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刺参酸性黏多糖联合氟尿嘧啶对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用
目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)联合氟尿嘧啶(5-FU)对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞的抑制作用,并对其作用机制进行探讨.方法 50只SPF级昆明种小鼠于右前肢腋部皮下接种H22肝癌细胞悬液,24 h后随机分为5组,分别为空白对照组(生理盐水)、5-FU组(5-FU 20 mg/kg)、SJAMP组(SJAMP 25 mg/kg)、低剂量5-FU+SJAMP组(5-FU 10 mg/kg+ SJAMP 25 mg/kg)、高剂量5-FU+ SJAMP组(5-FU 20 mg/kg+ SJAMP 25 mg/kg).HE染色观察各组肿瘤组织病理学改变;免疫组织化学方法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白的表达水平;Real-time PCR方法检测肿瘤组织中P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平.结果 与空白对照组相比,其余4组荷瘤小鼠肿瘤实体的平均质量均明显减小(P＜0.05).5-FU组及联合用药组抑瘤率均超过50％,高剂量5-FU+SJAMP组抑瘤率高达62.73％.HE染色显示给药组肿瘤细胞排列疏松,细胞质固缩,核质比减小.免疫组化及Real-time PCR结果显示,给药组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较空白对照组中的表达明显减弱(P＜0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显增强(P＜0.05),高剂量5-FU+SJAMP组相关基因mRNA及蛋白变化更加显著(P＜0.05).结论 SJAMP与5-FU均能通过下调PCNA蛋白、P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达、上调P21蛋白及mRNA的表达,达到抑制肿瘤细胞增殖的目的.SJAMP与5-FU合用具有一定的协同作用,能够明显增强抑瘤效果.
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刺参黏多糖诱导人肝癌细胞凋亡的实验研究
目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的情况,并初步探讨SJAMP对HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1表达有何作用,为其能否应用于肝癌的临床治疗提供理论依据和可行性评估.方法 体外培养人肝癌细胞HepG2,用不同浓度的刺参黏多糖(0.25、0.5、1.0、2.0、4.0g/L)培养人肝癌细胞HepG2.采用细胞毒试验(MTT法)检测HepG2细胞抑制率,蛋白印迹法(western blot)检测相关蛋白Bcl-2和nm23-H1 的变化. 结果 (1)MTT细胞毒试验证实SJAMP能明显抑制人肝癌细胞HepG2细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性.(2)western blot试验中,与空白组相比,SJAMP处理组、对照组(5-FU)及共同作用组HepG2细胞中Bcl-2蛋白表达均明显降低(P<0.05),nm23-H1蛋白的表达则明显升高(P<0.05). 结论 (1)SJAMP可通过抑制细胞增生并诱导凋亡来抑制人肝癌细胞HepG2的生长;(2)SJAMP可诱导人HepG2细胞中Bcl-2和nm23-H1蛋白含量的改变来发挥其抗肿瘤作用.
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刺参酸性黏多糖对5-FU治疗小鼠肝癌的减毒增效作用
目的 探讨刺参酸性黏多糖(stichopus japonicus acid mucopolysaccharide,SJAMP)联合5-FU对肝癌小鼠肿瘤生长及免疫功能的影响,了解其对化疗药的减毒增效作用.方法 将60只小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、空白对照组(生理盐水)、5-FU组[5-FU 20 mg/(kg·d)]、SJAMP组[SLAMP 25 mg/(kg·d)]、SJAMP+低5-FU组[SLAMP 25 mg/(kg· d)和5-FU 10 mg/(kg·d)]和SJAMP+高5-FU组[SLAMP 25 mg/(kg·d)和5-FU20mg/(kg· d)].除正常对照组外其他各组均于右腋皮下接种H22 (Hepatocarcinoma22)细胞.接种后第2天开始给药,连续给药12 d后处死小鼠,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数,ELISA检测血清TNF-α和IL-2含量,中性红法检测腹腔巨嗜细胞吞噬功能,CCK-8法测定脾脏淋巴细胞增殖能力,MTT法测NK细胞杀伤功能,流式细胞术检测小鼠外周血T细胞亚群.结果 各干预组小鼠肿瘤生长明显受到抑制,SJAMP+高5-FU组抑瘤率(62.73％)高于5-FU组(55.53％),P=1.000.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠脾脏指数显著高于其他组,P值均＜0.05.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组小鼠胸腺指数分别为(2.19±1.18)和(2.13±1.00) mg/g,高于5-FU组的(1.14±0.53)mg/g,P值分别为0.026和0.048;也高于SJAMP+高5-FU组的(1.07±0.49)mg/g,P值分别为0.011和0.020.各药物干预组TNF-α较空白对照组均降低,P值均＜0.001.和空白对照组(33.27±6.13)相比,5-FU组(23.52±3.31)血清IL-2水平明显降低,P＜0.001;SJAMP组(39.56±2.39)血清IL-2水平显著提高,P=0.001.与5-FU组相比,SJAMP组和联合用药组IL-2明显提高,P值均＜0.001.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组腹腔巨嗜细胞吞噬中性红能力显著高于正常对照组、空白对照组、5-FU组和SJAMP+高5-FU组,P值均＜0.001;SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.012.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组脾脏淋巴细胞增殖能力显著高于正常对照组(P值均＜0.001)、空白对照组(P值均＜0.001)、5-FU组(P值均＜0.001)和SJAMP+高5-FU组(P值分别为0.005和0.011);SJAMP+高5-FU组与5-FU组相比明显提高,P=0.005.SJAMP组和SJAMP+低5-FU组NK细胞杀伤能力高于5-FU组,P值分别为0.002和0.030.空白对照组和5-FU组CD3+ CD4+与CD3+ CD8+细胞比值低于正常对照组(P值均＜0.001)、SJAMP组(P值分别为0.001和＜0.001)和SJAMP+低5-FU组(P值分别为0.003和0.024),SJAMP+高5-FU组高于5-FU组(P=0.329).结论 SJAMP能够增强5-FU对肿瘤的抑制作用,减少5-FU对小鼠免疫功能的损伤.
