA体积分别为(6.70±1.52)ml、(10.28±1.75)ml、(10.36±2.30)ml,与空白对照组和阴性对照组相比,实验组小鼠MA体积明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).实验组小鼠平均生存时间为(17.2±2.1)d,显著长于阴性对照组(14.5±1.2)d和空白对照组(14.8±1.4)d(P<0.05);与空白对照组和阴性对照组相比,实验组小鼠MA中VEGF水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),与阴性对照组相比,实验组小鼠MA中IL-9水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);但三组间MMP-2、IFN-γ水平比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:腹腔注射抗IL-9抗体可以有效地抑制H22细胞荷瘤小鼠MA的产生,延长其生存时间,该作用可能是通过抑制MA中VEGF、IL-9的表达而实现.