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刺参酸性黏多糖对H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖相关基因表达的影响
目的 观察刺参酸性黏多糖(Stichopus japonicus acidic mucopolysaccharide,SJAMP)抑制H22荷肝癌小鼠肿瘤细胞增殖的作用,并探讨其可能机制.方法 以H22荷肝癌小鼠为对象,随机分为对照组、5-FU(5-Fluorouracil,氟尿嘧啶20mg/kg)、SJAMP低、中、高剂量(6.25、12.5、25mg/kg)5组.分别采用腹腔注射方式连续给予对应试剂12d.HE染色观察肿瘤组织病理学改变;分别采用免疫组化法检测肿瘤组织中PCNA、P53、P21、Cyclin D1及CDK4蛋白表达水平;Real-time PCR法检测P53、P21、Cyclin D1及CDK4 mRNA的表达水平.结果 SJAMP各剂量组H22肿瘤组织生长比较缓慢,其中SJAMP高剂量组肿瘤质量与阴性对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).HE染色观察到SJAMP中、高剂量组肿瘤组织较阴性对照组细胞数目少,排列疏松,坏死区多.免疫组化及Real-time PCR结果显示,SJAMP中、高剂量组中与细胞增殖相关基因的PCNA蛋白,P53、Cyclin D1及CDK4蛋白及mRNA的表达较阴性对照组中的表达明显下调(P＜0.05),P21蛋白及mRNA的表达明显上调(P＜0.05).结论 SJAMP能够抑制小鼠H22移植瘤的生长.SJAMP发挥抑瘤作用的作用机制可能是其能够调节肿瘤细胞内细胞增殖相关基因与蛋白的表达,以达到抑制肿瘤细胞增殖的目的.
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阿司匹林、双嘧达莫及噻氯匹定抗刺参酸性黏多糖所致血小板聚集的初步观察
目的:观察阿司匹林(A)、双嘧达莫(D)和噻氯匹定(T)对刺参酸性黏多糖(stichopus japonicus acid mucopoly saccharide,SJAMP)诱导小鼠血小板聚集的拮抗作用.方法:血小板计数采用显微镜计数法.结果:小鼠腹腔注射SJAMP 60 mg/kg,由于血小板聚集而使其血小板数量减少,给SJAMP同时口服A、D或T,分别为500、100、100 mg/kg*d-1×4,其血小板数量不减少或稍有减少.结论:A、D和T对SJAMP诱导的小鼠血小板聚集有拮抗作用.
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刺参酸性黏多糖对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响
目的 观察刺参酸性黏多糖(SJAMP)对荷瘤小鼠肝癌组织中细胞凋亡相关蛋白表达的影响.方法 采用肝癌细胞悬液接种法制备荷瘤小鼠50只,随机分为阴性对照组、阳性对照组和SJAMP低、中、高剂量组各10只,分别腹腔注射生理盐水、5-氟尿嘧啶和6.25、12.5、25 mg/kg的SJAMP各0.2 mL,连续12 d.处死小鼠,剥离肿瘤称取质量,计算抑瘤率;HE染色后观察肿瘤组织病理改变;免疫组化法检测肿瘤组织中的促凋亡基因Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白和抑制凋亡基因Survivin、NF-κB.结果 SJAMP高剂量组抑瘤率高于中、低剂量组(P均<0.05),与阳性对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).病理检查显示,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌细胞排列稀疏,核分裂减少,坏死区明显增多.与阴性对照组比较,SJAMP中、高剂量组和阳性对照组肝癌组织中Caspase-3、Caspase-9、细胞色素C、Smac蛋白表达升高,Survivin、NF-κB表达降低(P均<0.05).结论 中、高剂量刺参酸性黏多糖能够上调促凋亡基因、下调抑制凋亡基因的表达,从而抑制荷瘤小鼠瘤体的生长.
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刺参酸性黏多糖(SJAMP)对血小板三磷酸腺苷(ATP)释放的影响
目的:研究刺参酸性黏多糖(SJAMP)对正常人血小板三磷酸腺苷(ATP)释放的影响,以进一步了解其释放机制.方法:利用Chrono-log 600型血小板荧光-聚集仪,对SJAMP诱导的血小板聚集及ATP释放反应进行同步测定.结果:SJAMP诱导人血小板的聚集为典型的Ⅱ相聚集,在血小板聚集和释放间存在一定的延迟期,其释放反应依赖于血小板的聚集,并且血小板的释放反应能够为环氧化酶抑制剂乙酰水杨酸(ASA)所抑制.不同诱聚剂SJAMP 100 μg/ml,ADP5 μmol/L,胶原5 mg/ml,作用于人PRP后的ATP释放分别为0.69±0.22nmol/108血小板、1.60±0.25nmol/108血小板、1.57±0.15 nmol/108血小板.SJAMP诱导正常人ATP释放量明显低于ADP、胶原等诱导的ATP释放量(P＜0.01).结论:从诱导血小板释放的角度,SJAMP是比ADP更弱的一种血小板诱聚剂.
